一種電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器的制備方法，屬于新型納米功能材料和生物傳感器領域。本發(fā)明首先在二氧化鈦納米顆?；咨希霉怆娀瘜W合成方法，直接在電極上合成了二氧化鈦-貴金屬復合材料，進而制得了成本低、靈敏度高、特異性好、檢測快速、制備簡單的檢測胃癌腫瘤標志物的電化學無標記免疫傳感器。
【專利說明】-種電化學胃癌腫瘤標志物無標巧免疫傳感器的制備方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種用于檢測胃癌腫瘤標志物的電化學無標記免疫傳感器的制備方 法。屬于新型納米功能材料與生物傳感器【技術領域】。

【背景技術】
[0002] 電化學免疫傳感器由于其靈敏度高、特異性好、操作簡便等優(yōu)點被廣泛應用于臨 床分析和環(huán)境檢測領域，一般可分為有標記和無標記兩種，由于標記物的特性，前者比后者 對檢測環(huán)境要求更嚴格，操作也相對繁瑣，因此無標記電化學免疫傳感器具有更廣闊的應 用前景。構建無標記電化學免疫傳感器，關鍵的技術是提高修飾電極對抗體的固定量和對 測試底液的信號響應速度和大小。二氧化鐵納米粒子Ti化NPs是一種光敏材料，在光照條 件下，會導致電子-空穴對進行分離，進而具有一定的氧化還原性。本發(fā)明，利用Ti化NPs 的該一特性，直接在電極上實現(xiàn)了核殼結構的金銀鈕合金納米椿材料Au@Ag-Pd NDRs，使之 與Ti〇2 NPs的復合材料共同修飾的電極，一方面增加了電極比表面積，增強電極導電能力， 另一方面二者可W產(chǎn)生協(xié)同催化作用，更大的增強對過氧化氨溶液&化的催化響應速度和 電流響應信號大小。由此，成功的發(fā)明了無標記電化學免疫傳感器的制備方法。
[0003] 胃癌腫瘤標志物的檢測可反映胃癌的生物學特性，對胃癌患者的早期發(fā)現(xiàn)、臨床 治療及診斷的具有重要意義。目前，檢測胃癌腫瘤標志物的方法主要有酶聯(lián)免疫法、放射免 疫法、氣相色譜-質譜聯(lián)用法等。該些方法操作復雜，而且化驗人員需要專業(yè)培訓后才能進 行檢測。因此，研發(fā)靈敏度高、特異性強、檢測速度快的胃癌腫瘤標志物傳感器具有重要意 義。
[0004] 應用電化學免疫傳感器檢測胃癌腫瘤標志物的研究正處于上升態(tài)勢，但一般都需 要對電極進行多層修飾，操作相對繁瑣。因此，開發(fā)一種既制備簡單、又能快速靈敏檢測胃 癌腫瘤標志物的無標記電化學免疫傳感器，將具有廣闊的應用前景和重要的科學意義。


【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種制備簡單、靈敏度高、檢測快速、特異性強的可用于胃 癌腫瘤標志物檢測的電化學無標記免疫傳感器的制備方法，所制備的傳感器，可用于胃癌 腫瘤標志物的快速、靈敏檢測?；诖四康模景l(fā)明先后使用二氧化鐵納米粒子溶膠Ti化 NPs和金銀納米椿溶膠Au@Ag NRs對電極進行修飾，然后利用光電化學合成方法，在電極上 直接快速地制備了 Au@Ag-Pd NDRs，為更好的形成增強電極的電子響應速度和穩(wěn)定性等性 能，在電極上滴加硫堇溶液TH和殼聚糖溶液C服并成膜，利用邸C/N服的交聯(lián)作用固定胃 癌腫瘤標志物抗體，在進行檢測時，利用抗體與抗原的特異性定量結合，使得電極對&化的 電流響應信號相應降低，從而實現(xiàn)了采用無標記的電化學方法檢測胃癌腫瘤標志物的免疫 傳感器的構建。
[0006] 本發(fā)明采用的技術方案如下： 1. 一種電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器的制備方法，其特征在于，制備步驟 為： (1) W直徑4 mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂5?10 uL二氧化鐵納米粒子 溶膠Ti〇2 NPs，室溫下驚干后，滴涂5?10化的金銀納米椿溶膠Au@Ag NRs，并在室溫下驚 干； (2) 將步驟（1)中得到的電極超純水清洗，室溫下驚干成膜，表面滴涂5?lOuL 0.01 mol/L的氯鈕酸溶液H2PCICI4,立刻使用高壓隸燈照射30?90秒，制得Ti〇2 NPs負載的金銀 鈕合金納米椿材料Au@Ag-Pd NDRs修飾的工作電極，室溫下驚干； (3) 將步驟（2)中得到的電極用超純水清洗，室溫下驚干后，表面滴涂5?10 uL硫堇溶 液TH，室溫下驚干； (4) 將步驟（3)中得到的電極用超純水清洗，表面滴涂5?10 uL殼聚糖溶液C服，室溫 下驚干； (5) 將步驟（4)中得到的電極用超純水清洗后，將電極浸入到邸C/N服溶液中，1小時 后取出； (5) 在電極表面滴涂5?10化10嗦/mL的胃癌腫瘤標志物抗體溶液，4 °C冰箱中保 存驚干； (6) 將步驟（5)中得到的電極用超純水清洗，繼續(xù)在電極表面滴涂5?10化100嗦/mL 的牛血清白蛋白BSA溶液，4 °C冰箱中保存驚干，超純水清洗，4 °C冰箱中驚干成膜，審U 得電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器； 所述的Ti化NPs為Img/mL的二氧化鐵納米粒子水溶液； 所述的Au@Ag NRs為金@銀核殼納米椿與殼聚糖復合材料的水溶液，所述金@銀核殼 納米椿是W椿狀金納米粒子為核、W銀納米粒子為殼層的核殼結構的椿狀納米粒子，所述 椿狀納米粒子的長度為20?50nm ; 所述的^PdCL為抑值為1?2的氯鈕酸水溶液； 所述的Au@Ag-Pd NDRs為金銀鈕合金納米椿，所述的金銀鈕合金納米椿為金@銀鈕核 殼枝晶狀的納米椿，所述金@銀鈕核殼枝晶狀的納米椿是W椿狀金納米粒子為核、W枝晶 狀銀鈕合金納米粒子為殼層的核殼結構的納米粒子，所述納米椿的長度為20?50nm ; 所述TH為硫堇的水溶液，所述水溶液中硫堇的濃度為5mmol/L ; 所述CHS為將殼聚糖純品加入到體積分數(shù)為1%的醋酸中制備而成的殼聚糖水溶液； 所述的邸C/N服為1- (3-二甲氨基丙基）-3-己基碳二亞胺鹽酸鹽邸C和N-哲基了二 酷亞胺N服的混合溶液，所述混合溶液中邸C的濃度為0. Olmol/L，N服的濃度為0. 002mol/ L。
[0007] 2.本發(fā)明所述的制備方法所制備的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器， 所述的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器應用于胃癌腫瘤標志物的檢測，其特征在 于，檢測步驟為： (1) 標準溶液配制：配制一組包括空白標樣在內的不同濃度的胃癌腫瘤標志物標準溶 液，底液為抑7. 4的磯酸鹽緩沖溶液； (2) 工作電極修飾：將本發(fā)明所述的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器作為工 作電極，將步驟（1)中配制的不同濃度的胃癌腫瘤標志物標準溶液分別滴涂到工作電極表 面，4 °C冰箱中保存； (3) 工作曲線繪制：將飽和甘隸電極作為參比電極，銷絲電極作為輔助電極，與步 驟（2)所修飾好的工作電極組成=電極系統(tǒng)，連接電化學工作站，在電解槽中先后加入 10?25血抑=7. 0?8. 0的PBS緩沖溶液和20uL 3?6 mol/L的&〇2;通過計時電流法檢測組 裝的工作電極對&〇2的響應；空白標樣的響應電流記為/。，含有不同濃度的胃癌腫瘤標志 物標準溶液的響應電流記作馬，響應電流降低的差值為A /= /。-馬，A /與胃癌腫瘤標志物 標準溶液的質量濃度&間成線性關系，繪制A /-幻C作曲線； (4) 胃癌腫瘤標志物的檢測；用待測樣品代替步驟（1)中的胃癌腫瘤標志物標準溶液， 按照步驟（2)和（3)中的方法進行檢測，根據(jù)響應電流降低的差值A巧日工作曲線，得到待 測樣品中胃癌腫瘤標志物的含量。
[000引 3.本發(fā)明所述的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器的制備方法，其特征 在于所述胃癌腫瘤標志物選自下列之一；CA-199、CA-242或CA-724。
[0009] 本發(fā)明的有益成果 (1) 本發(fā)明所述的胃癌腫瘤標志物免疫傳感器制備簡單，操作方便，實現(xiàn)了對樣品的快 速、靈敏、高選擇性檢測，具有市場發(fā)展前景； (2) 本發(fā)明首次采用光電化學方法制備了 Au@Ag-Pd NDRs并將其應用于電化學免疫傳 感器的制備中，通過Ti〇2 NPs與Au@Ag-Pd NDRs的協(xié)同催化作用，顯著提高了電極對&〇2的 響應速度和重現(xiàn)性，大大提高了電化學傳感器的檢測靈敏度，具有重要的科學意義和應用 價值。

【具體實施方式】
[0010] 實施例1電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器的制備方法： (OW直徑4 mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂5 uL二氧化鐵納米粒子溶 膠Ti化NPs，室溫下驚干后，滴涂5化的金銀納米椿溶膠Au@Ag NRs，并在室溫下驚干； (2) 將步驟（1)中得到的電極超純水清洗，室溫下驚干成膜，表面滴涂加L 0.01 mol/L 的氯鈕酸溶液H2PCICI4,立刻使用高壓隸燈照射30秒，制得Ti〇2 NPs負載的金銀鈕合金納米 椿材料Au@Ag-Pd NDRs修飾的工作電極，室溫下驚干； (3) 將步驟（2)中得到的電極用超純水清洗，室溫下驚干后，表面滴涂5 uL硫堇溶液 TH，室溫下驚干； (4) 將步驟（3)中得到的電極用超純水清洗，表面滴涂5 uL殼聚糖溶液C服，室溫下驚 干； (5) 將步驟（4)中得到的電極用超純水清洗后，將電極浸入到邸C/N服溶液中，1小時 后取出； (5) 在電極表面滴涂5化10嗦/mL的胃癌腫瘤標志物抗體溶液，4 °C冰箱中保存驚 干； (6) 將步驟（5)中得到的電極用超純水清洗，繼續(xù)在電極表面滴涂5化100嗦/mL的牛 血清白蛋白BSA溶液，4 °C冰箱中保存驚干，超純水清洗，4 °C冰箱中驚干成膜，制得電 化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器； 所述的Ti化NPs為Img/mL的二氧化鐵納米粒子水溶液； 所述的Au@Ag NRs為金@銀核殼納米椿與殼聚糖復合材料的水溶液，所述金@銀核殼 納米椿是w椿狀金納米粒子為核、w銀納米粒子為殼層的核殼結構的椿狀納米粒子，所述 椿狀納米粒子的長度為20nm ; 所述的^PdCL為抑值為1的氯鈕酸水溶液； 所述的Au@Ag-Pd NDRs為金銀鈕合金納米椿，所述的金銀鈕合金納米椿為金@銀鈕核 殼枝晶狀的納米椿，所述金@銀鈕核殼枝晶狀的納米椿是W椿狀金納米粒子為核、W枝晶 狀銀鈕合金納米粒子為殼層的核殼結構的納米粒子，所述納米椿的長度為20nm ; 所述TH為硫堇的水溶液，所述水溶液中硫堇的濃度為5mmol/L ; 所述CHS為將殼聚糖純品加入到體積分數(shù)為1%的醋酸中制備而成的殼聚糖水溶液； 所述的邸C/N服為1- (3-二甲氨基丙基）-3-己基碳二亞胺鹽酸鹽邸C和N-哲基了二 酷亞胺N服的混合溶液，所述混合溶液中邸C的濃度為0. Olmol/L，N服的濃度為0. 002mol/ L。
[0011] 實施例2電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器的制備方法： (OW直徑4 mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂8 uL Ti化NPs，室溫下驚干 后，滴涂8化的Au@Ag NRs，并在室溫下驚干； (2) 將步驟（1)中得到的電極超純水清洗，室溫下驚干成膜，表面滴涂8uL 0.01 mol/L 的H2PCICI4,立刻使用高壓隸燈照射60秒，制得Ti化NPs負載的Au@Ag-Pd NDRs修飾的工作 電極，室溫下驚干； (3) 將步驟（2)中得到的電極用超純水清洗，室溫下驚干后，表面滴涂8 uL TH，室溫下 驚干； (4) 將步驟（3)中得到的電極用超純水清洗，表面滴涂8 uL CHS，室溫下驚干； (5) 將步驟（4)中得到的電極用超純水清洗后，將電極浸入到邸C/N服溶液中，1小時 后取出； (5) 在電極表面滴涂8化10嗦/mL的胃癌腫瘤標志物抗體溶液，4 °C冰箱中保存驚 干； (6) 將步驟（5)中得到的電極用超純水清洗，繼續(xù)在電極表面滴涂8化100帖/血的 BSA溶液，4 °C冰箱中保存驚干，超純水清洗，4 °C冰箱中驚干成膜，制得電化學胃癌腫瘤 標志物無標記免疫傳感器； 所述的Au@Ag NRs所使用的椿狀納米粒子的長度為40nm ; 所述的畔(1化為抑值為1.5 ; 所述的Au@Ag-Pd NDRs所使用的椿狀納米粒子的長度為40nm。
[0012] 實施例3電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器的制備方法： (OW直徑4 mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂10 uL Ti化NPs，室溫下驚 干后，滴涂10化Au@Ag NRs,并在室溫下驚干； (2) 將步驟（1)中得到的電極超純水清洗，室溫下驚干成膜，表面滴涂lOuL 0.01 mol/ L的H2PCICI4,立刻使用高壓隸燈照射90秒，制得Ti化NPs負載的Au@Ag-Pd NDRs修飾的工 作電極，室溫下驚干； (3) 將步驟（2)中得到的電極用超純水清洗，室溫下驚干后，表面滴涂10 uL TH，室溫 下驚干； (4) 將步驟（3)中得到的電極用超純水清洗，表面滴涂10 uL CHS，室溫下驚干； (5)將步驟（4)中得到的電極用超純水清洗后，將電極浸入到邸C/N服溶液中，1小時 后取出； (5) 在電極表面滴涂10化10嗦/mL的胃癌腫瘤標志物抗體溶液，4 °C冰箱中保存驚 干； (6) 將步驟（5)中得到的電極用超純水清洗，繼續(xù)在電極表面滴涂10化100嗦/mL的 BSA溶液，4 °C冰箱中保存驚干，超純水清洗，4 °C冰箱中驚干成膜，制得電化學胃癌腫瘤 標志物無標記免疫傳感器； 所述的Au@Ag NRs所使用的椿狀納米粒子的長度為50nm ; 所述的H2PCICI4為抑值為2 ; 所述的Au@Ag-Pd NDRs所使用的椿狀納米粒子的長度為50nm。
[0013] 實施例4 實施例1制備的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器，用于胃癌 腫瘤標志物的檢測，步驟如下： (1) 標準溶液配制：配制一組包括空白標樣在內的不同濃度的胃癌腫瘤標志物標準溶 液，底液為抑7. 4的磯酸鹽緩沖溶液； (2) 工作電極修飾：將本發(fā)明所述的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器作為工 作電極，將步驟（1)中配制的不同濃度的胃癌腫瘤標志物標準溶液分別滴涂到工作電極表 面，4 °C冰箱中保存； (3) 工作曲線繪制：將飽和甘隸電極作為參比電極，銷絲電極作為輔助電極，與步驟 (2)所修飾好的工作電極組成S電極系統(tǒng)，連接電化學工作站，在電解槽中先后加入lOmL pH=7. 0的PBS緩沖溶液和20uL 3 mol/L的&〇2;通過計時電流法檢測組裝的工作電極對 &化的響應；空白標樣的響應電流記為/。，含有不同濃度的胃癌腫瘤標志物標準溶液的響 應電流記作馬，響應電流降低的差值為A /= /。-馬，A巧胃癌腫瘤標志物標準溶液的質量 濃度&間成線性關系，繪制A /-口C作曲線； (4) 胃癌腫瘤標志物的檢測；用待測樣品代替步驟（1)中的胃癌腫瘤標志物標準溶液， 按照步驟（2)和（3)中的方法進行檢測，根據(jù)響應電流降低的差值A巧日工作曲線，得到待 測樣品中胃癌腫瘤標志物的含量； 所述的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器的線性檢測范圍為；〇. 02?25 ng/血， 檢出限為；8 pg/mL ;所述的胃癌腫瘤標志物為CA-199。
[0014] 實施例5 實施例2制備的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器，用于胃癌 腫瘤標志物的檢測，步驟如下： (1) 標準溶液配制：配制一組包括空白標樣在內的不同濃度的胃癌腫瘤標志物標準溶 液，底液為抑7. 4的磯酸鹽緩沖溶液； (2) 工作電極修飾：將本發(fā)明所述的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器作為工 作電極，將步驟（1)中配制的不同濃度的胃癌腫瘤標志物標準溶液分別滴涂到工作電極表 面，4 °C冰箱中保存； (3) 工作曲線繪制：將飽和甘隸電極作為參比電極，銷絲電極作為輔助電極，與步驟 (2)所修飾好的工作電極組成S電極系統(tǒng)，連接電化學工作站，在電解槽中先后加入15mL pH=7. 4的PBS緩沖溶液和20uL 4 mol/L的&〇2;通過計時電流法檢測組裝的工作電極對 &化的響應；空白標樣的響應電流記為/。，含有不同濃度的胃癌腫瘤標志物標準溶液的響 應電流記作馬，響應電流降低的差值為A /= /。-馬，A /與胃癌腫瘤標志物標準溶液的質量 濃度&間成線性關系，繪制A /-口C作曲線； (4)胃癌腫瘤標志物的檢測；用待測樣品代替步驟（1)中的胃癌腫瘤標志物標準溶液， 按照步驟（2)和（3)中的方法進行檢測，根據(jù)響應電流降低的差值A巧日工作曲線，得到待 測樣品中胃癌腫瘤標志物的含量； 所述的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器的線性檢測范圍為；〇. 02?37 ng/mL， 檢出限為；8 pg/mL ;所述的胃癌腫瘤標志物為CA-242。
[0015] 實施例6 實施例3制備的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器，用于胃癌 腫瘤標志物的檢測，步驟如下： (1) 標準溶液配制：配制一組包括空白標樣在內的不同濃度的胃癌腫瘤標志物標準溶 液，底液為抑7. 4的磯酸鹽緩沖溶液； (2) 工作電極修飾：將本發(fā)明所述的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器作為工 作電極，將步驟（1)中配制的不同濃度的胃癌腫瘤標志物標準溶液分別滴涂到工作電極表 面，4 °C冰箱中保存； (3) 工作曲線繪制：將飽和甘隸電極作為參比電極，銷絲電極作為輔助電極，與步驟 (2)所修飾好的工作電極組成S電極系統(tǒng)，連接電化學工作站，在電解槽中先后加入25mL pH=8. 0的PBS緩沖溶液和20uL 6 mol/L的&〇2;通過計時電流法檢測組裝的工作電極對 &〇2的響應；空白標樣的響應電流記為/。，含有不同濃度的胃癌腫瘤標志物標準溶液的響 應電流記作馬，響應電流降低的差值為A /= /。-馬，A /與胃癌腫瘤標志物標準溶液的質量 濃度&間成線性關系，繪制A /-口C作曲線； (4) 胃癌腫瘤標志物的檢測；用待測樣品代替步驟（1)中的胃癌腫瘤標志物標準溶液， 按照步驟（2)和（3)中的方法進行檢測，根據(jù)響應電流降低的差值A巧日工作曲線，得到待 測樣品中胃癌腫瘤標志物的含量； 所述的電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器的線性檢測范圍為；〇. 02?28 ng/mL， 檢出限為；8 pg/mL ;所述的胃癌腫瘤標志物為CA-724。
[0016] 實施例7人血清中胃癌腫瘤標志物的檢測 準確移取人血清樣品，加入一定質量濃度的胃癌腫瘤標志物抗原標準溶液，W未加入 胃癌腫瘤標志物抗原的人血清為空白，進行加標回收實驗，按照實施例4?6的步驟進行檢 巧。，測定樣品中胃癌腫瘤標志物的回收率，檢測結果見表1。
[0017] 表1人血清中胃癌腫瘤標志物的檢測結果

【權利要求】
1. 一種電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器的制備方法，其特征在于，制備步驟 為： (1) 以直徑4 mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂5~10 uL二氧化鈦納米粒子 溶膠Ti02 NPs，室溫下晾干后，滴涂5~10 ML的金銀納米棒溶膠AuOAg NRs，并在室溫下晾 干； (2) 將步驟（1)中得到的電極超純水清洗，室溫下晾干成膜，表面滴涂5~10uL 0.01 mol/L的氯鈀酸溶液H2PdCl4，立刻使用高壓汞燈照射30~90秒，制得Ti0 2 NPs負載的金銀 .巴合金納米棒材料Au@Ag-Pd NDRs修飾的工作電極，室溫下瞭干； (3) 將步驟（2)中得到的電極用超純水清洗，室溫下晾干后，表面滴涂5~10 uL硫堇溶 液TH，室溫下晾干； (4) 將步驟（3)中得到的電極用超純水清洗，表面滴涂5~10 uL殼聚糖溶液CHS，室溫 下晾干； (5) 將步驟（4)中得到的電極用超純水清洗后，將電極浸入到EDC/NHS溶液中，1小時 后取出； (5) 在電極表面滴涂5~10 ML 10 Pg/mL的胃癌腫瘤標志物抗體溶液，4 °C冰箱中保 存晾干； (6) 將步驟（5)中得到的電極用超純水清洗，繼續(xù)在電極表面滴涂5~10ML 100 Pg/mL 的牛血清白蛋白BSA溶液，4 °C冰箱中保存晾干，超純水清洗，4 °C冰箱中晾干成膜，制 得電化學胃癌腫瘤標志物無標記免疫傳感器； 所述的Ti02 NPs為lmg/mL的二氧化鈦納米粒子水溶液； 所述的Au@Ag NRs為金@銀核殼納米棒與殼聚糖復合材料的水溶液，所述金@銀核殼 納米棒是以棒狀金納米粒子為核、以銀納米粒子為殼層的核殼結構的棒狀納米粒子，所述 棒狀納米粒子的長度為20~50nm ; 所述的H2PdCl4S pH值為1~2的氯鈀酸水溶液； 所述的Au@Ag-Pd NDRs為金銀鈕合金納米棒，所述的金銀鈕合金納米棒為金0銀I巴核 殼枝晶狀的納米棒，所述金@銀鈀核殼枝晶狀的納米棒是以棒狀金納米粒子為核、以枝晶 狀銀鈕合金納米粒子為殼層的核殼結構的納米粒子，所述納米棒的長度為20~50nm ; 所述TH為硫堇的水溶液，所述水溶液中硫堇的濃度為5mmol/L ; 所述CHS為將殼聚糖純品加入到體積分數(shù)為1%的醋酸中制備而成的殼聚糖水溶液； 所述的EDC/NHS為1- (3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽EDC和N-羥基丁二 酰亞胺NHS的混合溶液，所述混合溶液中EDC的濃度為0? Olmol/L，NHS的濃度為0? 002mol/ L〇
2. 如權利要求1所述的無標記電化學胃癌腫瘤標志物免疫傳感器的制備方法，其特征 在于所述胃癌腫瘤標志物選自下列之一：CA-199、CA-242或CA-724。
【文檔編號】G01N27/26GK104502593SQ201510034908
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2015年1月25日 優(yōu)先權日:2015年1月25日
【發(fā)明者】張勇, 吳丹, 魏琴, 杜斌, 范大偉, 胡麗華 申請人:濟南大學