本發(fā)明屬生物醫(yī)藥檢驗領(lǐng)域，具體涉及經(jīng)修飾的KatG蛋白在制備檢測INH耐藥結(jié)核桿菌制劑中的應(yīng)用，本發(fā)明可用于建立檢測包含耐受異煙肼(INH)的耐藥結(jié)核桿菌和耐藥結(jié)核病的方法。

背景技術(shù)：

現(xiàn)有技術(shù)公開了結(jié)核病是由結(jié)核桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)引起的一種發(fā)病率及死亡率比較高的慢性傳染病。目前結(jié)核病的治療主要依賴WHO推薦的Dots方案，連續(xù)2個月用異煙肼(INH)，利福平(RIF)，乙胺丁醇(EMB)和丙嗪酰胺(PZA)四種一線藥物治療后，再繼續(xù)用INH和RIF治療4-6個月。實踐顯示，還疾患的治療療程長和用藥負擔重使得病人服藥的依從性較差，導致大量耐藥結(jié)核病的出現(xiàn)，給結(jié)核病的防控帶來了更加嚴峻的形勢。

報道顯示，中國是27個高負擔耐藥結(jié)核的國家中病例數(shù)最多的兩個國家之一，2007年全國的結(jié)核病流行病學調(diào)查顯示，34.2％的新發(fā)病例和54.5％的復發(fā)病例為耐藥結(jié)核桿菌感染(至少耐受一種一線藥物)，其中5.7％的新發(fā)病例和25.6％的復發(fā)病例是耐多藥結(jié)核(multidrug resistance，MDR-TB，至少同時耐受利福平和異煙肼)(Yanlin Zhao等，NEnglJMed2012；366:2161-70.)。對于MDR-TB以及廣泛耐藥結(jié)核病(extensively drug resistant tuberculosis，XDR-TB)的治療，需要從標準療程延長到兩年甚至更長時間。而且，由于結(jié)核桿菌耐藥模式的診斷方法和技術(shù)還不能滿足臨床診斷需求，進而帶來對耐藥結(jié)核病患者治療方案的不確定性，也導致耐藥結(jié)核的治療效果明顯下降，復治率增多(Pietersen E等，Lancet.2014；383:1230–9.和Winston CA等,Emerg Infect Dis 2012；18:1201–2.)。

結(jié)核桿菌與其他病原細菌的耐藥機制不同，研究表明結(jié)核桿菌的耐藥模式不是耐藥質(zhì)?；蚰退幓虻乃睫D(zhuǎn)移引起的，而主要集中在細菌基因組相關(guān)序列 的突變。RIF的作用靶標是編碼RNA轉(zhuǎn)錄酶B的rpoB基因，rpoB基因的突變或缺失會影響RIF與靶蛋白RpoB的結(jié)合，從而導致結(jié)核桿菌對RIF的耐受。INH是抗結(jié)核藥物組合中殺菌活性最強的藥物，INH自身是一種前體藥物，進入菌體后需要在過氧化氫-過氧化物酶(KatG)的作用下，INH才能轉(zhuǎn)化成具有殺菌活性的有效分子異煙酸。在katG基因發(fā)生突變或缺失時，過氧化氫-過氧化物酶活性下降甚至喪失，阻礙了異煙肼轉(zhuǎn)化為活性形式，從而導致結(jié)核桿菌INH耐藥的出現(xiàn)(Zhang Y等，Nature 1992；358:591–593.)。

大量臨床INH耐藥菌與突變基因相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，約有63-90.1％的INH耐藥菌是由于katG基因的突變導致，且突變位點也比較復雜和多樣，除katG315外，其他katG65,329,333,394,413等不同位點的突變均與結(jié)核桿菌INH藥物耐受相關(guān)；有報道涉及包括inhA、aphC及kasA等其他基因與INH耐藥相關(guān)，如inhA基因的啟動子區(qū)發(fā)生突變，但隨后也發(fā)現(xiàn)在INH敏感菌株中也存在這些基因的突變，且在INH耐藥菌中的突變也多伴隨著katG基因的同時突變(Lee AS等,Antimicrob Agents Chemother 2001；45:2157–2159.和Mdluli K等,Science 1998；280:1607–1610.和Banerjee A,Science 1994；263:227–230.)；隨著全基因組測序技術(shù)的使用，有研究發(fā)現(xiàn)另外一些基因突變可能與INH耐藥相關(guān)，但突變多屬于低頻率突變且這些基因突變與INH耐藥性的直接相關(guān)性也并沒有得到生物學的驗證(Shekar S等,PLoS ONE 2014；9(7):e102383.)；因此目前臨床分離INH耐藥結(jié)核桿菌中，依然大約有10-37％的菌株并沒有在包括katG在內(nèi)的已知耐藥相關(guān)基因中找到突變位點，因此還存在其他可能的INH耐藥形式和耐藥機制(Ramaswamy SV等,Antimicrob Agents Chemother 2013；47:1241–1250.和Zhang M等,J Clin Microbiol2007,43:5477–5482)，發(fā)現(xiàn)新的INH耐藥機制對耐藥結(jié)核病的快速檢測和治療有著重要現(xiàn)實意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供經(jīng)修飾的KatG蛋白在制備INH耐藥結(jié)核診斷制劑中的應(yīng)用，本發(fā)明可進一步用于檢測包含耐受異煙肼(INH)的耐藥結(jié)核桿菌和耐藥結(jié)核病的方法。

本發(fā)明提供了經(jīng)修飾的KatG蛋白及其修飾性多肽德系的藥用用途；本發(fā)明中，研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核桿菌KatG蛋白中一些賴氨酸殘基(Lys,K)可以發(fā)生諸如乙酰化、琥珀?；鹊鞍追g后的修飾，且該些賴氨酸殘基側(cè)鏈經(jīng)乙?；㈢牾；刃揎椇螅梢悦黠@地降低KatG蛋白的過氧化氫酶和過氧化物酶活性,從而引起對INH的耐藥性；且將乙酰化修飾的katG基因轉(zhuǎn)入因katG突變而導致INH耐受的結(jié)核菌中，無法恢復細菌對INH的敏感性，而轉(zhuǎn)入非乙?；揎椀腒atG基因時，INH耐受菌株可以部分或全部恢復細菌對INH的敏感性；因此，對經(jīng)翻譯后修飾的KatG蛋白質(zhì)及修飾的多肽具有在制備診斷INH耐藥結(jié)核桿菌及INH耐藥結(jié)核病的制劑中的新的用途，尤其是在制備耐受INH的結(jié)核桿菌和耐藥結(jié)核病診斷制劑中的用途。

在其最廣泛的方面，本發(fā)明提供了其中對應(yīng)于H37Rv KatG序列中氨基酸殘基經(jīng)單個或多個位點被乙?；㈢牾；?、巴豆?；?、泛素化等各類型但不限于上述修飾類型的翻譯后修飾的KatG蛋白質(zhì)或修飾的多肽，及其在制備診斷INH耐藥結(jié)核桿菌及INH耐藥結(jié)核病制劑中的用途。

在本發(fā)明的一個方面，提供對應(yīng)于H37Rv KatG序列中賴氨酸殘基Lys143,Lys310,Lys356,Lys410,Lys433,Lys554,Lys557,Lys590,Lys600或Lys680中，但不限于上述賴氨酸殘基，其中單個或多個位點受乙酰化、琥珀酰化等修飾的KatG蛋白質(zhì)。

本發(fā)明的另一個方面所述的經(jīng)修飾KatG蛋白質(zhì)包含序列中賴氨酸殘基Lys143,Lys310,Lys356,Lys410,Lys433,Lys554,Lys557,Lys590,Lys600或Lys680中，但不限于上述賴氨酸殘基，其中單個或多個賴氨酸位點受乙?；?、琥珀酰化等修飾的多肽。

所述修飾多肽為一種氨基酸聚合物，其長度包含但不限于20個氨基酸殘基，其中可包含賴氨酸殘基Lys143,Lys310,Lys356,Lys410,Lys433,Lys554,Lys557,Lys590,Lys600或Lys680，但不限于上述賴氨酸殘基，其中單個或多個賴氨酸位點受乙?；?、琥珀?；刃揎椀亩嚯募捌漕愃莆?；所述類似物為與其同源性在75％以上的經(jīng)過天然或人工修飾 后的多肽。

所述的經(jīng)修飾的KatG蛋白、經(jīng)修飾的多肽及其類似物，可以是天然分離的或是人工合成的。

本發(fā)明所涉及的修飾KatG蛋白，修飾多肽及其類似物可以通過基因工程技術(shù)獲得，也可以化學合成所得，此類技術(shù)為行業(yè)內(nèi)所熟悉。

本發(fā)明的再一個方面提供針對所述的被乙?；?、琥珀?；投辊；?、泛素化等各類型但不限于上述修飾類型的修飾KatG蛋白質(zhì)、修飾多肽及其類似物所制備的多克隆抗體或單克隆抗體，可特異性識別KatG修飾蛋白質(zhì)、修飾多肽及其類似物，以及在制備診斷INH耐藥結(jié)核桿菌及INH耐藥結(jié)核病制劑中的用途。

在本發(fā)明中所述多克隆抗體或單克隆抗體，具有可特異性識別KatG蛋白或多肽中賴氨酸殘基Lys143,Lys310,Lys356,Lys410,Lys433,Lys554,Lys557,Lys590,Lys600或Lys680上單個或多個位點的乙酰化、琥珀酰化等修飾特性，但不限于上述賴氨酸殘基。

本發(fā)明中所述多克隆抗體或單克隆抗體，可以通過生物技術(shù)方法分離制備，此類技術(shù)為行業(yè)內(nèi)所熟悉。

本發(fā)明所述制劑可用于檢測臨床分離結(jié)核桿菌對INH的耐受性，確定臨床結(jié)核病例的耐藥特性。

為了便于理解，以下將通過具體的附圖和具體實施方式對本發(fā)明進行詳細地描述。需要特別指出的是，這些描述僅僅是示例性的描述，并不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。依據(jù)本說明書的論述，本發(fā)明的許多變化、改變對所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來說都是顯而易見的。

附圖說明

圖1，結(jié)核桿菌KatG蛋白Lys410位點乙?；|(zhì)譜圖。

圖2，結(jié)核桿菌KatG蛋白Lys688位點乙?；|(zhì)譜圖。

圖3，KatG^410ace、KatG^688ace和KatG^{410、688ace}蛋白的SDS-PAGE示意圖，其中，大腸桿菌原核表達并純化目的蛋白后進行SDS-PAGE，其中1泳道為Lys410位點體外乙酰化修飾蛋白KatG^410ace、2泳道為Lys688位點體外乙?；揎椀鞍譑atG^688ace和3泳道為Lys410和Lys688位點同時體外乙?；揎椀鞍譑atG^410、688ace。

圖4，KatG^410ace、KatG^688ace和KatG^{410、688ace}蛋白的乙酰化修飾檢測，其中，使用特異性識別賴氨酸不同位點乙?；揎梿慰寺】贵w,采用western blot方法來檢測原核表達純化蛋白的乙?；揎椝剑?泳道為Lys410位點體外乙?；揎椀鞍譑atG^410ace、2泳道為Lys688位點體外乙?；揎椀鞍譑atG^688ace和3泳道為Lys410和Lys688位點同時體外乙?；揎椀鞍譑atG^410、688ace。

圖5，結(jié)核桿菌KatG蛋白及KatG^410ace、KatG^688ace和KatG^410、688ace蛋白過氧化氫酶活性測定。

圖6，結(jié)核桿菌KatG蛋白及KatG^410ace、KatG^688ace和KatG^{410、688ace}蛋白過氧化物酶活性測定。

具體實施方式

以下通過具體的實施例進行示例，其中所用的試劑均可通過市場渠道購買，如有未盡之處，可以參考相應(yīng)的分子克隆等實驗手冊，本發(fā)明所述實施方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。

以下實施例以KatG蛋白的Lys410和Lys688位點乙?；揎棡槔M行描述，但并不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。

實施例1：結(jié)核桿菌KatG蛋白Lys410和Lys688存在乙?；揎?/p>

(1)結(jié)核桿菌H37Ra接種于7H9(10％OADC)生長至對數(shù)中期，8,000g離心15分鐘，菌體沉淀1-3g重懸于緩沖液；

(2)冰水浴中超聲裂解菌體細胞，4℃ 20,000g離心40分鐘，留上清，并加入終濃度為15mM的丙酮，沉淀蛋白；

(3)利用胰蛋白酶水解蛋白后，用帶有賴氨酸乙?；贵w的珠子吸附并純化帶有乙酰化修飾肽段；

(4)C18(Dionex,sunnyvale,CA)柱子和HPLC清洗和純化肽段，直接電噴入LTQ一Orbitrap質(zhì)譜儀(ThermoEleetron,Bremen,Germany)進行分析，獲得結(jié)核桿 菌賴氨酸乙?；揎椀鞍讛?shù)據(jù)；

(5)鑒定到KatG蛋白為乙?；揎椀鞍祝渲邪↙ys410和Lys688位點受乙?；揎?如圖1和圖2)所示。

實施例2：結(jié)核桿菌KatG蛋白Lys410和Lys688位點乙酰化修飾蛋白的制備

1、蛋白的體外乙?；揎椩?Neumann H等Nature chemicalbiology,2008；4(4):232-23)：是采用一種質(zhì)粒(ACK)可以編碼賴氨酰tRNA合成酶，另一種質(zhì)粒(PYⅡ)是帶有識別CUA密碼子的tRNA合成酶，第三種質(zhì)粒是帶有目的基因katG的質(zhì)粒，該目的基因是將需要乙?；揎椀馁嚢彼峋幋a密碼子定點突變?yōu)門AG。將上述三種質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)入大腸桿菌宿主菌中。在培養(yǎng)基中添加乙酰賴氨酸的情況下，帶有CUA密碼子的tRNA合成酶可以識別目的基因中的TAG，并在賴氨酰tRNA合成酶幫助下在該位點加上乙?；馁嚢彼幔M而在大腸桿菌表達體系中完成特定賴氨酸位點的定點乙?；揎?；

2、katG基因中編碼Lys410和688位點密碼子的突變

(1)設(shè)計引物，從結(jié)核桿菌H37Rv基因組中擴增katG基因，測序正確后，將基因片段克隆入原核表達載體pT7中，構(gòu)建獲得pT7-KatG原核表達載體；

(2)針對Lys410和Lys688密碼子分別設(shè)計突變引物，

K410TAGS:5’-CGAGTTCGCCTAGGCCTGGTACAAGCTGATCCACC-3’；

K410TAGA:5’-CTTGTACCAGGCCTAGGCGAACTCGTCGGCCAA-3’；

K688TAG-S:5’-GGCAAGGTGTAGTGGACCGGCAGCCGCGTGGAC-3’；

K688TAG-SA:5’-TGCCGGTCCACTACACCTTGCCACTGCCATCCTTG-3’；

(3)分別用引物對K410TAG-S/K410TAG-A或K688TAG-S/K688TAG-A，以PT7-KatG為模板進行PCR擴增。純化PCR產(chǎn)物分別經(jīng)DpnⅠ37℃消化1小時后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5ɑ中，抽提質(zhì)粒經(jīng)測序驗證突變正確，獲得突變載體pT7-KatG^410TAG和pT7-KatG^688TAG；

(4)用引物對K688TAG-S/K688TAG-A，以pT7-KatG^410TAG為模板進行PCR擴增，方法與上述(3)一致，獲得410和688同時突變?yōu)門AG的載體pT7-KatG^{410、688TAG}；

3、Lys410和Lys688乙?；揎桲atG蛋白的獲得

(1)將質(zhì)粒PT7-KatG^410TAG、pT7-KatG^688TAG以及pT7-KatG^{410、688TAG}分別與另外兩個質(zhì)粒ACK和PYⅡ轉(zhuǎn)入大腸桿菌原核表達質(zhì)粒BL21，利用三種抗生素50mg/mL卡那霉素，150mg/mL氨芐霉素，150mg/mL壯觀霉素篩選三質(zhì)粒共存在的BL21菌株；

(2)在培養(yǎng)基中添加乙酰賴氨酸的情況下，25℃，IPTG 0.5mM IPTG誘導表達目的蛋白6h；

(3)表達目的蛋白KatG^410ace、KatG^688ace和KatG^{410、688ace}的菌體分別超聲裂解，收集上清蛋白液；

(4)分別用Ni親和層析柱純化目的蛋白KatG^410ace、KatG^688ace和KatG^410、688ace，用BCA試劑盒測定蛋白濃度，并保存于-80℃(如圖3所示)；

(5)使用賴氨酸乙?；贵w通過Western Blot檢測蛋白的乙?；?如圖4所示)；

(6)結(jié)果顯示，通過上述方法可以將原核表達的KatG蛋白在特定位點進行體外乙?；?。

實施例3：結(jié)核桿菌KatG蛋白Lys410和Lys688位點乙?；揎椀鞍椎幕钚詼y定

(1)過氧化氫酶活的測定：酶活測定體系50mM K₃PO₄、20mM H₂O₂、0.8μg目的蛋白，室溫下檢測240nm處吸光值的變化；

(2)過氧化物酶活的測定：酶活測定體系50mM CH₃COONa、20mM O-Ddianiside、24mM T-butyperoxidase、0.8μg目的蛋白，室溫下檢測460nm處吸光值的變化；

(3)結(jié)果顯示：相比KatGWT蛋白，所獲得的修飾蛋白KatG^410ace、KatG^688ace和KatG^{410、688ace}過氧化氫和過氧化物的酶活均顯著下降，證實在410或688位賴氨酸在發(fā)生乙?；揎椇?，可以顯著降低KatG蛋白的過氧化氫和過氧化物酶活性(如圖5和圖6所示)。

實施例4：外源KatG蛋白Lys410和Lys688位點修飾對耐INH結(jié)核桿菌耐藥性的影響

1、分離兩株H37Ra結(jié)核桿菌INH耐藥菌株(I31，I20)，對KatG基因進行測序，發(fā)現(xiàn)一株是KatG384位氨基酸密碼子發(fā)生移碼突變(CTG-CTTG)，另一菌株KatG171位編碼密碼子發(fā)生終止突變(TGC→TGA)，菌株KatG蛋白活性降低或失活,從而導致對INH的耐藥性(如表1所示)；

2、在這兩株INH耐藥菌株中轉(zhuǎn)入野生型katG基因，可以恢復細菌KatG功能，使結(jié)核桿菌顯示出對INH敏感的特性(I20::KatG；I31::KatG,表一)。由于Lys在正常狀態(tài)下呈正電荷，而被乙?；揎棔r，該Lys呈現(xiàn)不帶電荷狀態(tài)。因此我們將通過對耐INH菌株轉(zhuǎn)入外源katG基因，檢測外源蛋白對耐藥菌株耐受INH的變化。一種轉(zhuǎn)入的外源katG基因?qū)⑵?10、688位點氨基酸密碼子突變成帶正電荷精氨酸，另一種轉(zhuǎn)入的外源katG基因?qū)⑵?10、688位點氨基酸密碼子突變成不帶電荷的谷氨酰胺,分別模擬Lys和被乙?；揎椀腖ys；

3、從結(jié)核桿菌H37Rv基因組中擴增katG基因，測序正確后，將基因片段克隆入分支桿菌穿梭載體pMV261中，構(gòu)建獲得pMV-KatG重組穿梭載體；

4、分別設(shè)計引物將KatG第410位或610位密碼子由AAG(Lys，K)分別突變?yōu)镃GA(Arg，R)，模擬帶正電荷時未被乙酰化修飾狀態(tài)；另外引物將KatG第410位或610位密碼子突變成CAG(Gln，Q)，模擬賴氨酸被乙?；揎棽粠щ姾蔂顟B(tài)；

K410RS:5’-CGAGTTCGCCCGAGCCTGGTACAAGCTGATCCAC-3’

K410RA:5’-CTTGTACCAGGCTCGGGCGAACTCGTCGGCCAA-3’

K410QS:5’-CGAGTTCGCCCAGGCCTGGTACAAGCTGATCCAC-3’

K410QA:5’-CTTGTACCAGGCCTGGGCGAACTCGTCGGCCAA-3’

K688RS:5’-GGCAAGGTGCGATGGACCGGCAGCCGCGTGGAC-3’

K688RA:5’-TGCCGGTCCATCGCACCTTGCCACTGCCATCCTTG-3’

K688QS:5’-GGCAAGGTGCAGTGGACCGGCAGCCGCGTGGAC-3’

K688QA:5’-TGCCGGTCCACTGCACCTTGCCACTGCCATCCTTG-3’

5、以pMV-KatG為模板，分別以K410RS-K410RA，K410QS-K410QA，K688RS-K688RA，或K688QS-K688QA引物對，通過PCR擴增得到目的片段，分別用DPNⅠ 消化目的片段后轉(zhuǎn)入DH5a菌，Kan+挑選陽性克隆，提取質(zhì)粒，測序確定基因突變正確。分別獲得pMV-KatG410R，pMV-KatG410Q，pMV-KatG688R，pMV-KatG688Q；

6、電擊轉(zhuǎn)化INH耐藥結(jié)核菌(I31和I20)中，分別取上述pMV-KatG、pMV-KatG410R，pMV-KatG410Q，pMV-KatG688R以及pMV-KatG688Q五種重組穿梭載體50μl，加入200μlI31或I20株感受態(tài)細胞，冰浴30min，小心地將菌液轉(zhuǎn)入預(yù)冷的2mm電穿孔杯中，電轉(zhuǎn)條件是電壓1.25kV，電容25μF，電阻1000歐姆。電轉(zhuǎn)后，冰浴10min后，與等體積的2×7H9培養(yǎng)基混合，37℃靜置培養(yǎng)1天；

7、將靜置培養(yǎng)一天的菌液涂在含有卡那霉素抗性(卡那霉素的終濃度為15μg/ml)的7H10(含10％ADC)固體平板上,37℃倒置培養(yǎng)3-4周。待有菌落長出，挑選單菌落分別接種于5ml含50μg/ml卡那霉素的7H9Broth液體培養(yǎng)基中，37℃靜置培養(yǎng)2-3周，取菌提取基因組，PCR擴增，檢測將外源質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入的菌株，分別獲得I31::KatG、I31::KatG410R，I31::KatG410Q，I31::KatG688R，I31::KatG688Q以及I20::KatG、I20::KatG410R，I20::KatG410Q，I20::KatG688R，I20::KatG688Q菌株；

8、不同菌株對INH最小抑菌濃度(MIC)的測定：

(1)分別制備I31::KatG、I31::KatG410R，I31::KatG410Q，I31::KatG688R，I31::KatG688Q以及I20::KatG、I20::KatG410R，I20::KatG410Q，I20::KatG688R，I20::KatG688Q菌懸液，同時制備I30，I20，H37Ra菌懸液作為對照。制備好的1mg/ml結(jié)核桿菌上述各結(jié)核桿菌菌株懸液2ul，含菌數(shù)量1－5×10⁵，分別接種于每支含200μl 7H9的液體培養(yǎng)基的96孔板中；

(2)將INH進行倍比梯度稀釋(200μg/ml,100μg/ml，75μg/ml，50μg/ml，37.5μg/ml，25μg/ml，18.25μg/ml,12.5μg/ml,6.25μg/ml,3μg/ml，1.5μg/ml，0.75μg/ml，0.37μg/ml，0.18μg/ml,0.09μg/ml,0.045μg/ml,0.023μg/ml,0.012μg/ml)，分別加入含有不同結(jié)核桿菌的96孔板中。接種完畢后,置37℃恒溫孵箱內(nèi)培養(yǎng),2-3周觀察結(jié)果。每個菌株和每個藥物梯度平行做3個重復；

上述步驟進行兩次重復，將能肉眼可見培養(yǎng)基中抑制細菌生長的最低濃度定 為該菌株對藥物INH的最小抑菌濃度(MIC)；

9、不同菌株對INH的敏感性顯示如下：當將410或者688位點賴氨酸密碼子突變成編碼正電荷精氨酸密碼子的katG410R或katG688R基因轉(zhuǎn)入INH耐藥結(jié)核桿菌時，與轉(zhuǎn)入野生型katG基因類似，可以恢復細菌KatG功能，使結(jié)核桿菌顯示出對INH敏感的特性(表一)。而當410或者688位點賴氨酸密碼子突變成不帶電荷的谷氨酰胺的密碼子，將katG410Q或katG688Q基因轉(zhuǎn)入INH耐藥結(jié)核桿菌，則不能有效恢復KatG的活性，耐藥菌對INH敏感性不能得到恢復,提示當KatG蛋白在410或688位點被乙酰化修飾可以導致細菌對INH的耐受。

表1不同菌株對INH敏感性