解脲脲原體快速培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種解脈脈原體快速培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基，屬于生物培養(yǎng)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 脈原體OJreaplasma)是從人體中分離的能自身繁垣的13種支原體之一，屬硬壁 菌口柔膜體綱支原體目支原體科脈原體屬。脈原體介于病毒和細菌之間，是在人工培養(yǎng) 基上能繁殖的最小的原核細胞型微生物，無細胞壁，能自我復(fù)制，呈球桿狀，大小為125~ 250nm，分子量為4. 5X108,具高度多形性。脈原體根據(jù)分子生物學(xué)特征分為兩個生物 群和14個血清型，兩個生物群包括微小脈原體OJreaplasmaparvum，化）和解脈脈原體 OJreaplasmaureal^ixum，化），14個血清型中，基因組較小的血清型1、3、6、14屬于微小 脈原體，占脈原體感染的90%~92%;基因組較大的血清型2、4、5、8~13屬于解脈脈原 體，占脈原體感染的8%~10%。
[0003] 檢測解脈脈原體和人型支原體的方法有特異性抗體檢測法、PCR法、SouthernBlot 法和分離培養(yǎng)法等。免疫學(xué)檢測方法容易出現(xiàn)交叉反應(yīng)，PCR法容易出現(xiàn)假陰性和假陽性， 而SouthernBlot法對實驗技術(shù)要求較高，不適合在醫(yī)院內(nèi)使用。臨床上常用的檢測方法 是分離培養(yǎng)法。國內(nèi)有關(guān)泌尿生殖道支原體培養(yǎng)的實際應(yīng)用和研究顯示，支原體的鑒定主 要采用液體培養(yǎng)法。雖然液體培養(yǎng)法使用方便、快捷、容易判斷，但是運種方法只能從液體 顏色的改變來推斷支原體是否存在，假陽性率高，準確性不高。而固體培養(yǎng)法則可W通過顯 微鏡觀察到人型支原體和解脈脈原體的菌落，從而確證支原體的存在，較好地解決臨床標 本假陽性率高的問題。但是固體培養(yǎng)法判讀結(jié)果的時間較長，因而需要時間較長才能對UU 和ffil引起的泌尿道生殖道感染進行確診，不利于疾病的診斷和治療。
[0004] 基于現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，尋找一種能夠快速培養(yǎng)解脈脈原體固體培養(yǎng)基是現(xiàn)在迫切 需要解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種快速檢測支原體的固體培養(yǎng)基及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：
[0007] -種快速培養(yǎng)解脈脈原體的固體培養(yǎng)基，其配方如下：
[0008] 瓊脂粉12g，新鮮牛肉提取純粉lOg，肥陽S緩沖劑3g，k半脫氨酸0. 5g，憐酸二氨 鐘5g，脈1. 5g，硫酸儘0. 2g，葡萄糖Ig~3g，馬血清300ml，抗生素700, 000IU，橫胺甲基異 惡挫3g，甲氧節(jié)氨喀晚5mg，多粘菌素6mg，RPMI1640細胞培養(yǎng)基5g，蒸饋水定容至1000ml。
[0009] 本發(fā)明所得解脈脈原體培養(yǎng)基具有檢出可靠、支原體分離率高的特點，同時去除 精氨酸，不利于人型支原體生長，從而使得解脈脈原體的鑒定結(jié)果更加準確。
[0010] 本發(fā)明的有益效果是：
[0011] 使用本發(fā)明的固體培養(yǎng)基可選擇性地培養(yǎng)解脈脈原體，通過菌落的形成確證支原 體的存在，并能從菌落形態(tài)判斷支原體的類型，因此，相對于液體培養(yǎng)基常出現(xiàn)假陽性的情 況，本發(fā)明的固體培養(yǎng)基在診斷泌尿生殖道感染方面的準確性大大提高。除此w外，在支原 體菌落形成時間上，目前固體培養(yǎng)基的結(jié)果判讀時間為24小時，而使用本發(fā)明的支原體培 養(yǎng)基判讀結(jié)果只需要10小時，大大縮短了檢測時間，實現(xiàn)了解脈脈原體的快速檢測，并且 所形成的菌落比在市售培養(yǎng)基上形成的菌落要大得多，為醫(yī)生制訂合理的治療方案提供了 快速可靠的檢驗結(jié)果。
【具體實施方式】
[0012] 實施例1培養(yǎng)基的配置
[0013] 培養(yǎng)基制備：共設(shè)5組，分別為培養(yǎng)基1-4四組和對照1組。對照1組為支原體肉 湯固體培養(yǎng)基。
[0014] 其中培養(yǎng)基1為按照瓊脂粉12g，新鮮牛肉提取純粉lOg，肥陽S緩沖劑3g，k半 脫氨酸0. 5g，憐酸二氨鐘5g，脈1. 5g，硫酸儘0. 2g，葡萄糖Ig~3g，馬血清300ml，抗生素 700, 000IU，橫胺甲基異惡挫3g，甲氧節(jié)氨喀晚5mg，多粘菌素6mg，RPMI1640細胞培養(yǎng)基5g 的配方配置，蒸饋水定容1000ml。
[001引培養(yǎng)基2為按照瓊脂粉12g，新鮮牛肉提取純粉lOg，肥陽S緩沖劑3g，k半脫氨 酸0. 5g，憐酸二氨鐘5g，脈1. 5g，硫酸儘0. 2g，葡萄糖Ig~3g，馬血清300ml，精氨酸2g，抗 生素700, 000IU，甲氧節(jié)氨喀晚5mg，多粘菌素6mg，RPMI1640細胞培養(yǎng)基5g的配方配置，蒸 饋水定容1000ml。
[0016] 培養(yǎng)基3為按照瓊脂粉12g，新鮮牛肉提取純粉lOg，肥陽S緩沖劑3g，k半脫 氨酸0. 5g，憐酸二氨鐘5g，脈1. 5g，硫酸儘0. 2g，葡萄糖Ig~3g，馬血清300ml，抗生素 700, 000IU，橫胺甲基異惡挫3g，多粘菌素6mg，RPMI1640細胞培養(yǎng)基5g的配方配置，蒸饋 水定容1000ml。
[0017] 其中培養(yǎng)基4為按照瓊脂粉12g，新鮮牛肉提取純粉lOg，肥陽S緩沖劑3g，k半 脫氨酸0. 5g，憐酸二氨鐘5g，脈1. 5g，硫酸儘0. 2g，葡萄糖Ig~3g，馬血清300ml，抗生素 700, 000IU，甲氧節(jié)氨喀晚5mg，多粘菌素6mg，RPMI1640細胞培養(yǎng)基5g的配方配置，蒸饋水 定容1000ml。
[0018] 實施例2培養(yǎng)基培養(yǎng)效果驗證
[0019] 標本采集培養(yǎng)方法：
[0020] 婦科患者的泌尿生殖道標本拭子10例，均為解脈脈原體陽性，通過擴培，分為5 組，每組3個平行樣。人型支原體標本作為對照。分別用拭子接種固體培養(yǎng)基，然后36Γ培 養(yǎng)，10小時后檢驗培養(yǎng)結(jié)果。
[0021] 結(jié)果判定（顏色）
[0022]
[0023]
[0024] 實施例3培養(yǎng)基培養(yǎng)準確性驗證
[0025] 取臨床標本10例，接種固體培養(yǎng)基1，然后36°C培養(yǎng)，10小時后檢驗培養(yǎng)結(jié)果。通 過檢驗發(fā)現(xiàn)，有4例為解脈脈原體陽性。
[0026] 通過CN102409098A中的解脈脈原體PCR檢測試劑盒進行準確性鑒定，發(fā)現(xiàn)4例均 為解脈脈原體陽性，結(jié)果準確。其余6例沒有檢測到解脈脈原體。
[0027] 結(jié)論：培養(yǎng)基1可W有效的提高解脈脈原體標本檢驗的準確率，減少假陰性和假 陽性的發(fā)生，使婦科患者的臨床診斷正確率進一步加強。
【主權(quán)項】
1. 一種培養(yǎng)基，其特征在于：能快速培養(yǎng)解脲脲原體。2. 如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于：其包括瓊脂粉12g，新鮮牛肉提取純粉 10g，HEPES緩沖劑3g，L-半胱氨酸0. 5g，磷酸二氫鉀5g，脲1. 5g，硫酸猛0. 2g，葡萄糖lg~ 3g，馬血清300ml，抗生素700, 000IU，磺胺甲基異惡唑3g，甲氧芐氨嘧啶5mg，多粘菌素6mg， RPMI1640細胞培養(yǎng)基5g，蒸餾水定容1000ml。3. -種鑒別解脲脲原體的方法，其特征在于使用權(quán)利要求1-2所述的培養(yǎng)基。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種解脲脲原體快速培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基。所述的培養(yǎng)基與現(xiàn)有技術(shù)的培養(yǎng)基相比添加了多種的組分，該組分具有快速的提高培養(yǎng)效率能夠有效的鑒定解脲脲原體。具有培養(yǎng)時間短，易于鑒定的優(yōu)點。
【IPC分類】C12Q1/04
【公開號】CN105331671
【申請?zhí)枴緾N201510829005
【發(fā)明人】劉慧 , 陳艷萍, 代玉龍, 辛克盛
【申請人】劉慧
【公開日】2016年2月17日
【申請日】2015年11月20日