本發(fā)明屬于有機(jī)光電功能材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米粒子及其制備方法，本發(fā)明還涉及所述納米粒子在次氯酸根檢測(cè)、細(xì)胞成像和生物標(biāo)記中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

聚合物的納米粒子，相比于無機(jī)納米材料具有很多的優(yōu)點(diǎn)，具有水溶性好、生物相容性好、可生物降解的特點(diǎn)，常常作為疏水性有機(jī)材料的良好載體應(yīng)用于生物成像和癌癥治療中。

眾所周知，活性氧(Reactive oxygen species,ROS)是指分子氧在還原過程中產(chǎn)生的一系列中間產(chǎn)物，包括以自由基形式存在和不以自由基形式存在的具有高活性的中間產(chǎn)物，包括有超氧陰離子自由基、羥基自由基、過氧自由基、烷氧自由基、次氯酸、過氧化氫、單線態(tài)氧、過氧化氫自由基。氧分子是生物體代謝過程中的必需物質(zhì)，而生物體內(nèi)的ROS主要是由這些氧分子通過一系列化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的。分子氧是所有耗氧有機(jī)體維持其生命活動(dòng)的必需組分。人體內(nèi)的活性氧物種ROS主要是通過線粒體呼吸過程產(chǎn)生的氧氣，同時(shí)，也可通過外部干擾誘導(dǎo)有機(jī)體內(nèi)生成，例如外源性化學(xué)物質(zhì)，傳染劑和紫外線。ROS參與廣泛的生理和病理過程，如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，炎癥，癌變和神經(jīng)組織衰退性損傷。雖然在正常的細(xì)胞環(huán)境中產(chǎn)生ROS對(duì)于生命是必須的，但是當(dāng)它們?cè)谕庠葱源碳は律蛇^量時(shí)，對(duì)有機(jī)體也是有危害的。過量的ROS通過生物分子的氧化引起的氧化應(yīng)激，例如，脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA的氧化作用，并誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。

ROS調(diào)節(jié)各種各樣的生理過程。次氯酸(HOCl)，一個(gè)生物學(xué)意義的活性氧，是在活化白細(xì)胞內(nèi)，通過髓過氧化酶催化過氧化氯離子產(chǎn)生的。在自然防御中，次氯酸也是一種重要的殺菌劑。然而，次氯酸水平的異常與許多炎癥相關(guān)的疾病有著密切的聯(lián)系，包括心血管疾病，人體紅細(xì)胞的損傷，肺病，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和癌癥。所以，次氯酸的檢測(cè)是非常重要的。目前，已經(jīng)發(fā)展了許多檢測(cè)次氯酸的方法，例如，電解法，電勢(shì)法，分光光度法，化學(xué)發(fā)光檢測(cè)等。WeiyingLin組合成了一種檢測(cè)ClO^-的比率熒光探針，當(dāng)作用于分析物時(shí)，熒光發(fā)射比率(I₅₀₉/I₄₃₉)的可從0.28增加到2.74，且具有較高的選擇性(Chem.Eur.J.,2009,15,2305–2309)。此探針是基于熒光信號(hào)的檢測(cè)。

相比于熒光信號(hào)，磷光信號(hào)檢測(cè)具有以下優(yōu)勢(shì)：具有大的Stokes位移、可見光激發(fā)、良好的光穩(wěn)定性、長(zhǎng)的發(fā)射壽命、高的量子效率和發(fā)射波長(zhǎng)易調(diào)節(jié)等。其中大的斯托克斯位移 可以很容易區(qū)分激發(fā)和發(fā)射，長(zhǎng)的發(fā)射壽命可使用時(shí)間分辨技術(shù)與背景熒光信號(hào)相區(qū)分以提高檢測(cè)的信噪比和靈敏度以及可使用可見光進(jìn)行激發(fā)降低光漂白。因此，開發(fā)具有選擇性的、可用于生物體檢測(cè)的磷光探針具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

鑒于現(xiàn)有技術(shù)中存在上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是為了改善離子型材料的水溶性并保證其良好的發(fā)光強(qiáng)度，將離子型材料包覆于聚乙二醇-聚乳酸納米材料中，并提出將這種納米材料應(yīng)用于次氯酸檢測(cè)和生物成像中。本發(fā)明提供了一類水溶性好比油溶性好的兩親性聚合物聚乙二醇-聚乳酸和包覆于兩親性聚合物聚乙二醇-聚乳酸納米粒子核內(nèi)的磷光發(fā)射銥配合物，給出它們的制備方法，并提出這類配合物在次氯酸根檢測(cè)、細(xì)胞成像以及生物標(biāo)記中的應(yīng)用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下所述：

本發(fā)明提供一種包覆離子型銥配合物探針的聚乙二醇-聚乳酸納米材料，所述的納米材料包括兩親性聚合物聚乙二醇-聚乳酸和包覆于兩親性聚合物聚乙二醇-聚乳酸納米粒子核內(nèi)的離子型銥配合物探針，所述離子型銥配合物的結(jié)構(gòu)通式如下：

其中，C^N配體選自下述結(jié)構(gòu)中的一種：

其中，R選自H、CH₃(CH₂)₄CH₃、CH₃(CH₂)₁₀CH₃、CH₃(CH₂)₁₆CH₃中的一種。

上述納米粒子的直徑為80-110nm。

本發(fā)明還提供所述的包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料的制備方法，該方 法包括以下步驟：

A)用開環(huán)聚合的方法合成兩親性的聚合物聚乙二醇-聚乳酸，具體如下：加入干燥過的甲基封端的聚乙二醇，DL-丙交酯和溶于有機(jī)溶劑中的催化劑，70℃抽真空1h除水和甲苯，再密封反應(yīng)體系，140-160℃反應(yīng)2-5h得到兩親性聚合物聚乙二醇-聚乳酸；

B)自組裝為包覆納米離子，具體如下：取聚乙二醇-聚乳酸，離子型銥配合物溶于有機(jī)溶劑溶液中，將上述溶液緩慢地滴加到去離子水中形成聚合物納米粒子并攪拌，再將上述混合液轉(zhuǎn)移至截留分子量為14000的透析袋避光透析3天，除去有機(jī)溶劑四氫呋喃；最后用0.22μm的針頭過濾器過濾掉沒有包覆進(jìn)聚合物納米粒子中的銥配合物的聚集體。

所述納米材料的制備方法一個(gè)可行的合成路線為：

其中，所述磷光發(fā)射的離子型銥配合物的制備方法的具體步驟為：

(1)銥二氯橋的制備：將C^N配體(所述C^N配體選自上述C^N結(jié)構(gòu)中的一種)與三氯化銥在惰性氣體保護(hù)下加入到乙二醇乙醚和水的混合溶液中，加熱攪拌，制備得到二氯橋中間體；

(2)銥配合物中間體的制備：將得到的銥二氯橋中間體與含有肟基(-C＝N-OH)的N^N配體在二氯甲烷和甲醇混合液中惰性氣體保護(hù)下50℃密閉反應(yīng)5h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，得到銥配合物中間體；所述N^N環(huán)金屬配體的結(jié)構(gòu)通式為：

(3)銥配合物探針的制備：在步驟(2)反應(yīng)結(jié)束后的反應(yīng)液中加入六氟磷酸鉀繼續(xù)反應(yīng)8h后，分離提純得到的銥配合物探針。

所述磷光發(fā)射的離子型銥配合物的制備方法一個(gè)可行的合成路線為(僅是本發(fā)明所述制備方法中的一個(gè)實(shí)施例，不代表本發(fā)明包含的所有技術(shù)方案)：

本發(fā)明所述制備方法中，首先，合成了一類用于檢測(cè)次氯酸根(ClO^-)的含肟基團(tuán)(C＝N-OH)的磷光銥配合物。其次，采用開環(huán)聚合的方法制備以聚乙二醇為引發(fā)劑得到兩親性聚合物聚乙二醇-聚乳酸(mPEG-PLA)，最后，通過納米沉淀的方法，讓銥配合物與兩親性聚合物通過自組裝得到包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸的納米粒子。這種納米粒子尺寸均一，生物相容性好，可以有效改善的離子型銥配合物水溶性。這種包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米粒子具有好的水溶性和生物相容性，并且具有較好的磷光發(fā)射。

磷光重金屬銥配合物具有良好地光物理性質(zhì)，例如較長(zhǎng)的發(fā)射壽命、良好地光化學(xué)穩(wěn)定性、室溫下高的三線態(tài)光量子效率、易調(diào)節(jié)的發(fā)射波長(zhǎng)、大的斯托克斯位移和可見光區(qū)激發(fā)等優(yōu)點(diǎn)，當(dāng)前，已經(jīng)應(yīng)用于電致發(fā)光和發(fā)光電化學(xué)池器件、生物傳感等領(lǐng)域。相對(duì)于小分子有機(jī)熒光染料分子，磷光重金屬配合物長(zhǎng)的發(fā)射壽命可使用時(shí)間分辨技術(shù)與背景熒光信號(hào)相區(qū)分以提高檢測(cè)的靈敏度和信噪比。本發(fā)明所述的銥配合物探針具有很好的應(yīng)用前景，尤其是在生物細(xì)胞檢測(cè)和成像領(lǐng)域。

所述的包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料，其特征在于該探針可應(yīng)用于次氯酸根檢測(cè)且具有優(yōu)異的水溶性。

將上述包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料溶解在CH₃OH/H₂O(v/v,2:1)混合溶液中，逐次滴加到ClO^-的CH₃OH/H₂O混合溶液中，每次滴加ClO^-后均加熱攪拌以使ClO^-與上述納米材料充分反應(yīng)，并測(cè)試其熒光發(fā)射光譜。通過分析熒光發(fā)射光譜可以看到，在光波波長(zhǎng)為600nm附近，上述納米材料的溶液本身發(fā)光很弱，隨著ClO^-的加入，納米材料的溶液的熒光光譜立刻發(fā)生了變化，伴隨著ClO^-滴加濃度的升高，納米材料溶液的熒光光譜發(fā)生藍(lán)移且熒光強(qiáng)度逐漸升高。當(dāng)ClO^-的滴加濃度當(dāng)量達(dá)到30eq.時(shí)，滴定達(dá)到終點(diǎn)，再繼續(xù)滴加ClO^-，光譜則不再發(fā)生變化。

可見本發(fā)明所述的納米材料對(duì)次氯酸根的響應(yīng)性非常明顯，具有很好的靈敏度和很低的 檢測(cè)最低限。這是因?yàn)樯鲜黾{米材料包覆的銥配合物探針本身只有很低的熒光效果，但是，在次氯酸根的強(qiáng)氧化作用下，上述銥配合物探針上的含肟基團(tuán)(-C＝N-OH)被氧化為羧基(-COOH)，生成一種新的銥配合物，該銥配合物具有很強(qiáng)的熒光效應(yīng)。于是，即使只有很少的次氯酸根，在熒光效應(yīng)的對(duì)比下，也很容易得到明顯的檢測(cè)結(jié)果。

在上述納米材料溶解在CH₃OH/H₂O(v/v,2:1)混合溶液分別加入過量的NaClO₃、CuCl₂、LiClO₃、AlCl₃、MgCl₂、Na₂CO₃、Na₂SO₄、NaOAc、ZnCl₂、H₂O₂、NaNO₂、NaClO溶液，分別測(cè)其發(fā)射光譜。通過對(duì)比可知，其他離子均對(duì)發(fā)射光譜的強(qiáng)度和發(fā)射波長(zhǎng)均無明顯影響，即所述納米材料對(duì)ClO^-有較好的選擇性。

另外，包覆在離子型銥配合物外面的聚乙二醇-聚乳酸材料是常見的具有優(yōu)異水溶性的聚合物材料，那么，上述包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料具有優(yōu)異的水溶性

綜上可知，本發(fā)明所述的細(xì)胞膜靶向的磷光銥配合物探針可應(yīng)用于次氯酸根檢測(cè)，并具有優(yōu)異的水溶性，這對(duì)深入研究ClO^-在生物體體內(nèi)的生理和毒理作用具有重要意義。

所述的包覆離子型銥配合物探針應(yīng)用于細(xì)胞標(biāo)記和成像。

培養(yǎng)好的兩組Hela細(xì)胞，其中一組用所述納米材料的溶液孵育，并用培養(yǎng)液洗滌3次，作為空白對(duì)照組；另一組用納米材料的溶液孵育，并滴加ClO^-溶液，并用培養(yǎng)基洗滌3次，作為實(shí)驗(yàn)組。使用共聚焦顯微鏡對(duì)兩組細(xì)胞拍照，對(duì)比兩組細(xì)胞的照片可見，對(duì)照組細(xì)胞膜上基本沒有熒光發(fā)射，而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胞膜內(nèi)有較強(qiáng)的磷光發(fā)射。

另外，所述納米離子尺寸為80-110nm左右，易于與細(xì)胞發(fā)生相互作用，進(jìn)而通過胞吞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞成像的目的；所述納米材料中包覆的銥配合物及被次氯酸根氧化后得到的銥配合的熒光效應(yīng)均可使用可見光激發(fā)，可以避免使用紫外激發(fā)光源對(duì)活體生物細(xì)胞的潛在光損傷，這樣有利于探針應(yīng)用于活體細(xì)胞靶向的次氯酸根的光成像測(cè)定、細(xì)胞成像和生物標(biāo)記領(lǐng)域。

所述的包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料，其特征在于，該聚合物納米材料應(yīng)用于時(shí)間分辨壽命成像。

本發(fā)明具有如下有益效果：1、所述納米材料的制備方法簡(jiǎn)單、條件溫和、便于工業(yè)化生產(chǎn)；2、所述納米粒子熒光探針具有發(fā)光特性，具有靈敏度高，光穩(wěn)定性好，熒光光譜不漂移等優(yōu)點(diǎn)，為turn-on型磷光探針，有望應(yīng)用于生物成像、熒光示蹤檢測(cè)等領(lǐng)域；3、所述納米探針材料對(duì)ClO^-具有高的選擇性，并且響應(yīng)快；4、所述納米材料具有良好的水溶性和生物相容性、低生物毒性，且容易進(jìn)入細(xì)胞中，使得這類探針可用于細(xì)胞內(nèi)ClO^-檢測(cè)。

附圖說明

圖1.本發(fā)明中實(shí)施例3的包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料的紫外-可見吸收譜圖。

圖2.本發(fā)明中實(shí)施例3的包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料的熒光發(fā)射滴定譜圖。

圖3.本發(fā)明中實(shí)施例2合成的配合物Ir-2的MALDI-TOF譜圖。

圖4.本發(fā)明中實(shí)施例3的包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料的細(xì)胞成像圖。

圖5.本發(fā)明實(shí)施例3的包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料的透射電子顯微鏡圖。

具體實(shí)施方式

為了更好地理解本發(fā)明專利的內(nèi)容，下面通過具體的實(shí)例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。但這些實(shí)施實(shí)例并不限制本發(fā)明。

實(shí)施例1：離子型銥配合物Ir-1的制備：

本實(shí)施例中的N^N輔助配體為C＝N-OH-bpy，C^N環(huán)金屬配體為帶有12個(gè)碳的長(zhǎng)鏈烷基的C-12，兩者的結(jié)構(gòu)式分別為：

本實(shí)施例的合成反應(yīng)式為：

(1)銥二氯橋的制備：稱取C-12(2.2mmol)與IrCl₃·3H₂O(1mmol)混合投入三頸瓶中，在雙排管上抽真空-保氮?dú)?抽真空，循環(huán)往復(fù)三次，最后采用氮?dú)獗Ｗo(hù)整個(gè)反應(yīng)體系。將體積比為3:1的乙二醇乙醚和水的混合物注射進(jìn)反應(yīng)體系中，升溫至110℃，磁力攪拌反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將體系冷卻至室溫，過濾沉淀，并用乙醇和水洗，得到的固體產(chǎn)物即為銥二氯橋，可直接投入下一步反應(yīng)。

(2)銥配合物中間體的制備：稱取銥二氯橋(1mmol)、稱取C＝N-OH-bpy(2.4mmol)加入至三頸瓶中，在雙排管上抽真空-保氮?dú)?抽真空，循環(huán)往復(fù)三次，最后采用氮?dú)獗Ｗo(hù)整個(gè)反應(yīng)體系。將體積比為2:1的二氯甲烷和甲醇的混合物注入體系中，將溫度升至50℃，攪拌回流。

(3)銥配合物探針的制備：反應(yīng)5小時(shí)后，加入0.75mmol的六氟磷酸鉀固體，繼續(xù)攪拌反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后濃縮提純，最后用二氯甲烷和正己烷重結(jié)晶，得到固體產(chǎn)物即為銥配合物Ir-1。產(chǎn)率:69％。¹H NMR(400MHz DMSO):δ＝7.90(d,J＝5.6Hz,1H),7.73(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(m,2H),7.28(d,t,J＝3.2Hz,7.6Hz,2H),6.33-6.28(m,2H),5.77-5.70(m,2H),4.71-4.58(m,4H),2.08-1.95(m,4H),1.82-1.65(m,4H),1.52-1.43(m,4H),1.29-1.17(m,32H),0.87(t,J＝6.8Hz,6H)；[m/e](M,MALDI-TOF)理論值:1128.56,實(shí)驗(yàn)值:1128.79。

實(shí)施例2：配合物Ir-2的制備：

本實(shí)施例中的N^N輔助配體為C＝N-OH-bpy，C^N環(huán)金屬配體為帶有18個(gè)碳的長(zhǎng)鏈烷基的C-18，C-18的結(jié)構(gòu)式為：

本實(shí)施例的合成反應(yīng)式為：

(1)銥二氯橋的制備：稱取C-18(2.2mmol)與IrCl₃·3H₂O(1mmol)混合投入三頸瓶中，在雙排管上抽真空-保氮?dú)?抽真空，循環(huán)往復(fù)三次，最后采用氮?dú)獗Ｗo(hù)整個(gè)反應(yīng)體系。將體積比為3:1的乙二醇乙醚和水的混合物注射進(jìn)反應(yīng)體系中，升溫至110℃，磁力攪拌反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將體系冷卻至室溫，過濾沉淀，并用乙醇和水洗，得到的固體產(chǎn)物即為銥二氯橋，可直接投入下一步反應(yīng)。

(2)銥配合物中間體的制備：稱取銥二氯橋(1mmol)、稱取C＝N-OH-bpy(2.4mmol)加入至三頸瓶中，在雙排管上抽真空-保氮?dú)?抽真空，循環(huán)往復(fù)三次，最后采用氮?dú)獗Ｗo(hù)整個(gè)反應(yīng)體系。將體積比為2:1的二氯甲烷和甲醇的混合物注入體系中，將溫度升至50℃，攪拌回流。

(3)銥配合物探針的制備：反應(yīng)5小時(shí)后，加入0.75mmol的六氟磷酸鉀固體，繼續(xù)攪拌反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后濃縮提純，最后用二氯甲烷和正己烷重結(jié)晶，得到固體產(chǎn)物即為銥配合物Ir-2。產(chǎn)率:75％。1H NMR(400MHz DMSO):8.23-8.19(m,2H),7.96-7.90(m,4H),7.72-7.68(m,2H),7.41-7.39(m,1H),7.20-7.13(m,4H),6.40(d,J＝6.0Hz,2H),3.95-3.88(m,4H),1.40-1.20(m,2H),0.89(t,J＝7.2Hz,6H).[m/e](M,MALDI-TOF)理論值:1296.89,實(shí)驗(yàn)值:1296.752。

實(shí)施例3：

本實(shí)施例提供一種包覆離子型銥配合物的聚合物納米材料，包括兩親性聚合物聚乙二醇-聚乳酸和包覆于兩親性聚合物聚乙二醇-聚乳酸納米粒子核內(nèi)的離子型銥配合物。銥配合物的結(jié)構(gòu)通式如下：

其中，C^N配體的結(jié)構(gòu)如下：

其中，R為H，CH₃(CH₂)₄CH₃，CH₃(CH₂)₁₀CH₃，CH₃(CH₂)₁₆CH₃。

以其中一個(gè)銥配合物實(shí)施例1制備的Ir-1為例，其中環(huán)金屬配體為C-12，輔助配體是C＝N-OH-bpy，結(jié)構(gòu)式如下列分子式所示：

所述的聚乙二醇-聚乳酸的分子量為26778，包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸的納米粒子的粒徑為80-110nm。具體制備路線如下：

A)聚乙二醇-聚乳酸通過開環(huán)反應(yīng)合成，具體合成路線如下：

稱量0.1g已干燥過的mPEG₄₀₀₀和0.6g重結(jié)晶兩次的DL-丙交酯置于反應(yīng)管中，事先配置一定濃度(12.4mg/mL)的催化劑的甲苯溶液，取甲苯溶液725μL(催化劑辛酸亞錫為9mg)，然后加入2mL甲苯將附在反應(yīng)管上的物沖下去，并剛剛將反應(yīng)物沒過。70℃下減壓抽真空1h將甲苯和水蒸氣抽干，然后140-160℃本體聚合2-5h。反應(yīng)結(jié)束后，用二氯甲烷將產(chǎn)物溶解，再將溶液濃縮至0.5mL，用體積比為1:1乙醚和石油醚沉降，過濾。再用丙酮溶解，濃縮至0.5mL，在過量的水中沉降，過濾，產(chǎn)物真空干燥48h。得到的最終產(chǎn)物為400mg。

B)包覆離子型銥配合物的聚乙二醇‐聚乳酸納米材料通過納米沉淀法制備。取聚乙二醇-聚乳酸10mg，銥配合物1mg溶于1mL四氫呋喃溶液中，再將上述混合溶液緩慢地滴加到去離子水中形成聚合物納米粒子，攪拌30min，再將上述混合液轉(zhuǎn)移至截留分子量為14000的透析袋避光透析3天，除去有機(jī)溶劑四氫呋喃和甲醇。最后用0.22μm的針頭過濾器過濾掉沒有包覆進(jìn)聚合物納米粒子中的銥配合物的聚集體。

為了更好地理解本實(shí)施例提供的包覆離子型銥配合物的聚合物納米材料的性能，通過以下測(cè)試進(jìn)行表征：

包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸聚合物納米粒子的的形貌測(cè)試：

圖5為本發(fā)明提供的包覆離子型銥配合物的聚乙二醇‐聚乳酸納米材料的透射電子顯微鏡圖。具體測(cè)試步驟是：

取20μL濃度為1mg/mL的樣品溶液滴在銅網(wǎng)上，待干燥后進(jìn)行形貌測(cè)試。包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸聚合物納米粒子的粒徑為80-110nm，從圖1的透射電子顯微鏡照片顯示結(jié)果可以看出本發(fā)明所提供的納米粒子的粒徑均一，分散性良好。

實(shí)施例4：紫外-可見吸收譜圖

包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料(納米材料中包覆的銥配合物濃度折算為10^-5M)溶解在CH₃OH/H₂O(v/v,2:1)混合溶液中測(cè)的吸收譜圖，結(jié)果如圖1所示，由圖1可知，它的最大吸收波長(zhǎng)在225nm左右。

實(shí)施例5：發(fā)射光譜對(duì)ClO^-的響應(yīng)性：

包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料(納米材料中包覆的銥配合物濃度折算 為10^-5M)溶解在CH₃OH/H₂O(v/v,2:1)混合溶液中，逐次加入ClO^-的CH₃OH/H₂O混合溶液中，每次滴加ClO^-后，在37℃恒溫水浴中加熱攪拌5分鐘，使ClO^-與聚合物納米粒子充分反應(yīng)，隨后測(cè)試其熒光發(fā)射光譜，如圖2所示。在601nm處，聚合物納米粒子在溶液中本身發(fā)光很弱，隨著ClO^-的加入，聚合物納米粒子溶液的熒光光譜立刻發(fā)生了變化，伴隨著ClO^-滴加濃度的升高，聚合物納米粒子的熒光光譜藍(lán)移并在595nm處的熒光強(qiáng)度逐漸升高。當(dāng)ClO^-的滴加濃度當(dāng)量達(dá)到30eq.時(shí)，滴定達(dá)到終點(diǎn)，再繼續(xù)滴加ClO^-，光譜則不再發(fā)生變化。

實(shí)施例6：納米粒子對(duì)ClO^-的選擇性實(shí)驗(yàn)：

包覆離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米材料(納米材料中包覆的銥配合物濃度折算為10^-5M)溶解在CH₃OH/H₂O(v/v,2:1)混合溶液中，移取2.5mL所配化合物溶液于比色皿中，加入過量的NaClO₃、CuCl₂、LiClO₃、AlCl₃、MgCl₂、Na₂CO₃、Na₂SO₄、NaOAc、ZnCl₂、H₂O₂、NaNO₂、NaClO溶液，分別測(cè)其發(fā)射光譜。其他離子均無明顯影響。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：材料對(duì)ClO^-有較好的選擇性。

實(shí)施例7：活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)：

Hela細(xì)胞按照American Type Tissue Culture Collection規(guī)定進(jìn)行培養(yǎng)。將實(shí)驗(yàn)所得的離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米粒子水溶液進(jìn)行濃縮，Hela細(xì)胞用1.5μM該納米粒子在37℃下孵育30分鐘，用培養(yǎng)液洗滌3次，作為空白對(duì)照組的共聚焦顯微鏡照片結(jié)果如圖4所示，活細(xì)胞內(nèi)基本沒有熒光發(fā)射；實(shí)驗(yàn)組在Hela細(xì)胞用1.5μM該納米粒子在37℃條件下孵育30分鐘后，再用1.5ClO^-焦顯微鏡下拍照，之后用培養(yǎng)基洗滌3次，置于共聚焦顯微鏡下拍照，照片顯示活細(xì)胞胞內(nèi)有較強(qiáng)的磷光發(fā)射，結(jié)果如圖4所示。此實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，離子型銥配合物的聚乙二醇-聚乳酸納米粒子可用于檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)的ClO^-且水溶性較好。