番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中培養(yǎng)19h。按5%的接種量取 試管中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中培養(yǎng)19h。然 后，按5%的接種量再取錐形瓶中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至含有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng) 基的另一錐形瓶培養(yǎng)19h。取上一步錐形瓶中的鼠李糖乳桿菌菌液，按照梯度稀釋法稀釋 至10 7,取液體涂布到第二平板固體培養(yǎng)基。接著挑取第二平板固體培養(yǎng)基中的單菌落至 裝有5mL改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中。然后取試管中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至裝 有30mL改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中，培養(yǎng)19h后得到鼠李糖乳桿菌種子液。
[0103] 先將瑞士乳桿菌種子液中的瑞士乳桿菌接種至改良的番前汁肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 2h后，再將鼠李糖乳桿菌種子液中的鼠李糖乳桿菌也接種至改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基中靜 置發(fā)酵22h。其中，瑞士乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的體積比為1:2,接種量為6%，改良的番茄 汁肉湯培養(yǎng)基的初始pH值分別為6. 0、6. 6、6. 8、7. 0、7. 4,發(fā)酵溫度為37 °C，得到發(fā)酵后的 混合乳酸菌。
[0104] 發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液洗滌離心，測(cè)量發(fā)酵液的吸光值。D54。，并同時(shí)涂平板活菌計(jì) 數(shù)。計(jì)算出原發(fā)酵液中菌體密度（活菌數(shù)cfu/mL)。其中，吸光值的測(cè)定方法和活菌數(shù)的計(jì) 算方法同實(shí)施例1。吸光值。_：請(qǐng)參考圖6。在初始pH值為6. 6、6. 7和6. 8時(shí)，得到的活 菌數(shù)量最多，在4. IX 109cfu/mL。當(dāng)初始pH為6時(shí)，得到的活菌數(shù)為3. 2X 109cfu/mL。初 始pH為7時(shí)，得到的活菌數(shù)為5. 6 X 109cfu/mL。因此，在初始pH為6. 6-7. 0發(fā)酵時(shí)，可獲 得較多數(shù)量的乳酸菌活菌數(shù)。
[0105] 對(duì)比例1
[0106] 制備瑞士乳桿菌種子液，制備方法同實(shí)施例1。
[0107] 將瑞士乳桿菌種子液中的瑞士乳桿菌接種至改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基中，靜置 發(fā)酵22h。其中，接種量為6%，改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的初始pH值為6. 8,發(fā)酵溫度為 37°C，得到發(fā)酵后的瑞士乳桿菌。
[0108] 發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液洗滌離心，測(cè)量發(fā)酵液的吸光值。D54。。并同時(shí)涂平板活菌計(jì) 數(shù)，計(jì)算出原發(fā)酵液中菌體密度（活菌數(shù)cfu/mL)。其中，吸光值的測(cè)定方法和活菌數(shù)的計(jì) 算方法同實(shí)施例1。吸光值 m5?請(qǐng)參考圖4。得到活菌數(shù)為3. 8 X 10 9cfu/mL。
[0109] 對(duì)比例2
[0110] 制備鼠李糖乳桿菌種子液，制備方法同實(shí)施例1。
[0111] 將鼠李糖乳桿菌種子液中的鼠李糖乳桿菌接種至改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基中，靜 置發(fā)酵22h。其中，接種量為6 %，改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的初始pH值為6. 8，發(fā)酵溫度為 37°C，得到發(fā)酵后的鼠李糖乳桿菌。
[0112] 發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液洗滌離心，測(cè)量發(fā)酵液的吸光值。D54。。并同時(shí)涂平板活菌計(jì) 數(shù)，計(jì)算出原發(fā)酵液中菌體密度（活菌數(shù)cfu/mL)。其中，吸光值的測(cè)定方法和活菌數(shù)的計(jì) 算方法同實(shí)施例1。吸光值。：) 54。請(qǐng)參考圖4,得到活菌數(shù)為6. 7 X 10 scfu/mL。
[0113] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種乳酸菌混合發(fā)酵相比于兩種乳酸菌單獨(dú)發(fā)酵得到的活菌數(shù)更 多。當(dāng)兩種乳酸菌混合發(fā)酵時(shí)，其存在協(xié)同作用，能夠促進(jìn)兩種乳酸菌共同生長(zhǎng)繁殖，獲得 更大數(shù)量的活菌數(shù)。
[0114] 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種混合乳酸菌發(fā)酵方法，其特征在于，包括如下步驟： 將瑞±乳桿菌和鼠李糖乳桿菌菌種分別進(jìn)行活化處理，得到瑞±乳桿菌種子液和鼠李 糖乳桿菌種子液； 先將所述瑞±乳桿菌種子液中的瑞±乳桿菌接種至改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 2h-4h后，再將所述鼠李糖乳桿菌種子液中的鼠李糖乳桿菌也接種至所述改良的番茄汁肉 湯培養(yǎng)基，在30°C-37°C的恒溫條件下靜置培養(yǎng)22h-24h，其中，瑞±乳桿菌和鼠李糖乳桿 菌的體積比為1:1-1:2,所述瑞±乳桿菌和所述鼠李糖乳桿菌的總接種量為5% -7%，所述 改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的初始pH值為6. 6-7. 0,得到發(fā)酵后的混合乳酸菌菌液。2. 如權(quán)利要求1所述的混合乳酸菌發(fā)酵方法，其特征在于， 將瑞±乳桿菌進(jìn)行活化處理包括如下步驟，按照8%-10%的接種量，取在-80°C的甘 油中保存的瑞±乳桿菌菌種接種至第一液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h-19h，接著，按照3% -6% 的接種量，取所述第一液體培養(yǎng)基中的瑞±乳桿菌菌液接種至第二液體培養(yǎng)基中培養(yǎng) 17h-19h，然后，按照3 %-6%的接種量，取所述第二液體培養(yǎng)基中的瑞±乳桿菌菌液接種 至第Ξ液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h-19h，得到所述瑞±乳桿菌種子液； 將鼠李糖乳桿菌進(jìn)行活化處理包括如下步驟，按照8% -10%的接種量，取在-80°C的甘油中保存的鼠李糖乳桿菌菌種接種至第四液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h-19h，接著，按照 3%-6%的接種量，取所述第四液體培養(yǎng)基中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至第五液體培養(yǎng)基 中培養(yǎng)17h-19h，然后，按照3% -6%的接種量，取所述第五液體培養(yǎng)基中的鼠李糖乳桿菌 菌液接種至第六液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h-19h，得到所述鼠李糖乳桿菌種子液。3. 如權(quán)利要求2所述的混合乳酸菌發(fā)酵方法，其特征在于，所述第一液體培養(yǎng)基、所述 第二液體培養(yǎng)基、所述第Ξ液體培養(yǎng)基、所述第四液體培養(yǎng)基、所述第五液體培養(yǎng)基和所述 第六液體培養(yǎng)基均為改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基。4. 如權(quán)利要求2所述的混合乳酸菌發(fā)酵方法，其特征在于， 將瑞±乳桿菌進(jìn)行活化處理還包括如下步驟，取所述第Ξ液體培養(yǎng)基中的瑞±乳桿菌 菌液涂布到第一平板固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)至有菌落長(zhǎng)出，接著挑取所述第一平板固體培養(yǎng)基 中的單菌落至第屯液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)17h-19h，然后按照3 %-6%的接種量，取所述第屯液 體培養(yǎng)基中的瑞:t乳桿菌菌液接種至第八液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)17h-l化后得到所述瑞±乳桿 菌種子液； 將鼠李糖乳桿菌進(jìn)行活化處理還包括如下步驟，取所述第六液體培養(yǎng)基中的鼠李糖乳 桿菌菌液涂布到第二平板固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)至有菌落長(zhǎng)出，接著挑取所述第二平板固體培 養(yǎng)基中的單菌落至第九液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)17h-19h，然后按照3%-6%的接種量，取所述第 九液體培養(yǎng)基中的鼠李糖乳桿菌菌液至第十液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)17h-l化后得到所述鼠李糖 乳桿菌種子液。5. 如權(quán)利要求4所述的混合乳酸菌發(fā)酵方法，其特征在于，所述第屯液體培養(yǎng)基、所述 第八液體培養(yǎng)基、所述第九液體培養(yǎng)基和所述第十液體培養(yǎng)基均為改良的番茄汁肉湯培養(yǎng) 基。6. 如權(quán)利要求1、3、5中任意一項(xiàng)所述的混合乳酸菌發(fā)酵方法，其特征在于，所述改良 的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的組分為： 番茄浸粉 2.5g化； 牛肉膏粉 io.OgZU 醇母殘粉 5.0g/L; 醋敏納 5.0g化； 葡萄糖 2.0g化； 乳糖 20.0g/：L; 鱗酸氨二鐘 2.0g/L; 吐溫 80 l.Og/Le7.如權(quán)利要求1所述的混合乳酸菌發(fā)酵方法，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基的組分為： 番茄漫粉 2.5g/L; 牛肉膏粉 lO.Og/L; 酵母浸粉 5.0g化； 醋酸納 5.〇g化； 葡萄糖 2.0g化； 乳糖 20.0g/L; 磅酸氨二鐘 2.i)g/L·， 口上溫80 1.0呂化； 瓊脂 2雌,心。8. 如權(quán)利要求1所述的混合乳酸菌發(fā)酵方法，其特征在于，所述瑞±乳桿菌菌株的保 藏單位名稱為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中屯、，保藏日期為2015年9月15日，保藏號(hào)為CCTCCΜ 2015539ο9.如權(quán)利要求1所述的混合乳酸菌發(fā)酵方法，其特征在于，所述鼠李糖乳桿菌菌株的 保藏單位名稱為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中屯、，保藏日期為2015年9月15日，保藏號(hào)為CCTCC Μ2015540ο
【專利摘要】一種混合乳酸菌發(fā)酵方法，包括如下步驟：將瑞士乳桿菌和鼠李糖乳桿菌菌種分別進(jìn)行活化處理，得到瑞士乳桿菌種子液和鼠李糖乳桿菌種子液；將瑞士乳桿菌種子液中的瑞士乳桿菌和鼠李糖乳桿菌種子液中的鼠李糖乳桿菌接種至改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基中，發(fā)酵22h-24h，其中，瑞士乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的體積比為1:1-1:2，接種量為5％-7％，改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的初始pH值為6.6-7.0，發(fā)酵溫度為30℃-37℃，得到發(fā)酵后的混合乳酸菌。上述混合乳酸菌發(fā)酵方法，瑞士乳桿菌有較強(qiáng)的蛋白水解能力，可將培養(yǎng)基中的大分子蛋白水解成小分子，給共同發(fā)酵的鼠李糖乳桿菌提供一定的小分子蛋白，從而充分利用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分，從而同時(shí)獲得較多的瑞士乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的活菌數(shù)。CCTCC NO:M 201553920150915
【IPC分類】C12R1/225, C12N1/20
【公開號(hào)】CN105400713
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510649363
【發(fā)明人】胡曉珂, 陳慶彩, 李敬龍
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所, 齊魯工業(yè)大學(xué)
【公開日】2016年3月16日
【申請(qǐng)日】2015年10月9日