下述至 少一種：Scll，Zicl，01ig2,Brn2/4,NeuroDl和Mytll;所述小分子RNA為miR-9/9 和 / 或 miR-124 ；
[0057] 和 / 或，
[0058] 所述非神經(jīng)元真核細(xì)胞可為部分分化或完全分化的細(xì)胞。
[0059] 上述應(yīng)用或方法中，所述神經(jīng)元樣細(xì)胞不重組性表達(dá)神經(jīng)發(fā)生相關(guān)的核酸或神經(jīng) 元轉(zhuǎn)錄因子。
[0060] 上述應(yīng)用或方法中，所述神經(jīng)元樣細(xì)胞不重組性表達(dá)編碼具有促神 經(jīng)發(fā)生功能蛋白質(zhì)的核酸和/或小分子RNA;所述具有促神經(jīng)發(fā)生功能蛋白質(zhì) 為下述至少一種：Sell，Zicl，01ig2，Brn2/4，NeuroDl，Mytll (Vierbuchen, et al.，Nature, 463:1035-1041 (2010))，所述小分子 RNA 為 miR-9/9 和 / 或 miR-124 (Yoo, et alNature,476 (7359) :228-31 (201 1)and Ambasudhan,et al.,Cell Stem Cell, 9(2) : 113-118(2001)。
[0061] 上述應(yīng)用或方法中，所述非神經(jīng)元真核細(xì)胞為成纖維細(xì)胞，所述神經(jīng)元樣細(xì) 胞與來自同一物種的成纖維細(xì)胞（待重編程細(xì)胞或起始細(xì)胞）相比，下述至少一種 基因的表達(dá)下調(diào)：Fap(成纖維細(xì)胞激活蛋白alpha)，Des(desmin)，Slug(鋅指蛋白 SNAI2)，Den(decorin)，F(xiàn)Spl(成纖維細(xì)胞特異蛋白 1)，Collagen1 和Twist2(twist相關(guān) 蛋白2,或者A類基礎(chǔ)螺旋環(huán)螺旋蛋白39)。這些基因可被下調(diào)2、3、4或5倍，或被完全沉 默。
[0062] 上述方法中，待重編程細(xì)胞可在適合該待重編程細(xì)胞生長的培養(yǎng)基中培養(yǎng)1天 或兩天，然后將待重編程細(xì)胞在含有所述組合物的神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)14-24天，如 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21，22, 23,或24天。在所述待重編程細(xì)胞是成纖維細(xì)胞的情況下， 成纖維細(xì)胞需要在含有所述組合物的神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)19-21天。本領(lǐng)域技術(shù)人員 可以根據(jù)待重編程細(xì)胞的類型和上述神經(jīng)元樣特性的出現(xiàn)確定適合不同類型的待重編程 細(xì)胞在含有所述組合物的神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)時間。上述方法還包括在所述神經(jīng)元誘 導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)后，將細(xì)胞用促成熟培養(yǎng)基培養(yǎng)至少10天，如培養(yǎng)10, 11，12, 13, 14, 15, 16, 1 7, 18, 19, 20, 21，22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29或30天，獲得所述神經(jīng)元樣細(xì)胞。本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以根據(jù)待重編程細(xì)胞的類型和上述神經(jīng)元樣特性的出現(xiàn)確定適合不同類型的待重 編程細(xì)胞在促成熟培養(yǎng)基中培養(yǎng)的時間。在所述待重編程細(xì)胞是成纖維細(xì)胞的情況下，需 要在促成熟培養(yǎng)基中培養(yǎng)14-21天。在促成熟培養(yǎng)基中培養(yǎng)時要和來自同一物種的原代的 神經(jīng)元細(xì)胞或來自同一物種的原代的星型膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)。
[0063] 上述方法中，神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基含有Neurobasal基礎(chǔ)培養(yǎng)基，N2和B27添加成分， GlutaMAX和bFGF ;在所述待重編程細(xì)胞是成纖維細(xì)胞的情況下，含有所述組合物的神經(jīng)元 誘導(dǎo)培養(yǎng)基可用現(xiàn)有的神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基配制，所述神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基是向Neurobasal 培養(yǎng)基中添加N2、B27、GlutaMAX和bFGF得到的培養(yǎng)基，N2在神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的質(zhì)量 含量可為1%，B27在神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的質(zhì)量含量可為2%，GlutaMAX在神經(jīng)元誘導(dǎo)培 養(yǎng)基中的質(zhì)量含量可為l%，bFGF在神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的含量可為100-250ng/ml。含有 所述組合物的神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基是向所述神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加所述組合物得到的培 養(yǎng)基。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)待重編程細(xì)胞的類型和上述神經(jīng)元樣特性的出現(xiàn)確定適 合不同類型的待重編程細(xì)胞的所述組合物中的CINPs的組成及其使用濃度。如Forskolin 的使用濃度可為 5-500 y M，如 20-300 y M、20-200 y M、50-100 y M、20 y M、40 y M、60 y M、 80 yM、100 yM、120 yM、140 yM、160 yM、180 yM或 200 yM。ISX9 的使用濃度可為 5-100 yM， 如 10-40 yM、10-20 yM、5 yM、10 yM、15 yM、20 yM、25 yM、30 yM、35 yM、40 yM、45 yM 或 50 yM〇 CHIR99021 的使用濃度可為 2-100 yM,如 5-50 yM、10-20 yM、2-10 yM、2 yM、5 yM、 10 yM、15 yM、20 yM、25 yM、30 yM、35 yM、40 yM、45 yM 或 50 yM。Bio-acetoxime 的使用 濃度可為lyM。SB431542的使用濃度可為l-50yM,如2-40yM或2-10yM或10yM。 I-BET 151 的使用濃度可為 2-100 yM,如 5-50 yM、5-20 yM、2-10 yM、0. 5-2 yM、0. 5 yM、 2 yM、5 yM、10 yM、15 yM、20 yM、25 yM、30 yM、35 yM、40 yM、45 yM 或 50yM〇 在所述待重 編程細(xì)胞是成纖維細(xì)胞的情況下，上述方法中，含有所述組合物的神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中含 有的所述組合物為所述Cl、C2、C3或C4,含有所述組合物的神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中所述C1 的含量以所述 F 計(jì)為 5-500 y M、20-300 y M、20-200 y M、50-100 y M、20 y M、40 y M、60 y M、 80 y M、100 y M、120 y M、140 y M、160 y M、180 y M或200 y M ;含有所述組合物的神經(jīng)元誘導(dǎo) 培養(yǎng)基中所述C2的含量以所述F計(jì)為5-500 yM，如20-300 yM、20-200 yM、50-100 yM、 20 y M、40 y M、60 y M、80 y M、100 y M、120 y M、140 y M、160 y M、180 y M 或 200 y M ;含有所 述組合物的神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中所述C3的含量以所述F計(jì)為5-500 yM，如20-300 yM、 20-200 yM、50-100 yM、20 yM、40 yM、60 yM、80 yM、100 yM、120 yM、140 yM、160 yM、 180 yM或200 yM ;含有所述組合物的神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中所述C4的含量以所述F計(jì)為 50-100 yM5-500 yM，如 20-300 yM、20_200 yM、50_100 yM、20 yM、40 yM、60 yM、80 yM、 100 y M、120 y M、140 y M、160 y M、180 y M 或 200 y M。
[0064] 上述方法中，所述促成熟培養(yǎng)基具體可為向所述神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基加bFGF、 Forskolin,BDNF(Brain-derivedneurotrophicfactor)和GDNF(Glialcell line-derivedneurotrophicfactor)得到的培養(yǎng)基，bFGF在所述促成熟培養(yǎng)基中的含量 為50ng/ml，F(xiàn)orskolin在所述促成熟培養(yǎng)基中的含量為10yM，BDNF在所述促成熟培養(yǎng)基 中的含量為20ng/ml，⑶NF在所述促成熟培養(yǎng)基中的含量為20ng/ml。
[0065] 上述方法中，所述方法包括從培養(yǎng)的細(xì)胞中分離得到所述神經(jīng)元樣細(xì)胞。
[0066] 所述分離是指從培養(yǎng)的細(xì)胞中純化出至少30 %，35%，40%，45%，50%，55%，60 % ,65% ,70% ,75% ,80% ,85% ,90% ,95%或 99%的神經(jīng)元樣細(xì)胞。
[0067] CiNs可以被純化出來，例如通過從培養(yǎng)的細(xì)胞中進(jìn)行萃?。ㄍㄟ^密度梯度離心和 /或流式細(xì)胞分選）。純度可以通過任意適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行檢測。如通過流式細(xì)胞分選（如 FACS分析），CiNs的純度可以達(dá)到99% -100%。CiNs可以被分離出來，比如使用分子（如 抗體、抗體衍生物、配體或Fc-肽融合分子）結(jié)合到CiNs的marker(如TUJ1、MAP2、NF-H和 NeuN或這些marker的組合）上的方法，從而選出可以結(jié)合到分子上的細(xì)胞（陽性選擇）。 比如在文獻(xiàn)Guez-Barber,J.Neurosci.Methods.，203 (1) : 10-18 (2012))中就描述 了使用 NeuN抗體通過FACS的方法分離神經(jīng)元的方法。
[0068] 由上述方法獲得的所述神經(jīng)元樣細(xì)胞也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0069] 所述神經(jīng)元樣細(xì)胞可用于治療和/或改善神經(jīng)退行性或神經(jīng)系統(tǒng)疾病或神經(jīng)元 損傷是指減少/降低神經(jīng)退行性或神經(jīng)系統(tǒng)疾病或神經(jīng)元損傷的相關(guān)癥狀。
[0070] 作為優(yōu)先實(shí)施例，CiNs細(xì)胞是由自身來源的細(xì)胞誘導(dǎo)而成，即細(xì)胞是來源于患者 自身。然而，CiNs也可由異體來源的細(xì)胞誘導(dǎo)。在一種情況下，細(xì)胞來自于與受體遺傳相關(guān) 的供體，另外一種情況下，細(xì)胞來源于與受體遺傳不相關(guān)的供體。如果人CiNs細(xì)胞是異體 來源（非自體來源/同種異體來源）的細(xì)胞誘導(dǎo)而成，通常需要同時進(jìn)行免疫抑制治療，如 施用免疫抑制劑環(huán)胞多肽或FK506。CiNs細(xì)胞可以應(yīng)用同時不局限于各種神經(jīng)退行性變， 如阿爾茲海默癥（AD)，亨廷頓癥（HD)，帕金森氏癥（PD)，肌肉萎縮性側(cè)索硬化癥（ALS)，多 發(fā)性硬化（MS)和腦性癱瘓（CP)，齒狀核紅核蒼白球路易氏體萎縮癥（DRPLA)，神經(jīng)元核內(nèi) 透明包涵體?。∟IHID)，路易體癡呆，唐氏綜合癥，哈勒沃登-施帕茨病，朊粒病，嗜銀顆粒 性癡呆，皮質(zhì)基底節(jié)變性，拳擊員癡呆，彌漫性神經(jīng)原纖維纏結(jié)，格斯特曼一施特勞斯納病， 克雅氏病，3型尼曼-匹克病，進(jìn)行性核上麻痹，亞急性硬化性全腦炎，脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)， 皮克氏病。同時還有包括并不局限于外傷性腦損傷，中風(fēng)，化學(xué)誘導(dǎo)腦損傷等腦損傷。腦損 傷可源于不同類型的外界損傷，如運(yùn)動，事故及戰(zhàn)爭。包括腦震蕩，腦缺血（中風(fēng)），腦出血， 挫傷等腦損傷可造成個體神經(jīng)元的損傷或更嚴(yán)重的大量神經(jīng)組織的丟失。此外CiNs還可 應(yīng)用于包括由病原體感染造成的腦損傷或由于藥物，環(huán)境因素或藥物濫用造成的化學(xué)誘導(dǎo) 的腦損傷。
[0071] 包括所述神經(jīng)元樣細(xì)胞的治療組合物也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0072] 所述治療組合物中所述神經(jīng)元樣細(xì)胞可通過藥學(xué)上可接受的載體導(dǎo)入機(jī)體、組織 或細(xì)胞。如所述神經(jīng)元樣細(xì)胞可懸浮在生理緩沖液中，也可連接于支持介質(zhì)上。支持介質(zhì) 可以由可生物降解的材料或不可生物降解的材料制成。支持介質(zhì)可以是天然的聚合物或人 工合成的聚合物?？蛇x用如下天然聚合物：膠原蛋白，透明質(zhì)酸，多糖，鹽和糖。人工合成的 聚合物包括聚乳酸，聚乙醇酸，聚羥基脂肪酸酯及其共聚物，如聚羥基丁酸酯，聚正酯，聚酸 酐，聚氨酯，聚碳酸酯，聚酯。這些支持介質(zhì)可以植入物，管，網(wǎng)格，或水凝膠的形式存在。支 持介質(zhì)可以是一個松散的織造或非織造網(wǎng)格，所述神經(jīng)元樣細(xì)胞接種到網(wǎng)格中。
[0073] 所述治療組合物包括有效量的所述神經(jīng)元樣細(xì)胞。一個劑量的所述神經(jīng)元樣細(xì)胞 可為10 3-107個細(xì)胞，如10 4-105個細(xì)胞、10 4-107個細(xì)胞，10 5-108個細(xì)胞，10 6-109個細(xì)胞或 106-108個細(xì)胞。所述治療組合物中，所述神經(jīng)元樣細(xì)胞可以單位劑量的形式包裝。
[0074] 本申請中，所述具有神經(jīng)元形態(tài)可為具有神經(jīng)元的形態(tài)特征，如神經(jīng)絲，胞體，樹 突，軸突和/或突觸。
[0075] 本申請中所述非神經(jīng)元真核細(xì)胞具體可為哺乳動物非神經(jīng)元真核細(xì)胞，如可從 牛，羊，豬，狗，貓，馬，靈長類動物和人中獲得。所述非神經(jīng)元真核細(xì)胞可來自骨髓，成纖維 細(xì)胞，胎兒組織（例如，胎兒肝組織），外周血，臍帶血，胰腺，皮膚或其他器官或組織。
[0076] 實(shí)驗(yàn)證明，本申請的使非神經(jīng)元真核細(xì)胞獲得神經(jīng)元樣特性的組合物在16天的 誘導(dǎo)時間內(nèi)能夠產(chǎn)生超過90%的TUJ1陽性細(xì)胞。通過進(jìn)一步的促成熟階段，這些化學(xué)方法 誘導(dǎo)的神經(jīng)元樣細(xì)胞（CiNs)有著神經(jīng)元特異性的表達(dá)譜，能夠產(chǎn)生動作電位并且形成功 能性突觸。本申請證明可以在沒有涉及遺傳操作的情況下，實(shí)現(xiàn)僅化學(xué)方法誘導(dǎo)的跨胚層 的體細(xì)胞直接重編程，這種重編程是通過使用化學(xué)小分子打破起始細(xì)胞的基因網(wǎng)絡(luò)，并使 用化學(xué)小分子誘導(dǎo)目的細(xì)胞決定性基因?qū)崿F(xiàn)的。因?yàn)樾》肿颖旧硎欠敲庖咴缘?，成本?低，更加容易操作和標(biāo)準(zhǔn)化。并且，在細(xì)胞水平進(jìn)行的小分子操作是可逆的，細(xì)胞對于小分 子本身是可滲透的。因?yàn)檫@些優(yōu)勢的存在，小分子誘導(dǎo)的策略有潛力被最終轉(zhuǎn)化到治療應(yīng) 用。
【附圖說明】
[0077] 圖1為神經(jīng)元命運(yùn)誘導(dǎo)小分子的發(fā)現(xiàn)。
[0078] A、篩選小分子的示意圖。
[0079] B和C、4個小分子被發(fā)現(xiàn)可以有效促進(jìn)Ascii誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞向神經(jīng)元轉(zhuǎn)變的 過程。B，TUJ1陽性細(xì)胞的定量，這些細(xì)胞都是圓形胞體，神經(jīng)突起長度至少為胞體的3倍 以上。通過10個隨機(jī)視野（20X)來統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)量，圖中反映的是TUJ1陽性細(xì)胞相對DAPI 標(biāo)記細(xì)胞的比例。C，A或A+FICS處理誘導(dǎo)的代表性的TUJ1陽性細(xì)胞。
[0080] 其中，A，Ascll，即在神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)轉(zhuǎn)染有表達(dá)Ascii的病毒載體的 MEFs處理；control，未誘導(dǎo)（NI)，即在成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)染表達(dá)Ascii的病毒 載體的MEFs處理；A+F在加入Forskolin(簡稱F)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（在神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中 加入Forskolin使Forskolin的含量為100yM得到的培養(yǎng)基）中培養(yǎng)轉(zhuǎn)染有表達(dá)Ascii 的病毒載體的MEFs處理；A+I在加入ISX9 (簡稱I)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（在神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基 中加入ISX9使ISX9的含量為20yM得到的培養(yǎng)基）中培養(yǎng)轉(zhuǎn)染有表達(dá)Ascii的病毒載 體的MEFs處理；A+C在加入CHIR99021 (簡稱C)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（在神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加 入CHIR99021使CHIR99021的含量為20yM得到的培養(yǎng)基）中培養(yǎng)轉(zhuǎn)染有表達(dá)Ascii的 病毒載體的MEFs處理；A+S在加入SB431542的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（在神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入 SB431542(簡稱S)使SB431542的含量為10yM得到的培養(yǎng)基）中培養(yǎng)轉(zhuǎn)染有表達(dá)Ascii 的病毒載體的MEFs處理；A+FICS在加入F、I、C和S的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（在神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基 中加入Forskolin、ISX9、CHIR99021 和SB431542 使Forskolin的含量為 100yM、ISX9 的 含量為20 yM、CHIR99021的含量為20 yM和SB431542的含量為10 yM得到的培養(yǎng)基）中 培養(yǎng)轉(zhuǎn)染有表達(dá)Ascii的病毒載體的MEFs處理。
[0081] D、小分子誘導(dǎo)過程示意圖。FM，成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基；頂，神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基。 頂+SMs(F+I+C+S)處理是在頂+SMs培養(yǎng)基（向神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入Forskolin、ISX9、 CHIR99021 和 SB431542 使 Forskolin 的含量為 100 yM、ISX9 的含量為 20 yM、CHIR99021 的含量為20yM和SB431542的含量為10yM得到的培養(yǎng)基）中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)染表達(dá)Ascii的 病毒載體的MEFs處理。
[0082] E、頂+SMs (F+I+C+S)處理的代表性TUJ1陽性細(xì)胞。
[0083] F、小分子誘導(dǎo)的TUJ1陽性細(xì)胞的定量圖（相對DAPI標(biāo)記細(xì)胞，隨機(jī)選10個20X 的視野來進(jìn)行統(tǒng)計(jì)）。FICS是上述頂+SMs(F+I+C+S)處理，F(xiàn)是在上述加入Forskolin(簡 稱F)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)染表達(dá)Ascii的病毒載體的MEFs的處理；I是在上述加入 ISX9(簡稱I)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)染表達(dá)Ascii的病毒載體的MEFs的處理；C是在上 述加入CHIR99021 (簡稱C)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)染表達(dá)Ascii的病毒載體的MEFs的 處理；S是在上述加入SB431542的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)染表達(dá)Ascii的病毒載體的MEFs 的處理；DMS0,空白對照。
[0084] 所有數(shù)據(jù)的呈現(xiàn)形式為均值加減標(biāo)準(zhǔn)差。*P〈0. 05 ;**P〈0. 01 ;***P〈0. 001 (學(xué)生 t檢驗(yàn)）。標(biāo)尺為100 y m。
[0085] 圖2為誘導(dǎo)化合物的劑量依賴效應(yīng)。
[0086] A、FICB誘導(dǎo)細(xì)胞的代表性神經(jīng)突起形態(tài)。標(biāo)尺：100ym。
[0087] B、4個小分子以一個劑量依賴效應(yīng)誘導(dǎo)神經(jīng)元的產(chǎn)生。神經(jīng)元誘導(dǎo)效率（基于 TUJ1陽性細(xì)胞量）通過每個條件的隨機(jī)視野來確定。NI為未誘導(dǎo)，即在成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)染表達(dá)Ascii的病毒載體的MEFs處理；DMS0,空白對照；CHIR99021 ( y M)中的 0、2、5、10、20、50分別表示在向FIB培養(yǎng)基（向神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入Forskolin、ISX9 和I-BET151，使Forskolin的含量為100yM、ISX9的含量為20yM和I-BET151的含量為 2yM得到的培養(yǎng)基）中加入CHIR99021使CHIR99021的含量分別為0、2、5、10、20和50yM 得到的培養(yǎng)基中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)染表達(dá)Ascii的病毒載體的MEFs處理；ISX9(yM)中的0、5、10、 20、40和100分別表示在向FCB培養(yǎng)基（向神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入Forskolin、CHIR99021 和 I-BET151，使 Forskolin 的含量為 100 yM、CHIR99021 的含量為 20 yM和 I-BET151 的含 量為2yM得到的培養(yǎng)基）中加入ISX9使ISX9的含量分別為0、5、10、20、40和100yM得 到的培養(yǎng)基中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)染表達(dá)Ascii的病毒載體的MEFs處理；Forskolin(yM)中的0、20、 50、100、200、300分別表示在向ICB培養(yǎng)基（向神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中ISX9、CHIR99021和 I-BET151，使ISX9的含量為20yM、CHIR99021的含量為20yM和I-BET151的含量為2yM 得到的培養(yǎng)基）中加入Forskolin使Forskolin的含量分別為0、20、50、100、200、300 yM 得到的培養(yǎng)基中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)染表達(dá)Ascii的病毒載體的MEFs處理；I-BET151UM)中的0、 2、5、10、20、50分別表示在向FIC培養(yǎng)基（向神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入Forskolin、ISX9和 CHIR99021，使Forskolin的含量為100 yM、ISX9的含量為20 yM和CHIR99021的含量為 20 y M得到的培養(yǎng)基）中加入I-BET151使I-BET151的含量分別為0、2、5、10、20和50 y M 得到的培養(yǎng)基中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)染表達(dá)Ascl 1的病毒載體的MEFs處理。
[0088] 圖3為高效獲得化學(xué)誘導(dǎo)的神經(jīng)元（CiNs)。
[0089] A、發(fā)現(xiàn)促進(jìn)重編程小分子的示意圖
[0090] B、定量統(tǒng)計(jì)FICSB誘導(dǎo)的或從F