專利名稱：制備測(cè)試?yán)庾V銀溶膠的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種制備測(cè)試?yán)庾V銀溶膠的方法，制備好的銀溶膠可以長(zhǎng)期保存，并有顯著的表面增強(qiáng)拉曼光譜的效果，特別對(duì)生物大分子效果顯著。本發(fā)明屬于拉曼光譜測(cè)試的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前，激光拉曼技術(shù)越來(lái)越經(jīng)常地被用于探測(cè)蛋白質(zhì)等生物大分子的分子結(jié)構(gòu)，特別是它們?cè)诘蜐舛人芤褐械奶烊粯?gòu)象。但大多數(shù)蛋白質(zhì)在激光照射下會(huì)出現(xiàn)熒光，而熒光只要出現(xiàn)，其強(qiáng)度總會(huì)超過拉曼信號(hào)，以至難以獲得清晰可辨的拉曼圖譜。長(zhǎng)期以來(lái)，為了消除熒光，主要都采用大功率激光對(duì)測(cè)試樣品進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間照射的方法，使熒光強(qiáng)度退化到可接受的水平。1974年，英國(guó)的弗萊希曼(Fleischman)首先發(fā)現(xiàn)，吡啶分子在用電化學(xué)方法粗糙化的銀電極表面上得到的拉曼光譜有了增強(qiáng)。但他們認(rèn)為這是由于電極表面的粗糙化，電極真實(shí)表面積增加而使吸附的吡啶分子的量增加引起的，而沒有意識(shí)到粗糙表面對(duì)吸附分子的拉曼光譜信號(hào)的增強(qiáng)作用。一直到1977年，范多恩(Van Duyne)和克雷斯頓(Creighton)兩個(gè)研究組各自獨(dú)立地發(fā)現(xiàn)，吸附在粗糙銀電極表面的每個(gè)吡啶分子的拉曼信號(hào)要比溶液中單個(gè)吡啶分子的拉曼信號(hào)大約強(qiáng)106倍。他們認(rèn)為這種異常高的拉曼信號(hào)的增強(qiáng)不能簡(jiǎn)單地歸結(jié)于銀電極表面粗糙化后吸附的吡啶分子數(shù)量的增加，而必然有某種物理效應(yīng)在起作用。
當(dāng)具有共振拉曼效應(yīng)的分子吸附在粗糙化的銀、金或銅的表面時(shí)，其共振拉曼信號(hào)也被增強(qiáng)，這種現(xiàn)象被稱為表面增強(qiáng)拉曼散射(Surface Enhanced RamanScattering)。在測(cè)量生物分子的拉曼光譜時(shí)，經(jīng)常會(huì)受到熒光的干擾，但當(dāng)生物分子吸附到粗糙化的銀、金或銅的表面時(shí)，其熒光會(huì)被猝滅，拉曼譜峰會(huì)被增強(qiáng)，而很容易得到高質(zhì)量的表面增強(qiáng)拉曼散射譜。
要得到高質(zhì)量的表面增強(qiáng)拉曼散射譜，除了用電化學(xué)方法使金屬電極表面粗糙化外，另一種常用的使金屬基體粗糙化的方法是制成金屬溶膠，特別是銀溶膠。制備金屬溶膠的方法很多，但基本原理相似，即把可溶性金屬鹽溶液經(jīng)化學(xué)還原而得到金屬溶膠。制成的銀溶膠可立即使用，也可存放備用。但一般制備的銀溶膠質(zhì)量不穩(wěn)定，淬滅熒光的效果也是時(shí)好時(shí)壞。尤其是制成的銀溶膠存放期不長(zhǎng)，一般為幾天，最多數(shù)周，往往使用時(shí)不得不重新制備。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是對(duì)現(xiàn)有方法的不足提出的一種制備測(cè)試?yán)庾V銀溶膠的方法，該方法制備的銀溶膠可以長(zhǎng)期保持，質(zhì)量穩(wěn)定，有顯著的表面增強(qiáng)拉曼光譜的效果，能有效地猝滅熒光，迅速得到清晰穩(wěn)定的拉曼光譜圖。特別對(duì)測(cè)試生物分子拉曼光譜效果顯著。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是將90mg的硝酸銀溶于500ml去離子水中，加熱至沸騰，然后將10mg濃度為1％的檸檬酸三鈉逐滴加入，并劇烈攪拌，滴加完后繼續(xù)保持沸騰至少2小時(shí)以上。待此銀溶膠自然冷卻后，放入離心試管里，再用離心機(jī)離心分層，將上層比較澄清的溶膠去除，然后在室溫下避光密封存放。這樣處理后該銀溶膠能長(zhǎng)期存放，時(shí)間長(zhǎng)達(dá)一到兩年。而性質(zhì)穩(wěn)定不變，使用時(shí)根據(jù)需要將此銀溶膠與去離子水配成適當(dāng)濃度，然后與所測(cè)試的各類樣品如生物分子溶液混合，一般情況下熒光則基本被猝滅，可以得到清晰穩(wěn)定的表面增強(qiáng)拉曼散射譜。


圖1是5％DNA溶液的激光拉曼譜。
圖2是5％DNA溶液與按本方法制備銀溶膠混合后的表面增強(qiáng)拉曼散射譜。
具體實(shí)施例方式
將90mg的硝酸銀溶于500ml去離子水中，加熱至沸騰，然后將10mg濃度為1％的檸檬酸三鈉逐滴加入，并劇烈攪拌，滴加完后繼續(xù)保持沸騰至少2小時(shí)以上。待此銀溶膠自然冷卻后，放入離心試管里，再用離心機(jī)離心分層，將上層比較澄清的溶膠去除，然后在室溫下避光密封存放。
至十五個(gè)月后，取出0.5ml的該銀溶膠，加0.5ml去離子水，然后與5％DNA溶液混合，測(cè)試得到表面增強(qiáng)拉曼散射譜信號(hào)。圖1是5％DNA溶液的激光拉曼譜。圖2是5％DNA溶液與按本方法制備銀溶膠混合后的表面增強(qiáng)拉曼散射譜。我們可以清楚看到圖2上的拉曼譜峰要遠(yuǎn)高于圖1中對(duì)應(yīng)的拉曼譜峰，經(jīng)計(jì)算發(fā)現(xiàn)它們分別增強(qiáng)了幾倍到幾百倍。
權(quán)利要求
1.一種制備測(cè)試?yán)庾V銀溶膠的方法，將90mg的硝酸銀溶于500ml去離子水中，加熱至沸騰，然后將10mg濃度為1％的檸檬酸三鈉逐滴加入，并劇烈攪拌，其特征是滴加完后繼續(xù)保持沸騰至少2小時(shí)以上，待此銀溶膠自然冷卻后，放入離心試管里，再用離心機(jī)離心分層，將上層比較澄清的溶膠去除，然后在室溫下避光密封存放。
全文摘要
本發(fā)明提出了一種制備測(cè)試?yán)庾V銀溶膠的方法，該方法制備的銀溶膠可以長(zhǎng)期保持，質(zhì)量穩(wěn)定，有顯著的表面增強(qiáng)拉曼光譜的效果，能有效地猝滅熒光，迅速得到清晰穩(wěn)定的拉曼光譜圖，特別對(duì)測(cè)試生物分子拉曼光譜效果顯著。
文檔編號(hào)G01N21/25GK1657915SQ20051003783
公開日2005年8月24日 申請(qǐng)日期2005年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月25日
發(fā)明者柯惟中, 周殿鳳, 衡航, 吳緘中 申請(qǐng)人:南京師范大學(xué)