一種細胞共培養(yǎng)裝置及其制作方法、使用方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種細胞共培養(yǎng)裝置及其制作方法、使用方法和應(yīng)用，該細胞共培養(yǎng)裝置包括底板，底板上放置有若干用于細胞培養(yǎng)的玻璃片，玻璃片上放置有遮擋物，每個玻璃片的一部分被遮擋物遮擋住，記為區(qū)域2，玻璃片未被遮擋物遮擋住的部分記為區(qū)域1，且玻璃片上帶有用于區(qū)分區(qū)域1和區(qū)域2范圍的標(biāo)記。本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置，在使用時通過將特定的細胞接種在特定的部位，即可根據(jù)接種部位確定細胞類型，不需要再對細胞進行分子標(biāo)記，就可開展不同細胞之間的相互影響的研究，可用于研究不同狀態(tài)之間的同種細胞通過直接接觸而帶來的相互影響，還可用于研究不同種細胞通過直接接觸而帶來的相互影響。
【專利說明】
一種細胞共培養(yǎng)裝置及其制作方法、使用方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于生物細胞培養(yǎng)實驗裝置領(lǐng)域，涉及一種用于研究細胞與細胞之間影響的細胞共培養(yǎng)裝置及其制作方法、使用方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]生物體是由多種細胞組成的有機整體，不同細胞之間通過相互影響，協(xié)調(diào)發(fā)揮作用，維持器官、組織的正常，細胞之間的相互影響一直是研究的熱點。不同細胞之間存在相互影響，例如:少突膠質(zhì)細胞與神經(jīng)元細胞之間的細胞通訊影響髓鞘的形成，心肌細胞與成纖維細胞之間的相互影響參與心臟的發(fā)育過程，樹突狀細胞與T淋巴細胞之間的相互作用參與免疫反應(yīng)中的抗原提成過程，等等。同種細胞不同狀態(tài)之間也存在相互影響，例如:視網(wǎng)膜層內(nèi)的凋亡信號可以在組織內(nèi)擴散，使凋亡細胞周圍的正常細胞發(fā)生凋亡；心肌梗死過程中，死亡信號可以通過縫隙連接傳遞，使死亡心肌細胞周圍的正常細胞發(fā)生凋亡或壞死，等等。細胞之間的相互影響廣泛，在機體生理和病理狀態(tài)下發(fā)揮重要作用，值得進行系統(tǒng)的研究。
[0003]目前針對細胞之間的影響，實驗方法很多，主要是采用細胞共培養(yǎng)，研究細胞之間的相互影響。細胞共培養(yǎng)的實驗方法可以分為以下幾類；(I)Transwell共培養(yǎng)體系。實驗裝置分為上室和下室，二者之間由一層聚碳酸酯膜半透膜(半透膜孔徑:?3μπι)隔開，上室內(nèi)培養(yǎng)一種細胞，下室內(nèi)培養(yǎng)另一種細胞，細胞自身不能通過半透膜，但是細胞分泌的各種因子可以自由通透;此實驗裝置用于研究一種細胞分泌的細胞因子對另一種細胞的作用，不能用于研究一種細胞通過細胞接觸方式，對另一種細胞的作用。(2)兩種細胞在一個培養(yǎng)板內(nèi)生長。兩種不同種類的細胞先后按照一定比例接種于一個培養(yǎng)板，培養(yǎng)一段時間后，對兩類細胞的標(biāo)志蛋白通過免疫組化進行染色，區(qū)分培養(yǎng)板內(nèi)的不同種類細胞，觀察共培養(yǎng)過程對細胞生長的影響，此實驗方法用于研究一種細胞通過分泌因子或者直接接觸，對另一種細胞的影響。(3)兩種細胞先后在一個培養(yǎng)板內(nèi)生長。一種細胞接種到培養(yǎng)板內(nèi)，培養(yǎng)一段時間之后，細胞之間達到接近80%的融合，隨后再少量接種另一種細胞，培養(yǎng)板內(nèi)形成兩層細胞，下層為第一種細胞，上層為第二種細胞，此實驗方法用于研究不同細胞之間通過直接接觸對細胞之間的影響。(4)兩種細胞在一個培養(yǎng)板內(nèi)生長。兩種不同種類的細胞按照一定比例接種于一個培養(yǎng)板，培養(yǎng)一段時間后，通過流式細胞術(shù)將兩種細胞區(qū)分收集，隨后進行生化分析，研究細胞之間的相互影響。(5)采用基因工程的方法，標(biāo)記細胞后進行共培養(yǎng)。焚光蛋白標(biāo)記其中一種細胞后，將其與其它細胞在一個培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)，通過焚光區(qū)分兩種細胞，隨后觀察一系列指標(biāo)，研究兩種細胞之間的影響。
[0004]盡管已經(jīng)存在多種共培養(yǎng)方法，還有一類共培養(yǎng)研究是目前的實驗方法不能滿足的。例如目前需要進行研究的課題為:研究綠色熒光蛋白(GFP)在相互接觸的心肌細胞之間的擴散過程，而目前的共培養(yǎng)方法均不適用于此研究。原因在于:(I)Transwell共培養(yǎng)體系;此方法的問題在于，此方法適用于研究兩種細胞之間的相互作用，兩種細胞之間不存在直接接觸，因此不適用于上述課題。(2)兩種細胞按一定比例同時接種于一個培養(yǎng)板內(nèi)；此方法的問題在于，如果采用此共培養(yǎng)方法，需要提前通過病毒感染的方式，將GFP導(dǎo)入心肌細胞內(nèi)，隨后將感染病毒的心肌細胞與未感染病毒的心肌細胞，在一個培養(yǎng)板內(nèi)共培養(yǎng)，觀察GFP蛋白的擴散過程。此方法的缺陷在于培養(yǎng)后期細胞出現(xiàn)綠色熒光有兩種情況，第一種情況:感染病毒量少的細胞，前期GFP表達量少，在前期不能被確認，病毒經(jīng)過自身復(fù)制，后期GFP表達量增加，細胞會出現(xiàn)熒光;第二種情況:前期感染病毒，表達GFP并且出現(xiàn)熒光的心肌細胞，與周圍未感染的細胞接觸后，通過多種方式，GFP可以從感染病毒的細胞擴散至未感染病毒的細胞，未感染病毒的細胞也會出現(xiàn)熒光。此共培養(yǎng)方法不能區(qū)分出現(xiàn)熒光的細胞是第一種情況，還是第二種情況，因此該方法不適用于上述課題的研究。(3)兩種細胞以上下兩層的方式進行共培養(yǎng);此方法的問題在于，心肌細胞在培養(yǎng)一段時間后，不僅會相互融合，還會以層疊的方式生長，時間越長，上下兩層的細胞區(qū)分越不明顯，因此該方法不能用于上述課題的研究。(4)細胞共培養(yǎng)后通過流式細胞術(shù)分離收集兩種細胞;此方法的問題在于，此方法只能區(qū)分表達GFP的心肌細胞和不表達GFP的心肌細胞，不能確認GFP來源于病毒感染，還是GFP由其它細胞擴散而來，因此該方法不能用于上述課題的研究。(5)采用基因工程的方法標(biāo)記細胞后進行共培養(yǎng);此方法的問題在于，對細胞同時進行GFP和第二種分子標(biāo)記，不能保證第二種分子始終局限于病毒感染的細胞，有可能也會通過細胞接觸的方式轉(zhuǎn)移，因此該方法不能用于上述課題的研究。因此需要開發(fā)設(shè)計一套能夠用于上述課題的新的細胞共培養(yǎng)裝置，使得不需要對細胞進行分子標(biāo)記，即可研究不同狀態(tài)之間的同種細胞通過直接接觸而帶來的相互影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種細胞共培養(yǎng)裝置及其制作方法、使用方法和應(yīng)用，使用該細胞共培養(yǎng)裝置時不需要對細胞進行分子標(biāo)記，即可研究不同狀態(tài)之間的同種細胞通過直接接觸而帶來的相互影響，同時還能研究不同種細胞通過直接接觸而帶來的相互影響。
[0006]為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:
[0007]一種細胞共培養(yǎng)裝置，包括底板，底板上放置有若干用于細胞培養(yǎng)的玻璃片，玻璃片上放置有遮擋物，每個玻璃片的一部分被遮擋物遮擋住，記為區(qū)域2，玻璃片未被遮擋物遮擋住的部分記為區(qū)域I，且玻璃片上帶有用于區(qū)分區(qū)域I和區(qū)域2范圍的標(biāo)記。
[0008]所述的底板為表面平整的玻璃板，玻璃片為蓋玻片，遮擋物為載玻片、蓋玻片或透明膠帶。
[0009]所述的細胞共培養(yǎng)裝置的制造方法，其具體步驟如下:
[0010]選取表面平整、潔凈的底板，在底板上放置若干表面平整、潔凈的玻璃片，并在玻璃片上標(biāo)上用于區(qū)分區(qū)域I和區(qū)域2范圍的標(biāo)記，然后用遮擋物遮擋住區(qū)域2，再進行消毒處理，即得到細胞共培養(yǎng)裝置。
[0011]所述的消毒處理是采用鈷源照射的方式消毒。
[0012]所述的細胞共培養(yǎng)裝置在培養(yǎng)兩種不同的細胞方面的應(yīng)用。
[0013]所述的細胞共培養(yǎng)裝置在培養(yǎng)兩種不同細胞狀態(tài)下的同種細胞方面的應(yīng)用。
[0014]所述的細胞共培養(yǎng)裝置的使用方法，其具體步驟如下:
[0015]I)將無菌的細胞共培養(yǎng)裝置放入培養(yǎng)皿內(nèi)，然后將細胞A接種至培養(yǎng)皿內(nèi)進行培養(yǎng)，再將細胞共培養(yǎng)裝置從培養(yǎng)皿內(nèi)移走，此時細胞共培養(yǎng)裝置中底板上未被覆蓋的區(qū)域、玻璃片上的區(qū)域I及遮擋物上均貼敷有細胞A;
[0016]2)將遮擋物從細胞共培養(yǎng)裝置中移去，露出未被細胞A貼敷的區(qū)域2，再移去底板，只保留玻璃片，此時玻璃片的區(qū)域I上貼敷有細胞A，區(qū)域2上未貼敷任何細胞；
[0017]3)將玻璃片移入24孔板內(nèi)，向24孔板內(nèi)接種攜帶基因X的病毒，孵育細胞，使病毒感染細胞A，此時玻璃片區(qū)域I上的部分細胞A被病毒感染，再將24孔板內(nèi)的培養(yǎng)液換成新鮮培養(yǎng)液，清除培養(yǎng)液中游尚的病毒；
[0018]4)在24孔板內(nèi)再次接種細胞A進行培養(yǎng)，此時玻璃片的區(qū)域I和區(qū)域2上均貼敷有第二次接種的細胞A，同時區(qū)域I上還貼敷有第一次接種的未被病毒感染的細胞A和第一次接種的被病毒感染的細胞A;
[0019]5)將玻璃片移入新的24孔板內(nèi)繼續(xù)進行細胞培養(yǎng)，最后收集區(qū)域2上貼敷的細胞進行生化分析，分析區(qū)域I內(nèi)的細胞對區(qū)域2內(nèi)細胞的影響。
[0020]所述的細胞共培養(yǎng)裝置的使用方法，其具體步驟如下:
[0021]I)將無菌的細胞共培養(yǎng)裝置放入培養(yǎng)皿內(nèi)，然后將細胞A接種至培養(yǎng)皿內(nèi)進行培養(yǎng)，再將細胞共培養(yǎng)裝置從培養(yǎng)皿內(nèi)移走，此時細胞共培養(yǎng)裝置中底板上未被覆蓋的區(qū)域、玻璃片上的區(qū)域I及遮擋物上均貼敷有細胞A;
[0022]2)將遮擋物從細胞共培養(yǎng)裝置中移去，露出未被細胞A貼敷的區(qū)域2，再移去底板，只保留玻璃片，此時玻璃片的區(qū)域I上貼敷有細胞A，區(qū)域2上未貼敷任何細胞；
[0023]3)將玻璃片移入24孔板內(nèi)，向24孔板內(nèi)接種細胞B進行培養(yǎng)，此時玻璃片的區(qū)域I上同時貼敷有細胞A和細胞B，區(qū)域2上僅貼敷有細胞B;
[0024]4)將玻璃片移入新的24孔板內(nèi)繼續(xù)進行細胞培養(yǎng)，最后收集區(qū)域2上貼敷的細胞進行生化分析，分析區(qū)域I內(nèi)的細胞對區(qū)域2內(nèi)細胞的影響。
[0025]相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為:
[0026]本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置結(jié)構(gòu)簡單，制作方法簡便，而且容易使用，并且具有以下四點現(xiàn)有的細胞共培養(yǎng)裝置所不具備的優(yōu)勢，具體如下:
[0027]I)本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置可以用于研究兩種不同細胞之間的影響:將細胞A接種在區(qū)域I，細胞B接種在區(qū)域2，可以研究細胞A對細胞B的影響，尤其是可以研究細胞A通過直接接觸細胞B的方式對細胞B產(chǎn)生的影響；
[0028]2)本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置還可以研究同種細胞不同狀態(tài)之間的影響:將A狀態(tài)的細胞C接種在區(qū)域I，B狀態(tài)的細胞C接種在區(qū)域2，可以研究A狀態(tài)的細胞C對B狀態(tài)的細胞C的影響，尤其是可以研究A狀態(tài)的細胞C通過直接接觸B狀態(tài)的細胞C的方式對B狀態(tài)的細胞C產(chǎn)生的影響；
[0029]3)本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置在使用前不需要對待研究的細胞進行標(biāo)記:因為根據(jù)本發(fā)明的細胞共培養(yǎng)裝置的使用方法，將特定的細胞接種在特定的部位，最后在區(qū)域2內(nèi)的細胞都是同一類，根據(jù)標(biāo)記確定區(qū)域2在玻璃片上的位置后，即可根據(jù)位置確定玻璃片上細胞的類型，無需通過細胞自身的標(biāo)志蛋白或形態(tài)確定細胞類型；
[0030]4)在使用完本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置培養(yǎng)細胞后，對區(qū)域2內(nèi)的細胞進行收集，可以進行相關(guān)的生化分析，研究區(qū)域I內(nèi)的細胞對區(qū)域2內(nèi)細胞的蛋白表達影響:可以將區(qū)域2內(nèi)的細胞直接進行原位固定，免疫組化染色分析，研究區(qū)域2細胞的形態(tài)變化，以及蛋白在細胞內(nèi)的分布變化。
[0031]本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置能夠用于研究不同狀態(tài)之間的同種細胞通過直接接觸而帶來的相互影響，同時還能研究不同種細胞通過直接接觸而帶來的相互影響，能夠在培養(yǎng)兩種不同的細胞方面進行應(yīng)用，也能夠在培養(yǎng)兩種不同細胞狀態(tài)下的同種細胞方面進行應(yīng)用，具有良好的實用性和廣泛的應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0032]圖1為本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置的制作流程示意圖；
[0033]圖2為本發(fā)明制作的細胞共培養(yǎng)裝置的實物圖；
[0034]圖3為本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置的使用流程示意圖；
[0035]圖4為肌細胞之間GFP的擴散過程圖；
[0036]圖5為互接觸的心肌細胞間GFP擴散過程圖。
【具體實施方式】
[0037]本發(fā)明提供了一種細胞共培養(yǎng)裝置，應(yīng)用于研究不同細胞之間的相互影響。不同種類的細胞之間可以通過接觸的方式相互影響細胞的功能，在此類研究中，部分研究采用熒光分子標(biāo)記的方式區(qū)分兩種細胞，觀察一種細胞對另一種細胞的影響;但是另一部分研究中，不適合采用熒光分子標(biāo)記的方式區(qū)分兩種細胞，對此類研究的開展造成一定的困難。本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置，將特定的細胞接種在特定的部位，根據(jù)接種部位確定細胞類型，不需要再對細胞進行分子標(biāo)記，就可開展不同細胞之間的相互影響的相關(guān)研究。
[0038]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進一步詳細說明，所述是對本發(fā)明的解釋，而不是限定。
[0039]如圖1所示，本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置，包括底板，底板上放置有若干用于細胞培養(yǎng)的玻璃片，玻璃片上放置有遮擋物，每個玻璃片的一部分被遮擋物遮擋住，記為區(qū)域2，玻璃片未被遮擋物遮擋住的部分記為區(qū)域I，且玻璃片上帶有用于區(qū)分區(qū)域I和區(qū)域2范圍的標(biāo)記。其中底板僅要求表面平整即可，可以選用長方形蓋玻片①或塑料板、金屬板等；玻璃片可以選用圓形蓋玻片②;遮擋物只要能達到遮擋住部分玻璃片的功能即可，可以選用長方形蓋玻片或者透明膠帶③。
[0040]如圖1和圖2所示，本發(fā)明在制作細胞共培養(yǎng)裝置時具體包括以下步驟:
[0041]I)選取表面潔凈的長方形蓋玻片①(如圖1A所示)；
[0042]2)在長方形蓋玻片①上均勻放置6個圓形蓋玻片②，在6個圓形蓋玻片②上打上標(biāo)記(如圖1B所示)；
[0043]3)根據(jù)圓形蓋玻片②上的標(biāo)記，將圓形蓋玻片②分為兩個區(qū)域:區(qū)域I和區(qū)域2(如圖1C所示)；
[0044]4)用長方形蓋玻片或者透明膠帶③覆蓋區(qū)域2(如圖1D所示)；
[0045]5)將裝置通過鈷源照射方式消毒，即完成細胞共培養(yǎng)裝置的制作，制作好的細胞共培養(yǎng)裝置的實物圖如圖2所示。
[0046]如圖3所示，以研究綠色熒光蛋白(GFP)在相互接觸的心肌細胞之間的擴散過程為例來說明本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置的使用方法，其具體步驟如下:
[0047]I)將無菌的細胞共培養(yǎng)裝置放入培養(yǎng)皿內(nèi)(如圖3A所示)；
[0048]2)將乳鼠心肌細胞接種至培養(yǎng)皿內(nèi)，培養(yǎng)24h，如圖3B所示，此時培養(yǎng)皿內(nèi)、長方形蓋玻片①上未被覆蓋的區(qū)域、圓形蓋玻片②上的區(qū)域I及透明膠帶③上均貼敷有乳鼠心肌細胞；
[0049]3)將細胞共培養(yǎng)裝置從培養(yǎng)皿內(nèi)移走，如圖3C所示，此時長方形蓋玻片①上未被覆蓋的區(qū)域、圓形蓋玻片②上的區(qū)域I及透明膠帶③上仍貼敷有乳鼠心肌細胞；
[0050]4)將透明膠帶③從細胞共培養(yǎng)裝置中移去，如圖3D所示，此時細胞共培養(yǎng)裝置上被透明膠帶③覆蓋的區(qū)域沒有貼敷乳鼠心肌細胞，其他區(qū)域上仍貼敷有乳鼠心肌細胞；圖3E是圖3D對應(yīng)的實物圖，通過實驗?zāi)軌蜃C實透明膠帶③對圓形蓋玻片②上的區(qū)域I和區(qū)域2的細胞貼敷無影響；
[0051]5)將長方形蓋玻片①從細胞共培養(yǎng)裝置中移去，只保留6個圓形蓋玻片②，如圖3F所示，此時圓形蓋玻片②上的區(qū)域I上貼敷有乳鼠心肌細胞，區(qū)域2上沒有貼敷乳鼠心肌細胞；
[0052]6)將6個圓形蓋玻片②移入24孔板的6個孔內(nèi)，如圖3G所示；
[0053]7)向24孔板內(nèi)接種攜帶GFP基因的病毒，孵育24h，使病毒感染乳鼠心肌細胞，如圖3H所示，乳鼠心肌細胞只存在于圓形蓋玻片②上的區(qū)域I上，且部分乳鼠心肌細胞被病毒感染，剩余部分乳鼠心肌細胞未被病毒感染；
[0054]8)將24孔板內(nèi)的培養(yǎng)液換成新鮮培養(yǎng)液，清除液體中游離的病毒；
[0055]9)在24孔板內(nèi)接種乳鼠心肌細胞(第二次接種心肌細胞)，培養(yǎng)24h，如圖31所示，此時24孔板內(nèi)及圓形蓋玻片②上的區(qū)域I和區(qū)域2上均貼敷有第二次接種的乳鼠心肌細胞；
[0056]10)將6個圓形蓋玻片移入新的24孔板，如圖3J所示，圓形蓋玻片②上的區(qū)域2上只貼敷有第二次接種的乳鼠心肌細胞，而區(qū)域I上貼服有第一次接種的未被病毒感染的乳鼠心肌細胞、第一次接種的被病毒感染的乳鼠心肌細胞和第二次接種的乳鼠心肌細胞;并且存在在區(qū)域I和區(qū)域2的交界處，區(qū)域I內(nèi)的某一個第一次接種的被病毒感染的乳鼠心肌細胞與區(qū)域2內(nèi)的某一個第二次接種的乳鼠心肌細胞直接相互接觸的情況；
[0057]11)細胞繼續(xù)培養(yǎng)12d;至此，圓形蓋玻片②的區(qū)域I內(nèi)的細胞包括3類:第一次接種的心肌細胞(感染病毒)，第一次接種的心肌細胞(未感染病毒)，第二次接種的心肌細胞;圓形蓋玻片②區(qū)域2內(nèi)的細胞均為第二次接種的心肌細胞。
[0058]用熒光顯微鏡實時觀察在圓形蓋玻片②區(qū)域2內(nèi)的細胞狀態(tài)，以及區(qū)域2內(nèi)的GFP表達過程。區(qū)域I和區(qū)域2的細胞在分界線處存在細胞接觸，這兩部分細胞之間存在細胞聯(lián)系(如圖3J所示)。因為區(qū)域2內(nèi)的細胞從未接觸過病毒，細胞自身一定不會表達GFP，區(qū)域I內(nèi)的部分細胞會表達綠色熒光;在培養(yǎng)12d后，如果在區(qū)域2內(nèi)發(fā)現(xiàn)了表達綠色熒光的心肌細胞，則可以認為GFP—定是從區(qū)域I內(nèi)的細胞傳遞過來，證明GFP可以在細胞之間通過某種方式傳遞，具體的實驗結(jié)果如圖4、圖5所示。
[0059]圖4給出了心肌細胞之間GFP的擴散過程，其中A-F為細胞熒光顯微照片，A’-F’為細胞相差顯微照片。虛線Boundary以下為區(qū)域I，虛線Boundary以上為區(qū)域2?？梢钥闯黾毎囵B(yǎng)12d后，綠色熒光已經(jīng)擴散至區(qū)域2的Frontier。
[0060]圖5給出了相互接觸的心肌細胞間GFP的擴散過程，其中細胞I位于區(qū)域I內(nèi)，細胞2位于區(qū)域2內(nèi)，且細胞I和細胞2相互接觸。培養(yǎng)Sd后，細胞I出現(xiàn)熒光，細胞2未出現(xiàn)熒光；而培養(yǎng)12d后，細胞I和細胞2均出現(xiàn)熒光。
[0061]本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置的優(yōu)點在于:1)可以研究兩種細胞之間的影響；細胞A接種在區(qū)域I，細胞B接種在區(qū)域2，研究細胞A對細胞B的影響。2)可以研究同種細胞不同狀態(tài)之間的影響;A狀態(tài)的細胞接種在區(qū)域I，B狀態(tài)的細胞接種在區(qū)域2，研究A狀態(tài)的細胞對B狀態(tài)的細胞影響。3)不需要對細胞進行標(biāo)記；區(qū)域2內(nèi)的細胞都是同一類，確定區(qū)域2在蓋玻片上的位置后，根據(jù)位置即可確定細胞的類型，無需通過細胞自身的標(biāo)志蛋白或形態(tài)確定細胞類型。4)區(qū)域2內(nèi)的細胞經(jīng)過收集后，可以進行相關(guān)的生化分析，研究區(qū)域I內(nèi)的細胞對區(qū)域2內(nèi)細胞的蛋白表達影響;將區(qū)域2內(nèi)的細胞直接進行原位固定，免疫組化染色分析，研究區(qū)域2細胞的形態(tài)變化，以及蛋白在細胞內(nèi)的分布變化。這四點是目前已經(jīng)報道的細胞共培養(yǎng)裝置所不具備的優(yōu)勢。但是本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置不能排除旁分泌對細胞的影響，只關(guān)注通過直接接觸方式研究細胞對細胞的影響，因此在使用本發(fā)明提供的細胞共培養(yǎng)裝置前，應(yīng)該先進行transwel I共培養(yǎng)實驗，排除旁分泌在細胞之間的影響。
【主權(quán)項】
1.一種細胞共培養(yǎng)裝置，其特征在于:包括底板，底板上放置有若干用于細胞培養(yǎng)的玻璃片，玻璃片上放置有遮擋物，每個玻璃片的一部分被遮擋物遮擋住，記為區(qū)域2，玻璃片未被遮擋物遮擋住的部分記為區(qū)域I，且玻璃片上帶有用于區(qū)分區(qū)域I和區(qū)域2范圍的標(biāo)記。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞共培養(yǎng)裝置，其特征在于:所述的底板為表面平整的玻璃板，玻璃片為蓋玻片，遮擋物為載玻片、蓋玻片或透明膠帶。3.權(quán)利要求1或2所述的細胞共培養(yǎng)裝置的制造方法，其特征在于，其具體步驟如下: 選取表面平整、潔凈的底板，在底板上放置若干表面平整、潔凈的玻璃片，并在玻璃片上標(biāo)上用于區(qū)分區(qū)域I和區(qū)域2范圍的標(biāo)記，然后用遮擋物遮擋住區(qū)域2，再進行消毒處理，即得到細胞共培養(yǎng)裝置。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細胞共培養(yǎng)裝置的制造方法，其特征在于:所述的消毒處理是采用鈷源照射的方式消毒。5.權(quán)利要求1或2所述的細胞共培養(yǎng)裝置在培養(yǎng)兩種不同的細胞方面的應(yīng)用。6.權(quán)利要求1或2所述的細胞共培養(yǎng)裝置在培養(yǎng)兩種不同細胞狀態(tài)下的同種細胞方面的應(yīng)用。7.權(quán)利要求1或2所述的細胞共培養(yǎng)裝置的使用方法，其特征在于，其具體步驟如下: 1)將無菌的細胞共培養(yǎng)裝置放入培養(yǎng)皿內(nèi)，然后將細胞A接種至培養(yǎng)皿內(nèi)進行培養(yǎng)，再將細胞共培養(yǎng)裝置從培養(yǎng)皿內(nèi)移走，此時細胞共培養(yǎng)裝置中底板上未被覆蓋的區(qū)域、玻璃片上的區(qū)域I及遮擋物上均貼敷有細胞A; 2)將遮擋物從細胞共培養(yǎng)裝置中移去，露出未被細胞A貼敷的區(qū)域2，再移去底板，只保留玻璃片，此時玻璃片的區(qū)域I上貼敷有細胞A，區(qū)域2上未貼敷任何細胞； 3)將玻璃片移入24孔板內(nèi)，向24孔板內(nèi)接種攜帶基因X的病毒，孵育細胞，使病毒感染細胞A，此時玻璃片區(qū)域I上的部分細胞A被病毒感染，再將24孔板內(nèi)的培養(yǎng)液換成新鮮培養(yǎng)液，清除培養(yǎng)液中游尚的病毒； 4)在24孔板內(nèi)再次接種細胞A進行培養(yǎng)，此時玻璃片的區(qū)域I和區(qū)域2上均貼敷有第二次接種的細胞A，同時區(qū)域I上還貼敷有第一次接種的未被病毒感染的細胞A和第一次接種的被病毒感染的細胞A; 5)將玻璃片移入新的24孔板內(nèi)繼續(xù)進行細胞培養(yǎng)，最后收集區(qū)域2上貼敷的細胞進行生化分析，分析區(qū)域I內(nèi)的細胞對區(qū)域2內(nèi)細胞的影響。8.權(quán)利要求1或2所述的細胞共培養(yǎng)裝置的使用方法，其特征在于，其具體步驟如下: 1)將無菌的細胞共培養(yǎng)裝置放入培養(yǎng)皿內(nèi)，然后將細胞A接種至培養(yǎng)皿內(nèi)進行培養(yǎng)，再將細胞共培養(yǎng)裝置從培養(yǎng)皿內(nèi)移走，此時細胞共培養(yǎng)裝置中底板上未被覆蓋的區(qū)域、玻璃片上的區(qū)域I及遮擋物上均貼敷有細胞A; 2)將遮擋物從細胞共培養(yǎng)裝置中移去，露出未被細胞A貼敷的區(qū)域2，再移去底板，只保留玻璃片，此時玻璃片的區(qū)域I上貼敷有細胞A，區(qū)域2上未貼敷任何細胞； 3)將玻璃片移入24孔板內(nèi)，向24孔板內(nèi)接種細胞B進行培養(yǎng)，此時玻璃片的區(qū)域I上同時貼敷有細胞A和細胞B，區(qū)域2上僅貼敷有細胞B; 4)將玻璃片移入新的24孔板內(nèi)繼續(xù)進行細胞培養(yǎng)，最后收集區(qū)域2上貼敷的細胞進行生化分析，分析區(qū)域I內(nèi)的細胞對區(qū)域2內(nèi)細胞的影響。
【文檔編號】C12M3/00GK106085848SQ201610479284
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月24日
【發(fā)明人】岳志杰, 余志斌, 張琳, 趙星成, 王云英, 焦博, 圣娟娟, 茹凝玉
【申請人】中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)