59°C ? IR(KBr)cm hieAS, 1588. 4 NMR(400MHz, CDC13) : 8 7. 99 - 7. 92 (m, 2H), 7. 80 (d, J = 15. 4Hz, 1H), 7. 54 (d, J =8. 7Hz, 2H) , 7. 49 - 7. 42 (m, 2H) , 7. 26 (d, J = 1 5. 4Hz, 1H) , 6. 56 (d, J = 8. 8Hz, 2H), 3. 37 (t, J = 6. 6Hz, 4H), 2. 10 - 2. 02 (m, 4H). 13C NMR (101MHz, CDC13) :8 189. 2, 149. 8, 146. 7, 138. 3, 137. 6, 130. 8, 129. 7, 128. 7, 121. 9, 115. 5, 111. 8, 47. 6, 25. 5,
[0031] I -8:黃色固體，總收率54%;m.p. :164-165°C ? IROffiricmhieTS, lSgS.i NMR( 400MHz，CDCl3):S7.90(s，lH)，7.64(d，J = 8.5Hz，2H)，7.45 - 7.36(m，3H)，7.31(s，lH)，7. 23 (s, 1H), 6. 99 (d, J = 16. OHz, 1H), 6. 17 (s, 2H), 3. 87 (s, 3H), 3. 79 (s, 6H). 13C NMR(101MHz ,CDC13) : S 193. 6, 162. 7, 159. 0, 141. 9, 138. 3, 135. 4, 134. 3, 130. 8, 129. 9, 129. 7, 121. 3, 1 17. 8, 111. 7, 90. 8, 56. 0, 55. 5.
[0032] I -9:橘黃色固體，總收率53 % ;m. p. :168-169°C ? IR(KBr)cm hies], 1586. 4 匪R (400MHz, CDC13): 5 7.87 (d，J = 8. 4Hz，2H), 7.77 (d，J = 15.5Hz, 1H), 7.62 (d，J =8. 4Hz，2H)，7.55 (d，J = 8. 7Hz，2H)，7.30 (d，J = 15.5Hz，1H)，6.89 (d，J = 8. 7Hz，2H)，3. 40 - 3. 27(m，4H)，2. 62 - 2. 50(m，4H)，2. 34(s，3H). 13C匪R(101MHz，CDC13) :8 189. 4, 152. 8, 145. 8, 137. 6, 131. 8, 130. 3, 129. 9, 127. 3, 125. 0, 117. 7, 114. 7, 54. 8, 47. 6, 46. 2.
[0033] I -10:橘黃色固體，總收率69% ;m.p. :167-168°C ? IROffiricmhieSS, 1597.iH 匪R (400MHz, CDC13): 5 7.42 (d，J = 8. 4Hz，2H), 7.27 (d，J = 15.7Hz, 1H), 6.85 (d，J =8. 4Hz, 2H) , 6. 81(d,J = 15. 7Hz, 1H) , 6. 16(s,2H) , 3. 85(s,3H) , 3. 75(s, 6H), 3. 35 - 3. 21 (m, 4H), 2. 60 - 2. 49 (m, 4H), 2. 34(s,3H). 13C NMR(101MHz, CDC13) :8 194. 5, 162. 1, 158. 6, 152. 5, 144. 9, 129. 9, 125. 7, 125. 3, 114. 8, 113. 5, 90. 8, 55. 9, 55. 4 ,54. 7, 47. 7, 46. 1.
[0034] I -11:橘黃色固體，總收率66% ;m.p. :161-162°C ? IROffiricmhieAS, lSSO.i 匪R (400MHz, CDC13): 5 7.87 (d，J = 8. 5Hz，2H), 7.80 (d，J = 15.4Hz, 1H), 7.61 (d，J =8. 5Hz, 2H), 7. 53 (d, J = 8. 7Hz, 2H), 7. 24 (d, J = 15. OHz, 1H), 6. 55 (d, J = 8. 8Hz, 2H), 3. 36 (t, J = 6. 6Hz, 4H), 2. 11 - 1. 96 (m, 4H). 13C NMR (101MHz, CDC13) :8 189. 4, 149. 8, 146. 8, 138. 0, 131. 7, 130. 8, 129. 9, 127. 0, 121. 9, 115. 5, 111. 8, 47. 6, 25. 5.
[0035] I -12:橘黃色固體，總收率55 % ;m.p. :169-170 °C ? IR(KBr) cm :: 1640, 1589. :H NMR(400MHz, CDC13) : 8 7. 39 (d, J = 8. 7Hz, 2H), 7. 26 (d, J = 15. 8Hz, 1H), 6. 76(d,J= 15. 8Hz, 1H), 6. 49 (d,J= 8. 8Hz, 2H), 6. 16 (s, 2H), 3. 85 (s, 3H)，3.75(s，6H)，3.32(t，J= 6.6Hz，4H)，2.06 - 1.96(m，4H).13C匪R(101MHz，CDC13) :8 194. 6, 162. 0, 158. 6, 149. 4, 146. 4, 130. 4, 123. 8, 122. 0, 112. 5, 111. 6, 90. 8, 55. 9, 55. 5 ,47. 6, 25. 4.
[0036] 實(shí)施例3上述化合物的抗人神經(jīng)母瘤活性測(cè)定：
[0037] 1?實(shí)驗(yàn)方法：
[0038] 篩選所用化合物均是由本發(fā)明合成、純化而得；樣品儲(chǔ)備液：稱(chēng)取3_5mg樣品置于 1. 5mLEP管中，然后用DMS0配制成濃度是128X103yg/mL的溶液，4°C保存放置，實(shí)驗(yàn)時(shí)根 據(jù)所需濃度利用培養(yǎng)基稀釋。
[0039] 2?初篩
[0040] 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，消化計(jì)數(shù)后，用培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度，以4000-5000個(gè) cell/孔接種至96孔板中，每孔150yL，培養(yǎng)24h后，棄去培養(yǎng)基，加入用培養(yǎng)基稀釋好的 藥物（50yg/mL、100yg/mL)，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔，另設(shè)空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組。藥物作 用72h后，每孔加入20yLMTT，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，吸去液體，加入150mL的DMS0,振蕩均勾，酶 標(biāo)儀490nm處檢測(cè)吸光度值，計(jì)算抑制率，計(jì)算公式如下：
[0041] 抑制率（％ ) = (1-給藥組吸光度值/空白組吸光度值）X100%
[0042] 3、細(xì)篩
[0043] 50yg/mL時(shí)抑制率大于50 %的樣品，重新設(shè)置濃度進(jìn)行細(xì)篩。即將待測(cè)樣品以 0? 25yg/mL、0. 5yg/mL、1yg/mL、2yg/mL、4yg/mL、8yg/mL、16yg/mL、32yg/mL濃度加 入96孔板中，培養(yǎng)72h后，檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS軟件計(jì)算IC5。值和相關(guān)系數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié) 果見(jiàn)表1。
[0044] 表1化合物抑制人神經(jīng)母瘤細(xì)胞株（SK-N-SH)的IC50值
[0045]
[0046]3每個(gè)數(shù)值用平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差（mean土SD)表示，方差分析：p〈0. 05.
[0047] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明所提供的苯聯(lián)氮雜環(huán)查爾酮衍生物對(duì)SK-N-SH腫瘤細(xì)胞具 有一定的抑制作用，其中化合物1-8的體外抗腫瘤活性明顯優(yōu)于5-氟脲嘧啶，可作為進(jìn)一 步開(kāi)發(fā)的候選或者先導(dǎo)化合物，應(yīng)用于制備抗人神經(jīng)母瘤藥物。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 苯聯(lián)氮雜環(huán)查爾酮衍生物，其特征在于，具有如下所示結(jié)構(gòu)通式：札為4-氟、4-氯、4-溴或2, 4, 6-三甲氧基； R2SN-甲基哌嗪、嗎啉、咪唑、四氫吡咯或哌啶； X為F或H。2. 如權(quán)利要求1所述的苯聯(lián)氮雜環(huán)查爾酮衍生物，其特征在于，選如下化合物之一：3. 如權(quán)利要求1所述的苯聯(lián)氮雜環(huán)查爾酮衍生物在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于， 將其做為活性成分用于制備抗人神經(jīng)母瘤藥物。4. 制備如權(quán)利要求1所述的苯聯(lián)氮雜環(huán)查爾酮衍生物的方法，其特征在于，包括以下 步驟：(1) 化合物（m)的制備方法： 溶劑中，將含氮雜環(huán)在堿性條件下和對(duì)氟苯甲醛或3,4_二氟苯甲醛（II)反應(yīng)得到化 合物III，所用的堿是氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、磷酸鈉、十二水磷酸鈉、磷酸鉀、 碳酸氫鉀、碳酸氫鈉中的一種；所用的溶劑為乙醇、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、 四氫呋喃、二氧六環(huán)中之一或其中任意兩種的混合物；反應(yīng)在0_90°C之間進(jìn)行； (2) 通式（I)的制備方法： 溶劑中，化合物（III)與取代苯乙酮在堿性條件下反應(yīng)，待反應(yīng)完成后，冷凝，析出固 體，抽濾即得到通式（I)化合物；所用的溶劑為丙酮、乙腈、乙醇、甲醇、異丙醇、蒸餾水中之 一或其中任意兩種或三種的混合物；反應(yīng)在0-90°C之間進(jìn)行； 所述取代苯乙酮選4-氟苯乙酮、4-氯苯乙酮、4-溴苯乙酮或2,4,6-三甲氧基苯乙酮。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一類(lèi)苯聯(lián)氮雜環(huán)查爾酮衍生物及其制備方法和應(yīng)用，屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明將含氮雜環(huán)與查爾酮母核骨架拼接，簡(jiǎn)單高效，綠色環(huán)保的合成了12個(gè)苯聯(lián)氮雜環(huán)查爾酮衍生物。其具有如下結(jié)構(gòu)通式：R1為鹵素或三甲氧基。R2為N-甲基哌嗪、嗎啉、咪唑、四氫吡咯、哌啶。X為鹵素或H。該類(lèi)化合物體外抗癌活性試驗(yàn)表明對(duì)人神經(jīng)母瘤細(xì)胞株(SK-N-SH)具有一定的抑制作用，可作為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)的候選或者先導(dǎo)化合物，應(yīng)用于制備抗人神經(jīng)母瘤藥物。
【IPC分類(lèi)】A61P35/00, C07D233/60, C07D295/112
【公開(kāi)號(hào)】CN105130927
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510577293
【發(fā)明人】張雁冰, 付冬君, 張賽揚(yáng), 劉宏民
【申請(qǐng)人】鄭州大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年12月9日
【申請(qǐng)日】2015年9月11日