4H),7.20-7.35(m,lH),11.93(s,lH)〇MS m/z(T0F ES"):445(M+Na)〇
[0534] 化合物67
[0535] 3-( (13S ,1510-17-? 基 13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氨-6H-環(huán)戊二 締并[a]菲-15-基)-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0536]
[0537]如對于化合物1所述通過在還原中使用NaBH4由化合物66制備化合物67。
[053引 1h-NMR(CDCl3+MeOD-d4): 0.90(S，3H)，1.2-2.6(m，21H)，3.69(t，1H)，7.02(S，1H): 7.05-7.2(m,3H),7.30(m,lH)0MS m/z(T0F ES"):447(M+Na)0
[0539] 化合物68
[0540] 3-{(135，151〇-17-甲酯基氨基-3-徑基-13-甲基-7,8,9，11，12，13，14，15，16，17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基}-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0541]
[0542] 將化合物VII(20mg)溶于甲酯胺(0.7ml)，用微波在160°C加熱20分鐘。產(chǎn)物混合物 通過色譜進(jìn)行純化，得到化合物68作為主產(chǎn)物。
[0543] iH-NMR(CDC13+Me0H-d4):0.87(S，3H)，1.20-2.50(m，21H)，2.7-2.9(m,2H)，2.39 (s，3H)，4.0(t，lH)，6.57(s，2H)，6.62(d，lH)，7.03(d，lH)，7.10(d，lH)，7.41(s，lH)，8.14 (s,lH),9.49(s,lH),11.94(br s,lH)〇MS m/z(T0F ES"):490(M+Na)〇
[0544] 化合物Vn的硝化
[0545] 在氮?dú)夥諊孪蚍磻?yīng)容器裝入化合物￥11(1.32旨，3111111〇1)和乙醇(451111)。添加1'冊 (30ml)和硝酸鐵(600mg，1.5mmol)。在60°C攬拌反應(yīng)混合物4h之后，蒸發(fā)掉溶劑。粗反應(yīng)混 合物的HPLC顯示45 %的2-硝基-異構(gòu)體69a和35 %的4-硝基異構(gòu)體69b。通過快速色譜純化 得到358mg的69a和284mg的69b。另外，產(chǎn)物混合物含有約5 %的2,4-二硝基衍生物69c。
[0546] 化合物69a
[0547] 3-( (13S, 1510-3-? 基-13-甲基-2-硝基-17-氧-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基)-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[054引
[0549] iH-NMR(CDCl3):1.07(s，3H)，1.30-2.75(m，19H)，2.9-3.05(m，2H)，6.89(s，lH) 7.05(s,lH),7.98(s,lH)〇MS m/z(T0F ES"):506(M+Na)
[0巧0] 化合物69b
[Ο巧 1] 3-( (13S, 1510-3-? 基-13-甲基-4-硝基-17-氧-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基)-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0552]
[0 巧 3] iH-NMR(CDCl3):1.08(s，3H)，1.3-3.4(m，21H)，6.96(d，lH)，7.05(s，lH)，7.45(d， lH)〇MS m/z(TOF ES"):506(M+Na)
[Ο巧4] 化合物69c
[Ο 巧 5] 3-( (13S ,1510-3-? 基-13-甲基-2,4-二硝基-17-氧-7,8,9,11,12,13,14,15,16, 17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基)-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0556]
[0巧7] iH-NMR(CDCl3):1.08(s，3H)，1.35-3.10(m，21H)，7.03(s，lH)，8.14(s，lH)〇MS m/z (TOF ES"):529(M+H)
[Ο巧引化合物70
[0 巧 9] 3-((135，151〇-4-氨基-3-徑基-13-甲基-17-氧-7,8,9，11，12，13，14，15，16，17-十氨-6Η-環(huán)戊二締并[a ]菲-15-基)-Ν-( 5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0560]
[0561] 化合物69b的氨化在大氣壓力下在室溫在乙醇/THF 1:1中使用10%Pd/C作為催化 劑進(jìn)行。將催化劑濾出，蒸發(fā)掉溶劑，將產(chǎn)物70用快速色譜純化。
[0562] 1h-NMR(CDCl3+MeOH-d4): 1.03(S，3H)，1.35-2.65(m，19H)，2.75-3.00(m，2H)，6.63 (s,2H),7.03(s,lH)〇MS m/z(TOF ES"):476(M+Na)〇
[0563] 化合物71
[0564] 3-((135，15尺，175)-3，17-二徑基-4-異丙基氨基-13-甲基-7,8,9，11，12，13，14, 15,16,17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基)-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[化化]
[0566] 將化合物70(50mg，0. llmmol，lOOmol-% )和丙酬（80μ1，1. Immol，lOOOmol-% )溶 于含有分子篩4A (500mg)的干燥THF(2ml)。在添加乙酸(4化1,~600mo^% )并攬拌30分鐘 之后，添加 NaBH4( 17mg，~400mo^% )。將反應(yīng)混合物在室溫攬拌3.5小時。添加水(5ml)，用 NaO田容液將抑調(diào)節(jié)到抑8-9。將產(chǎn)物用化OAc萃取，用水和鹽水洗涂。使用DCM中的2%Me0H， 將粗產(chǎn)物進(jìn)行色譜提純，得到產(chǎn)物71 (19mg，產(chǎn)率35% )。
[0567] iH-NMR(CDCl3): 0.89(S，3H)，1.10&1.16(2x d，6H)，1.27-1.75(m，8H)，1.87-2.30 (m,14H),2.76(m,2H),3.25(m,lH),3.72(t,lH),6.74(d,lH),7.0(d,lH),7.06(s,lH)〇 [0 56引化合物72
[0569] 3-[(135，153，175)-3，17-二徑基-4-(2-徑基-1-甲基-乙基氨基）-13-甲基-7,8, 9,11，12,13,14,15,16,17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基]-N-(5-甲基嚷挫-2-基）丙酷 胺
[0570]
[0571] 除了使用徑基丙酬作為酬W外，使用對于化合物71使用的相同方法，由胺70制備 化合物。反應(yīng)在2小時內(nèi)完成。
[0572] iH-NMR(CDCl3):1.04(s，3H)，1.14(d，3H)，1.30-1.92(m，8H)，2.10-2.90(m，15H)， 3.24(m，lH)，3.49(s，2H)，3.65-3.78(m，lH)，6.75(d，lH)，6.95(d，lH)，7.05(s，lH)。
[0573] 化合物7 3
[0574] 3-[ (13S，1510-3-? 基-17-異丙基氨基-13-甲基-7，8,9,11，12,13,14,15,16,17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基]-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0575]
[0576]將化合物VII(lOOmg，0.23mmo 1，lOOmo 1-% )溶于DCM(2ml)和THF(2ml)。向反應(yīng)混 合物添加異丙基胺（190μ1，2.28mmol，lOeq.)、ai(90mg，1.36mmol，600mo^% )和乙酸（80μ 1，1.36mmol，600mol-% )。在室溫攬拌2小時后，添加化BH4(35mg，0.9mmol，400mol-% )。繼 續(xù)在+40°C攬拌4小時，然后室溫過夜。將反應(yīng)混合物倒入冰水（10ml)和化OAc，攬拌30分鐘。 將析出物濾出，用化OAc小屯、洗涂。將濾液用水洗涂，在用1N HC1溶液酸化后用化OAc洗涂。 將水相中和，將產(chǎn)物73在化OAc中萃取，用水和鹽水洗涂。
[0577] 1h-MlR(CDCl3+Me0H-d4):0.86(s，3H)，l.ll(dd，6H)，1.20-1.65(m，llH)，1.85- 2.85(m，14H)，3.03(t，IH)，6.56-6.80(m，2H)，7.04-7.10(m，2H)。
[057引化合物74
[0579] 3-( (13S，1510-3-? 基-17-異下基氨基-13-甲基-7，8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基)-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[化 80]
[0581] 通過與化合物73相同的方法使用異下基胺(eOOmol-%)作為試劑進(jìn)行合成。將反 應(yīng)在室溫攬拌1小時，然后在40°C攬拌5小時。粗產(chǎn)物用快速色譜純化。
[0582] iH-NMR(CDCl3) :0.85(s，3H)，0.90(dd,細(xì)），1.10-1.60(m，7H)，1.71-2.75(m，18H)， 6.53-6.61(m，2H)，7.05(br s，2H)。
[0583] 化合物7 5a
[化 84] 3-((135，151〇-2-(叔下基）-3-徑基-13-甲基-17-氧-7,8,9，11，12，13，14，15，16, 17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基)-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[化 85]
[0586] 向攬拌的化合物VII(2.Og，lOOmo^% )在干燥DCM中的懸浮液，在室溫用注射器添 加叔下醇（1.5ml)和Ξ氣化棚乙酸合物(3.2ml)，然后對反應(yīng)進(jìn)行化C。將混合物在室溫攬拌 過夜，添加補(bǔ)充量的Ξ氣化棚乙酸合物（1ml)和叔下醇（500μ1)。將所得澄色溶液攬拌3小 時，然后小屯、添加水(40ml)和DCM(40ml)。分離層，將水層用DCM(3X30ml)萃取。合并的有機(jī) 層用水(3 X 30ml )、飽和化肥化水溶液(30ml)和鹽水(3 X 30ml)洗涂。蒸發(fā)掉溶劑，將析出物 用庚燒洗涂，得到1.8g的產(chǎn)物75a(產(chǎn)率80% )。
[0587] iH-NMR(DMS0-d6):0.97(s，3H)，1.2-1.45(m，12H)，1.5-2.4(m，16H)，2.6-2.95(m， 2H),6.47(s,lH),7.01(s,lH),7.11(s,lH),8.97(s,lH),11.92(s,lH,-NH)〇MS m/z(T0F ES +):517(M+Na)
[058引化合物75b
[0589] 3-( (13S，15R)-2-叔下基-3-? 基-17-異下基氨基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14: 15,16,17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基]-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0590]
[0591] 使用異下基胺(600mo^% )作為試劑和化合物75a作為原料化合物75b通過對于化 合物73使用的方法制得。將反應(yīng)在40°C攬拌4小時，在室溫攬拌過夜。
[0592] iH-NMR(CDCl3) :1.06&1.09(2Xs,細(xì)），1.37(s,9H), 1.54-1.77(m，3H), 1.80-3.05 (m，2甜），6.49(s，lH)，7.00(s，lH)，7.12(s，lH)。
[0593] 化合物76
[0594] 3-((13S，15R)-17-[(巧喃-2-基甲基）-氨基]-3-? 基-13-甲基-7,8,9，11，12，13, 14,15,16,17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基]-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0595]
[0596] 使用巧喃基胺(eOOmol-%)作為試劑通過對于化合物73使用的相同方法制備化合 物76。將反應(yīng)在室溫攬拌1小時，然后在40°C攬拌5小時。粗產(chǎn)物用快速色譜純化。
[0597] 1h-NMR( CDCl3+Me0H-d4):1.04(S，3H)，1.35-1.79(S，8H)，2.00-2.89(m，17H)，4.06 (d,2H),6.42(s,lH),6.53-6.63(m,3H),7.05(s,lH),7.47(s,lH)〇
[059引化合物77
[0599] 3-( (13S，1510-3-? 基-17-(2-甲氧基乙基氨基）-13-甲基-7,8，9,11，12,13,14, 15,16,17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基]-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0600]
[OW]在氮?dú)夥諊聦⒃希?1(100111旨，0.23111111〇1，100111〇1-%)溶于1'冊（21111)和0〔1 (2ml)。添加 2-甲氧基乙基胺（120μ1 ,1 . 36mmo 1,600mol-% )、Zn(90mg，1.36mmol, eOOmol-% )和乙酸（80μ1，1.36mmol，eOOmol-% )。將反應(yīng)在室溫攬拌30分鐘，添加化抓4 (34.5mg，0.91mmol，400mo^% )。將反應(yīng)在室溫攬拌1小時，在40°C攬拌3小時。使反應(yīng)冷卻， 然后倒入冰水（10ml)。反應(yīng)經(jīng)娃藻±過濾，用化0Ac(3X5ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(3X 10ml)和鹽水(3 X 10ml)洗涂，用化2S化干燥。將粗產(chǎn)物（115mg)與庚燒一起研磨，用快速色譜 純化，得到46mg的C-17胺衍生物77。
[0602] iH-NMR(CDCl3):0.86(s，3H)，1.25-1.65(m，7H)，1.75-2.86(m，17H)，3.34(s，4H)， 3.51(m，2H)，6.54(S，1H)，6.59(d，1H)，7.04-7.08(m，2H)。
[0603] 化合物78
[0604] 3-((13S，15R)-3-徑基-17-(2-徑基乙基氨基）-13-甲基-7,8,9，11，12，13，14，15, 16,17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基]-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0605]
[0606] 使用乙醇胺（1 OOOmo 1-% )作為試劑通過對于化合物77使用的相同方法制備化合 物78。將反應(yīng)在室溫攬拌1小時，在+40°C攬拌3小時。
[0607] iH-NMR(CDCl3+Me0H-d4):0.91 (S，3H)，1.23-1.61 (m,8H)，1.95-2.89(m, 17H)，3.70 (m，2H)，6.57-6.64(m，2H)，7.03(d，lH)，7.09(d，lH)。
[060引化合物79
[0609] 3-((13S，15R)-2-叔下基-3-徑基-17-(2-甲氧基乙基氨基)-13-甲基-7,8,9，11， 12,13,14,15,16,17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基)-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0610]
[0611] 除了從開始起反應(yīng)溫度已為+40°C和原料為化合物75aW外，通過對于化合物77使 用的相同方法制備化合物79。將反應(yīng)在40°C攬拌4.5小時，在室溫攬拌過夜。
[0612] 1h-NMR(CDC13):0.88(S，3H)，1.23-1.62(m，17H)，1.94-2.86(m，20H)，3.50(S，2H)， 6.40(s，lH)，7.03(d，lH)，7.15(s，lH)。
[0613] 化合物80a
[0614] 3-[ (13S, 15R)-17-(3-二甲基氨基-丙基氨基）-3-?基-13-甲基-7,8,9,11,12, 13,14,15,16,17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基]-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0615] 化合物80b
[0616] 3-[ (13S, 15R)-17-(3-二甲基氨基-丙基氨基）-3-?基-13-甲基-7,8,9,11,12, 13，14,15，16，17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基]-N-巧-甲基嚷挫-2-基）丙酷胺二鹽酸 ±h
[0617]
[061引使用3-二甲基氨基-1-丙基胺作為試劑在+40°C通過對于化合物77使用的相同方 法制備化合物80a。將反應(yīng)在+40°C攬拌5.5小時，在室溫攬拌過夜。將粗產(chǎn)物用快速色譜純 化。將化合物80a用化OAc中的稀肥1處理，產(chǎn)生鹽80b。
[0619] 80a:iH-NMR(CDCl3):0.83(s，3H)，1.25-2.20(m，20H)，2.41(s，3H)，2.56(s，W), 2.60-2.84(m，細(xì)），6.54(s，IH)，6.60(d，IH)7.05-7.08(m，2H)。
[0620] 80b:iH-NMR(CDCl3+Me0H-d4):0.88(s，3H)，1.19-2.18(m，20H)，2.25(s，3H)，2.38 (s,6H),2.58-2.77(m,6H),6.54(s,lH),6.58(d,lH)7.02-7.05(m,2H)〇
[0621] 化合物81
[0622] 3-[(135，1510-17-(2-二甲基氨基-乙基氨基）-3-徑基-13-甲基-7,8,9，11，12, 13,14,15,16,17-十氨-6H-環(huán)戊二締并[a]菲-15-基]-N-(5-甲基嚷挫-2-基)丙酷胺
[0623]
[0624] 使用2-二甲基氨基乙基胺作為試劑通過對于化合物77使用的相同方法制備化合 物81。將反應(yīng)回流2小時，在+60°C攬拌2.5小時，在室溫攬拌過夜。粗產(chǎn)物用快速色譜純化。
[0625] iH-NMR(CDCl3+Me0H-d4):0.82(s，3H)，1.18-1.48(m,7H)，1.91-2.10(m,13H)，2.25 (s,3H),2.39(s,6H),2.58-2.77(m,4H),6.53(s,lH),6.58(d,lH)7.04(s,lH),7.06(m,lH)〇
[0626] 藥理試驗
[0627] 提供W下試驗W說明方式闡述本發(fā)明，不應(yīng)被認(rèn)為限制本發(fā)明的范圍。而且，檢測 中化合物的濃度是示例性的，不應(yīng)被作為限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員可W利用本領(lǐng)域已知的方 法定義藥學(xué)上相關(guān)的濃度。
[062引17β-徑基類固醇脫氨酶1型酶的抑制
[0629] 170-服D1 產(chǎn)生和分離：通過巧ac to Bac Ε邱ression System" (Invitrogen)產(chǎn)生 重組桿狀病毒。使用乂ellfectin試濟(jì)Γ (Invitrogen)將重組桿粒轉(zhuǎn)染到Sd9昆蟲細(xì)胞。60h 后，收集細(xì)胞；如化ranen,T.J. ,Poutanen,M.H. ,Peltoketo,H.E. ,Vihko,P.T.和 Vihko, R.K.(1994)Site-directed mutagenesis of the putative active site ofhuman 17β-hy化oxysteroid dehy化ogenase type l.Biochem.J.304:289-293所述分離微粒體部分。 將小份在酶活性測定前冷凍保存。
[0630] 檢測-重組人17f3-HSDl的抑制:在濃度ΙμΜ或0. ΙμΜ的潛在抑制劑的存在下，將重組 蛋白（lμg/ml)在含有30ηΜ雌酬（包含800000cpm/ml的化-雌酬）和ImM NADPH的20mM KH2P04pH 7.4中在室溫溫育30分鐘。在0150中制備抑制劑原液。將0150的終濃度調(diào)節(jié)為在 所有樣品中為1%。通過加入1〇%Ξ氯乙酸(終濃度)來停止酶反應(yīng)。將樣品在微量滴定板中 W4000;rpm離屯、10分鐘。在配有Waters Senhy Guard柱的Waters SymmetiT C18柱上對上 清液進(jìn)行反相HPLC。在RTW 1ml/min的流速在作為流動溶劑的乙臘：水48 : 52中進(jìn)行 Isocratic HPLC分析。通過化ckard Flow Scintillation Analyzer監(jiān)測洗脫液中的放射 性。在各樣品中測定雌酬和雌二醇的總放射性，并根據(jù)下式計算雌酬到雌二醇的百分比轉(zhuǎn) 化率： 轉(zhuǎn)化％= 100 X {(cpm含有抑制劑的樣品中的雌二醇)/
[(cpm含有抑制劑的樣品中的雌酬）+ (cpm含有抑制劑的樣品中的雌二醇)]} [(cpm沒有抑制劑的樣品中的雌二醇)/
[(cpm沒有抑制劑的樣品中的雌麗）+ (cpm沒有抑制劑的樣品中的雌二醇)]}
[0632] 如下計算百分比抑制率:抑制％ = 100-轉(zhuǎn)化％
[0633] 對示例化合物測定抑制％數(shù)值，將結(jié)果總結(jié)在表2中。
[0634] 17β-徑基類固醇脫氨酶2型酶的抑制
[0635] 170-HSD2產(chǎn)生和分離：與 170-HSD1 類似，通過"Bac to Bac Ε邱ression System" (Invitrogen)產(chǎn)生重組桿狀病毒。使用乂ellfectin試濟(jì)Γ (Invitrogen)將重組桿粒轉(zhuǎn)染到 Sd9昆蟲細(xì)胞。6化后，收集細(xì)胞，通過W下方案將上清液分級：
[0636] -將細(xì)胞溶于401111的4-緩沖液（401111了1?15,9服.0,20%甘油，2041麻0,0.41111 PMSF，150mM NaCl，0.5 %十二烷基-β-麥芽糖巧+蛋白酶抑制劑混合物）
[0637] -將細(xì)胞超聲
[063引-將裂解物在冰上溫育15分鐘
[0639] -將裂解物在5000巧m離屯、15分鐘，+4°C
[0640] -將上清液WlSOOOOg離屯、30分鐘，+4°C [0641 ]-將沉淀溶于8ml的A-緩沖液
[0642] -通過5000巧m離屯、15分鐘除去未重懸物，+4°C
[0643] -將澄清的上清液分成10化1小份，并在酶活性測定前冷凍保存。
[0644] 通過免疫印跡法分析17i3-HSD2的量，測定各提取批次的總蛋白濃度。
[0645] 檢測-重組人17i3-HSD2的抑制:在濃度ΙμΜ或0. ΙμΜ的潛在抑制劑的存在下，將重組 蛋白（4μg/ml)在室溫在含有50ηΜ雌二醇（包含800000cpm/ml的化-雌二醇）和ImM NADH的 20mM KH2P04抑8.5中溫育30分鐘。在DMS0中制備抑制劑原液。將DMS0的終濃度調(diào)節(jié)為在所 有樣品中為1%。通過加入1〇%Ξ氯乙酸(終濃度)來停止酶反應(yīng)。將樣品在微量滴定板中W 4000rpm離屯、10分鐘。在配有Waters Sen1:ry Guard柱的Waters SymmetiT C18柱上對上清 液進(jìn)行反相HPLC。在RT W Iml/min的流速在作為流動溶劑的乙臘:水48:52中進(jìn)行Isocratic HPLC分析。通過化ckard Flow Scintillation Analyzer監(jiān)測洗脫液中的放射性。在各樣品 中測定雌酬和雌二醇的總放射性，并根據(jù)下式計算雌酬到雌二醇的百分比轉(zhuǎn)化率： 轉(zhuǎn)化％ = 100 X {(cpni含有抑制劑的樣品中的雌麵)/
[(cpm含有抑制劑的樣品中的帷二醇)+ (巧m含有抑制劑的樣品中的雌酬)]} [(cpm沒有抑制劑的樣品中的雌麗)/
[(cpm沒有抑制劑的樣品中的雌二醇)+ (cpm沒有抑制劑的樣品中的雌麗)]} [0647] 如下計算百分比抑制率:抑制％ = 100-轉(zhuǎn)化％
[064引對示例化合物測定抑制％數(shù)值，將結(jié)果總結(jié)在表2中。
[0649] 雌激素受體結(jié)合檢測
[0650] 本發(fā)明的化合物與雌激素受體a化Ra)的結(jié)合親和力可W根據(jù)Koffmann等R邸所述 的體外ER結(jié)合檢測進(jìn)行測定。作為另選，雌激素受體結(jié)合檢測可W根據(jù)國際專利申請 W02000/07996進(jìn)行。
[0651 ]雌激素受體反式激活檢測
[0652] 顯示對于雌激素受體的結(jié)合親和力的本發(fā)明的化合物可W進(jìn)一步對其各自的雌 激素或抗雌激素潛力(對邸α或邸0的激動性或括抗性結(jié)合)進(jìn)行測試。雌激素受體括抗活性 的測定可W使用例如美國專利申請US2003/0170292中記載的匪TV-ERE-LU討良告系統(tǒng)根據(jù) 體外檢測系統(tǒng)進(jìn)行。
[0653] 代謝穩(wěn)定性檢測
[0654] 使用人肝微粒體和勻漿溫育對示例化合物測定本發(fā)明的化合物的體外代謝穩(wěn)定 性。與或不與適當(dāng)?shù)妮o因子一起使用的溫育時間點(diǎn)為0分鐘和60分鐘。在兩個時間點(diǎn)收集樣 品，使用LC/PDA/T0F-MS檢測底物。計算化合物的體外代謝穩(wěn)定性(60分鐘后人肝勻漿或微 粒體中的殘余％)，并將結(jié)果總結(jié)在表3中。
[0化日]藥理試驗結(jié)果 [0化6] 表2 [0化7]

[0660]本發(fā)明的應(yīng)用
[0661 ] 本發(fā)明的化合物顯示出對17f3-HSDl酶的選擇性抑制潛力并且對17f3-HSD2酶幾乎 沒有或沒有抑制活性，因此可W用于治療類固醇激素依賴性惡性或良性疾病或病癥，特別 是治療和預(yù)防多種雌激素依賴性疾病和病癥。而且，本發(fā)明的化合物可W用于治療與升高 的雌二醇水平有關(guān)的可W通過17i3-HSDl酶的抑制劑來預(yù)防、治療和/或緩解的疾病和病癥。
[0662] 炎性疾病和癥狀的實例包括但不限于乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮癌、子宮內(nèi) 膜癌、子宮內(nèi)膜增生、子宮內(nèi)膜異位癥、子宮囊腫、子宮肌瘤、子宮腺肌癥、痛經(jīng)、月經(jīng)過多、 子宮不規(guī)則出血、前列腺痛、良性前列腺增生癥，泌尿功能障礙、多囊卵巢綜合征、下泌尿道 綜合征、多發(fā)性硬化、肥胖癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)腸癌、組織創(chuàng)傷、皮膚皺紋和白內(nèi)障。
[0663] 此處使用的"治療或預(yù)防"包括防治或預(yù)防W及降低個體患上所述病癥或癥狀的 風(fēng)險或一旦確認(rèn)所述病癥后的緩解、改善、消除或治愈。
[0664] 本發(fā)明的化合物可W W約0 .化g/kg體重~約300mg/kg體重的劑量范圍內(nèi)的有效 量(優(yōu)選1.化g/kg體重~lOmg/kg體重)施用。本發(fā)明的化合物可單次的每日劑量施用， 或者總的每日劑量可W每日兩次、Ξ次或四次W分開劑量施用。
[0665] "有效量"指的是對治療對象賦予治療效果的化合物的量。治療效果可W是客觀的 (即可通過某些試驗或標(biāo)記物測量)或主觀的（即對象指出效果或感覺到效果）。運(yùn)樣的治療 不一定完全改善疾病的狀況。而且，運(yùn)樣的治療或預(yù)防可W與本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的減輕 癥狀的其他傳統(tǒng)治療聯(lián)合使用。
[0666] 本發(fā)明的化合物最優(yōu)選單獨(dú)使用或組合使用（即與其他活性成分一起同時、分別 或者順序施用）。本發(fā)明的化合物可W通過各種途徑施用，例如，腸胃外、皮下、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié) 內(nèi)、銷內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下注射和通過透皮、直腸、頰、口腔粘膜、鼻、眼途徑，W及經(jīng)由吸 入和經(jīng)由植入。
[0667] 可W將化合物配制為適當(dāng)?shù)慕M合物;適當(dāng)?shù)氖┯眯问桨ɡ缛芤骸⒎稚⒁?、懸?液、粉劑、膠囊劑、片劑、丸劑、緩釋膠囊、控釋藥片和控釋藥丸。除了藥理活性化合物W外， 化合物的藥用組合物可W含有合適的藥學(xué)上可接受的載體，包括有助于將活性化合物加工 為可W藥學(xué)上使用的制劑的賦形劑和助劑。
[0668] 另外，式（I)的化合物可W用作制備其他化合物、特別是可W由式（I)的化合物獲 得(例如通過引入取代基或官能團(tuán)的修飾)的其他藥學(xué)活性成分的合成中間體。
[0669] 本領(lǐng)域技術(shù)人員將明白，隨著技術(shù)進(jìn)步，本發(fā)明構(gòu)思可各種方式實施。本發(fā)明 及其實施方式并不限于上述實例，而是可W在權(quán)利要求的范圍內(nèi)有所變化。
【主權(quán)項】
1. 式(I)的化合物，或者其藥學(xué)上可接受的鹽 其中，(i -a) R2和R4各自獨(dú)立地選自由H、面素、Ci-6-烷基、Cl-廠面烷基、Cl-廠全面烷基、CN、N