材料
[0067]單花山竹子于2013年9月采自海南省，植物經(jīng)華南農(nóng)業(yè)大學張榮京博士鑒定鑒定。 植物樣本保存于上海中醫(yī)藥大學創(chuàng)新中藥實驗室。
[0068] 1.2試驗方法
[0069] 在室溫下，取單花山竹子葉粉末（2.4公斤），用石油醚滲漉提取至滲漉液基本無 色，減壓蒸發(fā)滲漉液，得到暗綠色提取物(A)30克;藥渣繼續(xù)用90%乙醇滲漉提取至滲漉液 基本無色，減壓蒸發(fā)滲漉液，得到暗綠色提取物(B) 460克。
[0070] 將提取物A用乙醇-水混合溶液溶解后加在MCI柱上，用30%乙醇水溶液、60%乙醇 水溶液、90 %乙醇水溶液、95 %乙醇水溶液依次洗脫，洗脫過程中按每瓶500毫升收集，每瓶 洗脫液減壓蒸發(fā)后經(jīng)TLC薄層分析，按分析結果將TLC薄層板上顯示的主要的點相同的洗脫 物合并，得到5個組分，其中首先被洗脫的第一個組分為組分I(Al)，依次排列得到組分1至 組分 5(A1-A5)。
[0071] 組分2(A2) (4.0克)通過ODS的中壓制備色譜，以甲醇/水梯度系統(tǒng)(30:70至100:0， 體積/體積)依次洗脫，洗脫液按每瓶100毫升收集，每瓶洗脫液減壓蒸發(fā)后經(jīng)薄層分析，將 TLC薄層板上顯示的主要的點相同的洗脫物合并，得到13個組分，按洗脫順序首先被洗脫的 組分為組分I (A2.1)，依次排列得到組分1至組分13(A2.1-A2.13)。其中組分11 (A2.11) (0.7 克）用甲醇凝膠柱純化獲得Oliganthin I(200毫克）。
[0072] 提取物A在MCI柱上分離得到的組分3(A3)(3.8克)通過ODS中壓制備色譜，以甲醇/ 水梯度系統(tǒng)(30:70至100:0,體積/體積)依次洗脫，分離過程中按每瓶100毫升收集，每瓶洗 脫液減壓蒸發(fā)后經(jīng)薄層分析，將TLC薄層板上顯示的主要的點相同的洗脫物合并，得到10個 組分，按洗脫順序首先被洗脫的組分為組分KA3.1)，依次排列得到組分1至組分10以3.1-A3.10)。其中組分5 (A3.5) (40毫克）用甲醇凝膠柱純化獲得01 iganthone B(2.6毫克）。 [0073]將提取物B以水溶解，用乙酸乙酯萃取，減壓蒸發(fā)萃取液，得到暗綠色萃取物286 克。該萃取物用氯仿-甲醇混合溶液溶解并與適量硅膠拌勻，除去溶劑后加在20倍量的硅膠 柱上，用二氯甲烷-甲醇（1:0至1:1，體積/體積)依次梯度洗脫，洗脫過程中按每瓶500毫升 收集，每瓶洗脫液減壓蒸發(fā)后，經(jīng)TLC薄層分析，將TLC薄層板上顯示的主要的點相同的洗脫 物合并，得到五個組分，按洗脫順序首先被洗脫的組分為組分I (BI )，依次排列得到組分1至 組分5 (B1-B5)。其中組分I (B1)(24克）通過MCI柱，依次用30 %乙醇水溶液、60 %乙醇水溶 液、90 %乙醇水溶液、95 %乙醇水溶液洗脫，洗脫過程中按每瓶250毫升收集，每瓶洗脫液減 壓蒸發(fā)后經(jīng)TLC薄層分析，將TLC薄層板上顯示的主要的點相同的洗脫物合并，得到十一個 組分，按洗脫順序首先被洗脫的組分為組分l(Bl.l)，依次排列得到組分1至組分1UB1.1-81.11)。其中組分1〇01.1〇)(4.8克)通過凝膠柱，以氯仿-甲醇（1 :1，體積/體積)洗脫，洗脫 過程按每瓶20毫升收集，每瓶洗脫液減壓蒸發(fā)后經(jīng)TLC薄層分析，將TLC薄層板上顯示的主 要的點相同的洗脫物合并，得到四個組分，按洗脫順序首先被洗脫的組分為組分1 (BI. 10.1)，依次排列得到組分1至組分4(B1.10.1-Bl. 10.4)，其中組分2(B1.10.2) (4克)通 過ODS中壓制備色譜，以甲醇/水梯度系統(tǒng)(30:70至100:0,體積/體積)依次洗脫，洗脫過程 中按每瓶100毫升收集，每瓶洗脫液減壓蒸發(fā)后經(jīng)TLC薄層分析，將TLC薄層板上顯示的主要 的點相同的洗脫物合并，得到十個組分，按洗脫順序首先被洗脫的組分為組分1 (BI . 10.2. 1)，依次排列得到組分1至組分10(BI . 10.2. I-Bl . 10.2. 10)，其中組分6 (BI. 10.2.6) (540毫克）用甲醇凝膠柱純化得到Oliganthin H(500mg)。
[0074]本實驗中，MCI柱選用CHP20P MCI gel(75-150ym,Mitsubishi Chemical Coparation, Japan);硅膠柱層析選用青島海洋化工有限公司柱層析硅膠(200-300目）；TLC 薄層分析選用煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司HSGF254薄層層析硅膠板;ODS中壓制備色譜柱選 用reversed-phase C18silica gel(50um，YMC，Kyoto，Japan);凝膠柱選用Sephadex LH-20 (GE Healthcare Bio-Sciences AB，Sweden)為填料D
[0075] Oliganthin I是一個黃色、無定形粉末，通過高分辨質(zhì)譜確定分子式為C28H3〇〇7,為 一未見報道的新化合物。其NMR數(shù)據(jù)如下：

[0078] Oliganthin H是一個黃色、無定形粉末，通過高分辨質(zhì)譜確定分子式為C33H38O7,為 一未見報道的新化合物。通過單晶X射線衍射確定Oliganthin H的絕對構型為8R構型。其 NMR數(shù)據(jù)如下：

[0082] Oliganthone B是一個黃色、無定形粉末，通過高分辨質(zhì)譜確定分子式為C28H30O7， 為一未見報道的新化合物，通過圓二色譜的計算，確定其絕對構型為5R，7R，IOaS，22R。其 NMR教掘加下；

[0086] h 3實驗結果
[0087] 從單花山竹子中分離得到化合物Oliganthin I、01iganthin H、01iganthone B， 經(jīng)核磁及質(zhì)譜檢測，化學結構分別如α-1 )、α-2)、（ Π )所示：

[0090] 實施例2 Oliganthin I、01iganthin H、01iganthone B抑制人腫瘤細胞增殖
[0091] 2.1實驗材料
[0092]人前列腺癌細胞PC-3，人肝癌細胞HepG2，購自美國ATCC公司，人非小細胞肺癌細 胞A549，人肝正常細胞H17702，香港中文大學林革教授贈予，人結腸癌細胞HT-29，清華大學 許乃寒教授贈予。
[0093] RPMI1640購自美國hyclone公司，DMEM購自美國Gibco公司，胎牛血清購自德國PAN 公司，青霉素和鏈霉素購自杭州吉諾公司，Taxol購自德國sigma公司。
[0094] 2.2實驗方法
[0095]人非小細胞肺癌細胞A549、人肝癌細胞HepG2,用含10%胎牛血清、lOOU/ml青霉素 和100μg/ml鏈霉素的DMEM培液基，人前列腺癌細胞PC-3、人結腸癌細胞HT-29和人肝正常細 胞H17702用含10%胎牛血清，lOOU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的RPMI1640培液基，于37 °C，5 %CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，用0.25 %胰蛋白酶消化傳代，取對數(shù)生長期細胞用 于實驗。
[0096]人前列腺癌細胞PC-3、人非小細胞肺癌細胞A549、人肝癌細胞HepG2、人結腸癌細 胞HT-29和人肝正常細胞H17702(4000個細胞/孔)接種于96孔板中。分別加入濃度梯度為 1 · 25μΜ、2 · 5μΜ、5μΜ、10μΜ的01 iganthin I、01 iganthinH、01 iganthone B于96孔板中， Paclitaxel作為陽性藥對照組，培養(yǎng)7