r>[0029]耐藥菌篩選與藥敏紙片對比實驗
[0030]選取6株金葡萄球菌的臨床耐藥菌株，藥敏紙片取米諾環(huán)素、頭孢西丁、青霉素G、萬古霉素、左氧沙星、利福平、妥布霉素；選取4株大腸產(chǎn)ESBLS埃希菌的臨床耐藥菌株，藥敏紙片取依替米星、環(huán)丙沙星、氨芐西林、氨曲南、頭孢他啶、泰能、左氧沙星、頭孢他啶/克拉維酸鉀，平板涂抹法同1.4.1，配制藥液濃度為30mg/mL，分別進行抗菌活性實驗，測量抑菌圈大小。5 % DMSO作為對照組。
[0031]最低抑菌濃度MIC值的測定
[0032]選取對耐藥菌株敏感(抑菌圈直徑不小于1mm)的配合物，根據(jù)美國臨床和實驗室標準協(xié)會(CLSI)推薦的微量稀釋法來測定不同菌株對不同配合物的MIC值(細菌用M-H肉湯培養(yǎng)液，真菌用沙保氏液體培養(yǎng)液)，每組平行操作3次，得出濃度平均值。選擇無菌96孔平底微量培養(yǎng)板，在每排第一孔中加入200uL培養(yǎng)液作為陰性對照；在每排第二孔中加入10uL菌液和10uL培養(yǎng)液作為陽性對照；在每排第3-12各孔中加入培養(yǎng)液100uL，然后于每排第3孔加入受試藥物lOOuL，混合均勻，并取出10uL移至第4孔中，以此類推直至第12孔混勻后吸取10uL棄去，最后于各孔中加入混勻后的細菌(5*10~5CFU/mL)及真菌(l*10~4CFU/mL)的菌懸液lOOul。將培養(yǎng)板置于35°C恒溫箱中培養(yǎng)18h觀察結果，測定其MIC值。選擇黑色背景觀察，以溶液清晰透亮的最低濃度孔中的藥物濃度為MIC。
[0033]最低殺菌濃度MBC值的測定
[0034]當確定MIC值后，取MIC值前3_5個孔的培養(yǎng)物，轉種在MH瓊脂平板上，置35°C的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)22h左右后取出觀察，細菌菌落數(shù)平均小于5個的最低藥物濃度即確定為該化合物的MBC。
[0035]金屬配合物的抗菌活性分析
[0036]判斷標準:抑菌圈小于1mm表示抑菌作用弱或無抑菌活性；等于1mm為輕度敏感；ll-15mm為中度敏感；大于16mm為高度敏感。金屬配合物對標準菌的抑菌結果見圖3。
[0037]根據(jù)圖3結果可判斷，配合物對標準金黃色葡萄球菌，標準大腸埃希菌敏感。
[0038]配合物對金黃色葡萄球菌臨床分離株的抑菌活性分析
[0039]體外抑菌實驗采用紙片擴散法，所用菌種為:臨床分離耐甲氧西林金黃色葡萄球菌。測試結果如圖4及其對常用抗生素藥敏敏紙片抑菌結果如圖5。
[0040]配合物對大腸埃希菌臨床分離株的抑菌活性分析
[0041]體外抑菌實驗采用紙片擴散法，所用菌種為:臨床分離大腸埃
[0042]希菌。測試結果如圖6及大腸藥敏紙片抑菌圈如圖7。
[0043]實驗結果表明配合物對產(chǎn)ESBLs有一定的抑菌效果。
[0044]基于標準菌的粗篩結果，選取相應標準菌株的臨床耐藥菌株進行進一步的試驗，結果分別見圖4，圖5，圖6，圖7。圖4表明，配合物對大多數(shù)金黃色葡萄球耐藥菌株敏感，進一步分析結果發(fā)現(xiàn)，配合物的抗菌活性優(yōu)于青霉素G和利福平，有進一步研究價值。圖6數(shù)據(jù)顯示，配合物對大腸桿菌臨床耐藥菌株敏感。
[0045]配合物對金葡菌和大腸的MIC/MBC的測定結果
[0046]通過抑菌圈結果的篩選，選取抑菌圈直徑大于12mm的配合物I對其進行MIC及MBC的測定。其測定結果見圖8和圖9:
[0047]在本實驗中，配合物對金黃色葡萄球菌的MIC值為15.625?62.5ug/ml，MBC值為31.25?125ug/ml ;配合物對大腸埃希菌的MIC值為31.25?62.5ug/ml，MBC值為62.5?125ug/ml ;表明配合物對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌都有一定的抑菌效果，且對金黃色葡萄球菌的抑菌作用較大腸埃希菌強。
[0048]以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。
【主權項】
1.一種稀佛堿雙核鎘配合物，其特征在于:它為黃色塊狀晶體，其化學名為雙N，N’ - 二(鄰羥亞芐基)-1, 2-苯二胺縮聯(lián)胺合鎘(II )，簡稱[Cd2 (C23H21N2O4)]，其分子式C46H42Cd2N4O8，其分子量FW = 1002.8，其特征結構參數(shù)(% )的理論值為:C，55.05 ;Η，4.19 ；Ν，5.58，實驗值為:C，55.15 ;Η，4.26 ;Ν，5.61。2.根據(jù)權利要求1所述的一種稀佛堿雙核鎘配合物的制備方法，其特征在于:(I)稱取2mmol (0.2160g)的鄰苯二胺溶解在1mL無水乙醇溶液中，再稱取5mmol (0.714g)的水楊醛溶在15mL無水乙醇溶液中，在60°C恒溫油浴中將鄰苯二胺逐滴加入到水楊醛中，混合均勻后，回流攪拌4個小時，冷卻靜置一夜后過濾用無水乙醇洗滌三次，烘干可得到配體(0.5634g，產(chǎn)率:75% )； (2)分別稱取0.0lmmol (0.0316g)配體和0.0lmmol (0.0236g)的乙酸鎘，將配體溶解在1mL I，2-二氯乙烷溶液中，金屬鹽溶解在2mL無水乙醇溶液中，完全溶解后攪拌下將乙酸鎘逐滴加入到配體中，常溫攪拌30min，過濾靜置兩周后得到可測的黃色晶體，適合X-射線單晶衍射，廣率為80%。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種稀佛堿雙核鎘配合物及其制備方法，它涉及醫(yī)學技術領域，它為黃色塊狀晶體，其化學名為雙N,Nˊ-二(鄰羥亞芐基)-1,2-苯二胺縮聯(lián)胺合鎘(Ⅱ)簡稱[Cd2(C23H21N2O4)]，其分子式C46H42Cd2N4O8，其分子量FW＝1002.8，其特征結構參數(shù)(％)的理論值為：C，55.05；H，4.19；N，5.58，實驗值為：C，55.15；H，4.26；N，5.61。它可以用于抗菌治療中，有明顯的抑菌活性，給醫(yī)學領域帶來創(chuàng)新，實用性強。
【IPC分類】A61P31/04, C07F3/08
【公開號】CN105111227
【申請?zhí)枴緾N201510493380
【發(fā)明人】謝明進, 余巍, 趙琦華, 盧春梅, 唐宜芳
【申請人】云南大學
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年8月13日