專利名稱：試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種診斷試劑盒。更具體地，本實(shí)用新型涉及包括至少兩項(xiàng)檢測試紙條的診斷試劑盒，所述至少兩項(xiàng)試紙條分別包被有抗原，用于體外定性檢測人血液中的AMA-M2抗 體、SP100抗體、GP210抗體、SLA抗體或LKM-I抗體，輔助診斷自身免疫性肝病。
背景技術(shù)：
背景肝炎是影響人類健康的最常見疾病之一，慢性肝炎對患者與社會影響更大。近幾年國外相繼報(bào)道自身免疫性肝病，特別是自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)和原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC),其發(fā)病率均有明顯上升的趨勢。AIH是由自身免疫反應(yīng)引起的肝臟損傷，表現(xiàn)為慢性漸進(jìn)性肝炎，直至肝硬化，血清學(xué)表現(xiàn)為高丙種球蛋白和特征性自身抗體等。由于AIH的檢測指標(biāo)經(jīng)常和其他自身免疫性肝病的指標(biāo)重疊，因此對病因不明的肝病患者篩查AIH的同時，有必要排除其他疾病的干擾。例如，已發(fā)現(xiàn)，AIH與PBC的重疊占8%，與原發(fā)性硬化性膽管炎重疊占6%，與慢性病毒型肝炎重疊占11%，與自身免疫性膽管炎重疊占10%，其他不明原因的慢型肝炎占13%。其中PBC的發(fā)病率較高，因此，有必要在篩查AIH的同時排除PBC的干擾。PBC是以破壞肝內(nèi)小及中等大小膽管為主的器官特異性自身免疫性肝病，表現(xiàn)為肝門脈區(qū)炎癥導(dǎo)致纖維化，肝硬化甚至功能性衰竭。PBC患者90%以上為女性，年齡一般為30至65歲之間，隨年齡增長期發(fā)病率呈上升趨勢。過去明確PBC診斷的方法是肝臟穿刺活檢，但這種創(chuàng)傷性的檢測手段限制了其應(yīng)用。迄今為止，自身免疫性疾病的診斷手段主要是在結(jié)合臨床的基礎(chǔ)上，依賴實(shí)驗(yàn)室檢測到一種或多種高效價的自身抗體。在國際權(quán)威機(jī)構(gòu)制定的某些自身免疫性疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)中就包括了自身抗體，如原發(fā)性膽汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis, PBC),美國肝病學(xué)會(AASLD) 2000年發(fā)表的PBC診斷程序中，將抗線粒體抗體(AMA)列為診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。線粒體膜上存在9種自身抗原(Ml 9)，針對其中M2亞型相應(yīng)的AMA(AMA-M2)診斷PBC的敏感性和特異性最高。而對自身免疫性肝炎(AIH)的診斷，甚至可以根據(jù)患者血清中自身抗體的不同，將其分型。當(dāng)然，以上各種自身抗體在疾病診斷過程均存在其局限性，不能一概而論。如有一些M2陰性的PBC患者就無法得到及時的診斷和治療。近年已有不少報(bào)道在M2陰性的PBC患者的體內(nèi)檢測到一些特殊類型的自身抗體，對PBC的診斷具有高度特異性，最具臨床價值的為SP100抗體和GP210抗體。SP100抗體可在約31 %的PBC患者體內(nèi)被檢測到，由于不能在其他各種類型的自身免疫性肝病中檢測到該抗體，因此放視為PBC的標(biāo)志物。GP210抗體雖然僅僅在約10%的PBC患者體內(nèi)被檢測到，但對M2陰性的PBC具有較高診斷價值，可在21%的M2陰性患者體內(nèi)查到，因此聯(lián)合SP100和GP210抗體指標(biāo)，提高了單項(xiàng)M2檢測對PBC的診斷率。SLA抗體對III性自身免疫性肝炎具有高度特異性，其陽性率占自身免疫性肝炎的11 % 32. 5%，至今尚未發(fā)現(xiàn)在其他疾病或正常人群中存在SLA抗體，因而診斷價值很高。LKM抗體(抗肝/腎微粒體抗體)能與肝細(xì)胞質(zhì)、近端腎小管起反應(yīng)，經(jīng)鑒定LKM抗體有3種亞型，LKM-I是II型自身免疫性肝炎的血清學(xué)標(biāo)
O目前還沒有一種診斷裝置，能夠同時對AIH和PBC進(jìn)行方便、快捷和準(zhǔn)確的篩查。而對這兩種疾病的篩查對臨床診斷的準(zhǔn)確性，以及后續(xù)治療方案的選擇都具有重要的意義。在臨床診斷上，目前實(shí)驗(yàn)室常用的檢測自身抗體的方法主要有酶聯(lián)免疫吸附劑試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、間接免疫突光法(indirectimmunof lurescence, IFF)、免疫印跡法(immunoblotting test, IBT)、線性免疫分析法(Line immuno assay，LIA)等。免疫印跡法雖綜合了 SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特異性和敏感性，但操作相對復(fù)雜，且試劑具有較強(qiáng)的毒性和污染性。間接免疫熒光法可作半定量測定，但需有熒光顯微鏡觀察結(jié)果，結(jié)果判定的客觀性不足，標(biāo)準(zhǔn)化困難，技術(shù)程序比較復(fù)雜,也不適合高通量標(biāo)本的檢測。線性免疫分析法主要用于疾病大類的篩查,針對性相對較差，同時也不適合高通量樣本的檢測。ELISA法檢測可用于高通量標(biāo)本測定，靈敏度也較高，目前被廣泛認(rèn)可，但操作比較繁瑣，需多次加樣和洗滌，且易受溫度和孵育條件的影響，在專業(yè)實(shí)驗(yàn)室里進(jìn)行操作，給實(shí)驗(yàn)帶來諸多不便。因此，本領(lǐng)域迫切需要提供一種在臨床中能夠快速準(zhǔn)確地檢測和篩查AIH和PBC的診斷裝置，以滿足臨床診斷的需要，實(shí)現(xiàn)即時檢測、床邊檢測的需求。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型提供了一種用于診斷自身免疫性肝病的診斷試劑盒，其包括至少兩個試紙條，其中所述試紙條包括依次搭接的樣品墊、結(jié)合墊、檢測膜、和吸水墊，以及支撐底板。其中，所述結(jié)合墊上包被有可與人抗體結(jié)合的金屬膠體標(biāo)記的蛋白；所述檢測膜的檢測區(qū)上包被有一種檢測蛋白印跡，所述檢測膜的質(zhì)控區(qū)上包被有一種質(zhì)控蛋白印跡；所述試紙條的檢測膜上的所述檢測蛋白印跡與所述質(zhì)控蛋白印跡彼此分離，所述檢測蛋白印跡相比于所述質(zhì)控蛋白印跡更靠近于結(jié)合墊。在某些實(shí)施方式中，所述樣品墊是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成，所述結(jié)合墊是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成，和所述檢測膜是由硝酸纖維素膜制成，以及所述支撐底板由PVC板或其它硬質(zhì)地而不吸水的材料制成。在某些實(shí)施方式中，所述檢測蛋白印跡和/或所述質(zhì)控蛋白印跡的形狀分別為斑點(diǎn)狀或條帶狀。在某些實(shí)施方式中，所述檢測蛋白印跡和所述質(zhì)控蛋白印跡都為斑點(diǎn)狀。在某些實(shí)施方式中，所述檢測蛋白印跡和所述質(zhì)控蛋白印跡都為條帶狀。在某些實(shí)施方式中，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。在某些實(shí)施方式中，所述診、斷試劑盒包括兩個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒包括三個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒包括四個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒包括五個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。在某些實(shí)施方式中，所述質(zhì)控蛋白為可與樣品中抗體結(jié)合的抗體或蛋白，或者可與所述膠體金標(biāo)記的蛋白結(jié)合的抗體或蛋白。在某些實(shí)施方式中，所述試紙條的結(jié)合墊上還包被有第二種膠體金標(biāo)記的蛋白，且所述質(zhì)控蛋白印跡能夠結(jié)合所述第二種 膠體金標(biāo)記的蛋白。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒進(jìn)一步包括至少一個固定底座，所述至少一個固定底座上固定有所述至少兩個試紙條。在某些實(shí)施方式中，所述至少一個固定底座上固定有兩個到五個所述試紙條，且所述試紙條相互獨(dú)立。在某些實(shí)施方式中，所述固定底座的板面上設(shè)有突起，其中所述試紙條放置在由所述突起界定的、可容納單個試紙條的容納部內(nèi)。在某些實(shí)施方式中，所述固定底座的板面上設(shè)有突起，所述突起界定至少兩個可容納單個試紙條的容納部。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒包括兩個或兩個以上所述固定底座，其中每個所述固定底座上分別固定有至少一個所述試紙條。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒還包括與所述固定底座和所述試紙條配套使用的上蓋，每個所述上蓋帶有加樣口和觀察窗口，所述加樣口位于所述試紙條的所述樣品墊上方，所述觀察窗口位于所述試紙條上的所述檢測膜上方。 在某些實(shí)施方式中，所述至少兩個試紙條相互平行。在某些實(shí)施方式中，所述試紙條的檢測膜上包被的檢測蛋白印跡基本位于同一水平線上，所述試紙條的檢測膜上包被的質(zhì)控蛋白印跡基本位于同一水平線上。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒還包括一種或多種選自下組的組成部分固定底座、上蓋、干燥劑、滴管、說明書、顏色標(biāo)簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。

圖I為單個試紙條的剖面示例圖，其中I指示樣品墊，2指示結(jié)合墊，3指示檢測膜，4指示吸水墊，5指示檢測區(qū)，6指示質(zhì)控區(qū)，7指示支撐底板。圖2為單個試紙條的分解示例圖，其中1-7所表示的結(jié)構(gòu)同圖I。圖3為可以設(shè)置單個試紙條的設(shè)有突起的固定底座的不例圖,其中(a)為俯視圖，(b)為剖視圖。其中8指示固定底座，9指示突起，20指示容納部。圖4為可與固定底座配合的上蓋的示例俯視圖，其中10指示上蓋，11指示加樣口，12指示觀察窗口。圖5為設(shè)有試紙條的固定底座和上蓋配合時的結(jié)構(gòu)示意圖，其中(a)為俯視圖，(b)為剖視圖，其中1-12所表示的結(jié)構(gòu)同圖I、圖2和圖4。圖6為可以設(shè)置兩個試紙條的設(shè)有突起的固定底座及可與之配合的上蓋的示例圖，其中(a)為固定底座的示例俯視圖，(b)為固定底座的示例剖視圖，(C)為上蓋的示例俯視圖。其中V指示固定底座，8’指示突起，9’指示上蓋，10’指示加樣口，11’指示觀察窗口，20指示容納部。圖7為可以設(shè)置三個試紙條的設(shè)有突起的固定底座及可與之配合的上蓋的示例圖，其中(a)為固定底座的示例俯視圖，(b)為固定底座的示例剖視圖，(C)為上蓋的示例俯視圖。其中7”指示固定底座，8”指示突起，9”指示上蓋，10”指示加樣口，11”指示觀察窗口，20指示容納部。 圖8為用試紙條進(jìn)行檢測得到的檢測結(jié)果示意圖，其中13指示檢測區(qū)內(nèi)出現(xiàn)的深色帶，14指示質(zhì)控區(qū)內(nèi)出現(xiàn)的深色帶。
具體實(shí)施方式
本實(shí)用新型提供了用于診斷自身免疫性肝病的含有試紙條的診斷試劑盒，所述試紙條能夠用于進(jìn)行樣品的層析，并且能夠檢測樣品中存在的被檢物質(zhì)。在某些實(shí)施方式中，所述樣品可以是人體液樣品，例如血液，血漿等。在某些實(shí)施方式中，所述樣品中存在的被檢物質(zhì)是一種或多種人抗體，例如，AMA-M2抗體、SP100抗體、GP210抗體、SLA抗體或LKM-I抗體。上述這些人抗體被證明與自身免疫性肝病有關(guān)，通過檢測血液或血漿中是否存在一種或多種這些抗體，可以輔助診斷自身免疫性肝病。這些被檢抗體能夠特異性結(jié)合其對應(yīng)的抗原，因此，將這些抗體的抗原包被在所述試紙條的檢測區(qū)，可以檢測與之對應(yīng)的被檢抗體。表I中列出了能夠與AMA-M2抗體、SP100抗體、GP210抗體、SLA抗體或LKM-I抗體特異性結(jié)合的抗原的示例，以及相關(guān)聯(lián)的疾病。表I
被檢抗體與被檢抗體特異性結(jié)合的關(guān)聯(lián)的疾病
抗原
SLA抗體可溶性肝抗原(SLA)自身免疫性肝炎(AIH)
LKM-I抗體肝腎微粒體抗原(LKM-I) AIH
AMA-M2抗體AMA-M2抗原(即線粒體上原發(fā)性膽汁性肝硬化
的2-氧酸脫氫酶復(fù)合體 (PBC)
(2-OADC))，或連接有丙酮酸脫氫酶、2-氧酸脫氫酶和2-氧戊二酸脫氫酶的抗原蛋白三聯(lián)體
SPlOO抗體磷酸化的細(xì)胞核蛋白PBC
(SP100) GP210抗體核膜糖蛋白(GP210)PBC[0034]本申請?zhí)峁┑脑\斷試劑盒包括至少兩個試紙條100，其中每一個試紙條100都包括依次搭接的樣品墊I、結(jié)合墊2、檢測膜3、和吸水墊4，以及支撐底板7，其中，所述試紙條的結(jié)合墊上包被有可與人抗體結(jié)合的金屬膠體標(biāo)記的蛋白；所述試紙條的檢測膜的檢測區(qū)上包被有一種檢測蛋白印跡，所述檢測膜的質(zhì)控區(qū)上包被有一種質(zhì)控蛋白印跡；所述試紙條的檢測膜上的所述檢測蛋白印跡與所述質(zhì)控蛋白印跡彼此分離，所述檢測蛋白印跡相比于所述質(zhì)控蛋白印跡更靠近于結(jié)合墊。在某些實(shí)施方式中，本申請?zhí)峁┑脑\斷試劑盒中的各個試紙條100相互獨(dú)立，彼此互不干擾檢測時樣品的層析流動和結(jié)果顯示。樣品墊I是樣品添加的區(qū)域。結(jié)合墊2上包被有金屬膠體標(biāo)記物，是樣品與金屬膠體標(biāo)記物結(jié)合或混合的區(qū)域。檢測膜3上設(shè)置有彼此分離的檢測區(qū)5和質(zhì)控區(qū)6，且所述檢測區(qū)5比所述質(zhì)控區(qū)6更靠近結(jié)合墊2，其中所述檢測區(qū)5包被有檢測蛋白印跡，用于結(jié)合待測抗體，所述質(zhì)控區(qū)6包被有質(zhì)控蛋白印跡用于結(jié)合質(zhì)控對照物。吸水墊4用于吸收水份以使樣品朝吸水墊4方向移動。支撐底板7用于支撐依次搭接的樣品墊I、結(jié)合墊2、檢測膜3、和吸水墊4。單個試紙條100的具體結(jié)構(gòu)示意圖見圖I和圖2。如圖I所示，單個試紙條100中，樣品墊I、結(jié)合墊2、檢測膜3和吸水墊4按照該順序從左到右依次首尾搭接。“搭接”是指，相鄰的兩個組件的首尾部分重疊，并且在重疊處形成可以允許液體樣品移動的連接結(jié)構(gòu)。例如，可以在相鄰的兩個組件的首尾部分通過按壓操作形成較為緊密的重疊結(jié)構(gòu)，使得樣品能夠從上游組件的尾部通過該重疊結(jié)構(gòu)移動至下游組件上。上游組件可以重疊在下游組件的上方，也可以重疊在下方。在檢測時，可以將液體狀態(tài)的樣品(如血液，血漿等)加樣到樣品墊I上，該液態(tài)狀態(tài)的樣品可以通過吸水作用，沿著樣品墊I向與之搭接的結(jié)合墊2移動，接觸到結(jié)合墊2后再沿著結(jié)合墊2向與之搭接的檢測膜3移動，接觸到檢測膜3之后再沿著檢測膜3向與之搭接的吸水墊4移動。這樣的移動通常稱為層析作用。樣品加到樣品墊I上后，其中的物質(zhì)通過層析作用，依次移動到結(jié)合墊2和檢測膜3上。當(dāng)樣品移動到結(jié)合墊2時，其中的待檢測抗體，如人抗體，可與結(jié)合墊2上包被的金屬膠體標(biāo)記的蛋白相結(jié)合，然后含有從結(jié)合墊2上結(jié)合或混合的物質(zhì)的樣品繼續(xù)移動到檢測膜3上，并與檢測膜3上包被的檢測蛋白印跡相結(jié)合并且被截留，從而使得樣品中的被檢物質(zhì)得以被檢測。在某些實(shí)施方式中，試紙條100的結(jié)合墊2上包被有可與人抗體結(jié)合的金屬膠體物標(biāo)記的第一種蛋白。在某些實(shí)施方式中，所述第一種蛋白可以是抗人IgG抗體，例如，羊抗人IgG抗體，兔抗人IgG抗體，豬抗人IgG抗體，或鼠抗入IgG抗體等。在某些實(shí)施方式中，所述第一種蛋白可以是葡萄球菌A蛋白或鏈球菌G蛋白。所述金屬膠體標(biāo)記的第一種蛋白可以通過在適當(dāng)條件下混合金屬膠體物和蛋白而制得。在某些實(shí)施方式中，可以用適當(dāng)?shù)木彌_液加入金屬膠體物中，調(diào)節(jié)至適當(dāng)?shù)腜H，再按一定比例加入蛋白，混勻制得金屬膠體物標(biāo)記的蛋白。適當(dāng)?shù)木彌_液包括，例如，碳酸鉀緩沖液、硼酸緩沖液、磷酸緩沖液、碳酸緩沖液等，適當(dāng)?shù)木彌_液濃度可以是O. I O. 5M。適當(dāng)?shù)膒H可以是5-10，6-10，7-10，或8-9。金屬膠體物可以通過本領(lǐng)域公知的方法制得，例如，用含有金屬離子的溶液與還原劑反應(yīng)制得。例如，將含有金屬離子的溶液在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成一定大小的金屬顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠體溶液。金屬膠體物的例子有膠體金、膠體銀
坐寸ο[0038]在某些實(shí)施方式中，所述試紙條的結(jié)合墊上包被有可與人抗體結(jié)合的膠體金標(biāo)記的蛋白。在某些實(shí)施方式中，所述試紙條的結(jié)合墊上包被有膠體金標(biāo)記的抗人IgG抗體，膠體金標(biāo)記的葡萄球菌A蛋白，或膠體金標(biāo)記的鏈球菌G蛋白。在某些實(shí)施方式中，結(jié)合墊2上還包被有金屬膠體物標(biāo)記的第二種蛋白。所述第二種蛋白不同于所述金屬膠體物標(biāo)記的第一種蛋白。在某些實(shí)施方式中，所述第二種蛋白可以特異性結(jié)合質(zhì)控蛋白，但不結(jié)合樣品中的人抗體。如下所述，該第二種蛋白為質(zhì)控對照物，用于顯示試紙功能是否正常。第二種蛋白可以根據(jù)實(shí)際情況選擇，例如，可以是不結(jié)合人抗體的兔抗體、鼠抗體、羊抗體、豬抗體、或者其他適合的蛋白。所述第二種蛋白可以通過上述的方法形成金屬膠體標(biāo)記的第二種蛋白。在某些實(shí)施方式中，所述第二種蛋白與所述第一種蛋白以混合物的形式包被在結(jié)合墊2上。在某些實(shí)施方式中，試紙條100的檢測膜3上設(shè)置有彼此分離的檢測區(qū)5和質(zhì)控區(qū)6，且所述檢測區(qū)5相比于所述質(zhì)控區(qū)6更靠近于結(jié)合墊2，其中所述檢測區(qū)5包被有檢測蛋白印跡，所述質(zhì)控區(qū)6包被有質(zhì)控蛋白印跡。所述檢測區(qū)5與所述質(zhì)控區(qū)6之間間隔足夠的距離，使得層析的樣品能夠分別與檢測區(qū)5的檢測蛋白印跡和質(zhì)控區(qū)6的質(zhì)控蛋白印跡相接觸，并且互相不會干擾。檢測區(qū)5更靠近于結(jié)合墊2，使得層析的樣品在層析過程中，先與檢測蛋白印跡接觸，然后再與質(zhì)控蛋白印跡接觸。在某些實(shí)施方式中，每個所述試紙條上的所述檢測蛋白印跡為一種選自下列組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡。在某些實(shí)施方式中，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。這些檢測蛋白印跡能夠特異性結(jié)合其對應(yīng)的抗體，如AMA-M2蛋白印跡能夠特異性結(jié)合AMA-M2抗體，SP100蛋白印跡能夠特異性結(jié)合SP100抗體，GP210蛋白印跡能夠特異性結(jié)合GP210抗體，SLA蛋白印跡能夠特異性結(jié)合SLA抗體，LKM-I蛋白印跡能夠特異性結(jié)合LKM-I抗體。這些蛋白在本領(lǐng)域公知，可以通過常規(guī)的技術(shù)進(jìn)行蛋白的生物表達(dá)和分離純化，從而獲得這些蛋白。所述蛋白印跡的例子見表I。AMA-M2抗原，即線粒體上的2_氧酸脫氫酶復(fù)合體(2-0ADC)，其包括多種組分，例如丙酮酸脫氫酶、2-氧酸脫氫酶、2-氧戊二酸脫氫酶、X蛋白等。在某些實(shí)施方式中，AMA-M2抗體的靶抗原是一種連接了丙酮酸脫氫酶，2-氧酸脫氫酶和2-氧戊二酸脫氫酶的抗原蛋白三聯(lián)體(見，例如，姜小華，仲人前等，M2自身抗原及其三聯(lián)體的克隆表達(dá)和初步鑒定，中華消化雜志，2001 (21) :530-533)。AMA-M2在PBC中敏感性可達(dá)90%以上。 SP100蛋白是I個磷酸化的細(xì)胞核蛋白，電泳時對應(yīng)的分子質(zhì)量為100，000，是一轉(zhuǎn)錄活化因子。GP210的主要成分為核膜糖蛋白，是核孔復(fù)合物中一種相對分子質(zhì)量為210，000完整的跨膜蛋白(見，例如Nakamura M等，Increased exp ression of nuclear envelopegp210antigen in small bile ducts in primary biliary cirrhosis[J]. JAutoimmun,2006,26(2) :138-145)。SLA是肝細(xì)胞質(zhì)中的一種可溶性蛋白抗原，在胰腺等組織也有表達(dá)。SLA蛋白的分子量為 50KD(見，Wies I 等，Identigication of target antigen for SLA/LPautoantibodies in autoimmune hepatitis. The Lancet，2000 ;355 :1510-1515)。LKM-I (liver/kidney microsomal，LKM)為肝 / 腎微粒體，引起自身免疫性疾病的靶抗原成分為人細(xì)胞色素II D6，分子量為50KD(見，Duclos-Vallee J C等，Conformational epitopes on CYP2D6are recognized by liver/kidney microsomalantibodies. G astroenterology, 1995 ；108 :470-476)。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒包括兩個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。例如，所述兩個試紙條上的檢測蛋白印跡可以分別是SLA蛋白印跡或LKM-I蛋白印跡，或者所述兩個試紙條上的檢測蛋白印跡也可以分別選自AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡和GP210蛋白印跡。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒包括三個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。例如，所述三 個試紙條上的檢測蛋白印跡可以分別是AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡或GP210蛋白印跡。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒包括四個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。例如，所述四個試紙條上的檢測蛋白印跡可以分別是AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡或SLA蛋白印跡。例如，所述四個試紙條上的檢測蛋白印跡也可以分別是AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡或LKM-I蛋白印跡。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒包括五個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。檢測蛋白印跡可以用適當(dāng)?shù)姆椒ò辉跈z測膜3的檢測區(qū)5。在某些實(shí)施方式中，可以將檢測蛋白溶于適當(dāng)?shù)木彌_液中，再通過固定、包被、吸附、噴涂、打印等方式包被在檢測區(qū)。適當(dāng)?shù)木彌_液包括，硼酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液、Tris-磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液或巴比妥緩沖液等，其pH值可以為6. 5-7. 5，或
7.0-7. 4?？梢詫⒑袡z測蛋白的緩沖液與檢測區(qū)接觸一段時間，然后除去接觸后的緩沖液。再例如，可以將含有檢測蛋白的緩沖液噴灑在或涂布在檢測區(qū)，再通過干燥等方式除去溶劑成分。再例如，可以將檢測蛋白印在或壓制在檢測區(qū)。在某些實(shí)施方式中，所述質(zhì)控蛋白印跡為可與樣品中抗體結(jié)合的抗體或蛋白，或者可與所述膠體金標(biāo)記的蛋白結(jié)合的抗體或蛋白。在某些實(shí)施方式中，所述試紙條的結(jié)合墊上還包被有第二種膠體金標(biāo)記的蛋白，且所述質(zhì)控蛋白印跡能夠結(jié)合所述第二種膠體金標(biāo)記的蛋白。所述質(zhì)控蛋白可以是抗體。當(dāng)所述第二種蛋白為抗體時，所述質(zhì)控蛋白印跡還可以是葡萄球菌A蛋白、或鏈球菌G蛋白。使用與檢測蛋白印跡相似的包被方法，可以將質(zhì)控蛋白印跡包被在檢測膜3的質(zhì)控區(qū)6上。所述質(zhì)控蛋白印跡可用于監(jiān)測層析作用是否正常發(fā)生。如果質(zhì)控蛋白印跡能夠檢測到金屬標(biāo)記物標(biāo)記的蛋白，則表明樣品已經(jīng)從樣品墊I經(jīng)過結(jié)合墊2，并帶走了結(jié)合墊2上包被的金屬膠體物標(biāo)記的蛋白，然后繼續(xù)移動到檢測膜3。這說明該檢測結(jié)果有效。如果質(zhì)控蛋白印跡沒有檢測到任何信號，則提示試紙條可能沒有正常工作，檢測結(jié)果無效。檢測區(qū)5上包被的檢測蛋白印跡和質(zhì)控區(qū)6上包被的質(zhì)控蛋白印跡可以是任何適當(dāng)?shù)男螤睢Ｔ谀承?shí)施方式中，檢測蛋白印跡和/或質(zhì)控蛋白印跡的形狀為斑點(diǎn)狀或條帶狀。在某些實(shí)施方式中，檢測蛋白印跡和質(zhì)控蛋白印跡都為斑點(diǎn)狀或都為條帶狀。這里所說的斑點(diǎn)狀可以是圓形、橢圓等規(guī)則形狀或不規(guī)則形狀。在某些實(shí)施方式中，所述樣品墊是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成，所述結(jié)合墊是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成，和所述檢測膜是由硝酸纖維素膜制成，以及所述支撐底板由PVC板或其它硬質(zhì)地而不吸水的材料制成。在某些實(shí)施方式中，試紙條100的吸水墊4可以是由吸收紙制成的片狀物。玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙、無紡布、吸收紙和硝酸纖維素膜都是已知的材料，本領(lǐng)域人員可以通過商業(yè)途徑很容易地獲得。這些材料的型號和規(guī)格可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行選擇。例如，適用的玻璃纖維的型號有Ahlstrom8964,Ahlstrom8975,GF-06和GF-08。適用的硝酸纖維素膜的型號可以包括 Milliporel35, Sartorius CN140,和 Vivid 170 等。在某些實(shí)施方式中，每個試紙條還包括一個支撐底板7。在某些實(shí)施方式中，支撐底板7可以是平板，如圖2所示。試紙條100的其他部分可以通過粘貼的方式固定在平板狀的支撐底板7上，例如使用膠條粘貼在支撐底板上。所述膠條可以是本領(lǐng)域公知的透明膠帶或半透明膠帶。再例如，也可以在支撐底板上涂覆有粘性的材料，再將試紙條100的其他部分粘貼在支撐底板上。在某些實(shí)施方式中，試劑盒進(jìn)一步包括至少一個固定底座,所述至少一個固定底座上固定有至少一個所述試紙條。底座可以由塑料等合適的材料制成。在某些實(shí)施方式中，如圖3(a)和3(b)所示，底座8的板面邊緣可以設(shè)置有連續(xù)突起9，突起9在底座8上界定可容納單個試紙條的容納部20。盡管圖示的由連續(xù)突起9界定的容納部20為例如矩形的閉合圖形，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，還可以在底座8上形成不連續(xù)的點(diǎn)狀、條狀等合適形狀的突起，并且.由突起所界定的容納部也可以是諸如“ = ”、“C”形的非閉合圖形。例如，可以在底座8的兩個相對邊緣分別設(shè)置兩列點(diǎn)狀突起，這兩列點(diǎn)狀突起在底座上界定可容納單個試紙條的槽狀容納部。進(jìn)一步，容納部的形狀和/或尺寸可以與試紙條相當(dāng)。在某些實(shí)施方式中，試劑盒還可包括可與固定底座8配合的、與固定底座8數(shù)目相同的上蓋10。如圖4所示，每個上蓋10均設(shè)有彼此分離的加樣口 11和觀察窗口 12。上蓋10可以通過粘貼或扣合方式與設(shè)置有試紙條的固定底座8相配合。在上蓋10與固定底座8配合時,上蓋10的加樣口 11位于試紙條的樣品墊I上方,觀察窗口 12位于試紙條上的檢測膜3上方，優(yōu)選露出檢測膜3的檢測區(qū)5和質(zhì)控區(qū)6。圖5 (a)和5 (b)示意性地顯示了彼此配合的上蓋10和設(shè)置有單個試紙條的固定底座8的結(jié)構(gòu)。在某些實(shí)施方式中，試劑盒進(jìn)一步包括至少一個固定底座,所述至少一個固定底座上固定有所述至少兩個試紙條。例如，所述試劑盒包括一個固定底座8 ’，其上設(shè)置有至少兩個試紙條100。在某些實(shí)施方式中，所述至少一個固定底座上固定有兩個或五個所述試紙條，且所述試紙條相互獨(dú)立。在某些實(shí)施方式中，所述試紙條可以是相互分離的。在某些實(shí)施方式中，所述固定底座的板面上設(shè)有突起，其中所述試紙條放置在由所述突起界定的、可容納單個試紙條的容納部內(nèi)。例如，固定底座8’的板面上可設(shè)置連續(xù)突起9’，突起9’界定至少兩個可分別容納單個試紙條100的容納部20，使得所述至少兩個試紙條100彼此分隔開。再例如，固定底座8’的板面上可設(shè)置連續(xù)突起9’，突起9’界定兩個到五個可分別容納單個試紙條100的容納部20，使得所述兩個到五個試紙條100彼此分隔開。可以用粘貼的方式將試紙條100固定在各自的容納部內(nèi)。圖6(a)和圖6(b)分別示出了帶有兩個容納部的設(shè)有連續(xù)突起9’的固定底座8，的俯視圖和剖視圖，圖7(a)和圖7(b)分別示出了帶有三個容納部的設(shè)有連續(xù)突起9’的固定底座8’的俯視圖和剖視圖。同樣地，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)兩個和三個容納部的示例圖可以很容易地知道帶有四個、五個或更多容納部的固定底座的結(jié)構(gòu)。當(dāng)然，固定底座8’上的突起9’也可以如上面介紹的那樣，構(gòu)造成多個點(diǎn)狀、條狀的突起，并且突起9’所界定的各個容納部的形狀也可以是非封閉圖形(例如槽狀)。優(yōu)選各個容納部的形狀和/或尺寸與試紙條100相當(dāng)。在某些實(shí)施方式中，所述固定底座的板面上設(shè)有突起，所述突起界定至少兩個可容納單個試紙條的容納部[0061]在某些實(shí)施方式中，試劑盒還包括至少一個可與所述固定底座配套使用的上蓋，每個所述上蓋帶有加樣口和觀察窗口，所述加樣口位于所述試紙條的所述樣品墊上方，所述觀察窗口位于所述試紙條上的所述檢測膜上方。例如，試劑盒還可包括一個可與固定底座8’配合的上蓋10’，所述上蓋10’設(shè)有彼此分離的至少兩個加樣口 11’，所述上蓋10’可以粘貼或扣合的方式與固定底座8’配合。在上蓋10’與設(shè)有至少兩個試紙條100的固定底座8，蓋合時，各個加樣口 11’分別位于對應(yīng)試紙條100的樣品墊I上方。在某些實(shí)施方式中，所述上蓋10’還可包括至少兩個彼此分離的觀察窗口 12’。在上蓋10’與設(shè)有至少兩個試紙條100的固定底座8，蓋合時，各個觀察窗口 12’分別位于對應(yīng)試紙條的檢測膜3上方，優(yōu)選露出該檢測膜3的檢測區(qū)5和質(zhì)控區(qū)6。圖6 (c)示出了帶有兩個加樣口和兩個觀察窗口的上蓋的俯視圖，圖7 (c)示出了帶有三個加樣口和三個觀察窗口的上蓋的俯視圖，同樣地，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)圖6(c)和圖7(c)可以很容易地知道帶有四個、五個或更多加樣口和觀察窗口的上蓋結(jié)構(gòu)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，所述至少兩個彼此分離的觀察窗口 12’和12”也可以用一個連貫的觀察窗口來替代，在上蓋10’與設(shè)有至少兩或三個試紙條100的固定底座8，和8”蓋合時，該觀察窗口位于所有試紙條的檢測膜3上方，優(yōu)選露出所有檢測膜3的檢測區(qū)5和質(zhì)控區(qū)6。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒包括兩個或兩個以上所述固定底座，其中每個所述固定底座上分別固定有至少一個所述試紙條。在某些實(shí)施方式中，所述兩個或兩個以上的所述固定底座相互獨(dú)立。例如，所述診斷試劑盒可以包括兩個相互獨(dú)立的固定底座，其中每一個都固定有至少一個試紙條。再例如，所述診斷試劑盒可以包括兩個相互獨(dú)立的固定底座，其中一個固定有至少兩個試紙條，另一個固定有至少一個試紙條。再例如，所述診斷試劑盒可以包括三個相互獨(dú)立的固定底座，其中兩個底座分別固定有兩個試紙條，另一個固定有一個試紙條。例如，所述診斷試劑盒可以包括五個相互獨(dú)立的固定底座，其中每個底座分別固定有一個試紙條。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒還包括有可與所述固定底座配套使用的上蓋，上蓋帶有加樣口和觀察窗口，所述加樣口位于所述試紙條的所述樣品墊上方，所述觀察窗口位于所述試紙條上的所述檢測膜上方。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒中的所述至少兩個試紙條相互平行。在某些實(shí)施方式中，設(shè)置在固定底座8，上的至少兩個試紙條100的檢測區(qū)5和/或質(zhì)控區(qū)6基本上排列在同一直線上，即至少兩個試紙條100的檢測區(qū)5基本上排列在一條直線上，和/或質(zhì)控區(qū)6基本上排列在同一條直線上。在某些實(shí)施方式中，至少兩個試紙條100在固定底座8’上平行排列。在某些實(shí)施方式中，診斷試劑盒，進(jìn)一步包括一種或多種選自下組的組成部分固定底座、上蓋、干燥劑、滴管、說明書、顏色標(biāo)簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。所述滴管可用于吸取液體樣品，并可用于將液體樣品滴加到樣品墊I。所述干燥劑可以保持試劑盒的濕度在適當(dāng)?shù)姆秶?。所述說明書上寫有使用方法、保存方法、生產(chǎn)批號等信息。在某些實(shí)施方式中，所述試劑盒還可以包括至少一個避光、密封的塑料袋，其中裝有所述試劑盒。在某些實(shí)施方式中，所述試劑盒能夠用于檢測AMA-M2抗體、SP100抗體、GP210抗體、SLA抗體或LKM-I抗體。例如，所述試劑盒可用于檢測樣品中是否存在一種或多種上述抗體。如果樣品中存在一種或多種上述抗體，其可以在樣品層析過程中被檢測膜上的對應(yīng)的檢測蛋白捕獲，從而在檢測區(qū)被檢測到。例如，加入樣品后，反應(yīng)3 5分鐘可以看到檢測區(qū)5和質(zhì)控區(qū)6的相應(yīng)位置上都出現(xiàn)深色條帶13，14，如圖8 (a)和8 (b)所示，這表示檢測結(jié)果為陽性，說明樣品中含有能夠與檢測蛋白特異性結(jié)合的抗體。再如，加樣后，只在質(zhì)控區(qū)6出現(xiàn)一條深色條帶14，檢測區(qū)5不出現(xiàn)深色條帶13 (如圖8 (c)所示)，這表示檢測結(jié)果為陰性，說明樣品中不含能夠與檢測蛋白特異性結(jié)合的抗體。再如，加樣后，質(zhì)控區(qū)6不出現(xiàn)深色條帶14，此時無論檢測區(qū)6是否有條帶出現(xiàn)(如圖8(d)、8(e)所示)，都說明試紙失效，檢測結(jié)果無效。在某些實(shí)施方式中，本申請?zhí)峁┑脑\斷試劑盒可用于幫助診斷疾病。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒可用于幫助診斷自身免疫性肝病，例如，自身免疫性肝炎(AIH)和/或原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)。LKM-I抗體和SLA抗體分別是II型和III型AIH的標(biāo)志性抗體，其檢測特異性高。具有確診意義。通過檢測樣品中是否存在LKM-1-1抗體和/或SLA抗體，可以輔助診斷樣品來源者是否患有AIH。PBC診斷的三種血清學(xué)指標(biāo)是AMA-M2抗體，SP100抗體和GP210抗體。其中AMA-M2抗體是主要的血清型指標(biāo)，在大多數(shù)PBC患者中能夠檢出。SP100抗體可在31 %的PBC病人中檢出，但在其他自身免疫性肝病中檢測不到。此外，SP100抗體還在48% AMA-M2抗體陰性的PBC病人中發(fā)現(xiàn)。抗核膜糖蛋白GP210抗體可在10%的PBC病人中檢出，是PBC的高度特異性抗體，其特異性高達(dá)96%以上，極少出現(xiàn)于自身免疫性肝炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征和多發(fā)性肌炎病人中。檢測GP210抗體對于AMA-M2抗體陰性或者缺乏一般臨床特征的PBC患者以及其實(shí)驗(yàn)室、病理結(jié)果、異常的PBC患者的確診具有重要的意義。因此，M2，SP100和GP210三種抗體同時測定，對提高PBC的診斷有極大意義。本申請?zhí)峁┑脑噭┖锌梢詫IH和/或PBC的多項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)同時進(jìn)行聯(lián)檢，有助于同時篩查AIH和/或PBC，并且輔助AIH或PBC的確診，以避免誤診和漏診。在某些實(shí)施方式中，如果檢測到樣品中存在LKM-I抗體和SLA抗體中的一種或兩種，則提示樣品來源者可能患有AIH。在某些實(shí)施方式中，如果檢測到樣品中存在AMA-M2抗體、SP100抗體和GP210抗體中的一種或多種，則提示樣品來源者可能患有PBC。在某些實(shí)施方式中，如果檢測到樣品中不存在LKM-I抗體、SLA抗體、AMA-M2抗體、SPlOO抗體和GP210抗體中的任一種，則提示樣品來源者可能既不患有AIH，也不患有PBC。本中請?zhí)峁┑脑\斷試劑盒使用膠體金免疫層析法。該方法是應(yīng)用膠體金標(biāo)記技術(shù)，以膠體金作為示蹤物，以條狀纖維層析材料為固相，通過毛細(xì)效應(yīng)使樣品溶液在層析條上泳動，使樣品中的待測物與結(jié)合墊上針對待測物的受體(如抗原或抗體)發(fā)生免疫反應(yīng)，并與條狀纖維層析材料上的抗原(或抗體)發(fā)生免疫反應(yīng)而被截留，進(jìn)而形成肉眼可見的紫紅色條帶，得到直觀的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，達(dá)到快速檢測的目的(Sikowicz Get al. One-step chromatographic immunoassay for qualitative determination ofchoricogonadotropin in urine. Clin Chem. 1990 (36) 1579-1586.)。使用時只需將樣品加樣到樣品墊上，數(shù)分鐘就根據(jù)檢測線上紫紅色條帶出現(xiàn)情況來判斷陰陽性結(jié)果。與其他檢測方法相比，檢測時間短，只需要5 10分鐘，操作人員無需培訓(xùn)，不受場地人員之限，操作簡便、快速，無需低溫保存，儲運(yùn)方便等優(yōu)勢。此外該試紙具有高特異性、高靈敏度、高準(zhǔn)確度，能滿足臨床快速篩選PBC和AIH， 為病人及早診斷治療提供條件，同時，也能滿足基層實(shí)驗(yàn)室、即時檢測、床邊檢測的需求。因此，本申請?zhí)峁┑脑\斷試劑盒與現(xiàn)有產(chǎn)品相比具有明顯的優(yōu)勢。示范例I :試劑盒的結(jié)構(gòu)本示范例中提供了一個診斷試劑盒，其包括兩個如圖I所示的試紙條，其中每一個試紙條100都包括依次搭接的樣品墊I、結(jié)合墊2、檢測膜3和吸水墊4，以及支撐底板7。每個試紙條100的結(jié)合墊2上都包被有膠體金標(biāo)記的抗人抗體，以及膠體金標(biāo)記的兔IgG。每個試紙條100的檢測膜3上都設(shè)有彼此分離的檢測區(qū)5和質(zhì)控區(qū)6，且所述檢測區(qū)5比所述質(zhì)控區(qū)6更靠近于結(jié)合墊2。檢測區(qū)5包被有檢測蛋白印跡，質(zhì)控區(qū)6包被有質(zhì)控蛋白印跡。兩個試紙條100上的檢測蛋白印跡互不相同，分別為可溶性肝抗原SLA和LKM-1。每個試紙條100的質(zhì)控蛋白印跡相同，都為羊抗兔IgG。所述診斷試劑盒還包括一個如圖6所示的固定底座8’和上蓋10’。固定底座8，上的突起9’界定兩個可容納并分隔試紙條100的容納部20，兩個試紙條100平行排列地分別放置在容納部20內(nèi)，且檢測膜3上的檢測區(qū)5基本上在同一直線上，質(zhì)控區(qū)6也基本上在同一直線上。上蓋10’扣合在固定底座8，上后，上蓋10’上的加樣口 11’分別正對每個試紙條100的樣品墊1，檢測窗口 12’分別正對每個試紙條100的檢測膜3。所述診斷試劑盒還可含有未圖示的滴管、干燥劑、說明書、顏色標(biāo)簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。用試劑盒進(jìn)行檢測的方法用上述示范例中的試劑盒進(jìn)行人體樣品的檢測。收集來源于臨床的100份確診為自身免疫性肝炎(AIH)患者的血清。對于每一個患者的樣品，用滴管吸取適量血樣，分別滴加到兩個加樣口。室溫條件下靜置5分鐘后，觀察并記錄結(jié)果。對100份AIH確診患者的血清的檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，以驗(yàn)證本試劑盒對AIH診斷的靈敏度和特異性。統(tǒng)計(jì)AIH的兩項(xiàng)聯(lián)檢指標(biāo)SLA抗體和LKM-I抗體的檢測結(jié)果，見表2。計(jì)算對于每個聯(lián)檢指標(biāo)的診斷靈敏性診斷靈敏性(％)=陽性結(jié)果樣品數(shù)/測試樣品總數(shù)X 100%。結(jié)果顯示，本試劑盒對SLA抗體和LKM-I抗體的診斷靈敏度分別為31%和39%。在被檢的100份樣品中，只要AIH的兩項(xiàng)聯(lián)檢指標(biāo)中任一檢測為陽性，則該樣品被判斷為AIH患者樣品。結(jié)果顯示，100份樣品中有62份都被檢出AIH陽性結(jié)果，表明本試劑盒對AIH患者的診斷率可達(dá)62%。此外，用這些AIH患者的血清另行檢測PBC聯(lián)檢指標(biāo)(即AMA-M2抗體、SPlOO抗體和GP210抗體)，幾乎都呈陰性結(jié)果，說明本試劑盒對AIH的診斷具有較高的特異性。表 權(quán)利要求1.一種用于診斷自身免疫性肝病的診斷試劑盒，包括至少兩個試紙條，其中所述試紙條包括依次搭接的樣品墊(I)、結(jié)合墊(2)、檢測膜(3)、和吸水墊(4)，以及支撐底板(7)，其中 所述試紙條的結(jié)合墊(2)上包被有可與人抗體結(jié)合的金屬膠體標(biāo)記的蛋白； 所述試紙條的檢測膜(3)的檢測區(qū)(5)上包被有一種檢測蛋白印跡； 所述試紙條的檢測膜(3)的質(zhì)控區(qū)(6)上還包被有一種質(zhì)控蛋白印跡；以及 所述試紙條的檢測膜(3)上的所述檢測蛋白印跡與所述質(zhì)控蛋白印跡彼此分離，所述檢測蛋白印跡相比于所述質(zhì)控蛋白印跡更靠近于結(jié)合墊(2)。
2.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其中所述樣品墊(I)是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成；所述結(jié)合墊(2)是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成； 所述檢測膜(3)是由硝酸纖維素膜制成；且所述支撐底板(7)由PVC板制成。
3.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其特征在于所述檢測蛋白印跡和質(zhì)控蛋白印跡的形狀分別為斑點(diǎn)狀或條帶狀。
4.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其中每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SPlOO蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，且不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。
5.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其特征是包括兩個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。
6.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其特征是包括三個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。
7.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其特征是包括四個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。
8.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其特征是包括五個所述試紙條，每個所述試紙條上的檢測蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測蛋白印跡不相同。
9.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其中質(zhì)控蛋白印跡為與樣品中抗體結(jié)合的抗體或蛋白，或者與所述膠體金標(biāo)記的蛋白結(jié)合的抗體或蛋白。
10.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其中所述試紙條的結(jié)合墊(2)上還包被有第二種膠體金標(biāo)記的蛋白，且所述質(zhì)控蛋白印跡能夠結(jié)合所述第二種膠體金標(biāo)記的蛋白。
11.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其特征是進(jìn)一步包括至少一個固定底座，所述至少一個固定底座上固定有所述至少兩個試紙條。
12.如權(quán)利要求11所述的診斷試劑盒，其中所述至少一個固定底座上固定有兩個到五個所述試紙條，且所述試紙條相互獨(dú)立。
13.如權(quán)利要求11或12所述的診斷試劑盒，其特征在于所述固定底座的板面上設(shè)有突起，其中所述試紙條放置在由所述突起界定的、可容納單個試紙條的容納部內(nèi)。
14.如權(quán)利要求11或12所述的診斷試劑盒，其特征在于所述固定底座的板面上設(shè)有突起，所述突起界定至少兩個可容納單個試紙條的容納部。
15.如權(quán)利要求11或12所述的診斷試劑盒，其特征是包括兩個或兩個以上所述固定底座，其中每個所述固定底座上分別固定有至少一個所述試紙條。
16.如權(quán)利要求11或12所述的診斷試劑盒，其特征在于還包括與所述固定底座和所述試紙條配套使用的上蓋，每個所述上蓋帶有加樣口和觀察窗口，所述加樣口位于所述試紙條的所述樣品墊上方，所述觀察窗口位于所述試紙條上的所述檢測膜上方。
17.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其中所述至少兩個試紙條相互平行。
18.如權(quán)利要求17所述的診斷試劑盒，其中所述試紙條的檢測膜(3)上包被的檢測蛋白印跡基本位于同一水平線上，所述試紙條的檢測膜(3)上包被的質(zhì)控蛋白印跡基本位于同一水平線上。
19.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其特征是進(jìn)一步包括一種或多種選自下組的組成部分用于固定所述試紙條的固定底座、上蓋、干燥劑、滴管、說明書、顏色標(biāo)簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。
專利摘要本實(shí)用新型提供了一種試劑盒，包括至少兩個相互獨(dú)立的試紙條，其中每一個試紙條部包括依次搭接的樣品墊、結(jié)合墊、檢測膜、和吸水墊，所述檢測膜上設(shè)置有相互分離的檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，其中檢測區(qū)包被有檢測蛋白，質(zhì)控區(qū)包被有質(zhì)控蛋白。本實(shí)用新型提供的試劑盒能夠用于檢測樣品中AMA-M2抗體、SP100抗體、GP210抗體、SLA抗體或LKM-1抗體的存在，并且可用于輔助診斷自身免疫性肝病。
文檔編號G01N33/576GK202404101SQ20112034744
公開日2012年8月29日 申請日期2011年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月16日
發(fā)明者包駿, 張玥 申請人:上?？菩律锛夹g(shù)股份有限公司