專(zhuān)利名稱(chēng)：一種基于電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子復(fù)合膜細(xì)胞傳感器的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基于電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子復(fù)合膜細(xì)胞傳感器的制備方法及其應(yīng)用，本發(fā)明屬于丙烯酰胺等具有毒素刺激物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
丙烯酰胺(acrylamide，AA)，是一種有毒的無(wú)色、無(wú)味透明固體結(jié)晶，沸點(diǎn)為125°C，熔點(diǎn)為84°C 85°C，室溫下穩(wěn)定，熔融或暴露在紫外光下以及氧化條件下易發(fā)生聚合反應(yīng)產(chǎn)生聚丙烯酰胺。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)證明AA可導(dǎo)致遺傳物質(zhì)改變和癌癥。其主要來(lái)源食品為薯?xiàng)l薯片，炸透的薯片中AA含量高達(dá)12800 μ g/kg。JECFA根據(jù)各國(guó)丙烯酰胺攝入量，認(rèn)為人類(lèi)平均攝入量大致為I μ g/kg · bw/d。對(duì)丙烯酰胺檢測(cè)方法中比較成熟主要有氣相色譜法和液相色譜法，也有通過(guò)色質(zhì)聯(lián)用技術(shù)大大提高了檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度。氣相色譜法(GC):由于AA的熱不穩(wěn)定性，所以在GC檢測(cè)前需要對(duì)AA進(jìn)行衍生化處理，以改善AA的熱不穩(wěn)定性。很多研究報(bào)道了丙烯酰胺非衍生化的氣相色譜測(cè)定方法，往往操作過(guò)程繁瑣，且檢測(cè)限較高。由于GC測(cè)定樣品中丙烯酰胺需進(jìn)行溴化衍生，操作繁瑣，對(duì)衍生技術(shù)要求較高，難以掌握采，用液相色譜法(LC)方法不需要衍生，直接對(duì)丙烯酰胺進(jìn)行測(cè)定，簡(jiǎn)化了分析過(guò)程，而且測(cè)定在常溫下進(jìn)行，克服了熱不穩(wěn)定性食品中丙烯酰胺還是屬于痕量物質(zhì)，在進(jìn)行GC或者LC分析之前必須進(jìn)行富集，這樣樣品的前處理就相對(duì)比較復(fù)雜。在此基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的LC-MS/MS方法，通過(guò)保留時(shí)間和相對(duì)離子強(qiáng)度來(lái)確定丙烯酰胺的含量，在化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定上具有很高的靈敏性，檢測(cè)限為20 50μ g/kg，可直接分析食品中丙烯酰胺的含量。由于食品中丙烯酰胺還是屬于痕量物質(zhì)，在分析之前必須進(jìn)行富集，樣品的前處理就相對(duì)比較復(fù)雜，另外各種檢測(cè)設(shè)備比較昂貴，限制了這些方法在分析時(shí)間和成本的普及型。90年代以來(lái)，以生物傳感器技術(shù)為基礎(chǔ)的各類(lèi)生物檢測(cè)系統(tǒng)迅速興起，一些快速和采用現(xiàn)代技術(shù)的檢測(cè)方法不斷出現(xiàn)，并日趨成熟，不斷的應(yīng)用于各類(lèi)毒素的檢測(cè)中去。利用丙烯酰胺的神經(jīng)毒性這一特征，以其靶細(xì)胞為檢測(cè)對(duì)象，分析丙烯酰胺與細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，做痕量分析。電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子復(fù)合膜細(xì)胞傳感器，利用金納米粒子具有生物固定的作用，同時(shí)具有增強(qiáng)電化學(xué)電子傳遞速率的功能，制備電化學(xué)細(xì)胞傳感器。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種基于電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子復(fù)合膜細(xì)胞傳感器的制備方法。本發(fā)明提供如下技術(shù)方案剝落氧化石墨烯電鍍沉積到玻碳電極表面，清洗氮?dú)獯蹈?，在氯金酸溶液中電鍍沉積，制備電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子修飾的玻碳電極。在修飾好的電極表面上滴加細(xì)胞懸濁液，孵育20 30min，以達(dá)到生物固定作用，制得基于化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子自組裝細(xì)胞傳感器。
所述化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子修飾的玻碳電極的制備將ImM HAuCl4溶解于O. 5MH2S04中，配置O. 05mM的HAuCl4溶液，將Hummers氧化制備的氧化石墨烯，用PB緩沖液配置成O. 5mg mL—1的氧化石墨烯溶液。分別用控制電位電解庫(kù)倫法電鍍沉積到玻碳電極表面。在修飾好的玻碳電極表面，滴加細(xì)胞懸濁液，在CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37°C孵育，制備得到自組裝電化學(xué)細(xì)胞傳感器。所述丙烯酰胺毒素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作方法如下取出已修飾完成的細(xì)胞傳感電極，依次滴加 ο μ L不同濃度的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品刺激后的細(xì)胞PBS懸濁液，37°C孵育20 IOOmin后，采用微分脈沖伏安法和交流阻抗法考察工作電極界面的變化，并對(duì)電極表進(jìn)行表征。玻碳電極清潔方法如下將玻碳電極(Φ = 2mm)置于Piranha溶液中浸泡15Min,依次用O. 3,0. 05 μ m的Al2O3拋光粉將電極表面拋成鏡面，再用1:1(體積比)的硝酸、無(wú)水乙醇、超純水超聲清洗5min，氮?dú)獯蹈桑?°C備用；在修飾好的電極表面上滴加10 μ I I. 6 X IO6個(gè)/ml的細(xì)胞懸濁液，CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中，370C孵育20 lOOmin，制得基于化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子自組裝細(xì)胞傳感器。上述細(xì)胞濃度為1.6X106個(gè)/ml時(shí)，所呈現(xiàn)的線(xiàn)性比例最好，若細(xì)胞濃度過(guò)高，則會(huì)需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行富集，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)；若細(xì)胞濃度過(guò)低，則會(huì)導(dǎo)致對(duì)丙烯酰胺等其他具有細(xì)胞侵害作用的毒素檢測(cè)范圍減小。本發(fā)明還提供了一種所述細(xì)胞傳感器的應(yīng)用，步驟如下取出已修飾完成的電極，依次滴加 ο μ L不同濃度的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品刺激的細(xì)胞懸浮液，37°C孵育20 IOOmin后，采用循環(huán)伏安法和交流阻抗法考察工作電極界面的變化，并對(duì)電極表進(jìn)行表征。CV測(cè)試條件電壓O. 2-0. 6V，掃描速率O. lV/s ;EIS測(cè)試條件初幅O. 05V，頻率為I 100kHz，靜置時(shí)間2s。反應(yīng)介質(zhì)液為2. 5mmol Fe (CN) 63_/4_溶液(所有測(cè)試均在室溫下進(jìn)行)。所述的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品刺激的細(xì)胞懸浮液，孵育時(shí)間為20 lOOmin，優(yōu)選地，所述的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品刺激的細(xì)胞懸浮液孵育時(shí)間為60min，當(dāng)孵育時(shí)間達(dá)到60min時(shí)，丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品刺激的細(xì)胞能夠充分固定到修飾后的玻碳電極表面。所述依次滴加的不同濃度的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品的終濃度為O. 1、1、2. 5、5、7. 5、IOmolmL—1，模擬電路得到阻抗值，以丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，阻抗值的大小為縱坐標(biāo)作圖，得到丙烯酰胺自組裝免疫電極檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。阻抗值的大小與丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品的濃度分別在O. I lOmol/mL之間存在良好的線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性方程分別為y = 61. 02x+494. 4，相關(guān)系數(shù)分別為R2 = O. 998，最低檢測(cè)限為O. 033mol/L。丙烯酰胺的分析方法如下電化學(xué)工作站CHI760在初幅0. 05V，頻率為I IOOkHz的條件下，在反應(yīng)介質(zhì)液為2. 5mmol Fe (CN)63_/4_溶液中進(jìn)行測(cè)量，采用交流阻抗法，并通過(guò)最佳等效電路計(jì)算，以工作電極經(jīng)修飾后滴加了 OmolL—1丙烯酰胺的細(xì)胞懸液的阻抗值作為空白交流阻抗值Rrt (Ab)，以此電極與含有不同濃度丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品刺激后的細(xì)胞在同一電解液中所測(cè)阻抗值為Rrt (Ab-Ag)，求出在不同丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度中Rrt的變化值A(chǔ)Ret =Δ Ret = Ret (Ab-Ag) -Ret (Ab)Ret (Ab)空白交流阻抗值；
Ret(Ab-Ag):與丙烯酰胺刺激后的細(xì)胞的電極電子傳遞電阻值；ARet :反應(yīng)前后極電子傳遞電阻的變化值；以電子傳遞電阻的變化值和丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的關(guān)系作圖，即得丙烯酰胺細(xì)胞傳感器的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。丙烯酰胺的回收率將樣品以DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋至一定濃度后，應(yīng)用自組裝免疫傳感器對(duì)樣品進(jìn)行加標(biāo)回收測(cè)定。本發(fā)明的方法具有下述有益效果(I)電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子復(fù)合膜結(jié)構(gòu)改善了納米金離子的分散性，有效的阻止了金的聚合，從而使其分散的更為均勻。(2)電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子復(fù)合膜結(jié)構(gòu)有效的促進(jìn)了電子的轉(zhuǎn)移，進(jìn)而有效的提高材料本身的傳導(dǎo)性，大大降低了檢測(cè)限。(3)自組裝免疫傳感器能夠結(jié)合多種材料的優(yōu)點(diǎn)，充分發(fā)揮細(xì)胞傳感的靈敏性，極大的降低檢測(cè)限。


圖I表示自組裝細(xì)胞傳感器的組裝示意圖；圖2表示電化學(xué)還原石墨烯掃描電鏡圖；圖3表示循環(huán)伏安分析表征；圖4表示不同濃度丙烯酰胺作用后的細(xì)胞電化學(xué)交流阻抗圖；圖5表示不同濃度丙烯酰胺作用后的細(xì)胞阻抗值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I細(xì)胞傳感器的制備方法步驟A :將 ImM HAuCl4 溶解于 O. 5M H2SO4 中，配置 O. 05mM 的 HAuCl4 溶液，將Hummers氧化制備的氧化石墨烯,用PB緩沖液配置成O. 5mol/mL的氧化石墨烯溶液。步驟B :將金電極(Φ = 2mm)置于Piranha溶液中浸泡15Min,依次用O. 3,O. 05 μ m的Al2O3拋光粉將電極表面拋成鏡面，再用1:1(體積比)的硝酸、無(wú)水乙醇、超純水超聲清洗5min，氮?dú)獯蹈桑?°C備用；步驟C :分別用控制電位電解庫(kù)倫法電鍍沉積到玻碳電極表面。在修飾好的玻碳電極表面，滴加受不同濃度的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品刺激細(xì)胞懸濁液(刺激時(shí)間為12h)，在CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37°C孵育，50min,制備得到自組裝電化學(xué)細(xì)胞傳感器。實(shí)施例2免疫傳感器的制備方法步驟A :將 ImM HAuCl4 溶解于 O. 5M H2SO4 中，配置 O. 05mM 的 HAuCl4 溶液，將Hummers氧化制備的氧化石墨烯，用PB緩沖液配置成O. Smol/mL1的氧化石墨烯溶液。步驟B :將金電極(Φ = 2mm)置于Piranha溶液中浸泡15min,依次用O. 3,O. 05 μ m的Al2O3拋光粉將電極表面拋成鏡面，再用1:1(體積比)的硝酸、無(wú)水乙醇、超純水超聲清洗5min，氮?dú)獯蹈桑?°C備用；步驟C :分別用控制電位電解庫(kù)倫法電鍍沉積到玻碳電極表面。在修飾好的玻碳電極表面，滴加受不同濃度的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品刺激細(xì)胞懸濁液(刺激時(shí)間為24h)，在CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37°C孵育，60min，制備得到自組裝電化學(xué)細(xì)胞傳感器。實(shí)施例3免疫傳感器的制備方法步驟A :將 ImM HAuCl4 溶解于 O. 5M H2SO4 中，配置 O. 05mM 的 HAuCl4 溶液，將Hummers氧化制備的氧化石墨烯，用PB緩沖液配置成O. 5mg mL—1的氧化石墨烯溶液。步驟B :將金電極(Φ = 2mm)置于Piranha溶液中浸泡15Min,依次用O. 3,O. 05 μ m的Al2O3拋光粉將電極表面拋成鏡面，再用1:1(體積比)的硝酸、無(wú)水乙醇、超純水超聲清洗5min，氮?dú)獯蹈桑?°C備用；步驟C :分別用控制電位電解庫(kù)倫法電鍍沉積到玻碳電極表面。在修飾好的玻碳電極表面，滴加受不同濃度的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品刺激細(xì)胞懸濁液(刺激時(shí)間為36h)，在CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37°C孵育，70min,制備得到自組裝電化學(xué)細(xì)胞傳感器。實(shí)施例4取出己修飾完成的電極，依次滴加10 μ L不同濃度的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品作用的細(xì)胞懸液，37°C孵育20 IOOmin后，采用循環(huán)伏安法和交流阻抗法考察工作電極界面的變化，并對(duì)電極表進(jìn)行表征。CV測(cè)試條件電壓O. 2—0. 6V，掃描速率O. lV/s ；EIS測(cè)試條件初幅O. 05V,頻率為I 100kHz，靜置時(shí)間2s。反應(yīng)介質(zhì)液為2. 5mmol Fe (CN) 63_/4_溶液(所有測(cè)試均在室溫下進(jìn)行)。所述的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品刺激細(xì)胞孵育時(shí)間為12 36h，優(yōu)選地，所述的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品孵育時(shí)間為24h，當(dāng)孵育時(shí)間達(dá)到24h時(shí)，丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品能夠充分與細(xì)胞作用，使得細(xì)胞內(nèi)融物流出，導(dǎo)致電化學(xué)信號(hào)變化。所述依次滴加的不同濃度的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為O. 1、1、2· 5、5、7· 5、10mol/mL，模擬電路得到阻抗值，以丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，阻抗值的大小為縱坐標(biāo)作圖，得到丙烯酰胺自組裝細(xì)胞電極檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。阻抗值的大小與丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品的濃度分別在O. I lOmol/mL之間存在良好的線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性方程分別為Y = 61. 02x+494. 4，相關(guān)系數(shù)分別為R2 = O. 998，最低檢測(cè)限為O. 033mol/mL。丙烯酰胺的分析方法如下電化學(xué)工作站CHI760在振幅O. 05V，頻率為I IOOkHz的條件下，在反應(yīng)介質(zhì)液為2. 5mmol Fe (CN) 63_/4_溶液中進(jìn)行測(cè)量，采用EIS法，并通過(guò)最佳等效電路計(jì)算，以工作電極經(jīng)修飾后滴加了 Omol/mL丙烯酰胺刺激的細(xì)胞懸液的阻抗值作為空白交流阻抗值Rrt (Ab)，以此電極與含有不同濃度丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品中反應(yīng)后在同一電解液中所測(cè)阻抗值為Rrt(Ab-Ag)，求出在不同金黃色葡萄球菌腸毒素B標(biāo)準(zhǔn)品濃度中Ret的變化值Λ Ret Δ Ret = Ret (Ab-Ag) -Ret (Ab)Ret (Ab)空白交流阻抗值；Ret(Ab-Ag):與丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)后的電極電子傳遞電阻值；ARet :反應(yīng)前后極電子傳遞電阻的變化值；
以電子傳遞電阻的變化值和丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的關(guān)系作圖，即得丙烯酰胺細(xì)胞傳感器的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。丙烯酰胺的回收率將樣品以DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋至一定濃度后，應(yīng)用自組裝免疫傳感器對(duì)樣品進(jìn)行加標(biāo)回收測(cè)定。根據(jù)上述測(cè)定方法與分析方法得到薯?xiàng)l在4mol/mL的加標(biāo)濃度下的回收率為92%。加標(biāo)濃度為4mol/mL,檢測(cè)濃度為3. 70mol/mL。實(shí)施例5根據(jù)實(shí)施例4測(cè)定方法與分析方法得到薯片在3mol/mL的加標(biāo)濃度下的回收率為84%。加標(biāo)濃度為3mol/mL,檢測(cè)濃度為2. 52mol/mL。實(shí)施例6根據(jù)實(shí)施例4測(cè)定方法與分析方法得到面包在Imol/mL的加標(biāo)濃度下的回收率為111%。加標(biāo)濃度為Imol/mL,檢測(cè)濃度為I. I Imol/mL。
權(quán)利要求
1.一種基于電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子復(fù)合膜細(xì)胞傳感器的制備方法，其特征在于，將剝落氧化石墨烯電鍍沉積到玻碳電極表面，清洗氮?dú)獯蹈?，在氯金酸溶液中電鍍沉積，制備電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子修飾的玻碳電極。在修飾好的電極表面上滴加細(xì)胞懸浮液，培養(yǎng)孵育，以達(dá)到細(xì)胞固定的目的，制得基于石墨烯金納米粒子修飾自組裝電化學(xué)細(xì)胞傳感器。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子修飾的玻碳電極制備方法如下將ImM HAuCl4溶解于O. 5M H2SO4*，配置O. 05mM的通11(14溶液，將Hummers氧化制備的氧化石墨烯，用PB緩沖液配置成O. 5mg/mL的氧化石墨烯溶液。分別用控制電位電解庫(kù)倫法電鍍沉積到玻碳電極表面。在修飾好的玻碳電極表面，滴加細(xì)胞懸濁液，在CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37°C孵育，制備得到自組裝電化學(xué)細(xì)胞傳感器。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于，控制電位電解庫(kù)倫法進(jìn)行電鍍沉積是具體條件如下將打磨超聲處理后的玻碳電極浸入O. 5mg/mL的氧化石墨烯溶液,控制電位電解庫(kù)倫法，電解電位為-I. 2，電解時(shí)間為IOOs ;清洗氮?dú)獯蹈珊?，置于O. 5mM的HAuCl4溶液，電解電位為-O. 5，電解時(shí)間為100s。清洗，氮?dú)獯蹈桑?°C備用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，玻碳電極清潔方法如下將玻碳電極置于Piranha溶液中浸泡15min，依次用O. 3,0. 05 μ m的Al2O3拋光粉將電極表面拋成鏡面，再用體積比I :1的硝酸、無(wú)水乙醇、超純水超聲清洗5min，氮?dú)獯蹈桑?°C備用。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞PBS懸濁液滴加量為10μ 1，PBS的 pH = 7. 4，濃度為 O. OlM0
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞濃度為I.6 X IO6個(gè)/mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，在37°C孵育20 lOOmin。
8.—種權(quán)利要求I所述方法構(gòu)建的免疫電極的應(yīng)用，其特征在于，步驟如下取出已修飾完成的細(xì)胞傳感電極，依次滴加 ο μ L不同濃度的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品刺激后的細(xì)胞PBS懸濁液，37°C孵育20 IOOmin后，采用微分脈沖伏安法和交流阻抗法考察工作電極界面的變化，并對(duì)電極表進(jìn)行表征。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，丙烯酰胺細(xì)胞刺激具體方法如下用細(xì)胞培養(yǎng)液(含胎牛血清蛋白)配制不同終濃度的丙烯酰胺細(xì)胞刺激物進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)12 36h后，離心，用PBS清洗后，溶于PBS培養(yǎng)液，進(jìn)行試驗(yàn)。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于，離心轉(zhuǎn)速為800r/min，離心時(shí)間為5min ;微分脈沖伏安法條件為掃描范圍-0. 2 O. 6V，振幅0. 05V ;交流阻抗法條件為初始電位0. 2V，振幅0. 05V，頻率范圍I-IOOkHz。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子復(fù)合膜細(xì)胞傳感器的制備方法及其應(yīng)用。通過(guò)制備電化學(xué)還原氧化石墨/金納米粒子復(fù)合膜，提高了材料自身傳導(dǎo)性，并成功應(yīng)用于細(xì)胞傳感器中，極大的降低了傳感器的檢測(cè)限并獲得了更好的穩(wěn)定性，采用循環(huán)伏安法及交流阻抗法對(duì)傳感器進(jìn)行表征與測(cè)定，建立了丙烯酰胺檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，線(xiàn)性范圍在0.1～10mol/mL之間，相關(guān)系數(shù)為R2＝0.998，檢測(cè)限為0.033mol/mL(S/N＝3)。本發(fā)明特異性良好，檢測(cè)回收率在84～111％之間，可再生使用，穩(wěn)定性好，可應(yīng)用于食品中的丙烯酰胺快速檢測(cè)，具有非常廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)G01N27/327GK102944598SQ20121049542
公開(kāi)日2013年2月27日 申請(qǐng)日期2012年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月29日
發(fā)明者孫秀蘭, 紀(jì)劍, 蔣棟磊, 張銀志, 李在均 申請(qǐng)人:江南大學(xué)