1.一種快速測定食品中L-谷氨酸的方法,其特征在于:包括以下步驟,
(1)對樣品進行前處理,提取樣品中的L-谷氨酸,離心過濾;
(2)取適量濾液,調(diào)pH至8.0~9.0,并稀釋至一定體積,作為樣品檢測液,樣品檢測液L-谷氨酸濃度控制在0.006g/L~0.06g/L范圍內(nèi);
(3)設(shè)置光吸收酶標(biāo)儀檢測參數(shù):檢測波長為490nm,讀板方式為按排逐孔檢測,讀數(shù)時間為0.5秒/孔;
(4)分別吸取50μL的L-谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)系列溶液、樣品檢測液、水到透明96孔板相應(yīng)檢測孔中;
(5)往每個相應(yīng)檢測孔加入100μL檢測試劑A,混勻,采用光吸收酶標(biāo)儀進行第一次吸光值測定;
所述檢測試劑A的成分為試劑A1、A2、A3的混合物,試劑A1:三乙醇胺磷酸鹽緩沖液、曲拉通;試劑A2:心肌黃酶、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+);試劑A3:碘四唑硝基氯(INT);
(6)往每個相應(yīng)檢測孔加入50μL檢測試劑B,混勻,反應(yīng)10~20分鐘后,采用光吸收酶標(biāo)儀進行第二次吸光值測定;
所述檢測試劑B的組分為谷氨酸脫氫酶(GLDH);
(7)根據(jù)前后兩次測定的吸光值差,建立L-谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線,將樣品檢測液吸光值差代入L-谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程,求得樣品檢測液L-谷氨酸濃度,乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),即為樣品L-谷氨酸含量。
2.如權(quán)利要求1所述的快速測定食品中L-谷氨酸的方法,其特征在于,所述試劑A1為pH8.0~9.0的磷酸鹽/三乙醇胺緩沖液,其中含曲拉通(Triton X-100)0.5%~1.0%;試劑A2中心肌黃酶的酶活力單位為1U~3U/mL,NAD+濃度為10mg/mL~15mg/mL;試劑A3中碘四唑硝基氯(INT)的濃度為1mg/mL~3mg/mL。
3.如權(quán)利要求2所述的快速測定食品中L-谷氨酸的方法,其特征在于,試劑A1、試劑A2、試劑A3使用前按3:1:1混合。
4.如權(quán)利要求2所述的快速測定食品中L-谷氨酸的方法,其特征在于,樣品檢測液、試劑A1用2mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH至8.6。
5.如權(quán)利要求1所述的快速測定食品中L-谷氨酸的方法,其特征在于,所述檢測試劑B的酶活力單位為≥30U/mL。
6.如權(quán)利要求1所述的快速測定食品中L-谷氨酸的方法,其特征在于,前處理包括以下步驟:
固體或半固體樣品采用合適的工具碾碎或絞爛;
稱取適量已碾碎或絞爛的樣品,加入一定量1.0mol/L稀高氯酸溶液或5-磺基水楊酸溶液進行均質(zhì)提取,提取時間為5~10分鐘,該提取方法所得L-谷氨酸為游離L-谷氨酸;利用離心機對樣品提取液進行分離,在1000g離心力下離心5~10分鐘;
取中層清液,用中速濾紙過濾;
液體樣品無需上述前處理,直接移取適量樣品,用中速濾紙過濾即可。
7.如權(quán)利要求1所述的快速測定食品中L-谷氨酸的方法,其特征在于,包括蛋白水解步驟,用于提取構(gòu)成蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的L-谷氨酸。