1.一種維生素D3含量的檢測方法,其特征是步驟如下:
(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
在避光條件下準(zhǔn)確稱取維生素D3標(biāo)準(zhǔn)品,用乙醇配制成理論濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液;吸取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量,使用甲醇稀釋配制成濃度為0.1~5.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液;
(2)樣品處理
①皂化:稱取混合均勻的待檢測的樣品,依次加入抗壞血酸、焦性沒食子酸、2,6-二叔丁基對甲酚、無水乙醇和氫氧化鉀水溶液,在加熱磁力攪拌器的作用下進(jìn)行皂化;
②萃?。簩⒃砘恨D(zhuǎn)移至分液漏斗中,加入萃取劑進(jìn)行萃取,合并萃取所得的萃取劑,去除痕量水后收集于圓底燒瓶內(nèi);將圓底燒瓶蒸至近干,然后用氮吹儀吹干;
③定容:將吹干的圓底燒瓶用正己烷分多次少量的洗滌并轉(zhuǎn)移至定容瓶中待用;
④凈化:依次用二氯甲烷和正己烷淋洗活化硅膠柱,吸取定容后的樣液轉(zhuǎn)移到硅膠柱中,經(jīng)除雜、洗脫后用氮吹儀吹干,加入甲醇溶解,通過濾膜過濾后得到濾液;
(3)高效液相色譜儀分析
將步驟④得到的濾液注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析。
2.一種如權(quán)利要求1所述的維生素D3含量的檢測方法,其特征在于步驟(3)中色譜條件如下:
色譜柱:HPLC SB C18柱(0.45μm,5mm×150mm);
流動(dòng)相:95%的甲醇和5%的水;
流速0.3mL/min;
柱溫:40℃;
紫外檢測器(DAD)檢測波長:264nm;
進(jìn)樣量為5μL。
3.一種如權(quán)利要求1所述的維生素D3含量的檢測方法,其特征在于所述步驟(1)中配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液時(shí)使用乙醇逐級(jí)稀釋,按稀釋倍數(shù)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的實(shí)際濃度,計(jì)算濃度時(shí)在264nm波長下使用分光光度計(jì)進(jìn)行校正并計(jì)算校正液實(shí)際濃度。
4.一種如權(quán)利要求3所述的維生素D3含量的檢測方法,其特征在于所述步驟①中抗壞血酸、焦性沒食子酸、2,6-二叔丁基對甲酚與樣品的質(zhì)量比為1.5∶1∶0.1∶10。
5.一種如權(quán)利要求4所述的維生素D3含量的檢測方法,其特征在于所述步驟①中氫氧化鉀水溶液中氫氧化鉀的質(zhì)量百分比為35%,皂化溫度為75℃,皂化時(shí)間為40分鐘。
6.一種如權(quán)利要求5所述的維生素D3含量的檢測方法,其特征在于所述步驟②中萃取劑為石油醚,萃取次數(shù)為3次以上。
7.一種如權(quán)利要求6所述的維生素D3含量的檢測方法,其特征在于所述步驟④除雜時(shí)先使用正己烷淋洗,然后用環(huán)己烷、正己烷和異丙醇的混合溶液淋洗,環(huán)己烷和正己烷的體積比為1∶1,異丙醇的體積分?jǐn)?shù)為0.8%。
8.一種如權(quán)利要求7所述的維生素D3含量的檢測方法,其特征在于所述步驟④洗脫時(shí)所用洗脫液的含量及比例為40份的乙酸乙酯:60份的正己烷,所用濾膜的孔徑為0.22μm。