本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療丹毒藥物的質(zhì)量檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

丹毒是以風(fēng)熱毒蘊(yùn)證和濕熱毒蘊(yùn)證為主要癥狀的一種病證。是清熱解毒，涼血化瘀，清利濕熱等多種原因引起的臨床上常見的一種疾病，臨床主要表現(xiàn)是風(fēng)熱、濕熱毒蘊(yùn)。授權(quán)專利丹毒清顆粒及其制備方法（專利號(hào)ZL200410042526.2）目前為本申請(qǐng)人獨(dú)家投產(chǎn)的產(chǎn)品，該藥物所用原料及用量重量分?jǐn)?shù)比為：連翹 450～550重量份、金銀花600～700重量份、梔子300～360重量份、當(dāng)歸450～550重量份、薏苡仁（炒）450～550重量份、牡丹皮450～550重量份、郁金300～360重量份、甘草120～200?；谏鲜鏊幬锾幵谕懂a(chǎn)初期，還沒有構(gòu)建制備中質(zhì)量控制的技術(shù)方案，產(chǎn)品質(zhì)量難于達(dá)到持續(xù)保證。建立該方法保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性、可控性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種治療丹毒藥物的質(zhì)量檢測(cè)方法。用于該藥物的質(zhì)量控制，具體方法包括金銀花、當(dāng)歸、牡丹皮、梔子的薄層鑒別和連翹苷、梔子苷含量測(cè)定方法。

（1）鑒別

①金銀花鑒別

取待檢藥物適量，加甲醇5～15ml，超聲處理10～30分鐘，濾過，濾液濃縮至少量，加甲醇定容至5ml，作為供試品溶液。另取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5～1.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法通則0502試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2～4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比5～10∶2∶2～5醋酸丁酯－甲酸－水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm下紫外燈檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

②當(dāng)歸、牡丹皮鑒別

取待檢藥物適量，加熱水20～40ml 溶解，放冷至室溫，用乙醚提取2次，每次30 ml ，合并乙醚液，至35℃水浴上蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?.5～1.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5～1.5g，加乙醚30 ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液自然揮干，殘?jiān)蛹状?.5～1.5ml使溶解，作為當(dāng)歸對(duì)照藥材溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每1ml含2～4mg的溶液，作為丹皮酚對(duì)照品溶液。照薄層色譜法通則0502試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各3～6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比2～4∶0.5～2環(huán)已烷－醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干。置365nm下紫外燈檢視，供試品色譜中，在與當(dāng)歸對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與丹皮酚對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的斑點(diǎn)。

③梔子鑒別

取待檢藥物適量，取梔子苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含3～5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法通則0502試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液及金銀花項(xiàng)下供試品溶液各1～3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比4～6∶5∶0.5～2∶0.5～2醋酸乙酯－丙酮－甲酸－水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)；紫外光燈365nm下顯相同顏色的斑點(diǎn)。

（2）含量測(cè)定

連翹苷

①色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比15～35：65～85的乙腈-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm。理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

②對(duì)照品溶液的制備：精密稱取連翹苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.1～0.2mg的溶液，即得。

③供試品溶液的制備：取待檢藥物0.1～2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50～70%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理20～40分鐘，放冷，密塞，再稱定重量，用50～70%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，離心，精密量取上清液15～30ml，置圓底燒瓶中，加入氯仿15～30ml，75℃水浴回流萃取3次，每次30分鐘，合并氯仿層，水浴蒸干。殘?jiān)舆m量甲醇溶解，加中性氧化鋁0.5～2g拌勻，加于中性氧化鋁柱上，用50～70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0～70%甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，即得。

④測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10～20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

梔子苷

①色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比10～20：80～90的乙腈-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm。理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

②對(duì)照品溶液的制備：精密稱取梔子苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.02～0.05mg的溶液，即得。

③供試品溶液的制備：取待檢藥物0.1～2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，稱定重量，超聲處理20～40分鐘，放冷，密塞，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，即得。

④測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10～20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

本發(fā)明具有如下有益效果：

這種治療丹毒藥物的質(zhì)量控制方法，對(duì)處方中的金銀花、當(dāng)歸、牡丹皮、梔子進(jìn)行定性鑒別，該方法具有較好的專屬性、重現(xiàn)性及耐用性；對(duì)連翹苷、梔子苷進(jìn)行定量分析，此法具有分離度高、分析時(shí)間短且操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，能有效的提高生產(chǎn)效率，節(jié)約能源。同時(shí)采用二極管陣列檢測(cè)器，考察方法的專屬性；采用不同儀器及不同色譜柱考察方法的耐用性。此方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確。這種治療丹毒藥物質(zhì)量控制方法的定性、定量檢測(cè)，為這種治療清熱解毒，涼血化瘀，清利濕熱的藥物提供了安全有效的質(zhì)控方法，為藥品的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了有效保障。

附圖說明

圖1為本發(fā)明金銀花薄層鑒別色譜圖；

圖2為本發(fā)明當(dāng)歸、牡丹皮薄層鑒別色譜圖-當(dāng)歸；

圖3為本發(fā)明當(dāng)歸、牡丹皮薄層鑒別色譜圖-牡丹皮；

圖4為本發(fā)明梔子薄層鑒別色譜圖-日光；

圖5為本發(fā)明梔子薄層鑒別色譜圖-熒光；

圖6為本發(fā)明連翹苷對(duì)照品溶液高效液相色譜圖；

圖7為本發(fā)明連翹苷供試品溶液高效液相色譜圖；

圖8為本發(fā)明梔子苷對(duì)照品溶液高效液相色譜圖；

圖9為本發(fā)明梔子苷供試品溶液高效液相色譜圖。

具體實(shí)施方式：

實(shí)施例1

待檢藥物：按丹毒清顆粒及其制備方法（ZL200410042526.2）實(shí)施例中顆粒劑的制備方法制成顆粒劑。

（1）鑒別

①金銀花鑒別

取待檢藥物適量，加甲醇15ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至少量，加甲醇定容至5ml，作為供試品溶液。另取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法通則0502試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比7∶2∶2.5醋酸丁酯－甲酸－水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm下紫外燈檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

②當(dāng)歸、牡丹皮鑒別

取待檢藥物適量，加熱水30ml 溶解，放冷至室溫，用乙醚提取2次，每次30 ml ，合并乙醚液，至35℃水浴上蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5g，加乙醚30 ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液自然揮干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為當(dāng)歸對(duì)照藥材溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每1ml含2mg的溶液，作為丹皮酚對(duì)照品溶液。照薄層色譜法通則0502試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比2∶1環(huán)已烷－醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干。置365nm下紫外燈檢視，供試品色譜中，在與當(dāng)歸對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與丹皮酚對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的斑點(diǎn)。

③梔子鑒別

取待檢藥物適量，取梔子苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法通則0502試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液及金銀花項(xiàng)下供試品溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比5∶5∶1∶2醋酸乙酯－丙酮－甲酸－水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)；紫外光燈365nm下顯相同顏色的斑點(diǎn)。

（2）含量測(cè)定

①色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比40：60的乙腈-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm。理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

②對(duì)照品溶液的制備：精密稱取連翹苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.1的溶液，即得。

③供試品溶液的制備：取待檢藥物1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加70%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理40分鐘，放冷，密塞，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，離心，精密量取上清液20ml，置圓底燒瓶中，加入氯仿30ml，75℃水浴回流萃取3次，每次30分鐘，合并氯仿層，水浴蒸干。殘?jiān)舆m量甲醇溶解，加中性氧化鋁2g拌勻，加于中性氧化鋁柱上，用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0%甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，即得。

④測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

梔子苷

①色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比10：90的乙腈-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm。理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

②對(duì)照品溶液的制備：精密稱取梔子苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.03的溶液，即得。

③供試品溶液的制備：取待檢藥物0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇 50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，密塞，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，即得。

④測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。