1.復(fù)方金銀花顆粒的檢測(cè)方法,使用高效液相色譜法對(duì)復(fù)方金銀花顆粒中的新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、連翹苷、松脂素、黃芩苷、漢黃芩素同時(shí)進(jìn)行檢測(cè);其特征在于包括如下工藝步驟:
A、對(duì)照品溶液的制備
取綠原酸、連翹苷、黃芩苷對(duì)照品,加質(zhì)量百分比為50%甲醇分別制成每1ml含綠原酸50μg、連翹苷20μg、黃芩苷0.25mg的溶液;
B、供試品溶液的制備
取復(fù)方金銀花顆粒2g,研細(xì),精密稱定,置具塞錐瓶中,加入質(zhì)量百分比為50%甲醇25ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用質(zhì)量百分比為50%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液即得;
C、測(cè)定
精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl注入高效液相色譜儀,根據(jù)以下色譜條件進(jìn)行測(cè)定;
色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;
流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A,0.4%磷酸為流動(dòng)相B,進(jìn)行梯度洗脫;
所述梯度洗脫程序如下,其中流動(dòng)相比例均為體積百分比;
0-10分鐘,流動(dòng)相A為8%,流動(dòng)相B為92%;
10-25分鐘,流動(dòng)相A為8%-10%,流動(dòng)相B為92%-90%;
25-40分鐘,流動(dòng)相A為10%-19%,流動(dòng)相B為90%-81%;
40-55分鐘,流動(dòng)相A為19%-29%,流動(dòng)相B為81%-77%;
55-60分鐘,流動(dòng)相A為29%,流動(dòng)相B為71%;
60-65分鐘,流動(dòng)相A為29%-60%,流動(dòng)相B為71%-40%;
65-75分鐘,流動(dòng)相A為60%,流動(dòng)相B為40%;
75-80分鐘,流動(dòng)相A為60%-70%,流動(dòng)相B為40%-30%;
80-85分鐘,流動(dòng)相A為70%-8%,流動(dòng)相B為30%-92%;
所述高效液相色譜法的條件還包括:
流速為1.0ml/min,新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸檢測(cè)波長(zhǎng)為326nm,連翹酯苷A、連翹苷、松脂素、黃芩苷、漢黃芩素檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm,理論塔板數(shù)按黃芩苷計(jì),不得低于60000;
D、結(jié)果計(jì)算
D1、金銀花中有效成分計(jì)算
以綠原酸對(duì)照品為參照,以其相應(yīng)的峰為S1峰,計(jì)算新綠原酸、隱綠原酸的相對(duì)保留時(shí)間,其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±5%范圍內(nèi),相對(duì)保留時(shí)間及校正因子如下:
新綠原酸:相對(duì)保留時(shí)間0.51,校正因子1.19;
綠原酸:相對(duì)保留時(shí)間1,校正因子1;
隱綠原酸:相對(duì)保留時(shí)間1.18,校正因子1.22;
以綠原酸的峰面積為對(duì)照,分別乘以校正因子,計(jì)算新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸的含量;
D2、連翹中有效成分計(jì)算
以連翹苷對(duì)照品為參照,以其相應(yīng)的峰為S2峰,計(jì)算連翹酯苷A、松脂素的相對(duì)保留時(shí)間,其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±5%范圍內(nèi),相對(duì)保留時(shí)間及校正因子如下:
連翹酯苷A:相對(duì)保留時(shí)間0.80,校正因子0.78;
松脂素:相對(duì)保留時(shí)間0.84,校正因子1.02;
連翹苷:相對(duì)保留時(shí)間1,校正因子1;
以連翹苷的峰面積為對(duì)照,分別乘以校正因子,計(jì)算連翹酯苷A、松脂素、連翹苷的含量;
D3、黃芩中有效成分計(jì)算
以黃芩苷對(duì)照品為參照,以其相應(yīng)的峰為S3峰,計(jì)算漢黃芩素的相對(duì)保留時(shí)間,其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±5%范圍內(nèi),相對(duì)保留時(shí)間及校正因子如下:
黃芩苷:相對(duì)保留時(shí)間1,校正因子1;
漢黃芩素:相對(duì)保留時(shí)間1.28,校正因子0.59;
以黃芩苷的峰面積為對(duì)照,分別乘以校正因子,計(jì)算黃芩苷、漢黃芩素的含量;
測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl與供試品溶液10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方金銀花顆粒的檢測(cè)方法,其特征在于所述的步驟B中超聲處理的條件為功率250w,頻率35kHz。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方金銀花顆粒的檢測(cè)方法,其特征在于所述的步驟B中色譜柱型號(hào)為Agilent ZORBAX SB,色譜柱柱長(zhǎng)為250mm,內(nèi)徑為4.6mm。