一種混合乳酸菌發(fā)酵方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及乳酸菌發(fā)酵領(lǐng)域，尤其涉及一種混合乳酸菌發(fā)酵方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，乳酸菌成為人們研究的熱點，并且在食品、藥品等行業(yè)中廣泛應(yīng)用。乳酸 菌（lactic acid bacteria，LAB)是一類能利用可發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的細菌的 通稱。其對機體的調(diào)節(jié)作用是其它腸道菌群不可替代的，這種活的微生物，需要攝入充足的 數(shù)量，才可對宿主產(chǎn)生一種或多種益處。乳（培養(yǎng)基）中含有豐富的蛋白質(zhì)、乳糖、脂肪、維 生素和礦物質(zhì)，但其中游離的氨基酸和小肽的含量很低。這就需要乳酸菌來降解乳中的大 分子蛋白來維持其持續(xù)增長，而大部分乳酸菌的蛋白水解能力較弱，甚至需要在乳中添加 小分子的多肽來促進生長。
[0003] 瑞士乳桿菌和鼠李糖乳桿菌均是食品工業(yè)中常用的乳酸菌。與其它乳酸菌相比， 瑞士乳桿菌具有較強的蛋白水解能力。鼠李糖乳桿菌僅可代謝單糖和小分子蛋白，耐酸性 良好，腸道定植能力強。傳統(tǒng)的乳酸菌發(fā)酵方法中沒有將這兩種乳酸菌混合發(fā)酵的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 鑒于此，有必要提供一種瑞士乳桿菌（Lactobacillus helveticus)QC-1和鼠李糖 乳桿菌（Lactobacillus rhamnosus)QC_2混合發(fā)酵的方法。
[0005] -種混合乳酸菌發(fā)酵方法，包括如下步驟：
[0006] 將瑞士乳桿菌和鼠李糖乳桿菌菌種分別進行活化處理，得到瑞士乳桿菌種子液和 鼠李糖乳桿菌種子液；
[0007] 先將所述瑞士乳桿菌種子液中的瑞士乳桿菌接種至改良的番前汁肉湯培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)2h_4h后，再將所述鼠李糖乳桿菌種子液中的鼠李糖乳桿菌也接種至所述改良的番茄 汁肉湯培養(yǎng)基，在30°C -37°C的恒溫條件下靜置培養(yǎng)22h-24h，其中，瑞士乳桿菌和鼠李糖 乳桿菌的體積比為1:1-1:2,所述瑞士乳桿菌和所述鼠李糖乳桿菌的總接種量為5% -7%， 所述改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的初始pH值為6. 6-7. 0,得到發(fā)酵后的混合乳酸菌菌液。
[0008] 在其中一個實施例中，將瑞士乳桿菌進行活化處理包括如下步驟，按照8 % -10 % 的接種量，取在-80°C的甘油中保存的瑞士乳桿菌菌種接種至第一液體培養(yǎng)基中培養(yǎng) 17h-19h，接著，按照3 % -6 %的接種量，取所述第一液體培養(yǎng)基中的瑞士乳桿菌菌液接種 至第二液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h-19h，然后，按照3% -6%的接種量，取所述第二液體培養(yǎng)基 中的瑞士乳桿菌菌液接種至第三液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h-19h，得到所述瑞士乳桿菌種子 液；
[0009] 將鼠李糖乳桿菌進行活化處理包括如下步驟，按照8% -10%的接種量，取 在-80 °C的甘油中保存的鼠李糖乳桿菌菌種接種至第四液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h_19h，接著， 按照3% -6%的接種量，取所述第四液體培養(yǎng)基中的鼠李糖乳桿菌菌液接種至第五液體培 養(yǎng)基中培養(yǎng)17h-19h，然后，按照3% -6%的接種量，取所述第五液體培養(yǎng)基中的鼠李糖乳 桿菌菌液接種至第六液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h-19h，得到所述鼠李糖乳桿菌種子液。
[0010] 在其中一個實施例中，所述第一液體培養(yǎng)基、所述第二液體培養(yǎng)基、所述第三液體 培養(yǎng)基、所述第四液體培養(yǎng)基、所述第五液體培養(yǎng)基和所述第六液體培養(yǎng)基均為改良的番 前汁肉湯培養(yǎng)基。
[0011] 在其中一個實施例中，
[0012] 將瑞士乳桿菌進行活化處理還包括如下步驟，取所述第三液體培養(yǎng)基中的瑞士乳 桿菌菌液涂布到第一平板固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)至有菌落長出，接著挑取所述第一平板固體培 養(yǎng)基中的單菌落至第七液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)17h_19h，然后按照3% -6 %的接種量，取所述第 七液體培養(yǎng)基中的瑞士乳桿菌菌液接種至第八液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)17h_19h后得到所述瑞士 乳桿菌種子液；
[0013] 將鼠李糖乳桿菌進行活化處理還包括如下步驟，取所述第六液體培養(yǎng)基中的鼠李 糖乳桿菌菌液涂布到第二平板固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)至有菌落長出，接著挑取所述第二平板固 體培養(yǎng)基中的單菌落至第九液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)17h-19h，然后按照3% -6%的接種量，取所 述第九液體培養(yǎng)基中的鼠李糖乳桿菌菌液至第十液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)17h_19h后得到所述 鼠李糖乳桿菌種子液。
[0014] 在其中一個實施例中，所述第七液體培養(yǎng)基、所述第八液體培養(yǎng)基、所述第九液體 培養(yǎng)基和所述第十液體培養(yǎng)基均為改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基。
[0015] 在其中一個實施例中，所述改良的番茄汁肉湯培養(yǎng)基的組分為：
[0016] 番恭浸粉 2.5g/L; 牛肉膏粉 10.0g/L; 酵母浸粉 5.0g/L; 酷酸納 5.0g/L; 葡萄糖 2.0g/L; 乳糖 20.0g/L; 磷酸氫二鉀 2.0g/L; 吐溫 80 LOg/Lc
[0017] 在其中一個實施例中，所述固體培養(yǎng)基的組分為：
[0018] 番茄浸粉 2.5g/L; 牛肉膏粉 10.0g/L; 酵母浸粉 5.0g/L; 醋酸鈉 5,0g/L; 葡萄糖 2.0g/L; 乳糖 20.0g/L; 磷酸氫二鐘 2. Og/L; 吐溫 80 I .Og/L; 瓊脂 20g/L。
[0019] 在其中一個實施例中，所述瑞士乳桿菌菌株的保藏單位名稱為中國典型培養(yǎng)物保 藏中心，保藏日期為2015年9月15日，保藏號為CCTCC M 2015539。
[0020] 在其中一個實施例中，所述鼠李糖乳桿菌菌株的保藏單位名稱為中國典型培養(yǎng)物 保藏中心，保藏日期為2015年9月15日，保藏號為CCTCC M 2015540。
[0021] 上述混合乳酸菌發(fā)酵方法，采用的瑞士乳桿菌與其它乳酸菌相比有較強的蛋白水 解能力，它可將培養(yǎng)基中的大分子蛋白水解成小分子，給共同發(fā)酵的鼠李糖乳桿菌提供一 定的小分子蛋白，從而充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分，從而同時獲得較多的瑞士乳桿菌和 鼠李糖乳桿菌的活菌數(shù)。
【附圖說明】
[0022] 圖1為一實施方式的混合乳酸菌發(fā)酵方法的流程圖；
[0023] 圖2為將瑞士乳桿菌進行活化處理的流程圖；
[0024] 圖3為將鼠李糖乳桿菌進行活化處理的流程圖；
[0025] 圖4為實施例1中兩種乳酸菌混合發(fā)酵的吸光值與對比例1和2中兩種乳酸菌單 獨發(fā)酵的吸光值的對比圖；
[0026] 圖5為實施例4中兩種乳酸菌混合發(fā)酵的吸光值隨溫度變化圖；
[0027] 圖6為實施例5中兩種乳酸菌混合發(fā)酵的吸光值隨pH值變化圖。
【具體實施方式】
[0028] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清晰，如下結(jié)合附圖及實施例，對本發(fā) 明進行進一步詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用 于限定本發(fā)明。
[0029] 如圖1所示，一實施方式的混合乳酸菌發(fā)酵方法，包括如下步驟：
[0030] S10、將瑞士乳桿菌和鼠李糖乳桿菌菌種分別進行活化處理，得到瑞士乳桿菌種子 液和鼠李糖乳桿菌種子液。
[0031] 瑞士乳桿菌菌株的保藏單位名稱為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2015 年9月15日，保藏號為CCTCC M 2015539。保藏單位地址：武漢，中國典型培養(yǎng)物保藏中心 (武漢大學）。郵編=430072。
[0032] 鼠李糖乳桿菌菌株的保藏單位名稱為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2015 年9月15日，保藏號為CCTCC M 2015540。保藏單位地址：武漢，中國典型培養(yǎng)物保藏中心 (武漢大學）。郵編=430072。
[0033] 瑞士乳桿菌菌株和鼠李糖乳桿菌菌株具有生長快、起發(fā)早、發(fā)酵時間短、對酸耐受 力強、穩(wěn)定性好等特點。
[0034] 請參考圖2,將瑞士乳桿菌進行活化處理包括如下步驟：
[0035] Slll、按照8% -10%的接種量，取在-80°C的甘油中保存的瑞士乳桿菌菌種接種 至第一液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h_19h。
[0036] S112、接著，按照3% -6%的接種量，取第一液體培養(yǎng)基中的瑞士乳桿菌菌液接種 至第二液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h-19h。
[0037] S113、然后，按照3% -6%的接種量，取第二液體培養(yǎng)基中的瑞士乳桿菌菌液接種 至第三液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h-19h，得到瑞士乳桿菌種子液。
[0038] 第一液體培養(yǎng)基、第二液體培養(yǎng)基和第三液體培養(yǎng)基均為改良的番茄汁肉湯培養(yǎng) 基。
[0039] 請參考圖3,將鼠李糖乳桿菌進行活化處理包括如下步驟：
[0040] S121、按照8% -10%的接種量，取在-80°C的甘油中保存的鼠李糖乳桿菌菌種接 種至第四液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h-19h。
[0041] S122、接著，按照3% -6%的接種量，取第四液體培養(yǎng)基中的鼠李糖乳桿菌菌液接 種至第五液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)17h_19h。
[0042] S123、然后，按照3% -6%的接種量，取第五液體培養(yǎng)基中的鼠李糖乳桿菌菌液接 種至第六液體培養(yǎng)基中培