0,產(chǎn)生白色 沉淀，抽濾，CH2CI2溶解產(chǎn)物，用無水化2SO4干燥，過濾旋除溶劑，真空干燥得到4, 4'-二漠 甲基-2,2'-聯(lián)化晚，產(chǎn)率45%。
[0034] 似配合物Ir-I化(卵y)2-bpy-時(shí)種6的合成
[0035] 取苯基化晚合銀氯橋二聚體200mg，HOmg4, 4' -二漠甲基-2, 2' -聯(lián)化晚，六氣 憐酸鐘（KPFe) 300mg，二氯甲燒20mU無水甲醇IOmU依次加入帶攬拌子的兩口燒瓶中，通氮 氣，回流攬拌2地，用二氯甲燒稀釋反應(yīng)液，過濾得澄紅色二氯甲燒澄清液，減壓旋干后，用 二氯甲燒/乙酸乙醋（V:V= 20:1)柱層析得澄色粉末即為銀配合物Ir-I,產(chǎn)率86%。
[0036] iHMffi(400MHz，CDCl3)5(wm):8.65(m;2H);7.91-7.88(m;4H);7.76(t;J= 8. 00Hz;2H) ;7. 68(dJ= 7. 60Hz;2H) ;7. 53-7. 51(m;3H) ;7. 46(dd;Ji= 1.20HzJz= 5. 60Hz;lH) ;7. 09-7. 02(m;4H) ;6. 92(t;J= 7. 20Hz;2H) ;6. 27(dJ= 7. 60Hz;2H); 4. 80(s;2H) ;4. 63(s;2H)。
[0037]做配合物Ir-2化(卵y) 2-bpy-NO] +PFe的合成
[003引稱取銀配合物Ir-I(Immol)，4-氨基-2, 2, 6, 6-四甲基贓晚氮氧自由基（3mmol) 和過量碳酸鐘粉末加入帶攬拌子的雙頸瓶中，在雙排管上抽真空-保氮?dú)?抽真空，循環(huán)往 復(fù)S次，最后采用氮?dú)獗Ｗo(hù)整個(gè)反應(yīng)體系。注入5mL蒸過的N-甲基化咯燒酬溶液，80°C攬 拌回流lOh。反應(yīng)結(jié)束后，用石油酸沉降除去溶劑，二氯甲燒溶解濃縮提純，得到紅色固體產(chǎn) 物即為銀配合物Ir-2。
[0039]虹/e] (M,MALDI-T0F)理論值：1023. 32,實(shí)驗(yàn)值：1023. 06,如圖 1 所示。
[0040] 實(shí)施例2 :憐光探針I(yè)r-2的發(fā)射光譜對(duì)抗壞血酸的響應(yīng)性
[0041] 將銀配合物Ir-2配成1.OX10 2mol/L的DMSO溶液，移取10yL溶液到1000yL PBS緩沖溶液中，使其濃度稀釋至1. 0X10 5mol/L進(jìn)行測(cè)試，逐次加入抗壞血酸（或稱Vc) 水溶液，每次滴加抗壞血酸后，在37°C恒溫水浴中加熱攬拌5分鐘，使抗壞血酸與銀配合物 Ir-2充分反應(yīng)，隨后測(cè)試其巧光發(fā)射光譜，如圖2所示。在614nm處，銀配合物Ir-2溶液本 身發(fā)光很弱，隨著抗壞血酸的加入，銀配合物Ir-2溶液的巧光光譜發(fā)生了變化，伴隨著抗 壞血酸滴加濃度的升高，銀配合物Ir-2的巧光強(qiáng)度逐漸升高并發(fā)生藍(lán)移。當(dāng)抗壞血酸的滴 加濃度當(dāng)量達(dá)到4eq.時(shí)，滴定達(dá)到終點(diǎn)，再繼續(xù)滴加抗壞血酸，光譜則不再發(fā)生變化。配合 物Ir-2的憐光發(fā)射強(qiáng)度與初始強(qiáng)度比與不同當(dāng)量抗壞血酸（Vc)的線性擬合曲線如圖3所 /J、-O 陽0創(chuàng)實(shí)施例3 :憐光探針I(yè)r-2的壽命對(duì)抗壞血酸的響應(yīng)性
[0043] 將銀配合物Ir-2配成1. 0X10 2mol/L的DMSO溶液，移取10yL溶液到1000yL PBS緩沖溶液中，使其濃度稀釋至1.OX10 5mol/L進(jìn)行測(cè)試，加入抗壞血酸前測(cè)試配合物 Ir-2的壽命，繼而向Ir-S的PBS緩沖液中加入超過反應(yīng)當(dāng)量的抗壞血酸溶液，充分反應(yīng)再 次進(jìn)行壽命測(cè)試，配合物前后的壽命變化如圖4所示。
[0044] 實(shí)施例4 :憐光探針I(yè)r-2應(yīng)用于活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)
[0045]Hela細(xì)胞按照AmericanTypeTissueQiltureCollection規(guī)定進(jìn)行培養(yǎng)。Hela 細(xì)胞用20yM銀配合物Ir-2溶液在37°C下解育30分鐘，用培養(yǎng)液洗涂3次，配合物Ir-2標(biāo) 記的化Ia細(xì)胞分別用低濃度和高濃度抗壞血酸（Vc)溶液在37°C條件下各解育30分鐘，之 后均用培養(yǎng)基洗涂3次，用405nm波長激發(fā)細(xì)胞進(jìn)行共聚焦成像，照片顯示活細(xì)胞胞漿內(nèi)有 明顯可見的憐光，且高濃度抗壞血酸解育的化Ia細(xì)胞中的憐光強(qiáng)度比低濃度解育的細(xì)胞 中的憐光強(qiáng)度高，如圖5所示，此結(jié)果表明憐光探針I(yè)r-2具有較好的細(xì)胞穿透性，主要分布 在細(xì)胞質(zhì)區(qū)域，可用于活細(xì)胞內(nèi)抗壞血酸檢測(cè)，且憐光探針本身的壽命比自發(fā)巧光壽命長， 而細(xì)胞內(nèi)的憐光探針與待檢測(cè)物作用之后的壽命變長，在自發(fā)巧光衰減之后再測(cè)定憐光探 針壽命的信號(hào)，即可應(yīng)用時(shí)間分辨技術(shù)實(shí)現(xiàn)較高靈敏度的檢測(cè)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種離子型磷光銥配合物，其特征在于所述銥配合物的輔助配體上含有氮氧自由 基，該銥配合物具有如下結(jié)構(gòu)通式：其中，C~N配體為下列結(jié)構(gòu)中的一個(gè)：2. -種如權(quán)利要求1所述的離子型磷光銥配合物的制備方法，其特征在于該制備方法 包括以下步驟： (1)4, 4' -二甲基-2, 2' -聯(lián)吡啶經(jīng)過氧化、甲氧基化、酯的還原、氫溴酸取代四步反應(yīng) 得到N~N輔助配體； ⑵將所述步驟1得到的輔助配體與銥二氯橋（(C~N)2IrU-Cl)2Ir(C~N)2)通過配位 反應(yīng)制備得到配合物中間體； (3)將所述步驟2得到的配合物中間體與4-氨基-2, 2, 6, 6-四甲基哌啶氮氧自由基以 及碳酸鉀粉末溶解于N-甲基吡咯烷酮溶液中反應(yīng)，得到目標(biāo)銥配合物。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的離子型磷光銥配合物在抗壞血酸檢測(cè)上的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的離子型磷光銥配合物的應(yīng)用，其特征在于所述探針能夠用于 細(xì)胞成像和時(shí)間分辨技術(shù)上。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種離子型磷光銥配合物及其制備方法和應(yīng)用，具體涉及一類用于檢測(cè)L-抗壞血酸的磷光銥配合物。該類配合物材料由環(huán)金屬配體，金屬中心和氮氧自由基修飾的輔助配體組成，結(jié)構(gòu)通式如下式所示。由于所述銥配合物具有低生物毒性、容易進(jìn)入細(xì)胞漿中以及長的磷光發(fā)射壽命，因此其在抗壞血酸檢測(cè)、細(xì)胞成像及時(shí)間分辨技術(shù)方面有廣闊的應(yīng)用前景。
【IPC分類】C09K11/06, G01N21/64, C07F15/00
【公開號(hào)】CN105294773
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510763336
【發(fā)明人】趙強(qiáng), 黃維, 朱亞娜, 劉淑娟, 許文娟, 楊天赦
【申請(qǐng)人】南京郵電大學(xué)
【公開日】2016年2月3日
【申請(qǐng)日】2015年11月10日