鼠李糖乳桿菌的體積比為1:2,接種量為6%，改良的番 茄汁肉湯培養(yǎng)基的初始PH值為6. 8,發(fā)酵溫度為37°C，得到發(fā)酵后的混合乳酸菌。
[0082] 發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液洗滌離心，測量發(fā)酵液的吸光值。D54。請參考圖4,并同時涂 平板活菌計數(shù)，得到活菌數(shù)為6. 8X 109cfu/mL。
[0083] 吸光值的測定方法為：將30mL發(fā)酵液用60mL無菌水稀釋，混勾后，在4 °C， SOOOXg的條件下，離心10min，棄去上清液后再用無菌生理鹽水洗滌沉淀1-2次，最后將 洗滌干凈的菌體重懸于30mL的生理鹽水中。以生理鹽水為空白，在540nm下測定樣品的吸 光度值，每個樣品做3個平行對照實驗，取平均值，得到吸光度值。
[0084] 活菌數(shù)的計算方法為：采用梯度稀釋法用無菌生理鹽水將發(fā)酵液稀釋，取10 7稀 釋度的菌液100 μ L涂平板，然后將平板放入37°C培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，待菌落長出后計數(shù)， 每個樣品做3個平行對照實驗，取平均值，得到活菌數(shù)。然后計算出原發(fā)酵液中菌體密度 (活菌數(shù)cfu/mL)。
[0085] 實施例2
[0086] 制備瑞士乳桿菌種子液：按10 %的接種量，取在-80°C的甘油中保存的瑞士乳桿 菌菌種，接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中培養(yǎng)17h。接著，按6%的接種量取 試管中的瑞士乳桿菌菌液接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中培養(yǎng)17h。然后， 按6%的接種量再取錐形瓶中的瑞士乳桿菌菌液接種至含有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的另 一錐形瓶培養(yǎng)17h，得到瑞士乳桿菌種子液。
[0087] 制備鼠李糖乳桿菌種子液：按10 %的接種量，取在-80°C的甘油中保存的鼠李糖 乳桿菌菌種，接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中培養(yǎng)17h。按6%的接種量取試 管中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中培養(yǎng)18h。然后， 按6%的接種量再取錐形瓶中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至含有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的 另一錐形瓶培養(yǎng)17h，得到鼠李糖乳桿菌種子液。
[0088] 先將瑞士乳桿菌種子液中的瑞士乳桿菌接種至改良的番前汁肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 2h后，再將鼠李糖乳桿菌種子液中的鼠李糖乳桿菌也接種至改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基中， 靜置發(fā)酵22h。其中，瑞士乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的體積比為1:1，接種量為5%，改良的番 茄汁肉湯培養(yǎng)基的初始PH值為6. 6,發(fā)酵溫度為30°C，得到發(fā)酵后的混合乳酸菌。
[0089] 發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液洗滌離心，測量發(fā)酵液的吸光值。D54。為0. 993為XX，并 同時涂平板活菌計數(shù)，計算出原發(fā)酵液中菌體密度（活菌數(shù)cfu/mL)。得到活菌數(shù)為 5. 2X 109cfu/mL。其中，吸光值的測定方法和活菌數(shù)的計算方法同實施例1。
[0090] 實施例3
[0091 ] 制備瑞士乳桿菌種子液：按9%的接種量，取在_80°C的甘油中保存的瑞士乳桿菌 菌種，接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中培養(yǎng)19h。接著，按5%的接種量取試 管中的瑞士乳桿菌菌液接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中培養(yǎng)19h。然后，按 5%的接種量再取錐形瓶中的瑞士乳桿菌菌液接種至含有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的另一 錐形瓶培養(yǎng)19h。取上一步錐形瓶中的瑞士乳桿菌菌液按照稀釋涂布平板法稀釋到10 7后， 取100 μ L液體涂布到第一平板固體培養(yǎng)基，在30°C恒溫培養(yǎng)中倒置培養(yǎng)至有菌落長出。接 著挑取第一平板固體培養(yǎng)基中的單菌落至裝有5mL改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中，在 30°C的恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)19h。然后取試管中的瑞士乳桿菌菌液接種至裝有30mL改良 的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中，培養(yǎng)19h后得到瑞士乳桿菌種子液。
[0092] 制備鼠李糖乳桿菌種子液：按9%的接種量，取在_80°C的甘油中保存的鼠李糖乳 桿菌菌種，接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中培養(yǎng)19h。按5%的接種量取試管 中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中培養(yǎng)19h。然后， 按5%的接種量再取錐形瓶中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至含有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的 另一錐形瓶培養(yǎng)19h。取上一步錐形瓶中的鼠李糖乳桿菌菌液按照稀釋涂布平板法稀釋到 10 7后，取100 μ L液體涂布到第二平板固體培養(yǎng)基，在30°C恒溫培養(yǎng)中倒置培養(yǎng)至有菌落 長出。接著挑取第二平板固體培養(yǎng)基中的單菌落至裝有5mL改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試 管中，在30°C的恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)19h。然后取試管中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至裝 有30mL改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中，培養(yǎng)19h后得到鼠李糖乳桿菌種子液。
[0093] 先將瑞士乳桿菌種子液中的瑞士乳桿菌接種至改良的番前汁肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 4h后，再將鼠李糖乳桿菌種子液中的鼠李糖乳桿菌也接種至改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基中 靜置發(fā)酵24h。其中，瑞士乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的體積比為1:2,接種量為7%，改良的番 茄汁肉湯培養(yǎng)基的初始PH值為7. 0,發(fā)酵溫度為37°C，得到發(fā)酵后的混合乳酸菌。
[0094] 發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液洗滌離心，測量發(fā)酵液的吸光值。D54。為1. 083為XX，并 同時涂平板活菌計數(shù)，計算出原發(fā)酵液中菌體密度（活菌數(shù)cfu/mL)。得到活菌數(shù)為 6. 2X 109cfu/mL。其中，吸光值的測定方法和活菌數(shù)的計算方法同實施例1。
[0095] 實施例4
[0096] 制備瑞士乳桿菌種子液：將在_80°C的甘油中保存的瑞士乳桿菌菌種，取0. 5mL接 種至裝有5mL的改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中培養(yǎng)17h。接著，按3%的接種量取試管 中的瑞士乳桿菌菌液接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中培養(yǎng)17h。然后，按 3%的接種量再取錐形瓶中的瑞士乳桿菌菌液接種至含有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的另一 錐形瓶培養(yǎng)17h。取上一步錐形瓶中的瑞士乳桿菌菌液，按照梯度稀釋法稀釋至10 7,取液 體涂布到第一平板固體培養(yǎng)基，在37°C恒溫培養(yǎng)中倒置培養(yǎng)至有菌落長出。接著挑取第一 平板固體培養(yǎng)基中的單菌落至裝有5mL改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中，在37°C的恒溫 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)17h。然后取試管中的瑞士乳桿菌菌液接種至裝有30mL改良的番茄汁肉 湯培養(yǎng)基的錐形瓶中，培養(yǎng)17h后得到瑞士乳桿菌種子液。
[0097] 制備鼠李糖乳桿菌種子液：將在-80°C的甘油中保存的鼠李糖乳桿菌菌種，取 0. 5mL接種至裝有5mL的改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中培養(yǎng)17h。按3%的接種量取 試管中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中培養(yǎng)17h。然 后，按3 %的接種量再取錐形瓶中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至含有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng) 基的另一錐形瓶培養(yǎng)17h。取上一步錐形瓶中的鼠李糖乳桿菌菌液，按照梯度稀釋法稀釋 至10 7,取液體涂布到第二平板固體培養(yǎng)基，在37°C恒溫培養(yǎng)中倒置培養(yǎng)至有菌落長出。接 著挑取第二平板固體培養(yǎng)基中的單菌落至裝有5mL改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中，在 37°C的恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)17h。然后取試管中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至裝有30mL改 良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中，培養(yǎng)17h后得到鼠李糖乳桿菌種子液。
[0098] 先將瑞士乳桿菌種子液中的瑞士乳桿菌接種至改良的番前汁肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 3h后，再將鼠李糖乳桿菌種子液中的鼠李糖乳桿菌也接種至改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基中， 靜置發(fā)酵23h。其中，瑞士乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的體積比為1:2,接種量為6%，改良的番 茄汁肉湯培養(yǎng)基的初始pH值為6. 8，發(fā)酵溫度分別為20 °C、30 °C、35 °C、37 °C和40 °C，得到發(fā) 酵后的混合乳酸菌。
[0099] 發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液洗滌離心，測量發(fā)酵液的吸光值。D54。，并同時涂平板活菌計 數(shù)。計算出原發(fā)酵液中菌體密度（活菌數(shù)cfu/mL)。其中，吸光值的測定方法和活菌數(shù)的計 算方法同實施例1。吸光值。 D54(]請參考圖5。在30°C、35°C和37°C條件下，得到的活菌數(shù)量 在5. 6X 109cfu/mL左右。20°C時得到的活菌數(shù)量為3. 6X 109cfu/mL。40°C時活菌數(shù)僅為 2. 3 X IO9CfVmL0
[0100] 實施例5
[0101] 制備瑞士乳桿菌種子液：將在-80°C的甘油中保存的瑞士乳桿菌菌種，取0. 5mL接 種至裝有5mL的改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的試管中培養(yǎng)19h。接著，按5%的接種量取試管 中的瑞士乳桿菌菌液接種至裝有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中培養(yǎng)19h。然后，按 5%的接種量再取錐形瓶中的瑞士乳桿菌菌液接種至含有改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的另一 錐形瓶培養(yǎng)19h。取上一步錐形瓶中的瑞士乳桿菌菌液，按照梯度稀釋法稀釋至10 7,取液 體涂布到第一平板固體培養(yǎng)基。接著挑取第一平板固體培養(yǎng)基中的單菌落至裝有5mL改良 的番前汁肉湯培養(yǎng)基的試管中。然后取試管中的瑞士乳桿菌菌液接種至裝有30mL改良的 番茄汁肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中，培養(yǎng)19h后得到瑞士乳桿菌種子液。
[0102] 制備鼠李糖乳桿菌種子液：將在-80°C的甘油中保存的鼠李糖乳桿菌菌種，取 0. 5mL接種至裝有5mL的改良的