1.一種黑草總黃酮的提取方法,其特征在于,包括如下步驟:
(1)D101大孔樹脂的預(yù)處理:以體積濃度95%乙醇浸泡D101大孔樹脂20-30h,充分溶脹后,除去上浮樹脂及雜物,用濕法裝柱,繼續(xù)用95%乙醇不斷洗滌,洗至流出液與水混合無白色渾濁現(xiàn)象,改用水洗至無醇味,備用;所述流出液與水混合的體積比為1:3;
(2)藥材的提取、濃縮:取黑草藥材,粉碎成粗粉,加入10倍于黑草重量的體積濃度60%乙醇;加熱回流提取5次,每次2小時(shí),提取液濾過,合并濾液;濾液回收乙醇,并濃縮至無醇味;
(3)將步驟(2)中的濃縮液上至(1)柱中,用體積濃度5%-95%乙醇洗至顏色較淺,收集并濃縮至干,即得黑草總黃酮;
所述的黑草總黃酮中含有木犀草素、芹菜素和香葉木素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黑草總黃酮的提取方法,其特征在于:所述的黑草總黃酮含量以蘆丁計(jì)算重量含量不少于50.0%。
3.權(quán)利要求1所述的黑草總黃酮的測定方法,其特征在于,所述的黑草總黃酮的測定方法采用分光光度法;測定過程包括以下步驟:
(1)對照品儲備液的制備:精密稱取蘆丁對照品,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制得質(zhì)量濃度為0.2074mg/mL的溶液;
(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:分別精密吸取對照品儲備液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL,分別至25mL量瓶中,分別加水至6.0mL,加重量含量5%亞硝酸鈉溶液1.0 mL,搖勻,放置6分鐘,加重量含量10%硝酸鋁1.0mL,搖勻,放置6分鐘;加重量含量4%氫氧化鈉溶液10.0mL,再加水至刻度,搖勻,放置15分鐘;于500nm波長處測定吸光度A,并進(jìn)行空白對照,以對照品吸光度A為縱坐標(biāo),濃度C為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(3)樣品測定:精密吸取供試品溶液2mL,至25mL量瓶中,照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法,加水至6.0mL,加重量含量5%亞硝酸鈉溶液1.0 mL,搖勻,放置6分鐘,加重量含量10%硝酸鋁1.0mL,搖勻,放置6分鐘;加4%氫氧化鈉溶液10.0mL,再加水至刻度,搖勻,放置15分鐘;于500nm波長處測定吸光度,并進(jìn)行空白對照,計(jì)算出總黃酮的含量,黑草中總黃酮含量以蘆丁計(jì)算不少于50%。
4.權(quán)利要求1所述的黑草總黃酮的測定方法,其特征在于,所述的黑草總黃酮中木犀草素、芹菜素及香葉木素含量的測定方法,采用高效液相色譜法,測定過程包括以下步驟:
(1)色譜條件為:
色譜柱:安捷倫ZORBAX Eclipse XDB-C18:4.6×250mm,5μm色譜柱;
流動相:乙腈-0.1%磷酸;
流速為1mL/min;
檢測波長為350nm,進(jìn)樣量為10μL;
所述流動相的體積比為25:75;
(2)步驟:
(A)對照品溶液的制備:分別精密稱取木犀草素對照品14.53mg、芹菜素對照品4.32mg以及香葉木素對照品4.25mg,置于同一50mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得木犀草素濃度為290.6μg/mL、芹菜素濃度為86.4μg/mL及香葉木素濃度為85μg/mL的對照品儲備液;取對照品儲備液2mL,置25mL容量瓶中,以甲醇稀釋至刻度,搖勻,得木犀草素濃度為23.25μg/mL、芹菜素濃度為6.91μg/mL及香葉木素濃度為6.8μg/mL的對照品溶液;
(B)供試品溶液的制備:精密稱取樣品10mg,置25mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻、濾過即得;
(C)樣品的測定:對對照品溶液及供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜分析,記錄峰面積,并基于所得到的液相色譜分析結(jié)果,采用外標(biāo)法計(jì)算所述黑草總黃酮中木犀草素、芹菜素及香葉木素的含量。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的黑草總黃酮的測定方法,其特征在于,黑草總黃酮中木犀草素含量不少于重量含量5%、芹菜素含量不少于重量含量1.5%、香葉木素含量不少于重量含量0.5%。