一種葉酸定量檢測裝置及其制備方法和其在葉酸定量檢測中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種葉酸定量檢測的裝置及制備方法和應(yīng)用，所述葉酸定量檢測的裝置包括水相池和油相池；所述水相池包括上端開口的容器、水相鉑絲對電極Ⅱ，水相參比電極Ag/AgCl;所述油相池包括有機凝膠電化學(xué)傳感器、油相鉑絲對電極Ⅰ，油相參比電極Ag/AgCl；所述的有機凝膠電化學(xué)傳感器為底部粘有MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜而上部開口的中空管，且中空管中自底向上依次裝有有機凝膠、混合溶液。制備方法包括MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜、有機凝膠、有機凝膠電化學(xué)傳感器的制備和葉酸定量檢測的裝置組裝等4個步驟。利用該裝置對葉酸進行定量檢測的方法具有很高的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度、回收率和重現(xiàn)性。
【專利說明】一種葉酸定量檢測裝置及其制備方法和其在葉酸定量檢測中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種葉酸定量檢測裝置及其制備方法和其在葉酸定量檢測中的應(yīng)用，屬液/液界面電化學(xué)領(lǐng)域和電化學(xué)膜傳感器裝置應(yīng)用領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]葉酸(folic acid，F(xiàn)A)為蝶呤衍生物，屬于水溶性B族維生素。亦稱蝶酰谷氨酸，是機體細胞生長和繁殖的必需物質(zhì)，其分子式為C19H19N7O6,分子量為441.40。葉酸對人體的精神健康有重要作用，作為主要一碳單位供體，葉酸參與核酸、氨基酸、蛋白質(zhì)的生物合成。葉酸主要用于各種原因引起的葉酸缺乏以及葉酸缺乏引起的巨幼紅細胞性貧血的治療，惡性貧血的輔助治療，以及妊娠期、哺乳期婦女的預(yù)防給藥。由于葉酸具有這些特殊的生理功能，特別是對妊娠期、哺乳期婦女和胎兒，葉酸經(jīng)常作為營養(yǎng)強化劑用于保健藥品中，因此，如何測定這些藥品中的葉酸含量，以監(jiān)控這些藥品的質(zhì)量就變得尤為重要。
[0003]目前，國內(nèi)外關(guān)于葉酸檢測的裝置和方法都比較復(fù)雜，主要分為電化學(xué)方法和非電化學(xué)方法。非電化學(xué)方法一般有微生物法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫法法和熒光分光光度法。微生物法操作繁瑣，容易造成交叉感染，重現(xiàn)性不好。高效液相色譜不僅儀器昂貴而且管路容易腐蝕，長期測定容易造成設(shè)備的損壞。酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果與實際數(shù)值出入較大，而且長期使用成本較高。熒光分光光度法回收率低于規(guī)定范圍，不能用于實際檢測。電化學(xué)方法主要集中于利用修飾電極的固/液界面電化學(xué)，但是這些修飾電極制作過程往往涉及一些劇毒性物質(zhì)或貴重金屬，而且多次使用修飾電極容易損耗，具有不利于人體健康，成本較高和不能重復(fù)利用等缺點。基于上述問題，開發(fā)一種制備簡單、操作易行和成本低廉的葉酸定量檢測裝置，同時利用該葉酸定量檢測裝置對于葉酸定量檢測結(jié)果重現(xiàn)性好、靈敏度高、回收率高的葉酸檢測方法就尤為重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的之一是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中葉酸定量檢測裝置中所存在的操作繁瑣、容易損壞、成本較高等技術(shù)問題而提供一種葉酸定量檢測裝置，該裝置具有制備簡單、操作易行和成本低廉等特性。
[0005]本發(fā)明的目的之二在于提供上述的一種葉酸定量檢測裝置的制備方法。
[0006]本發(fā)明的目的之三在于提供一種利用上述的葉酸定量檢測裝置進行葉酸定量檢測的方法，該檢測方法具有很高的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度和回收率而且使用壽命長，重現(xiàn)性好。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)原理
多孔膜支撐的液/液界面電化學(xué)因其有增強傳質(zhì)，擴大電化學(xué)信號和提高電分析化學(xué)靈敏度等優(yōu)點，近幾年廣泛用于生物大分子和藥物分子檢測。液/液界面上有機凝膠結(jié)合溶出伏安技術(shù)的使用，使得一些生物大分子和藥物分子的檢測限大大降低至亞微摩爾級另|J。根據(jù)多孔膜支撐的液/液界面電化學(xué)方法檢測葉酸。針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，利用含有離子型表面活性劑(CTAB)的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜對陰離子具有離子交換功能結(jié)合有機凝膠的預(yù)富集功能大大提高了葉酸的檢測限，實現(xiàn)了葉酸的痕量分析與檢測。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)方案
一種葉酸定量檢測的裝置，包括水相池和油相池；油相池置于水相池的中上部，水相池可以通過升降裝置上下移動；
所述的水相池包括上端開口的容器、水相鉬絲對電極II，水相參比電極Ag/AgCl;所述的油相池包括有機凝膠電化學(xué)傳感器、油相鉬絲對電極I，油相參比電極Ag/AgCl ；
所述的有機凝膠電化學(xué)傳感器為底部粘有MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜而上部開口的中空管，且中空管中自底向上依次裝有有機凝膠、混合溶液；
所述的上部開口的中空管的材質(zhì)為石英；
有機凝膠的體積占整個中空管體積的10-20 %，混合溶液的體積占中空管體積的30-80% ;
所述的混合溶液為濃度為1mol.L—1的雙(三苯基膦)氯化銨)水溶液和濃度為0.1mol.Γ1的NaCl水溶液按體積比計算，即1mol.Γ1的雙(三苯基膦)氯化銨)水溶液:0.1mol.L-1的NaCl水溶液為5:6的比例混合而成；
所述的有機凝膠通過如下步驟的方法制備而成:
將1，6_ 二氯己烷和有機相支持電解質(zhì)于40-60°C油浴中加熱10-50min，然后加入平均分子量為22000的聚氯乙烯，緩慢升溫至70-90°C，待溶液呈透明狀態(tài)后，控制溫度為65-85°C，恒溫攪拌10-50min，即得有機凝膠；
其中1，6_ 二氯己烷、有機相支持電解質(zhì)和平均分子量為22000的聚氯乙烯的用量，按1，6- 二氯己烷:有機相支持電解質(zhì):平均分子量為22000的聚氯乙烯為Iml:0.012g:0.02-0.5g 的比例；
其中所用的有機相支持電解質(zhì)通過包括如下步驟的方法制備而成:
將雙(三苯基膦)氯化銨和四(4-氯苯基)硼酸鉀分別溶于按體積比為1:1的甲醇和水組成的混合溶液，再將兩種溶液混合，直至有白色沉淀生成，即制得有機相支持電解質(zhì)，其中雙(三苯基膦)氯化銨的摩爾濃度為0.01mol/L,四(4-氯苯基)硼酸鉀的摩爾濃度為0.01mol/L。
[0009]上述的一種葉酸定量檢測的裝置的制備，具體包括如下步驟:
(1)、MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜的制備
將無水乙醇，正硅酸四已酯(TEOS)和2.8mmol/L HCl水溶液按Ig:l_5g:0.1-1ml的比例混合均勻，放入三口燒瓶，置于油浴中，溫度都控制在50-80°C，反應(yīng)90min，停止加熱，所得的反應(yīng)液冷卻到室溫；
將十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、無水乙醇和55mmol/L HCl水溶液按Ig:5_15g:
l-5ml的比例混合后加入到上述所得的反應(yīng)液中繼續(xù)攪拌10-50min，得到前驅(qū)液，然后，在室溫25°C條件下，將2mL所制得的前驅(qū)液用空白對苯二甲酸乙二醇脂(PET)膜以抽濾的方式過濾，保持抽濾狀態(tài)2min，即空白對苯二甲酸乙二醇脂(PET)膜表面基本干燥后，即得MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜，具體見授權(quán)專利ZL 2011 I 0098700.5所示；
(2)、有機凝膠的制備
將1，6_ 二氯己烷和有機相支持電解質(zhì)于40-60°C油浴中加熱10-50min，然后加入平均分子量為22000的聚氯乙烯，緩慢升溫至70-90°C，待溶液呈透明狀態(tài)后，控制溫度為65-85°C，恒溫攪拌10-50min，即得有機凝膠；
其中1，6_ 二氯己烷、有機相支持電解質(zhì)和平均分子量為22000的聚氯乙烯的用量，按1，6- 二氯己烷:有機相支持電解質(zhì):平均分子量為22000的聚氯乙烯為5ml:0.059g:0.1-1.0g 的比例；
其中所用的有機相支持電解質(zhì)通過包括如下步驟的方法制備而成:
將雙(三苯基膦)氯化銨和四(4-氯苯基)硼酸鉀分別溶于按體積比為1:1的甲醇和水組成的混合溶液，再將兩種溶液混合，直至有白色沉淀生成，即制得有機相支持電解質(zhì)，其中雙(三苯基膦)氯化銨的摩爾濃度為0.01mol/L,四(4-氯苯基)硼酸鉀的摩爾濃度為0.01mol/L ；
(3 )、有機凝膠電化學(xué)傳感器的制備
用硅膠將步驟(I)所得的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜粘在一個中空管底部的孔道口，放置至少12h ；
再用玻璃滴管吸取有機凝膠注入到底部粘有MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜的中空管內(nèi)，放置至少lh，以便使有機凝膠硬化，有機凝膠的體積占整個中空管體積的10-20% ;
待中空管中的有機凝膠硬化后，將混合溶液加入其中，其加入量占中空管體積的30-80%，得有機凝膠電化學(xué)傳感器；
所述混合溶液為在50ml容量瓶中，加入5ml濃度為1mol.Γ1的雙(三苯基膦)氯化銨)水溶液和6ml濃度為0.1mol.Γ1的NaCl水溶液混合后用蒸餾水定容至50ml ；
(4)、葉酸定量檢測的裝置的組裝
在屏蔽箱內(nèi)利用固定裝置將步驟(3)所得的有機凝膠電化學(xué)傳感器固定于一個上端開口的容器上，帶有MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜的一端向下，并且?guī)в蠱CM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜的位置位于容器內(nèi)的中上部，最后，在有機凝膠電化學(xué)傳感器的中空管的混合溶液中插入油相鉬絲對電極I，油相參比電極Ag/AgCl，在上端開口的容器中插入水相鉬絲對電極II，水相池，水相參比電極Ag/AgCl，即完成葉酸定量檢測的裝置的組裝。
[0010]利用上述的葉酸定量檢測的裝置進行葉酸的檢測，具體包括如下步驟:
(1)、葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
配制濃度分別為 I μ M/L、3 μ M/L、5 μ M/L、9 μ M/L、18 μ M/L、24 μ M/L、32 μ M/L、40 μ M/L的葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；
所述的葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制所用的溶劑為pH=7.2、含有0.lmol/L氯化鈉、0.lmol/L磷酸二氫鉀和0.lmol/L氫氧化鈉的水溶液，其配置過程即將葉酸溶解于上述的溶劑中，然后定容于50ml容量瓶中，得到不同濃度的葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，放于暗室保存?zhèn)溆茫?br> (2)、待測的葉酸樣品溶液的制備
待測樣品以葉酸片為例，取I片葉酸片放入研磨缽，用研磨棒研碎，裝入25ml小燒杯，向燒杯中加入15ml緩沖溶液I超聲溶解lOmin，然后轉(zhuǎn)入25ml離心管，蓋上蓋子，放入離心機，轉(zhuǎn)數(shù)為10000-25000 X g，離心20-50min，所述上清液轉(zhuǎn)入50ml容量瓶用緩沖溶液2定容至50ml，再用移液管移取5ml，轉(zhuǎn)入50ml容量瓶用緩沖溶液3定容至50ml，得到待測的葉酸樣品溶液,放入暗室保存?zhèn)溆茫?br> 所述的緩沖溶液1、緩沖溶液2、緩沖溶液3均為pH=7.2、含有0.lmol/L氯化鈉、0.lmol/L磷酸二氫鉀和0.lmol/L氫氧化鈉的水溶液；
(3)、利用葉酸定量檢測的裝置，通過電化學(xué)工作站測定葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測葉酸樣品溶液所對應(yīng)的峰電流值；
將在待測的葉酸樣品溶液或葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液裝入葉酸定量檢測的裝置的上端開口的容器中，通過小型升降臺裝置，將上端開口的容器一點點上升，直至葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測的葉酸樣品溶液剛巧碰觸到有機凝膠電化學(xué)傳感器的中空管底部的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜，操作過程中不可使中空管底部的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜浸沒在葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測的葉酸樣品溶液中；
利用電化學(xué)工作站，以中循環(huán)伏安法(CV)，在其各技術(shù)參數(shù)如高電位:0.8-1.2V，低電位:0-0.2V，掃速:0.005-0.lV/s,掃描段數(shù):2_10，靈敏度:10_6_10_4的條件下和差分脈沖伏安法(DPV)，在其各技術(shù)參數(shù)如初始電位:0-0.2V，終止電位:0.8-1.2V，脈沖寬度:0.01-0.1V，采樣寬度:0.01-0.ls，脈沖周期:0.1-0.5s，靈敏度:10_6_10_4的條件下觀察葉酸溶液中葉酸陰離子在該有機凝膠電化學(xué)傳感器上的電化學(xué)響應(yīng)；
以差分脈沖溶出伏安法(DPSV)的預(yù)富集功能，在各技術(shù)參數(shù)如振幅:0.01-0.1V，脈沖寬度:0.01-0.1V，采樣寬度:0.01-0.ls，脈沖周期:0.1-0.5s，沉積電位:0.1-0.8V，沉積時間:5-100s，靈敏度:10-6-10-4的條件下分別讀取步驟(I)中葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和步驟(2)中待測的葉酸樣品溶液所對應(yīng)的峰電流；
(4)、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制；
以峰電流為縱坐標(biāo)，葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液所對應(yīng)葉酸濃度為橫坐標(biāo)，繪制峰電流與葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液所對應(yīng)的葉酸濃度之間的曲線，擬合得到葉酸濃度與峰電流的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；
(5 )、待測葉酸樣品中葉酸濃度
將步驟(3)中待測的葉酸樣品溶液的峰電流代入步驟(4)所得葉酸濃度與峰電流的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，并計算得到待測的葉酸樣品溶液中葉酸的濃度，然后根據(jù)步驟(2)待測葉酸樣品的稀釋倍數(shù)，從而求出待測的葉酸樣品中葉酸的含量。
[0011]本發(fā)明的有益效果
本發(fā)明的一種葉酸定量檢測的裝置，克服了以前葉酸檢測裝置操作繁瑣，重現(xiàn)性不好，使用成本較高，回收率低等缺點。其中有機凝膠電化學(xué)傳感器具有制備簡單、操作易行和成本低廉等特性。該葉酸定量檢測的裝置劑利用其進行葉酸定量檢測的方法具有很好地商品化推廣價值。
[0012]進一步，利用葉酸定量檢測的裝置對葉酸進行定量檢測的方法，特別在葉酸濃度為I?18yM/L范圍內(nèi)線性良好，平均回收率為90%?100%，RSD%小于2%。因此該方法具有很高的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度和回收率，而且檢測時間短，使用壽命長，重現(xiàn)性好。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1、實施例1的一種葉酸定量檢測的裝置的結(jié)構(gòu)示意圖，其中I為水相鉬絲對電極Π，2為水相參比電極Ag/AgCl;3為油相鉬絲對電極I，4為油相參比電極Ag/AgCl ;5為混合溶液、6為有機凝膠、7為MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜、8為上端開口的容器、9為中空管；
圖2、實施例1所得的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜表面的掃描電鏡圖；
圖3、各種不同濃度葉酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液中葉酸陰離子在實施例1的葉酸定量檢測的裝置上差分脈沖溶出伏安響應(yīng)圖片；
圖4、葉酸片樣品溶液中葉酸陰離子在實施例1的葉酸定量檢測的裝置上差分脈沖溶出伏安響應(yīng)圖片；
圖5、葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液峰電流與標(biāo)準(zhǔn)溶液相對應(yīng)葉酸濃度之間的曲線；
圖6、葉酸片樣品溶液峰電流與葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液峰電流與標(biāo)準(zhǔn)溶液相對應(yīng)葉酸濃度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
圖7、濃度為4yM/L的葉酸溶液中葉酸陰離子在實施例1的葉酸定量檢測的裝置上循環(huán)伏安響應(yīng)圖；
圖8、濃度為4yM/L的葉酸溶液中葉酸陰離子在實施例1的葉酸定量檢測的裝置上不同掃速的循環(huán)伏安響應(yīng)圖；
圖9、濃度為4yM/L的葉酸溶液中葉酸陰離子循環(huán)伏安峰電流與掃速的平方根之間的曲線；
圖10、濃度為4 μ M/L的葉酸溶液中葉酸陰離子在實施例1的葉酸定量檢測的裝置上差分脈沖伏安響應(yīng)圖；
圖11、濃度為4 μ M/L的葉酸溶液中葉酸陰離子在實施例1的葉酸定量檢測的裝置上差分脈沖溶出伏安響應(yīng)圖；
圖12、濃度為4yM/L的葉酸溶液中葉酸陰離子差分脈沖溶出伏安峰電流與預(yù)富集時間之間的曲線。

【具體實施方式】
[0014]下面通過實施例并結(jié)合附圖對本發(fā)明進一步進行闡述，但并不限制本發(fā)明。
[0015]本發(fā)明所用的化學(xué)試劑均為分析純。
[0016]所用的對苯二甲酸乙二醇脂(PET)膜，膜厚度約為5μπι，直徑50mm，平均孔徑為10nm,孔隙率1.0%-1.5%，上海豪夏核孔膜科技有限公司。
[0017]本發(fā)明所用的測量儀器如下:
掃描電鏡，S-3400型SEM掃描電鏡，日本日立公司；
實施例1
一種葉酸定量檢測的裝置，包括水相池和油相池；油相池置于水相池的中上部，水相池可以通過升降裝置上下移動；其結(jié)構(gòu)示意圖如圖1所示，
所述的水相池包括上端開口的容器8、水相鉬絲對電極II 1，水相參比電極Ag/AgC12;所述的油相池包括有機凝膠電化學(xué)傳感器、油相鉬絲對電極I 3，油相參比電極Ag/AgC14 ；
所述的有機凝膠電化學(xué)傳感器為底部粘有MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7而上部開口的中空管9，中空管9中自底向上依次裝有有機凝膠6、混合溶液5 ；
所述的中空管9的材質(zhì)為石英； 有機凝膠6的體積占整個中空管體積的10%，混合溶液5的體積占中空管體積的70%;
所述的混合溶液5為濃度為1mol.L—1的雙(三苯基膦)氯化銨)水溶液和濃度為0.1mol.L—1的NaCl水溶液按體積比計算，即1mol.L—1的雙(三苯基膦)氯化銨)水溶液:0.1mol.L-1的NaCl水溶液為5:6的比例混合而成；
所述的有機凝膠6通過如下步驟的方法制備而成:
加5ml的1，6-二氯己烷和0.059g有機相支持電解質(zhì)至小燒杯中，40-60°C油浴中加熱10-50min，然后加入0.5g平均分子量為22000的聚氯乙烯，緩慢升溫至70_90°C，待溶液呈透明狀態(tài)后，控制溫度為65-85°C，恒溫攪拌10-50min，即得有機凝膠；
其中所用的有機相支持電解質(zhì)通過包括如下步驟的方法制備而成:
將雙(三苯基膦)氯化銨和四(4-氯苯基)硼酸鉀分別溶于按體積比為1:1的甲醇和水組成的混合溶液，再將兩種溶液混合，直至有白色沉淀生成，即制得有機相支持電解質(zhì)，其中雙(三苯基膦)氯化銨的摩爾濃度為0.0lmol/L,四(4-氯苯基)硼酸鉀的摩爾濃度為
0.0lmol/L。
[0018]上述的一種葉酸定量檢測的裝置的制備，具體包括如下步驟:
(1)、MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7的制備
將無水乙醇，正硅酸四已酯和2.8mmol/L HCl水溶液按Ig:1.5g:0.13ml的比例混合均勻，放入三口燒瓶，置于油浴中，溫度都控制在50-80°C，反應(yīng)90min，停止加熱回流，所得的反應(yīng)液冷卻到室溫，將十六烷基三甲基溴化銨、無水乙醇和55mmo I/L的HCl水溶液按I g:1Og:2.67ml的比例混合后加入到上述所得的反應(yīng)液中繼續(xù)攪拌10_50min，得到前驅(qū)液，然后，在室溫25°C條件下，將2mL所制得的前驅(qū)液用空白對苯二甲酸乙二醇脂膜以抽濾的方式過濾，保持抽濾狀態(tài)2min，即空白對苯二甲酸乙二醇脂膜表面基本干燥后，即得MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7，具體見授權(quán)專利ZL 2011 I 0098700.5所示；
(2)、有機凝膠6的制備
加5ml的1，6-二氯己烷和0.059g有機相支持電解質(zhì)至小燒杯中，40-60°C油浴中加熱10-50min，然后加入0.5g平均分子量為22000聚氯乙烯，緩慢升溫至70_90°C，待溶液呈透明狀態(tài)后，控制溫度為65-85°C，恒溫攪拌10-50min，即得有機凝膠6 ;
其中所用的有機相支持電解質(zhì)通過包括如下步驟的方法制備而成:
將雙(三苯基膦)氯化銨和四(4-氯苯基)硼酸鉀分別溶于按體積比為1:1的甲醇和水組成的混合溶液，再將兩種溶液混合，直至有白色沉淀生成，即制得有機相支持電解質(zhì)，其中雙(三苯基膦)氯化銨的摩爾濃度為0.0lmol/L,四(4-氯苯基)硼酸鉀的摩爾濃度為
0.01mol/L ；
(3 )、有機凝膠電化學(xué)傳感器的制備
用硅膠將步驟(I)所得的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7粘在中空管9的底部的孔道口，放置至少12h;
再用玻璃滴管吸取步驟(2)所得的有機凝膠6注入到底部粘有MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜的中空管9內(nèi)，其加入量占中空管9體積的10%，放置至少lh，以便使有機凝膠6硬化；
待中空管9中的有機凝膠6硬化后，將混合溶液5加入其中，其加入量占中空管9體積的70%，即得有機凝膠電化學(xué)傳感器； 所述混合溶液5為在50ml容量瓶中，加入5ml濃度為1mol.Γ1的雙(三苯基膦)氯化銨)水溶液和6ml濃度為0.1 mo 1.Γ1的NaCl水溶液，混合后用蒸餾水定容至50ml ；
(4)、葉酸定量檢測的裝置的組裝
在屏蔽箱內(nèi)利用固定裝置將步驟(3)所得的所述的有機凝膠電化學(xué)傳感器固定于一個上端開口的容器8上，帶有MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7的一端向下，并且?guī)в蠱CM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7的位置位于容器內(nèi)的中上部，最后，在有機凝膠電化學(xué)傳感器的中空管9的混合溶液5插入油相鉬絲對電極I 3，油相參比電極Ag/AgC14，在上端開口的容器中插入水相鉬絲對電極II 1，水相參比電極Ag/AgC12，即完成葉酸定量檢測的裝置的組裝;
最終組成的電池組如下:
Pt I Ag I AgCl I 1mM BTPPAC1 + 1mM NaCl I 1mM BTPPATPBC1 + Gellified
1,6-DCH Il X μ M FA-+ Buffer solut1n I AgCl I Ag I Pt。
[0019] 應(yīng)用實施例1
利用實施例1所得的葉酸定量檢測的裝置進行葉酸的檢測，具體包括如下步驟:
(1)、葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制；
配制濃度分別為 I μ M/L、3 μ M/L、5 μ M/L、9 μ M/L、18 μ M/L、24 μ M/L、32 μ M/L、40 μ M/L的葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；
所述的葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制所用的溶劑為pH=7.2、含有0.lmol/L氯化鈉、0.lmol/L磷酸二氫鉀和0.lmol/L氫氧化鈉的水溶液，其配置過程即將葉酸溶解于上述的溶劑中，然后定容于50ml容量瓶中，得到不同濃度的葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，放于暗室保存?zhèn)溆茫?br> (2)、待測葉酸樣品溶液的制備；
待測樣品以葉酸片為例，取I片葉酸片放入研磨缽，用研磨棒研碎，裝入25ml小燒杯，向燒杯中加入15ml緩沖溶液I超聲溶解lOmin，然后轉(zhuǎn)入25ml離心管，蓋上蓋子，放入離心機，轉(zhuǎn)數(shù)為10000-25000 X g，離心20-50min，所述上清液轉(zhuǎn)入50ml容量瓶用緩沖溶液2定容至50ml，再用移液管移取5ml，轉(zhuǎn)入50ml容量瓶用緩沖溶液3定容至50ml，得到待測樣品溶液，放入暗室保存?zhèn)溆茫?br> 所述的緩沖溶液1、緩沖溶液2、緩沖溶液3均為pH=7.2、含有0.lmol/L氯化鈉、
0.lmol/L磷酸二氫鉀和0.lmol/L氫氧化鈉的水溶液；
(3)、利用葉酸定量檢測的裝置，通過電化學(xué)工作站測定葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測葉酸樣品溶液所對應(yīng)的峰電流值；
將葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測葉酸樣品溶液裝入葉酸定量檢測的裝置的上端開口的容器8中，通過小型升降臺裝置，將上端開口的容器8—點點上升，直至葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測的葉酸樣品溶液剛巧碰觸到中空管9底部的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7，操作過程中不可使中空管9底部的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7浸沒在葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測葉酸樣品溶液中；
利用電化學(xué)工作站，采用差分脈沖溶出伏安法(DPSV)的預(yù)富集功能，在各技術(shù)參數(shù)如振幅:0.01-0.1V，脈沖寬度:0.01-0.1V，采樣寬度:0.01-0.ls，脈沖周期:0.1-0.5s，沉積電位:0.1-0.8V，沉積時間:60s，靈敏度:10-6-10-4的條件下分別讀取如步驟(I)中葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和步驟(2)中待測樣品溶液所對應(yīng)的峰電流； (4)、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制；
以峰電流為縱坐標(biāo)，葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液所對應(yīng)葉酸濃度為橫坐標(biāo)，繪制峰電流與葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液所對應(yīng)的葉酸濃度之間的曲線，擬合得到葉酸濃度與峰電流的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；
(5 )、待測葉酸樣品中葉酸濃度
將步驟(3)中待測葉酸樣品的峰電流代入步驟(4)所得葉酸濃度與峰電流的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，并計算得到待測葉酸樣品中葉酸的濃度，然后根據(jù)步驟(2)待測葉酸樣品的稀釋倍數(shù)，從而求出待測葉酸樣品中葉酸的含量。
[0020]上述的各種不同濃度葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和葉酸片樣品溶液中葉酸陰離子在葉酸定量檢測裝置上轉(zhuǎn)移行為，其結(jié)果如圖3和圖4所示。
[0021]從圖3可以看出利用差分脈沖溶出伏安法，不同濃度葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液中葉酸陰離子在0.52V均出峰,而且隨著葉酸濃度的增大峰電流依次增大。從圖4可以看出利用差分脈沖溶出伏安法，葉酸片樣品溶液中葉酸陰離子在0.52V處出峰。由此表明了本發(fā)明的有機凝膠電化學(xué)傳感器結(jié)合差分脈沖溶出伏安法用于葉酸的檢測具有較好的重現(xiàn)性。
[0022]繪制的峰電流與8個葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液所對應(yīng)葉酸濃度之間的曲線如圖5所示，其中縱坐標(biāo)為峰電流，橫坐標(biāo)為葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液所對應(yīng)的葉酸濃度，擬合得到葉酸濃度與峰電流的曲線方程如圖6所示，Y=0.02X+0.19 (相關(guān)系數(shù)R=0.996)，將待測葉酸樣品溶液的峰電流數(shù)據(jù)代入上述擬合所得的曲線方程中，計算得到待測葉酸樣品溶液中的葉酸濃度。然后根據(jù)步驟(2)待測葉酸樣品的稀釋倍數(shù)，從而求出待測葉酸片樣品中葉酸的含量為
0.393mg，其結(jié)果與生產(chǎn)商提供的葉酸含量0.4mg在標(biāo)準(zhǔn)相對偏差允許范圍內(nèi)一致。從而表明了因此該方法具有良好的準(zhǔn)確度。
[0023]應(yīng)用實施例2
利用實施例1所得的葉酸定量檢測的裝置觀察葉酸陰離子在該有機凝膠電化學(xué)傳感器上轉(zhuǎn)移行為，具體包括如下步驟:
(1)、葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
以pH=7.2、含有0.lmol/L氯化鈉、0.lmol/L磷酸二氫鉀和0.lmol/L氫氧化鈉的水溶液配制濃度為4 μ M/L的葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，放于暗室保存?zhèn)溆茫?br> (2)、利用葉酸定量檢測的裝置，利用電化學(xué)工作站(上海辰華儀器公司生產(chǎn)CHI660D型電化學(xué)工作站)進行電化學(xué)檢測，利用循環(huán)伏安法(CV)、差分脈沖伏安法(DPV)和差分脈沖溶出伏安法(DPSV)觀察葉酸陰離子在該有機凝膠電化學(xué)傳感器上的電化學(xué)響應(yīng)；
將葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液裝入葉酸定量檢測的裝置的上端開口的容器8中，通過小型升降臺裝置，將上端開口的容器8—點點上升，直至葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測的葉酸樣品溶液剛巧碰觸到中空管9底部的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7，操作過程中不可使中空管9底部的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7浸沒在葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液中；
CV各技術(shù)參數(shù)分別是高電位:0.8-1.2V，低電位:0-0.2V，掃速:0.005-0.lV/s,掃描段數(shù):2-10，靈敏度:10_6-10-4 ；
DPV各技術(shù)參數(shù)分別是初始電位:0-0.2V，終止電位:0.8-1.2V，脈沖寬度:0.01-0.1V，采樣寬度:0.01-0.ls，脈沖周期:0.1-0.5s，靈敏度:10_6-10_4 ；
DPSV各技術(shù)參數(shù)分別是振幅:0.01-0.1V，脈沖寬度:0.01-0.1V，采樣寬度:0.01-0.1s,脈沖周期:0.1-0.5s,沉積電位:0.1-0.8V,沉積時間:5-100s,靈敏度:10(10'
[0024]上述濃度為4 μ M/L的葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液中葉酸陰離子在該有機凝膠電化學(xué)傳感器上的電化學(xué)響應(yīng)情況如圖7、圖8、圖9、圖10和圖11所示:
從圖7可以看出利用循環(huán)伏安法(CV)在空白窗口，即沒有加入葉酸溶液所得到的窗口上，呈陰離子狀態(tài)的葉酸發(fā)生定向轉(zhuǎn)移，在空白窗口的位置發(fā)生出峰情況?？瞻状翱诜秶?br> 0-1.0V,葉酸陰離子出峰位置是在0.55V ；
從圖8可以看出峰電流隨著掃速的增大而增大；
從圖9可以看出，峰電流值與掃速的平方根成正比，根據(jù)圖9中曲線的斜率，通過Randles-Seveik公式:ip=269An3/2cD1/2v1/2，可以算出葉酸陰離子在有機凝膠中的擴散系數(shù)為1.2X l(T6cm2/s,其中,A為復(fù)合膜有效孔面積,η為葉酸所帶電荷數(shù)，c為葉酸在水溶液中的濃度，D為葉酸在有機凝膠中的擴散系數(shù)，V為掃描速度。由此說明了葉酸陰離子以線性擴散控制的方式從有機凝膠轉(zhuǎn)移到水相溶液中。
[0025]從圖10可以看出利用差分脈沖伏安(DPV)葉酸陰離子出峰位置是在0.52V ；
從圖11和圖12可以看出，利用差分脈中溶出伏安可得出富集時間達到60秒后峰電流的增加會趨于平緩。即葉酸陰離子在葉酸定量檢測的裝置的有機凝膠電化學(xué)傳感器上最佳富集時間為60秒。同時可以表明利用葉酸定量檢測的裝置對葉酸進行定量檢測可觀察到葉酸在其上轉(zhuǎn)移行為。
[0026]應(yīng)用實施例3
利用實施例1所得的葉酸定量檢測的裝置檢測葉酸精密度試驗，平行操作6次，具體包括如下步驟:
(I )、待測葉Ife樣品溶液的制備
待測樣品以葉酸片為例，取I片葉酸片放入研磨缽，用研磨棒研碎，裝入25ml小燒杯，向燒杯中加入15ml緩沖溶液I超聲溶解lOmin，然后轉(zhuǎn)入25ml離心管，蓋上蓋子，放入離心機，轉(zhuǎn)數(shù)為10000-25000 X g，離心20-50min，所述上清液轉(zhuǎn)入50ml容量瓶用緩沖溶液2定容至50ml，再用移液管移取5ml，轉(zhuǎn)入50ml容量瓶用緩沖溶液3定容至50ml，得到待測樣品溶液，放入暗室保存?zhèn)溆茫?br> 所述的緩沖溶液1、緩沖溶液2、緩沖溶液3均為pH=7.2、含有0.lmol/L氯化鈉、
0.lmol/L磷酸二氫鉀和0.lmol/L氫氧化鈉的水溶液。
[0027](2)、利用葉酸定量檢測的裝置，通過電化學(xué)工作站測定待測葉酸樣品溶液所對應(yīng)的峰電流值
將待測的葉酸樣品溶液裝入葉酸定量檢測的裝置的上端開口的容器8中，通過小型升降臺裝置，將上端開口的容器8—點點上升，直至葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測的葉酸樣品溶液剛巧碰觸到中空管9底部的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7，操作過程中不可使中空管9底部的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7浸沒在待測的葉酸樣品溶液中；
利用電化學(xué)工作站，采用差分脈沖溶出伏安法(DPSV)觀察待測的葉酸樣品溶液中葉酸陰離子所對應(yīng)的峰電流值，利用應(yīng)用實施例1的步驟(4)所得的葉酸濃度與峰電流的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，將測得峰電流值換算成葉酸濃度值后其結(jié)果見下表:■msa,.,..#幕偏羞(503 ".^:
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所述的差分脈沖溶出伏安法(DPSV)的各技術(shù)參數(shù)分別是振幅:0.01-0.1V，脈沖寬度:
0.01-0.1V，采樣寬度:0.01-0.ls，脈沖周期:0.1-0.5s，沉積電位:0.1-0.8V，沉積時間:60s，靈敏度:1(Γ6-10-4。
[0028]從上表的結(jié)果表明，利用本發(fā)明的葉酸定量檢測的裝置對葉酸定量檢測的方法，其檢測相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2%，說明利用本發(fā)明的葉酸定量檢測的裝置對葉酸定量檢測的方法用于對葉酸的進行定量檢測具有重現(xiàn)性較好的優(yōu)點，能夠滿足實驗室測定葉酸含量的要求。
[0029]應(yīng)用實施例4
利用實施例1所得的葉酸定量檢測的裝置對葉酸定量檢測的回收率的試驗，具體包括如下步驟:
(I )、待測的葉Ife樣品溶液的制備
待測樣品以葉酸片為例，取I片葉酸片放入研磨缽，用鹽磨棒研碎，裝入25ml小燒杯，向燒杯中加入15ml緩沖溶液I超聲溶解lOmin，然后轉(zhuǎn)入25ml離心管，蓋上蓋子，放入離心機，轉(zhuǎn)數(shù)為10000-25000 X g，離心20-50min，所述上清液轉(zhuǎn)入50ml容量瓶用緩沖溶液2定容至50ml，再用移液管移取5ml，轉(zhuǎn)入50ml容量瓶用緩沖溶液3定容至50ml，得到待測葉Ife片樣品溶液，放入暗室保存?zhèn)溆茫?br> 所述的緩沖溶液1、緩沖溶液2、緩沖溶液3均為pH=7.2、含有0.lmol/L氯化鈉、
0.lmol/L磷酸二氫鉀和0.lmol/L氫氧化鈉的水溶液。
[0030](2)、回收率樣品溶液的配制
取步驟(I)所得的待測的葉酸樣品溶液2組，其濃度均為1.79 μ M/L,即回收率樣品溶液的本底值是1.79 μ M/L,再分別向其中添加濃度為5 μ M/L、18 μ M/L葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到2組回收率樣品溶液；
(3)、利用葉酸定量檢測的裝置，通過電化學(xué)工作站測定2組回收率樣品溶液所對應(yīng)的峰電流值，每組做6個平行
將回收率樣品溶液裝入葉酸定量檢測的裝置的上端開口的容器8中，通過小型升降臺裝置，將上端開口的容器8—點點上升，直至葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測的葉酸樣品溶液剛巧碰觸到中空管9底部的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7，操作過程中不可使中空管9底部的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜7浸沒在回收率樣品溶液中；
利用電化學(xué)工作站，采用差分脈沖溶出伏安法(DPSV)觀察觀察各種不同濃度回收率樣品溶液中葉酸陰離子所對應(yīng)的峰電流值情況，利用應(yīng)用實施例1的步驟(4)所得的葉酸濃度與峰電流的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，將測得峰電流值換算成葉酸濃度值后其結(jié)果見下表:

【權(quán)利要求】
1.一種葉酸定量檢測的裝置，其特征在于所述的葉酸定量檢測的裝置包括水相池和油相池；油相池置于水相池的中上部，水相池可以通過升降裝置上下移動； 所述的水相池包括上端開口的容器、水相鉬絲對電極II，水相參比電極Ag/AgCl; 所述的油相池包括有機凝膠電化學(xué)傳感器、油相鉬絲對電極I，油相參比電極Ag/AgCl ； 所述的有機凝膠電化學(xué)傳感器為底部粘有MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜而上部開口的中空管，且中空管中自底向上依次裝有有機凝膠、混合溶液； 其中有機凝膠的體積占整個中空管體積的10-20%，混合溶液的體積占中空管體積的30-80% ； 所述的混合溶液為濃度為1mol.L—1的雙(三苯基膦)氯化銨)水溶液和濃度為0.1mol.Γ1的NaCl水溶液按體積比計算，即1mol.Γ1的雙(三苯基膦)氯化銨)水溶液:0.1mol.L-1的NaCl水溶液為5:6的比例混合而成； 所述的有機凝膠通過如下步驟的方法制備而成: 將1，6_ 二氯己烷和有機相支持電解質(zhì)，于40-60°C油浴中加熱10-50min，然后加入平均分子量為22000的聚氯乙烯，緩慢升溫至70-90°C，待溶液呈透明狀態(tài)后，控制溫度為65-85°C，恒溫攪拌10-50min，即得有機凝膠； 其中1，6_ 二氯己烷、有機相支持電解質(zhì)和平均分子量為22000的聚氯乙烯的用量，按1，6- 二氯己烷:有機相支持電解質(zhì):平均分子量為22000的聚氯乙烯為5ml:0.059g:0.1-1.0g 的比例； 其中所述的有機相支持電解質(zhì)通過包括如下步驟的方法制備而成: 將雙(三苯基膦)氯化銨和四(4-氯苯基)硼酸鉀分別溶于按體積比為1:1的甲醇和水組成的混合溶液，再將兩種溶液混合，直至有白色沉淀生成，即得有機相支持電解質(zhì)，其中雙(三苯基膦)氯化銨的摩爾濃度為0.01mol/L,四(4-氯苯基)硼酸鉀的摩爾濃度為0.01mol/L。
2.如權(quán)利要求1所述的一種葉酸定量檢測的裝置，其特征在于所述的有機凝膠的體積占整個中空管體積的10%，混合溶液的體積占中空管體積的70% ； 所述的1，6-二氯己烷、有機相支持電解質(zhì)和平均分子量為22000的聚氯乙烯的用量，按1，6_ 二氯己烷:有機相支持電解質(zhì):平均分子量為22000的聚氯乙烯為5ml: 0.059g: 0.5g 的比例。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種葉酸定量檢測的裝置，其特征在于所述的上部開口的中空管的材質(zhì)為石英。
4.如權(quán)利要求1所述的一種葉酸定量檢測的裝置的制備方法，其特征在于具體包括如下步驟: (1)、MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜的制備； 將無水乙醇，正硅酸四已酯和2.8mmol/L HCl水溶液按Ig:l_5g:0.1-1ml的比例混合均勻，放入三口燒瓶，置于油浴中，溫度控制在50-80°C，反應(yīng)90min，停止加熱，所得的反應(yīng)液冷卻到室溫； 將十六烷基三甲基溴化銨、無水乙醇和55mmol/L的HCl水溶液按Ig:5_15g:l-5ml的比例混合后加入到上述所得的反應(yīng)液中繼續(xù)攪拌10-50min，得到前驅(qū)液，然后，在室溫.25°C條件下，將2mL所制得的前驅(qū)液用空白對苯二甲酸乙二醇脂膜以抽濾的方式過濾，保持抽濾狀態(tài)2min，即空白對苯二甲酸乙二醇脂膜表面基本干燥后，即得MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜； (2)、有機凝膠的制備 將1，6_ 二氯己烷和有機相支持電解質(zhì)于40-60°C油浴中加熱10-50min，然后加入平均分子量為22000的聚氯乙烯，緩慢升溫至70-90°C，待溶液呈透明狀態(tài)后，控制溫度為65-85°C，恒溫攪拌10-50min，即得有機凝膠； 其中1，6_ 二氯己烷、有機相支持電解質(zhì)和平均分子量為22000的聚氯乙烯的用量，按1，6- 二氯己烷:有機相支持電解質(zhì):平均分子量為22000的聚氯乙烯為Iml:0.012g:0.02-0.5g 的比例； (3 )、有機凝膠電化學(xué)傳感器的制備 用硅膠將步驟(I)所得的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜粘在一個中空管底部的孔道口，放置至少12h ； 再用玻璃滴管吸取有機凝膠注入到底部粘有MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜的中空管內(nèi)，放置至少lh，以便使有機凝膠硬化，有機凝膠的體積占整個中空管體積的10-20% ; 待中空管中的有機凝膠硬化后，將混合溶液加入其中，其加入量占中空管體積的30-80%，得有機凝膠電化學(xué)傳感器； 所述混合溶液為在50ml容量瓶中，加入5ml濃度為1mol.Γ1的雙(三苯基膦)氯化銨)水溶液和6ml濃度為0.1mol.Γ1的NaCl水溶液混合后用蒸餾水定容至50ml ； (4)、葉酸定量檢測的裝置的組裝 在屏蔽箱內(nèi)利用固定裝置將有機凝膠電化學(xué)傳感器固定于一個上端開口的容器上，帶有MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜的一端向下，并且?guī)в蠱CM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜的位置位于容器內(nèi)的中上部，最后，在有機凝膠電化學(xué)傳感器的中空管的混合溶液中插入油相鉬絲對電極I，油相參比電極Ag/AgCl，在上端開口的容器中插入水相鉬絲對電極II，水相池，水相參比電極Ag/AgCl，即完成葉酸定量檢測的裝置的組裝。
5.如權(quán)利要求4所述的葉酸定量檢測的裝置的制備方法，其特征在于步驟(I)中所述的空白對苯二甲酸乙二醇脂膜，膜厚度為5 μ m，直徑50mm，平均孔徑為lOOnm，孔隙率1.0%-1.5%。
6.利用如權(quán)利要求1或2所述的葉酸定量檢測的裝置對葉酸進行定量檢測。
7.如權(quán)利要求6所述的利用葉酸定量檢測的裝置對葉酸進行定量檢測的檢測，其特征在于具體包括如下步驟: (1)、葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
配制濃度分別為 I μ M/L、3 μ M/L、5 μ M/L、9 μ M/L、18 μ M/L、24 μ M/L、32 μ M/L、40 μ M/L的葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液； 所述的葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制所用的溶劑為pH=7.2、含有0.lmol/L氯化鈉、0.lmol/L磷酸二氫鉀和0.lmol/L氫氧化鈉的水溶液，其配置過程即將葉酸溶解于上述的溶劑中，然后定容于50ml容量瓶中，得到不同濃度的葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，放于暗室保存?zhèn)溆茫? (2)、待測的葉酸樣品溶液的制備 待測樣品以葉酸片為例，取I片葉酸片放入研磨缽，用研磨棒研碎，裝入25ml小燒杯，向燒杯中加入15ml緩沖溶液I超聲溶解lOmin，然后轉(zhuǎn)入25ml離心管，蓋上蓋子，放入離心機，轉(zhuǎn)數(shù)為10000-25000 X g，離心20-50min，所述上清液轉(zhuǎn)入50ml容量瓶用緩沖溶液2定容至50ml，再用移液管移取5ml，轉(zhuǎn)入50ml容量瓶用緩沖溶液3定容至50ml，得到待測的葉酸樣品溶液,放入暗室保存?zhèn)溆茫? 所述的緩沖溶液1、緩沖溶液2、緩沖溶液3均為pH=7.2、含有0.lmol/L氯化鈉、.0.lmol/L磷酸二氫鉀和0.lmol/L氫氧化鈉的水溶液； (3)、利用葉酸定量檢測的裝置，通過電化學(xué)工作站測定葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測葉酸樣品溶液所對應(yīng)的峰電流值； 將葉酸定量檢測的裝置的上端開口的容器中裝入待測的葉酸樣品溶液或葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過小型升降臺裝置，將上端開口的容器一點點上升，直至葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測的葉酸樣品溶液剛巧碰觸到有機凝膠電化學(xué)傳感器的中空管底部的MCM-41型有機/無機復(fù)合介孔膜； 以差分脈沖溶出伏安法的預(yù)富集功能，在各技術(shù)參數(shù)如振幅:0.01-0.1V，脈沖寬度:0.01-0.1V，采樣寬度:0.01-0.ls，脈沖周期:0.1-0.5s，沉積電位:0.1-0.8V，沉積時間:5-lOOs，靈敏度:10-6-10-4的條件下分別讀取步驟(I)中葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和步驟(2)中待測的葉酸樣品溶液所對應(yīng)的峰電流； (4)、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以峰電流為縱坐標(biāo)，葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液所對應(yīng)葉酸濃度為橫坐標(biāo)，繪制峰電流與葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液所對應(yīng)的葉酸濃度之間的曲線，擬合得到葉酸濃度與峰電流的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程； (5 )、待測葉酸樣品中葉酸濃度 將步驟(3)中待測的葉酸樣品溶液的峰電流代入步驟(4)所得葉酸濃度與峰電流的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，并計算得到待測的葉酸樣品溶液中葉酸的濃度，然后根據(jù)步驟(2)待測葉酸樣品的稀釋倍數(shù)，從而求出待測的葉酸樣品中葉酸的含量。
【文檔編號】G01N27/416GK104198565SQ201410335047
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年7月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月15日
【發(fā)明者】江旭恒, 陳勇, 高逵, 胡道盼, 王蒙, 周敏, 王歡歡, 周潔 申請人:上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院