本發(fā)明涉及植物檢測領(lǐng)域，尤其是涉及普洱茶的檢測和指紋圖譜的建立。

背景技術(shù)：

中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實(shí)性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。中藥及其制劑均為多組分復(fù)雜體系，因此評價其質(zhì)量應(yīng)采用與之相適應(yīng)的，能提供豐富鑒別信息的檢測方法，建立中藥指紋圖譜將能較為全面地反映中藥及其制劑中所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進(jìn)而對藥品質(zhì)量進(jìn)行整體描述和評價。

目前，指紋圖譜技術(shù)也已進(jìn)入茶葉相關(guān)研究領(lǐng)域，茶葉科研人員借鑒用于鑒別中藥真?zhèn)魏唾|(zhì)量控制的指紋圖譜技術(shù)，將茶葉樣品經(jīng)過適當(dāng)處理后，利用氣相色譜(GC)、高相液相色譜(HPLC)、紅外及近紅外光譜(IR&NIR)、核磁共振(NMR)等的技術(shù)，得到能夠標(biāo)示茶葉特征成分的譜圖；在此基礎(chǔ)上運(yùn)用主成分分析法(PCA)、聚類分析法(Classification Analysis)、人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(BP)等的數(shù)據(jù)信息處理技術(shù)對所得茶葉指紋圖譜進(jìn)行分析，從而對茶葉品質(zhì)做出可量化的評價，有效彌補(bǔ)了感官審評的缺陷。

需要建立一種普洱茶提取物的指紋圖譜，以便對普洱茶提取物進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控和辨別。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種HPLC測定普洱茶提取物中有效成分的方法。

本發(fā)明還提供了一種普洱茶提取物指紋圖譜的建立方法。

本發(fā)明提供的普洱茶提取物HPLC有效成分測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備

分別稱取表沒食子酸兒茶素，兒茶素，表兒茶素，表沒食子兒茶素沒食子酸酯和表兒茶素沒食子酸酯，加甲醇-水，得到含表沒食子酸兒茶素，兒茶素，表兒茶素，表沒食子兒茶素沒食子酸酯和表兒茶素沒食子酸酯的混合對照品溶液。

(2)供試品溶液的制備

取普洱茶提取物，加入純水，室溫下超聲使普洱茶提取物完全溶解，過濾膜，即得供試品溶液。

(3)測定法：

吸取混合對照品溶液和供試品溶液，注入超高效液相色譜儀，得到色譜圖，根據(jù)色譜圖計(jì)算供試品中相應(yīng)成分的含量。

根據(jù)本發(fā)明，超高效液相色譜儀的色譜條件如下：

色譜柱選自：C18柱，

流動相：A相為乙腈，B相為0.01％-0.1％磷酸水溶液，進(jìn)行梯度洗脫，流動相的流速為0.8-1.2mL/min，柱溫25-35℃，

檢測波長：200-220nm。

本發(fā)明所述的普洱茶提取物，可以按照現(xiàn)有技術(shù)制備，為了更好的發(fā)揮本發(fā)明的療效，本發(fā)明的普洱茶提取物是按照專利公開號CN101961061A、CN101961061B、CN101961425A、CN101961425B、CN101961060A、CN101961059A、CN101961059B制備。例如，可按照如下制備方法進(jìn)行制備：

步驟1，普洱茶葉加水煎煮提取2-4次，每次0.5～2小時，6-12倍體積的水；提取液過濾，濾液在≤70℃條件下減壓濃縮至茶葉重量：濃縮液體積＝1：2-1：3，

步驟2，濃縮液用離心機(jī)離心，離心液減壓濃縮至45-65℃比重1.1—1.25，濃縮膏噴霧干燥或微波干燥，即得。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式之一，步驟(1)中甲醇-水的體積比為1:1，混合對照品溶液中表沒食子酸兒茶素，兒茶素，表兒茶素，表沒食子兒茶素沒食子酸酯和表兒茶素沒食子酸酯的濃度范圍分別為0.25-0.75mg/ml，0.076mg/ml-0.38mg/ml，0.076mg/ml-0.38mg/ml，0.2mg/ml-1.0mg/ml，0.1mg/ml-0.5mg/ml。

本發(fā)明的普洱茶提取物，可以提取自普洱生茶或普洱熟茶，優(yōu)選自如下幾種來源：(1)云南普洱茶生態(tài)茶園優(yōu)質(zhì)普洱茶原料(特有葉組拼配)；(2)普洱市高海拔生態(tài)茶園種植大葉普洱茶原料(科學(xué)配比不同茶山、不同季節(jié)、不同質(zhì)級的大葉種普洱茶)；以及(3)百年以上、經(jīng)自然陳化4年以上的普洱茶古樹茶原料。普洱茶原料各5個批次進(jìn)行混合，制備得到普洱茶提取物樣品。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式之一，流動相A相為乙腈，B相為0.05％磷酸水溶液，梯度程序如下：

每次進(jìn)下一樣品之前，可以用2％A相、98％B相平衡色譜柱15min。

根據(jù)本發(fā)明，步驟(3)中，溶液的進(jìn)樣量為10μL。流動相的流速為1.0mL/min，柱溫30℃。

優(yōu)選地，本發(fā)明最佳檢測波長為210nm。普洱茶中主要成分兒茶素的最大吸收波長278nm，但是經(jīng)過研究，發(fā)現(xiàn)在210nm處，可以獲得更全面的色譜峰，且色譜峰紫外吸收較大，基線較為平穩(wěn)，故優(yōu)選的檢測波長確定為210nm。

另，本發(fā)明流動相A選擇乙腈而不選擇甲醇，是因?yàn)榧状冀刂共ㄩL為205nm，乙腈截止波長為190nm，本發(fā)明的最佳檢測波長為210nm，故選擇乙腈可以保證基線穩(wěn)定。流動相B選擇含有0.05％磷酸的水，而不是其它的酸，例如乙酸，是因?yàn)樵谧贤獠ㄩL范圍內(nèi)，磷酸的紫外吸收干擾比乙酸弱。若用210nm低波長，最好用磷酸，乙酸在220nm左右有吸收，會 干擾吸收峰。

采用本發(fā)明所提供的方法得到的指紋圖譜有11個主要特征峰，保留時間分別為：11.5±0.2min，13.2±0.2min，18.3±0.2min，24.9±0.2min，27.0±0.2min，29.3±0.2min，32.5±0.2min，34.3±0.2min，37.1±0.2min，43.1±0.2min，44.6±0.2min。(參見圖1)采用本發(fā)明所提供的方法得到的指紋圖譜，其11個主要特征峰均可以得到很好地分離。

本發(fā)明還提供了一種普洱茶提取物HPLC指紋圖譜的建立方法，包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備

分別取表沒食子酸兒茶素，兒茶素，表兒茶素，表沒食子兒茶素沒食子酸酯和表兒茶素沒食子酸酯，加體積比為1:1的甲醇-水，得到含表沒食子酸兒茶素，兒茶素，表兒茶素，表沒食子兒茶素沒食子酸酯和表兒茶素沒食子酸酯的混合對照品儲備液，表沒食子酸兒茶素，兒茶素，表兒茶素，表沒食子兒茶素沒食子酸酯和表兒茶素沒食子酸酯的濃度分別0.3mg/ml，0.152mg/ml，0.152mg/ml，0.4mg/ml和0.2mg/ml。

(2)供試品溶液的制備

取云南普洱茶生態(tài)茶園優(yōu)質(zhì)普洱茶原料、普洱市高海拔生態(tài)茶園種植大葉普洱茶原料以及百年以上、經(jīng)自然陳化4年以上的普洱茶古樹茶原料，各5個批次進(jìn)行混合，制備得到普洱茶提取物供試品，稱取0.15g，置50ml容量瓶中，加入超純水，攪拌、室溫下超聲使普洱茶提取物完全溶解，定容，搖勻，過0.45μm濾膜，即得供試品溶液。

(3)獲得色譜圖

以對照品溶液作為參照物，將供試品溶液和對照品溶液注入超高效液相色譜儀，得到色譜圖，

其中，超高效液相色譜儀的色譜條件如下：

色譜柱選自：C18柱，規(guī)格250mm×4.6mm，

流動相：流動相A相為乙腈，B相為0.05％磷酸水溶液，梯度程序如下：

每次進(jìn)下一樣品之前，用2％A相、98％B相平衡色譜柱15min；溶液的進(jìn)樣量為10μL，流動相的流速為1.0mL/min，柱溫30℃，

檢測波長：210nm。

(4)生成指紋圖譜：

樣品分析后，對色譜圖進(jìn)行積分處理，調(diào)整積分參數(shù)，去除咖啡堿峰，即得到每個樣品的待分析圖譜，其中11個主要特征峰的保留時間分別為11.5±0.2min，13.2±0.2min，18.3±0.2min，24.9±0.2min，27.0±0.2min，29.3±0.2min，32.5±0.2min，34.3±0.2min，37.1±0.2min，43.1±0.2min，44.6±0.2min。

本發(fā)明的普洱茶提取物HPLC指紋圖譜的建立及檢測方法，更具體地可以包括如下步驟：

1、建立普洱茶提取物HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；

2、建立待測普洱茶樣品的HPLC指紋圖譜；

3、將待測普洱茶樣品的HPLC指紋圖譜與普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行對比，判斷二者的相似度。

其中，步驟1，建立普洱茶提取物HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，具體方法為：

A、樣品的選擇：分別選用上述三種來源的普洱茶原料各5個批次進(jìn)行混合，來制備得到普洱茶提取物樣品。

B、樣品處理：取上述普洱茶提取物樣品，稱取0.1500g，置50ml容量瓶中，加入超純水，攪拌、室溫下超聲使普洱茶提取物完全溶解，定容，搖勻，過0.45μm濾膜，作為供試品溶液。

C、將供試品溶液注入高效液相色譜，其中，色譜條件如下：

色譜柱：Synergi 4u Hydro-RP 80A C18柱(250mm×4.6mm ID,Phenomenex)；

流動相：A:乙腈－B:水(含0.05％磷酸)；

梯度洗脫：0→50min，2％A：98％B→25％A：75％B；

50→55min，25％A：75％B→2％A：98％B；

進(jìn)下一樣之前2％A：98％B平衡色譜柱15min；

檢測波長：210nm；

流速：1.0mL/min；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：10μL。

D、數(shù)據(jù)分析并獲得本發(fā)明普洱茶提取物的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

其中數(shù)據(jù)分析為：樣品分析后，對色譜圖進(jìn)行積分處理，調(diào)整積分參數(shù)，去除咖啡堿峰，既得本發(fā)明普洱茶提取物的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。參見圖1。本發(fā)明普洱茶提取物的HPLC指紋圖譜具有如下11個主要特征峰，保留時間分別為：11.5±0.2min，13.2±0.2min，18.3±0.2min，24.9±0.2min，27.0±0.2min，29.3±0.2min，32.5±0.2min，34.3±0.2min，37.1±0.2min，43.1±0.2min，44.6±0.2min。

其中，步驟2，建立待測茶葉HPLC指紋圖譜：以與步驟1相同的方法及色譜條件進(jìn)行待測普洱茶樣品的處理以及HPLC譜圖的采集，得到待測普洱茶樣品的HPLC指紋圖譜。(參見圖1)

其中，步驟3，將待測普洱茶樣品的HPLC指紋圖譜進(jìn)行積分處理，調(diào)整積分參數(shù)，去除咖啡堿峰，積分后色譜圖以AIA格式導(dǎo)出，導(dǎo)出數(shù)據(jù)導(dǎo)入到國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件(2004A版)，以普洱茶標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜為參照，進(jìn)行相似度分析。

其中，當(dāng)待測普洱茶樣品的HPLC指紋圖譜與普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行對比，相似度大于0.9時，可判斷為同一產(chǎn)品，或同一產(chǎn)品不同批次之間質(zhì)量穩(wěn)定。否則，為其它普洱茶產(chǎn)品，或本批次產(chǎn)品質(zhì)量不合格。

本發(fā)明的方法是經(jīng)過驗(yàn)證的。

方法學(xué)驗(yàn)證

1穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取本發(fā)明普洱茶提取物樣品，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，置于室溫下，分別在0，2，4，6，12，24h檢測指紋圖譜，結(jié)果參見圖1，顯示本發(fā)明普洱茶提取物中主要成分：表沒食子酸兒茶素(EGC，峰4)，兒茶素(C，峰5)，表兒茶素(EC，峰7)，表沒食子兒茶素沒食 子酸酯(EGCG，峰8)和表兒茶素沒食子酸酯(ECG，峰10)峰面積的RSD分別為0.91％，1.22％，0.91％，0.99％和0.60％，保留時間的RSD分別為0.19％，0.22％，0.20％，0.21％和0.14％，結(jié)果參見圖2，表明供試液在24h內(nèi)測定的指紋圖譜是穩(wěn)定的。

同時將24h穩(wěn)定性考察的色譜峰進(jìn)行相似度比較，表1同樣表明普洱茶提取物樣品溶液在室溫下24h內(nèi)測定指紋圖譜是穩(wěn)定的。

表1普洱茶提取物相似度結(jié)果

2重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取普洱茶提取物樣品，按供試品溶液制備方法制備試品溶液，制備5份平行供試品溶液，檢測指紋圖譜，結(jié)果顯示普洱茶提取物中主要成分EGC(峰4)，C(峰5)，EC(峰7)，EGCG(峰8)和ECG(峰10)峰面積的RSD分別為0.68％，1.06％，0.85％，1.05％和0.43％，保留時間的RSD分別為0.10％，0.10％，0.13％，0.10％和0.08％，結(jié)果參見圖3，表明供試液日內(nèi)重復(fù)指紋圖譜是穩(wěn)定的。

同時將日內(nèi)重復(fù)性考察的色譜峰進(jìn)行相似度比較，表2同樣表明普洱茶提取物樣品溶液日內(nèi)測定指紋圖譜是穩(wěn)定的。

表2普洱茶提取物日內(nèi)穩(wěn)定性相似度結(jié)果

取普洱茶提取物樣品，按供試品溶液制備方法制備試品溶液，連續(xù)5天，每天制備一份平行供試品溶液，檢測指紋圖譜結(jié)果顯示普洱茶提取物中主要成分EGC(峰4)，C(峰5)，EC(峰7)，EGCG(峰8)和ECG(峰10)峰面積的RSD分別為1.66％，1.73％，3.46％，1.40％和1.02％，保留時間的RSD分別為0.36％，0.19％，0.21％，0.17％和0.23％，結(jié)果參見圖4，表明供試液日間重復(fù)指紋圖譜是穩(wěn)定的。

同時將日間重復(fù)性考察的色譜峰進(jìn)行相似度比較，表3同樣表明甘醇樣品溶液日間測定指紋圖譜是穩(wěn)定的。

表3普洱茶提取物日間穩(wěn)定性相似度結(jié)果

本發(fā)明采用HPLC技術(shù)建立普洱茶提取物指紋圖譜，來比較每批次生產(chǎn)普洱茶提取物與標(biāo)準(zhǔn)提取物的相似度，同時與市場上存在的競品普洱茶產(chǎn)品進(jìn)行比較，以建立普洱茶提取物質(zhì)量監(jiān)控、競品辨別方法。

本發(fā)明的有益效果：

普洱茶提取物為多組分復(fù)雜體系，因此評價其質(zhì)量應(yīng)采用與之相適應(yīng)的，能提供豐富鑒別信息的檢測方法，本發(fā)明建立的普洱茶提取物HPLC指紋圖譜能較為全面地反映普洱茶提取物中所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進(jìn)而對產(chǎn)品的穩(wěn)定性及質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控，另外，也可與市場上存在的其他同類產(chǎn)品進(jìn)行判別，方法簡便，快速可靠。

本發(fā)明附加的方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面 的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。

附圖說明

本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從下面結(jié)合附圖對實(shí)施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中：

圖1本發(fā)明提供的普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；

圖2普洱茶提取物穩(wěn)定性指紋圖譜；

圖3普洱茶提取物日內(nèi)重復(fù)指紋圖譜；

圖4普洱茶提取物日間重復(fù)性指紋圖譜；

圖5普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜與部分不同批次甘醇型普洱茶提取物指紋圖譜；

圖6普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜與不同批次清香型普洱茶提取物指紋圖譜；

圖7普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜與不同批次古茶型普洱茶提取物指紋圖譜；

圖8本發(fā)明普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜與不同廠家茶珍指紋圖譜。

具體實(shí)施方式

下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例。下面通過參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能解釋為對本發(fā)明的限制。

實(shí)施例1

A、樣品的選擇：樣品的選擇：分別選用下述(1)～(3)三種來源的普洱茶原料各5個批次進(jìn)行混合，并用本發(fā)明說明書中公開的普洱茶提取物制備方法制備得到普洱茶提取物，即普洱茶提取物樣品。

(1)云南普洱茶生態(tài)茶園種植的優(yōu)質(zhì)普洱茶原料，特有葉組拼配；(2)普洱市高海拔地區(qū)生態(tài)茶園種植茶葉為原料，科學(xué)配比不同茶山、不同季節(jié)、不同質(zhì)級的大葉種普洱茶；以及(3)百年以上、經(jīng)自然陳化4年以上的普洱茶古樹茶原料。

B、樣品處理：取上述得到的普洱茶提取物樣品，稱取0.1500g，置50ml容量瓶中，加入超純水，攪拌、室溫下超聲使普洱茶提取物完全溶解，定 容，搖勻，過0.45μm濾膜，作為供試品溶液。

C、將供試品溶液注入高效液相色譜，其中，色譜條件如下：

色譜柱：Synergi 4u Hydro-RP 80A C18柱(250mm×4.6mm ID,Phenomenex)；

流動相：A:乙腈－B:水(含0.05％磷酸)；

梯度洗脫：0→50min，2％A：98％B→25％A：75％B；

50→55min，25％A：75％B→2％A：98％B；

進(jìn)下一樣之前2％A：98％B平衡色譜柱15min；

檢測波長：210nm；

流速：1.0mL/min；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：10μL。

D、對色譜圖進(jìn)行積分處理，調(diào)整積分參數(shù)，去除咖啡堿峰，既得本發(fā)明普洱茶提取物的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。參見圖1。

實(shí)施例2

選用云南普洱茶生態(tài)茶園種植的優(yōu)質(zhì)普洱茶原料，特有葉組拼配，并用本發(fā)明說明書中公開的普洱茶提取物制備方法制備普洱茶提取物，即得甘醇型普洱茶提取物。

取43個批次的甘醇型普洱茶提取物，分別為：

甘醇2011I02；甘醇2011J14；甘醇2011J16；甘醇2012B06；甘醇2012C21；甘醇2012E16；甘醇2013H06；甘醇2013I04；甘醇2013L04；甘醇2013L06；甘醇PE2012E09(Z)；甘醇PE2012G02；甘醇PE2013G01；甘醇PE2013G02；甘醇PE2013G03；甘醇PE2013I03；甘醇PE2013I08；甘醇PE2013L02；甘醇PE2013L03；甘醇PE2013L05；甘醇PE2014A01；甘醇PE2014A02；甘醇PE2014A03；甘醇PE2014A03；甘醇PE2014A04；甘醇PE2014A05；甘醇PE2014A06；甘醇PE2014A07；甘醇PE2014A08；甘醇PE2014B04；甘醇PE2014B05；甘醇PE2014B06；甘醇PE2014B07；甘醇PE2014C01；甘醇PE2014C02；甘醇PE2014C03；甘醇PE2014C04；甘醇PE2014C05；甘醇PE2014C07；甘醇PE2014C08；甘醇PE2014C09； 甘醇PE2014C10，云南天士力帝泊洱生物茶集團(tuán)有限公司質(zhì)量部提供。

分別稱取每個批次的甘醇型普洱茶提取物樣品0.1500g，置50ml容量瓶中，加入超純水，攪拌、室溫下超聲使普洱茶提取物完全溶解，定容，搖勻，過0.45μm濾膜，作為供試品溶液。

將供試品溶液注入高效液相色譜，其中，色譜條件如下：

色譜柱：Synergi 4u Hydro-RP 80A C18柱(250mm×4.6mm ID,Phenomenex)；

流動相：A:乙腈－B:水(含0.05％磷酸)；

梯度洗脫：0→50min，2％A：98％B→25％A：75％B；

50→55min，25％A：75％B→2％A：98％B；

進(jìn)下一樣之前2％A：98％B平衡色譜柱15min；

檢測波長：210nm；

流速：1.0mL/min；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：10μL。

每個樣品做3個平行實(shí)驗(yàn)，檢測結(jié)果經(jīng)積分處理(積分中調(diào)整積分參數(shù)，去除咖啡堿峰)后數(shù)據(jù)按AIA格式導(dǎo)出，將導(dǎo)出的數(shù)據(jù)(AIA格式)導(dǎo)入到中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2004A版)，以普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜為參照，對不同批次甘醇普洱茶提取物樣品進(jìn)行相似度分析，分析結(jié)果如圖5、表4。

表4不同批次甘醇型普洱茶提取物樣品相比于普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度結(jié)果

分析結(jié)果顯示(表4)：除了甘醇2011I02(0.805)、甘醇2012B06(0.606)、甘醇PE2014A06(0.644)、甘醇PE2014C07(0.699)相比于普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度小于0.900，其余甘醇樣品與普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相似度均大于0.900(0.904-0.991)，表明公司每批甘醇提取物樣品基礎(chǔ)物質(zhì)種類和含量差別小，產(chǎn)品穩(wěn)定。

實(shí)施例3

選用普洱市高海拔地區(qū)生態(tài)茶園種植茶葉為原料，科學(xué)配比不同茶 山、不同季節(jié)、不同質(zhì)級的大葉種普洱茶，并用本發(fā)明說明書中公開的普洱茶提取物制備方法制備普洱茶提取物，即得清香型普洱茶提取物。

分別取33個批次的清香型普洱茶提取物，分別為：

清香20100455；清香20100508；清香2011J02；清香2011K09；清香2011L01；清香2012B24；清香2012B40；清香2012B41；清香2012D01；清香2012D05；清香2012E06；清香2013H02；清香2013H03；清香2013I01；清香2013I02；清香2013I05；清香2013I06；清香2013I07；清香2013I09；清香2013I10；清香2013K01；清香20130302；清香PE2013K01；清香PE2013K02；清香PE2013K03；清香PE2013K04；清香PE2013K05；清香PE2014B01；清香PE2014B02；清香PE2014B03；清香PE2014C06；清香PE2014D06；清香PE2014D07，云南天士力帝泊洱生物茶集團(tuán)有限公司質(zhì)量部提供。

分別稱取每個批次的清香型普洱茶提取物0.1500g，置50ml容量瓶中，加入超純水，攪拌、室溫下超聲使普洱茶提取物完全溶解，定容，搖勻，過0.45μm濾膜，作為供試品溶液。

將供試品溶液注入高效液相色譜，其中，色譜條件如下：

色譜柱：Synergi 4u Hydro-RP 80A C18柱(250mm×4.6mm ID,Phenomenex)；

流動相：A:乙腈－B:水(含0.05％磷酸)；

梯度洗脫：0→50min，2％A：98％B→25％A：75％B；

50→55min，25％A：75％B→2％A：98％B；

進(jìn)下一樣之前2％A：98％B平衡色譜柱15min；

檢測波長：210nm；

流速：1.0mL/min；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：10μL。

每個樣品做3個平行實(shí)驗(yàn)，檢測結(jié)果經(jīng)積分處理(積分中調(diào)整積分參數(shù)，去除咖啡堿峰)后到出數(shù)據(jù)AIA格式，將導(dǎo)出的數(shù)據(jù)(AIA格式)導(dǎo)入到中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2004A版)，以普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜為參照，對不同批次清香型普洱茶提取物進(jìn)行相似度分析，分 析結(jié)果如圖6、表5。

表5不同批次清香型普洱茶提取物相比于普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度結(jié)果

分析結(jié)果顯示(表5)：除了清香20100455、清香2011L01相比于標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度小于0.900(20100455為0.899；2011L01為0.649)，其余清香樣品與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相似度均大于0.900(0.903-0.995)，表明公司每批清香型普洱茶提取物基礎(chǔ)物質(zhì)種類和含量差別小，產(chǎn)品穩(wěn)定。

實(shí)施例4

選用百年以上、經(jīng)自然陳化4年以上的普洱茶古樹茶原料，并用本發(fā)明說明書中公開的普洱茶提取物制備方法制備普洱茶提取物，即得古茶型普洱茶提取物。

分別取18個批次的古茶型普洱茶提取物，分別為：

古茶100J；古茶1800J；古茶20100129；古茶20100206；古茶20100306；古茶20100405；古茶2011H04；古茶2012C24；古茶2012C26；古茶2012D09；古茶2013H05；古茶2013I01；古茶2013I02；古茶PE2013J01；古茶PE2013K07；古茶PE2013L01；古茶PE2013L07；古茶PE2014D03，云南天士力帝泊洱生物茶集團(tuán)有限公司質(zhì)量部提供。

分別稱取每個批次的古茶型普洱茶提取物0.1500g，置50ml容量瓶中，加入超純水，攪拌、室溫下超聲使普洱茶提取物完全溶解，定容，搖勻，過0.45μm濾膜，作為供試品溶液。

將供試品溶液注入高效液相色譜，其中，色譜條件如下：

色譜柱：Synergi 4u Hydro-RP 80AC18柱(250mm×4.6mm ID,Phenomenex)；

流動相：A:乙腈－B:水(含0.05％磷酸)；

梯度洗脫：0→50min，2％A：98％B→25％A：75％B；

50→55min，25％A：75％B→2％A：98％B；

進(jìn)下一樣之前2％A：98％B平衡色譜柱15min；

檢測波長：210nm；

流速：1.0mL/min；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：10μL。

每個樣品做3個平行實(shí)驗(yàn)，檢測結(jié)果經(jīng)積分處理(積分中調(diào)整積分參數(shù)，去除咖啡堿峰)后到出數(shù)據(jù)AIA格式，將導(dǎo)出的數(shù)據(jù)(AIA格式)導(dǎo)入到中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2004A版)，以普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜為參照，對不同批次古茶型普洱茶提取物進(jìn)行相似度分析，分析結(jié)果如圖7、表6。

表6不同批次古茶型普洱茶提取物相比于普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度結(jié)果

分析結(jié)果顯示(表6)：除了古茶100J、古茶PE2013J01、古茶PE2013L07、古茶PE2014D03相比于標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度小于0.900(0.812-0.894)，其余古茶樣品與古茶標(biāo)準(zhǔn)品相比，相似度均大于0.900(0.909-0.993)，表明公司每批古茶茶珍樣品基礎(chǔ)物質(zhì)種類和含量差別小，產(chǎn)品穩(wěn)定。

實(shí)施例5

選取20個競品普洱茶樣品，分別為：

佛蓮山普洱茶粉普洱天福生物科技發(fā)展有限公司；國漢醉爽速溶茶云南、云縣國漢生態(tài)茶業(yè)有限公司；樂淳快時尚即溶茶廣東正源華茶生物工程有限公司；科洱健即溶普洱茶珍云南萬紅揚(yáng)茶業(yè)有限公司；七彩云南醇品普洱茶珍昆明七彩云南灃祥茶業(yè)股份有限公司；熟茶普洱茶云南松德生物科技開發(fā)有限公司；臨毫普洱臨滄千年古茶有限公司；精爍普洱茶珍云南龍潤茶業(yè)貢獻(xiàn)公司；和泰之春固態(tài)速溶茶貴州和泰春茶葉科技有限公司；版比臘告速溶普洱茶楚雄州百草嶺藥業(yè)發(fā)展有限公司； 御香君國風(fēng)普洱茶膏云南貢潤茶業(yè)有限公司；國道固態(tài)速溶茶(藍(lán))云南大唐漢方制藥有限公司；國道固態(tài)速溶茶(金)云南大唐漢方制藥有限公司；茶褐素云南、紅河唐人生物發(fā)展有限公司；八角亭和靈普洱速溶茶珍云南省黎明農(nóng)工商聯(lián)合公司茶廠；滇泊洱普洱茶珍云南滇泊洱生物科技有限公司；凈末普洱茶珍云南海灣茶葉有限公司；云南大葉喬木古茶粉普洱市思茅區(qū)玥樹茶莊；龍御軒昆明萬維新商務(wù)有限公司；寶文堂昆明寶文堂商貿(mào)有限公司。

分別稱取每個競品0.1500g，置50ml容量瓶中，加入超純水，攪拌、室溫下超聲使普洱茶提取物完全溶解，定容，搖勻，過0.45μm濾膜，作為供試品溶液。

將供試品溶液注入高效液相色譜，其中，色譜條件如下：

色譜柱：Synergi 4u Hydro-RP 80AC18柱(250mm×4.6mm ID,Phenomenex)；

流動相：A:乙腈－B:水(含0.05％磷酸)；

梯度洗脫：0→50min，2％A：98％B→25％A：75％B；

50→55min，25％A：75％B→2％A：98％B；

進(jìn)下一樣之前2％A：98％B平衡色譜柱15min；

檢測波長：210nm；

流速：1.0mL/min；

柱溫：30℃；

每個樣品做3個平行實(shí)驗(yàn)，檢測結(jié)果經(jīng)積分處理(積分中調(diào)整積分參數(shù)，去除咖啡堿峰)后到出數(shù)據(jù)AIA格式，將導(dǎo)出的數(shù)據(jù)(AIA格式)導(dǎo)入到中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2004A版)。

以本發(fā)明普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜為參照，對不同生產(chǎn)廠家的茶珍樣品進(jìn)行相似度分析，分析結(jié)果如圖8、表7。

表7不同廠家茶珍相比于本發(fā)明普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度結(jié)果

以本發(fā)明普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜為參照，對19個廠家的20個樣品進(jìn)行相似度分析，分析結(jié)果顯示：19個廠家的20個茶珍樣品與本發(fā)明普洱茶提取物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相似度均低于0.800(0.065-0.767)。

盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。