一種新的二萜化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術領域，具體涉及從天葵的干燥根中分離得到的一種具有治療 肝癌作用的二萜化合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 天葵（Semiaguilegia adoxoides)為毛茛科植物，屬天葵被子植物門，高15~40 厘米，塊根灰黑色，略呈紡錘形或橢圓形，生于海拔100-1050米間的疏林下、路旁或山谷地 的較陰處，3-4月開花，4-5月結果。在中國分布于四川、貴州、廣西北部、江西、江蘇、安徽 等地，在日本也有分布。其根入藥稱為天葵子，為《中國藥典》收載的中藥品種，味甘、苦，性 寒，有小毒，有清熱解毒、消腫止痛、利尿等作用，治乳腺炎、扁桃體炎、癰腫、瘰疬、小便不利 等癥；全草又作土農(nóng)藥。
[0003] 天葵中含有多種化學成分，牛峰等人用HPLC方法對天葵中的化學成分做了指紋 圖譜；目前從天葵中分離出的主要成分有生物堿、內(nèi)酯類、氰苷硝基類、酚類、二萜、木脂素 等成分。目前從天葵中分離得到4個生物堿類成分，分別為異喹啉季銨型和原小檗堿類生 物堿。
[0004] 現(xiàn)代藥理實驗表明，天葵具有良好的抗腫瘤作用。牛鋒采用MTT法對天葵子部分 化學成分的細胞毒活性進行實驗，結果表明天葵子素A對于宮頸癌、胃癌和乳腺癌三個腫 瘤細胞株的細胞毒活性都要優(yōu)于紫杉醇，且對白血病和肝癌腫瘤細胞株也有明顯的細胞毒 活性；藍華英的研究表明天葵中的 2_(0 -Dgluoopyranosyloxy)-4_hydroxy-benzeneaeet onitrile具有抗腫瘤活性，其ID 5。為9. 43 y g/mL ;關頻對天葵中生物堿成分的抗腫瘤活性 進行了研究，其中的唐松草酚定在高劑量組（l〇〇〇mg/kg)有較好的抗腫瘤作用，抑瘤率為 37. 1%〇

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從天葵的干燥根中分離得到的一種具有治療肝癌作用 的二萜化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結構式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I )的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將天葵的干燥根粉碎， 用85 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的 正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟（a)中乙 酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，依次用15%乙醇和75%乙醇洗脫，收集75%乙醇洗脫液， 減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟（b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依 次用體積比為80:1、50:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d) 步驟（c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1、12:1和5:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；(e)步驟（d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠 分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個柱體積洗脫液，洗脫液 減壓濃縮得到純的化合物（I )。
[0010] 進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I )和藥學上可接受的載體。
[0012] 所述的化合物（I )在制備治療肝癌的藥物中的應用。
[0013] 所述的藥物組合物在制備治療肝癌的藥物中的應用。
[0014] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0015] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I )，其余為藥物學上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0016] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0017]
[0018]圖1為化合物（I )結構式；
[0019] 圖2為化合物（I )理論E⑶值與實驗E⑶值比較；
[0020] 圖3為化合物（I)對IfepG2及L02細胞增殖的影響（n = 3)。
【具體實施方式】
[0021] 下面結合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的實質(zhì)和范圍。
[0022] 實施例1 :化合物（I )分離制備及結構確證
[0023] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0024] 制備方法：（a)將天葵的干燥根（8kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提?。?5LX3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3LX 3次）、乙酸乙酯（3LX 3次）和水飽和 的正丁醇（3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（355g)和正丁醇萃取 物；(b)步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，依次用15%乙醇（8L)和75% (12L)乙醇洗脫，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏（136g) ;(c)步驟 (b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1 (8個柱體積）、50:1 (8個 柱體積）、30:1 (6個柱體積）、15:1 (8個柱體積）和1:1 (5個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到5個組分；(d)步驟（c)中組分4 (31g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比 為20:1 (8個柱體積）、12:1 (10個柱體積）和5:1 (6個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2 (llg)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體 積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得 到純的化合物（I ) (23mg)。
[0025] 結構確證：HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z 441. 1914,結合核磁特征可得分子 式為C23H3Q07,不飽和度為9。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)S H (ppm，DMS0-d6, 600MHz) :H-1 (4. 84， t，J = 2. 4)，H-2(l. 62, m)，H-2(l. 85, m)，H-3(l. 06, m)，H-3(l. 66, m)，H-6(l. 51，m)， H-6(2.07, m)，H-8 (1.94, m)，H-9 (2.56, td，J = 12.0,1.8)，H-ll (1.34, m)，H-ll (1.97， m)，H-15 (5. 86, s)，H-17 (5. 28, d，J = 1. 8)，H-17 (5. 52, d，J = 1. 8)，H-18 (0? 98, s)， H-19(0.99, s)，H-20 (1.00, s)，l-〇Ac (2.02, s)，12-0CH3 (3.01，s)，5-OH (2.91，br，s);核 磁共振碳譜數(shù)據(jù) 8c (ppm，DMS0-d6,125Hz) :73. 9 (CH，1-C)，21. 9 (CH2, 2-C)，29. 1 (CH2, 3-C)， 37. 5 (C，4-C)，77. 4 (C，5-C)，34. 8 (CH2，6-C)，208. 3 (C，7-C)，47. 7 (CH，8-C)，36. 4 (CH， 9-C)，42. 4 (C，10-C)，34. 9 (CH2,11-C)，106. 5 (C，12-C)，165. 8 (C，13-C)，140. 1 (C，14-C)， 114. 8(CH，15-C)，168. 3(C，16-C)，113. 9(CH2, 17-C)，27. 2(CH3,18-C)，24. 0(CH3,19-C)， 16. 3(CH3,20-C)，168. 9(C，l-〇Ac)，20. 3(CH3, l-〇Ac)，49. 2(CH3,12-0CH3);碳原子標記參見 圖1。IR譜含有羰基（1757cm 1)信號，以及紫外光譜最大吸收波長在212nm處，表明該化 合物含有a，不飽和丁烯酸內(nèi)酯部分。在烯烴質(zhì)子信號SH5.86(H_15, s)和位于低 場的碳信號SC165. 8(C-13)，114. 8(C-15)和168. 3(C-16)也證實了存在這樣的部分，另 外結合三個甲基信號 SH〇.98(Me-18, s)，0.99(Me-19, s)和 1.00 信號（Me-20, s)，表明 該化合物是一個含有丁烯酸內(nèi)酯內(nèi)酯單元四環(huán)二萜類化合物。HMBC譜中，H-1(SH4.84， t，J = 2. 4Hz)與-0C0CH3( S C168. 9)，12-0CH3( S H3. 01，s)與 C-12( S C106. 5)的相關 性表明C-l位上連有乙酰氧基，C-12與甲氧基相連。在HSQC和HMBC譜中，質(zhì)子信號 S H5. 28 (d，J = 1. 8Hz)和 5. 52 (d，J = 1. 8Hz)與碳信號（S C113. 9)直接相連，以及 C-14(SC140. 1)和C-13(SC165. 8)長距離的相關性，表明C-14和C-17之間連有雙鍵。 NOESY 譜中，Me-20( S H1. 00, s)與 H-l( S H4. 84, t，J = 2. 4Hz)，H-2(l. 62, m)，H-2(l. 85， m)，H-8(1. 94，m)，H-llmax( S HI. 97，m)和 Me-19( S HO. 99，s) ;Me-18 與 5-OH( S H2. 91，br， s)和 H-9(2.56，td，J = 12.0，1.8) ;H-9 與 12-0CH3(SH3.01，s)的相關性表明環(huán) A和 B 是 以反式稠合環(huán)連接的椅式構象，從而證實了 C-l，C-2, C-4, C-5, C-10, C-12和C-14的相對 構