本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種解脲支原體金標(biāo)檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

解脲支原體(Ureaplasma Urealyticum，UU)是原核細(xì)胞微生物，體積介于細(xì)菌和病毒之間，屬于支原體柔膜菌綱，缺少細(xì)胞壁和脂多糖，常用Dienes染色法將其染成淡紫色。其分子量小，約為750-947kbp,僅為大腸桿菌的五分之一，合成和代謝有限，是目前已知的能在無(wú)生命培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖的最小的原核細(xì)胞。1954年，Shepard等從男性非淋球菌性尿道炎(Nongonoccal Urethritis，NGU)患者的尿道分泌物中首次分離得到解脲支原體(UU)。

人解脲支原體至少含有14個(gè)血清型，依據(jù)基因組大小，16SrRNA，16S-23SrRNA基因間隔區(qū)，酶多態(tài)性，DNA-DNA雜交，多條帶抗原(Multiple-Banded antigen，MB抗原)的不同可分為兩大類，第一群微小支原體(Ureaplasma parvum Up)，包括血清1、3、6和14四個(gè)血清型，其他10個(gè)血清型屬于第二群解脲支原體(U.urealyticum,Uu)，60％-80％的解脲支原體感染是由第一血清型引起。MB抗原是解脲支原體的毒力因子和人感染過(guò)程中血清識(shí)別的主要抗原。MB抗原N端相對(duì)保守，故制備針對(duì)MB抗原N端保守區(qū)的抗體來(lái)檢測(cè)臨床標(biāo)本中的解脲支原體。

解脲支原體可以寄居于健康人泌尿生殖道粘膜表面和嬰兒呼吸道，也可以引起侵襲性疾病。在發(fā)達(dá)國(guó)家，認(rèn)為解脲支原體感染被認(rèn)為是一種性傳播疾病，女性感染可造成不孕，孕婦感染可引起產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎、絨毛膜羊膜炎、流產(chǎn)、早產(chǎn)、支原體性產(chǎn)褥熱，也可垂直傳播感染嬰兒。男性感染后會(huì)引起前列腺炎、附睪炎、尿道炎癥并影響精液的濃度和PH,對(duì)精液質(zhì)量產(chǎn)生負(fù)面作用。

近年來(lái)，解脲支原體感染性引起的非淋球菌性尿道炎已成為最常見(jiàn)的性傳播疾病，且發(fā)病率有上升趨勢(shì)，歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家已居各類性病之首，我國(guó)的發(fā)病率也不容忽視。濫用抗生素導(dǎo)致耐藥菌株出現(xiàn)，隨時(shí)間和地點(diǎn)的變化其耐藥性也各不相同。應(yīng)此，解脲支原體的檢查在優(yōu)生優(yōu)育中具有極其重要的地位，越來(lái)越受到醫(yī)學(xué)專家們的關(guān)注，及早發(fā)現(xiàn)對(duì)于控制感染和并發(fā)癥有著重大意義。

目前，該項(xiàng)目檢測(cè)主要應(yīng)用的檢測(cè)方法為：直接電鏡法(EM)、培養(yǎng)法、免疫電鏡法(IEM)、放射免疫法(RIA)、免疫熒光實(shí)驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)、雜交技術(shù)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)等方法進(jìn)行檢測(cè)。但是，這些檢測(cè)方法均需要依賴相應(yīng)的儀器設(shè)備、并需要使用液體試劑等，不便于實(shí)地檢測(cè)，而且試劑的保存溫度和使用也受到限制，也不便于快速簡(jiǎn)便的得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

因而，目前需要一種能夠早期、快速、簡(jiǎn)便、可靠地診斷解脲支原體的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種解脲支原體金標(biāo)檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供一種解脲支原體金標(biāo)檢測(cè)試劑盒，包括樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水濾紙和反應(yīng)支持物；其中，所述樣品墊、所述膠體金墊、所述硝酸纖維素膜、所述吸水濾紙依次設(shè)置在所述反應(yīng)支持物上；所述樣品墊設(shè)置在所述反應(yīng)支持物的底端，所述樣品墊的頂端壓住所述膠體金墊的底端并與之粘貼，所述膠體金墊的頂端壓住所述硝酸纖維素膜的底端并與之粘貼，所述硝酸纖維素膜的頂端被所述吸水濾紙的底端壓住并與之粘貼。

優(yōu)選的，所述吸水濾紙長(zhǎng)度為20.0mm，所述吸水濾紙與所述硝酸纖維素膜重疊粘貼在一起的重疊長(zhǎng)度為1.5mm。

優(yōu)選的，所述膠體金墊的長(zhǎng)度為7.0mm，所述膠體金墊與所述硝酸纖維素膜重疊粘貼在一起的重疊長(zhǎng)度為1.5mm。

優(yōu)選的，所述樣品墊的長(zhǎng)度為20.0mm，所述樣品墊與所述膠體金墊重疊粘貼在一起的重疊長(zhǎng)度為3.0mm。

優(yōu)選的，所述膠體金墊為含有膠體金標(biāo)記的解脲支原體MB蛋白單克隆抗體的膠體金墊。

優(yōu)選的，所述硝酸纖維素膜設(shè)置有檢測(cè)條帶和質(zhì)控條帶，所述檢測(cè)條帶設(shè)置于靠近所述膠體金墊的一側(cè)并含有解脲支原體MB蛋白單克隆抗體，所述質(zhì)控條帶設(shè)置于遠(yuǎn)離所述膠體金墊的一側(cè)并含有羊抗鼠IgG多克隆抗體。

優(yōu)選的，所述反應(yīng)支持物為塑料。

本發(fā)明提供一種應(yīng)用解脲支原體金標(biāo)檢測(cè)試劑盒進(jìn)行解脲支原體檢測(cè)的方法，包括以下步驟：

(1)將待檢樣本用稀釋液處理；其中，所述待檢樣本為泌尿或生殖道分泌物；

(2)將稀釋好的樣本滴加至解脲支原體金標(biāo)檢測(cè)試劑盒的樣品墊上；樣本將依次沿著反應(yīng)支持物上的各個(gè)附著物向吸水濾紙的方向移動(dòng)；

(3)若所述樣本中含有解脲支原體，則解脲支原體中的解脲支原體MB蛋白在經(jīng)過(guò)所述膠體金墊的過(guò)程中，與所述膠體金墊標(biāo)記的解脲支原體MB蛋白單克隆抗體特異性結(jié)合形成復(fù)合物；所述復(fù)合物在經(jīng)過(guò)所述硝酸纖維素膜的過(guò)程中，依次與解脲支原體MB蛋白單克隆抗體以及羊抗鼠IgG多克隆抗體特異性結(jié)合；則檢測(cè)條帶處出現(xiàn)紅色或紫紅色，樣本為陽(yáng)性；

若所述樣本中不含有解脲支原體，則檢測(cè)條帶處未出現(xiàn)紅色或紫紅色，樣本為陰性：

(4)如果質(zhì)控條帶處出現(xiàn)紅色或紫紅色，則表明實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效；如果質(zhì)控條帶處未 出現(xiàn)紅色或紫紅色，則表明膠體金失效或者實(shí)驗(yàn)操作有誤，實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)效。

優(yōu)選的，步驟(1)中，使用0.01M磷酸鹽緩沖液作為樣品稀釋液，稀釋待檢樣本。

本發(fā)明的有益效果如下：

本發(fā)明提供的解脲支原體金標(biāo)檢測(cè)試劑盒，能夠簡(jiǎn)化泌尿或生殖道樣本中解脲支原體的檢測(cè)流程。利用該種檢測(cè)試劑盒檢測(cè)解脲支原體，不對(duì)任何實(shí)驗(yàn)儀器、環(huán)境或者操作人員具有依賴性，操作簡(jiǎn)單、方便、檢測(cè)周期短、易于判讀；另外，不需要特殊的儀器設(shè)備，不需要專業(yè)培訓(xùn)，適應(yīng)性強(qiáng)，便于隨時(shí)隨地的監(jiān)測(cè)和檢驗(yàn)。

本發(fā)明提供的檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單方便、不依賴較高實(shí)驗(yàn)室條件、用于快速檢測(cè)解脲支原體，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)快速簡(jiǎn)便的輔助診斷泌尿生殖道等相關(guān)疾病的病因。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒的正面示意圖；

圖2是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒的側(cè)面示意圖；

圖3是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性示意圖；

圖4是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果陰性示意圖；

圖5是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒結(jié)果無(wú)效示意圖；

圖6是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒結(jié)果無(wú)效示意圖。

其中：1、吸水濾紙；2、硝酸纖維素膜；3、膠體金墊；4、樣品墊；5、反應(yīng)支持物；T、檢測(cè)條帶；C、質(zhì)控條帶。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明：

本發(fā)明實(shí)施方式為針對(duì)解脲支原體的具體檢測(cè)方式，其他亞型或者基因型的檢測(cè)方法，在制得合適的單克隆抗體后均可以按照以下思路得到檢測(cè)方法。

本發(fā)明提供的解脲支原體金標(biāo)檢測(cè)試劑盒由吸水濾紙(1)、硝酸纖維素膜(2)、膠體金墊(3)、樣品墊(4)和反應(yīng)支持物(5)組成。其中，反應(yīng)支持物可以為塑料膠板。吸水濾紙可以防止樣本在硝酸纖維素膜的一端堆積，從而導(dǎo)致后續(xù)的樣本無(wú)法繼續(xù)前行，進(jìn)而能夠使反應(yīng)充分。硝酸纖維素膜(2)包括含有解脲支原體MB蛋白單克隆抗體的檢測(cè)條帶T以及含有羊抗鼠IgG多克隆抗體的質(zhì)控條帶C。膠體金墊(3)含有膠體金標(biāo)記的解脲支原體MB蛋白單克隆抗體。包被檢測(cè)條帶T和質(zhì)控條帶C的硝酸纖維素膜(2)粘貼在反應(yīng)支持物(5)上。

具體的，樣品墊設(shè)置在反應(yīng)支持物的底端，樣品墊的頂端壓住膠體金墊的底端并與之粘貼，樣品墊的長(zhǎng)度為20.0mm，所述樣品墊與所述膠體金墊重疊粘貼在一起的重疊長(zhǎng)度為 3.0mm。

膠體金墊的頂端壓住硝酸纖維素膜的底端并與之粘貼，膠體金墊的長(zhǎng)度為7.0mm，所述膠體金墊與所述硝酸纖維素膜重疊粘貼在一起的重疊長(zhǎng)度為1.5mm。

硝酸纖維素膜的頂端被吸水濾紙的底端壓住并與之粘貼，吸水濾紙長(zhǎng)度為20.0mm，吸水濾紙與硝酸纖維素膜重疊粘貼在一起的重疊長(zhǎng)度為1.5mm。

在檢測(cè)條帶T的方向上硝酸纖維素膜的邊緣距離反應(yīng)支持物邊緣34.0mm，在質(zhì)控條帶C的方向上硝酸纖維素膜的邊緣距離反應(yīng)支持物的邊緣20.0mm。

為了能夠達(dá)到檢測(cè)解脲支原體MB蛋白的目的，需要選用合適的稀釋液配方，從而能夠?qū)⒔怆逯гw包涵體中的MB蛋白分離出來(lái)，本實(shí)例中使用的是0.01M磷酸鹽緩沖液作為樣品處理液。

將50～100μl的待檢樣品處理液直接滴加至檢測(cè)試劑盒樣品墊，此時(shí)樣品將依次沿著反應(yīng)支持物(5)上的各個(gè)附著物向吸水濾紙的方向移動(dòng)，15分鐘內(nèi)讀取實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

如果待檢樣本(泌尿生殖道分泌物)中含有的解脲支原體時(shí)，則與檢測(cè)試劑盒上的膠體金標(biāo)記的解脲支原體MB蛋白單克隆抗體特異性結(jié)合形成復(fù)合物，而后繼續(xù)前行，與包被在硝酸纖維素膜(2)上的另一個(gè)解脲支原體MB蛋白單克隆抗體發(fā)生特異性結(jié)合，在檢測(cè)條帶處出現(xiàn)紅色或者紫紅色，即檢測(cè)線，表明待檢樣品中含有解脲支原體，為陽(yáng)性，參照?qǐng)D3。

如果待檢樣本中含有的不含有解脲支原體，就不能形成足量復(fù)合物，檢測(cè)條帶處也就不能出現(xiàn)紅色或紫紅色，為陰性，參照?qǐng)D4。

無(wú)論樣本中是否含有解脲支原體，上述膠體金標(biāo)記的單克隆抗體都會(huì)繼續(xù)前行至質(zhì)控條帶并與此處包被的羊抗鼠IgG多克隆抗體結(jié)合，形成紅色或者紫紅色條帶，即為質(zhì)控線。如果在檢測(cè)中此條帶不出現(xiàn)，則證明膠體金失效或者操作有失誤，結(jié)果無(wú)效，需要重新檢測(cè)，參照?qǐng)D5和圖6。

本發(fā)明提供的解脲支原體金標(biāo)檢測(cè)試劑盒，能夠簡(jiǎn)化泌尿生殖道分泌物樣本中解脲支原體的檢測(cè)流程。利用該種檢測(cè)試劑盒檢測(cè)解脲支原體，不對(duì)任何實(shí)驗(yàn)儀器、環(huán)境或者操作人員具有依賴性，操作簡(jiǎn)單、方便、檢測(cè)周期短、易于判讀；另外，不需要特殊的儀器設(shè)備，不需要專業(yè)培訓(xùn)，適應(yīng)性強(qiáng)，便于隨時(shí)隨地的監(jiān)測(cè)和檢驗(yàn)。

本發(fā)明提供的檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單方便、不依賴較高實(shí)驗(yàn)室條件、用于快速檢測(cè)解脲支原體，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)快速簡(jiǎn)便的輔助診斷泌尿生殖道感染等相關(guān)疾病的病因。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視本發(fā)明的保護(hù)范圍。