專利名稱：一種同時檢測胃癌腫瘤標志物多通道印刷電極免疫傳感器的制作方法
技術領域：
—種同時檢測胃癌腫瘤標志物多通道印刷電極免疫傳感器技術領域[0001]本實用新型涉及一種同時檢測胃癌腫瘤標志物多通道印刷電極免疫傳感器，具體 是涉及一種基于鉬雜化的磺酸化石墨烯納米材料構建的同時檢測胃癌腫瘤標志物的多通 道印刷電極電化學免疫傳感器，屬于新材料、生物傳感及腫瘤檢測技術領域。
背景技術：
[0002]胃癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于肺癌，居第二位，男性發(fā)病率為 55. 7/10萬，女性發(fā)病率為21. 0/10萬。我國胃癌的死亡率居惡性腫瘤之首。實施胃癌篩 查、早期診斷及早期治療是降低胃癌發(fā)病率及死亡率最為有效的策略。[0003]腫瘤標志物的發(fā)現及應用成為繼影像診斷和病理診斷之后，當前臨床檢測腫瘤常 用的方法之一，并用于腫瘤的隨訪及治療效果觀察，但目前尚未發(fā)現某一種胃癌特異性的 腫瘤標志物,而對血清中癌胚抗原CEA、糖類抗原CA19-9及糖類抗原CA72-4三種腫瘤標志 物同時檢測可彌補單一指標的局限性，提高了早期胃癌的診斷率，對胃癌的早期診斷具有 重要的意義。[0004]因此開發(fā)出一種能同時快速靈敏檢測胃癌腫瘤標志物的多通道印刷電極免疫傳 感器勢在必行。[0005]目前測定胃癌腫瘤標志物的方法有放射免疫法、酶聯免疫法、金標法等，盡管這些 方法都具有不同的優(yōu)點，但仍然存在不足，例如放射免疫法存在放射線輻射和污染等問題， 酶聯免疫法存在操作復雜、設備要求高、要求專門的操作人員等缺點，而金標法存在相對于 酶聯免疫法的特異性及敏感性低等缺點。[0006]針對上述不足，本實用新型提供一種操作方便、便攜、成本低、快速靈敏檢測胃癌 腫瘤標志物多通道印刷電極電化學免疫傳感器及其檢測方法。實用新型內容[0007]本實用新型的技術方案，包括以下步驟[0008]一種同時檢測胃癌腫瘤標志物多通道印刷電極免疫傳感器，其特征在于，在一聚 酯薄膜矩形基片的表面上，用銀/氯化銀漿印刷I個參比電極；用碳漿印刷3個工作電極、I 個輔助電極；用銀漿印刷電極引出線及電極引出線端部；在工作電極表面滴涂納米復合材 料孵化的不同胃癌腫瘤標志物抗體以及牛血清白蛋白，即制成一種同時檢測胃癌腫瘤標志 物多通道印刷電極免疫傳感器。[0009]所述納米復合材料為鉬雜化的磺酸化石墨烯，用于修飾工作電極。[0010]所述胃癌腫瘤標志物是癌胚抗原CEA、糖類抗原CA19-9和糖類抗原CA72-4。[0011]所述不同胃癌腫瘤標志物抗體是癌胚抗原CEA、糖類抗原CA19-9和糖類抗原 CA72-4對應的抗體。[0012]所述多通道印刷電極免疫傳感器用于胃癌腫瘤標志物癌胚抗原CEA、糖類抗原 CA 19-9和糖類抗原CA72-4的一次性同時檢測。[0013]電極以外的基片及上述所述的所有電極引出線端部，用絕緣漿印制一層絕緣層， 并在電極區(qū)域制成一個橢圓形電解池凹槽，該橢圓形電解池凹槽用于放置鐵氰化鉀溶液。[0014]上述所述的牛血清白蛋白用于封閉電極上的非特異性活性位點。[0015]上述所述的多通道印刷電極免疫傳感器，用于檢測胃癌腫瘤標志物的含量，步驟如下采用循環(huán)伏安法，利用峰電流電信號與不同類型的胃癌腫瘤標志物濃度的線性關系， 即可得出樣品中三種不同類型的胃癌腫瘤標志物的含量。[0016]與現有技術相比，本實用新型的優(yōu)勢如下[0017](I)印刷電極制備簡單、成本低、便于攜帶、易于微型化和集成化。[0018](2)本實用新型傳感器，檢測方法簡單，所需時間短，樣品消耗少，靈敏度高、重現性好，應用范圍廣。[0019](3)鉬雜化的磺酸化石墨烯既能增大電極表面積，結合更多的抗體，又能顯著改善電子傳遞能力，從而提高了本實用新型傳感器的靈敏度。[0020](4)本實用新型傳感器，與多通道電化學工作站的檢測電路相連，能夠實現3通道同時檢測，更加方便快捷，且同步性好，能減小測量誤差，顯著提高了檢測效率。[0021](5)本實用新型傳感器，采用免疫分析技術實現了不同類型胃癌腫瘤標志物的特異性識別，提高了早期胃癌的診斷率，對腫瘤的診斷、分類、預后判斷以及治療指導具有重要的指導意義。


[0022]圖1是多通道印刷電極結構示意圖。圖1中，①碳工作電極，②銀/氯化銀參比電極，③碳輔助電極，④引出 線，⑤引出線端部，⑥絕緣層，⑦橢圓形電解池凹槽。
具體實施方式
[0023]
以下結合附圖和實例進一步說明本實用新型[0024]實施例1本實用新型的產品結構[0025]結合圖1，一種同時檢測胃癌腫瘤標志物多通道印刷電極免疫傳感器的產品結構， 其特征在于，在一聚酯薄膜矩形基片的表面上印刷5個電極，其中包括3個碳工作電極①，I 個銀/氯化銀參比電極②，I個碳輔助電極③；在聚酯薄膜基片上用銀漿印刷上述5個電極的引出線④及引出線端部⑤。[0026]在5個電極的引出線端部⑤及5個電極以外的基片上，覆蓋有絕緣漿印制的絕緣層⑥，并在電極區(qū)域制成一個橢圓形電解池凹槽⑦。[0027]工作電極①及橢圓形電解池凹槽⑦的容積大小可根據需要設定，實際操作中為減小樣品消耗，一般將工作電極①的容積設置為5 ΙΟμ ，橢圓形電解池凹槽⑦的容積設置為 80 ΙΟΟμ 。[0028]通過電極表面修飾技術在工作電極上依次固定鉬雜化的磺酸化石墨烯孵化的不同類型的胃癌腫瘤標志物抗體以及牛血清白蛋白，置于4°C下晾干，即完成一種同時檢測胃癌腫瘤標志物多通道印刷電極免疫傳感器的制備，于4°C下保存?zhèn)溆?。[0029]實施例2血清樣品中CEA、CA 19-9及CA72-4的同時檢測[0030]取血清樣品分別滴涂到實施例1所制備的傳感器的工作電極表面，于室溫下孵化lh，用磷酸鹽緩沖溶液清洗干凈、晾干；將引出線端部與多通道電化學工作站檢測電路相連 接，向本傳感器的橢圓形電解池凹槽內加入鐵氰化鉀溶液，采用循環(huán)伏安分析法同時檢測 血清樣品中CEA、CA 19-9及CA72-4的含量。
權利要求1.一種同時檢測胃癌腫瘤標志物多通道印刷電極免疫傳感器，其特征在于，在一聚酯薄膜矩形基片的表面上，用銀/氯化銀漿印刷I個參比電極；用碳漿印刷3個工作電極、I個輔助電極；用銀漿印刷電極引出線及電極引出線端部；在工作電極表面滴涂納米復合材料孵化的不同胃癌腫瘤標志物的抗體以及牛血清白蛋白。
2.根據權利要求1所述的一種同時檢測胃癌腫瘤標志物多通道印刷電極免疫傳感器， 其特征在于，所述納米復合材料為鉬雜化的磺酸化石墨烯。
3.根據權利要求1所述的一種同時檢測胃癌腫瘤標志物多通道印刷電極免疫傳感器， 其特征在于，所述不同胃癌腫瘤標志物的抗體是癌胚抗原CEA、糖類抗原CA19-9和糖類抗原CA72-4對應的抗體。
專利摘要本實用新型涉及一種同時檢測胃癌腫瘤標志物多通道印刷電極免疫傳感器，其特征在于，在1個聚酯薄膜基片表面上印刷5個電極，其包括3個碳工作電極，1個銀/氯化銀參比電極和1個碳輔助電極，5個電極的引出線及引出線端部。用新型納米材料作為工作電極傳感材料，通過表面修飾技術，在工作電極表面上依次固定鉑雜化的磺酸化石墨烯孵化的不同類型的胃癌腫瘤標志物抗體及牛血清白蛋白，滴涂檢測液后與多通道電化學工作站檢測電路相連，從而實現了胃癌腫瘤標志物癌胚抗原CEA、糖類抗原CA19-9和糖類抗原CA72-4的一次性、同時快速檢測，提高了早期胃癌的診斷率。本實用新型傳感器制備簡單、加工方便、成本低、便于攜帶、易于商品化。
文檔編號G01N33/543GK202854092SQ20122041811
公開日2013年4月3日 申請日期2012年8月22日 優(yōu)先權日2012年8月22日
發(fā)明者吳丹, 張勇, 李賀, 杜斌, 魏琴, 李燕, 王志玲, 朱沛華, 朱寶存, 馬洪敏, 范大偉, 閆良國 申請人:濟南大學