詞也包括復數(shù)形式，除非該數(shù)字明顯的意為 單數(shù)。
[0069] 本文使用的術(shù)語"發(fā)明"或"本發(fā)明"為非限定術(shù)語，和并不意指特定發(fā)明的任何 單個實施方式，但是包括如申請書中記載的所有可能的實施方式。
[0070] 本文使用的，修飾本發(fā)明使用的成分或反應物的量的術(shù)語"約"指的是數(shù)字的量的 變化，所述變化可以通過例如以下發(fā)生：在現(xiàn)實中用來制備濃縮物或溶液的典型的測量和 液體操作程序；這些程序中的無意的錯誤；用來制備組合物或進行方法的成分的制備、來 源或純度的差異；等。術(shù)語"約"也包括量的差異，所述差異歸因于從特定的最初的混合物 中產(chǎn)生的組合物的不同的平衡條件。例如，根據(jù)使用儀器的精確性的水平，基于測量的樣品 數(shù)量的標準誤差，和舍入誤差，該術(shù)語"約"包括但不限于± 10%。
[0071] 單位、前綴和符號以其國際單位制（SI)可接受的形式表示。數(shù)量范圍包括所限定 該范圍的數(shù)量端值。本文提供的標題不是本發(fā)明公開的不同方面的限定，其可以參考本說 明書整體的來理解。因此，通過參考本說明書的整體更全面地定義在下文被定義的術(shù)語。
[0072] 0 _隱黃素濃縮物
[0073] 本發(fā)明提供隱黃素的濃縮物，其包含約10-80重量％的總的葉黃素，所述總的 葉黃素的約75-98重量％為反式-0-隱黃素，剩余包括玉米黃素、反式-辣椒紅、胡 蘿卜素和微量的其他類胡蘿卜素，源自植物材料的提取物或含油樹脂，且有益于營養(yǎng)和衛(wèi) 生保健。
[0074] 在一些實施方式中，濃縮物包含至少約10重量％的總的葉黃素，所述總的葉黃素 的至少約75重量％為反式-隱黃素。
[0075] 在一些實施方式中，濃縮物包含至少約40重量％的總的葉黃素，所述總的葉黃素 的至少約90重量％為反式-隱黃素。
[0076] 在某些實施方式中，濃縮物包含至少約80重量％的總的葉黃素，所述總的葉黃素 的至少約98重量％為反式-隱黃素。
[0077] 天然來源
[0078] 植物材料源自包括但是不限于水果和蔬菜的來源。在本發(fā)明的一些實施方式中， 植物材料源自辣椒屬。辣椒屬（Capsicum)為一種有花的植物屬，其包括辣椒（pepper)的一 些變種，例如但是不限定于紅辣椒（redpepper)，該詞"辣椒屬"（capsicum)在世界的一些 地方，當提及辣椒（pepper)時，也可以與pepper互換使用。此處記載的辣椒屬（capsicum) 的含油樹脂也包括紅辣椒（paprika)的含油樹脂。
[0079] 劑量和施用
[0080] 本發(fā)明的富含隱黃素的濃縮物可以被制為以下劑型，其包括但是不限于以下 劑型：球狀劑（beadlets)、微囊化的粉末劑、油混懸劑、液體分散劑、膠囊劑、小丸劑、軟膏 劑、軟膠囊劑、片劑、咀嚼片劑或洗劑/液體制劑。本發(fā)明富含隱黃素的濃縮物也可以 被提供為食品或飼料（包括液體或固體的）組合物。因此，設想合適的遞送方法包括但是 不限于□服的、腸胃外的、皮下的、靜脈內(nèi)的、肌肉內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、經(jīng)皮的、顱內(nèi)的、或頰部 的施用。
[0081] 包含本發(fā)明的富含反式-隱黃素的濃縮物的組合物包含一種或多種合適的藥 學可接受的成分或食品級別的成分，例如但不限于載體、粘合劑、穩(wěn)定劑、賦形劑、稀釋劑、 pH緩沖劑、崩解劑、增溶劑和等滲劑。
[0082] 本發(fā)明的組合物可以包括"治療有效量"或"預防有效量"的富含反式_隱黃 素的濃縮物。"治療有效量"指的是這樣的量，其在必需的時間段內(nèi)和劑量對于達到期望的 治療效果是有效的，例如在治療方法中或用于這些方法的藥學組合物中。治療有效的量可 以根據(jù)因素例如個體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和體重而改變。治療有效的量也為這樣的一種 量，在這種量上治療有益的效果大于組合物的任何有毒的或有害的效果。"預防有效的量" 指的是這樣的量，其在必需的時間段內(nèi)和劑量對于達到期望的預防效果是有效的。典型地， 因為預防劑量在疾病之前或疾病的較早期，或確定需要治療的病癥時用于個體，該預防有 效量將少于治療有的量。
[0083] 對施用本發(fā)明的富含反式-0-隱黃素的濃縮物的有用的劑量可以在以下的范 圍中，例如，約〇?〇〇〇lmg/kg至約10mg/kg、約0? 001mg/kg至約1. Omg/kg,和更通常的約 0? 01mg/kg至約0? 5mg/kg、約0? 01mg/kg至約0? lmg/kg、約0? 01mg/kg至約0? 05mg/kg、約 0. 01mg/kg至約0. 025mg/kg、約0. 01mg/kg至約0. 2mg/kg,或約0. 05mg/kg至約5mg/kg、約 0? 05mg/kg至約1. Omg/kg、或約0? 05mg/kg至約0? lmg/kg服用者的體重。例如，劑量可以為 約0. 005mg/kg體重、約0. 01mg/kg體重、約0. 05mg/kg體重、約0. lmg/kg體重、約1. Omg/kg 體重，或約l〇mg/kg體重或在約0? 001-1. Omg/kg的范圍內(nèi)，優(yōu)選至少0? 005mg/kg。在上述范 圍內(nèi)的中間劑量也意欲在本發(fā)明范圍內(nèi)（例如，約〇?〇〇2mg/kg、約0? 025mg/kg、約0? 05mg/ kg、約0? 075mg/kg、約0? lmg/kg、約0? 2mg/kg、約2mg/kg,等）。受試者可以每日攝取這些 劑量，或者每天、隔一天一次、每周或根據(jù)經(jīng)驗分析確定的其他時間表被給予這些劑量。示 范性的治療使得在延長的時間段例如至少6個月施用多重劑量。
[0084] 可以調(diào)整劑量方案以提供最佳的期望的響應（例如，治療的或預防的響應）。例 如，可以施用一個快速推注劑，可以隨時間施用幾個分份劑量或可以根據(jù)治療情況的緊急 性所表明的相應地減少或增加劑量。將腸胃外的組合物制備為容易施用的單位劑型是特別 有益的，以及本文所使用的單位劑型的均一性指的是物理分離的單位，其適合作為單一劑 量用于待治療的哺乳動物受試者，每單位包含預定量的活性化合物和所需的藥物載體，所 述的預定量經(jīng)計算產(chǎn)生期望的治療效果。本發(fā)明的單位劑型的規(guī)格由以下決定且直接根據(jù) 以下：(a)本發(fā)明的富含反式-0-隱黃素的濃縮物的獨特特征和待達到的特別的治療或預 防的效果，和（b)本發(fā)明的富含反式-0-隱黃素的濃縮物的配制領域中的固有的、對于哺 乳動物受試者的治療敏感性的限制。本發(fā)明的個體或哺乳動物受試者可以包括人類和動物 受試者，所述動物受試者包括家養(yǎng)動物、寵物和農(nóng)場養(yǎng)殖的魚。
[0085] 方法
[0086] 本發(fā)明提供從植物材料中制備富含0 _隱黃素的濃縮物的方法，所述濃縮物包含 約10-80重量％的總的葉黃素，所述總的葉黃素的約75-98重量％為反式-隱黃素，剩 余的包括玉米黃素、反式-辣椒紅、胡蘿卜素和微量的其他類胡蘿卜素，作為營養(yǎng)補充 劑適用于人類攝取，所述方法包括：
[0087] a)將含油樹脂中的葉黃素酯與脂肪醇溶劑混合；
[0088] b)在升高的溫度下將存在于植物材料的含油樹脂中的葉黃素酯用堿皂化；
[0089] c)除去脂肪醇溶劑，然后將水加入以得到稀釋的生成混合物；
[0090] d)將稀釋的有機酸加入至稀釋的生成混合物中，以形成水層和沉淀的葉黃素物 質(zhì)；
[0091] e)除去水層，并將沉淀的葉黃素物質(zhì)用極性溶劑洗滌；
[0092] f)將沉淀的葉黃素物質(zhì)干燥以獲得粗制的葉黃素物質(zhì)；
[0093] g)將粗制的葉黃素物質(zhì)用非-極性溶劑洗滌，并將非-極性溶劑洗滌物濃縮以得 到濃縮的粗制的葉黃素物質(zhì)；
[0094] h)將濃縮的粗制的葉黃素物質(zhì)轉(zhuǎn)移至硅膠柱，并用非-極性溶劑洗滌；
[0095] i)將柱用非-極性溶劑和極性溶劑的混合物洗脫，并將洗脫液濃縮以獲得富含反 式-0 _隱黃素的葉黃素濃縮物；
[0096] j)將富含反式_ 0 _隱黃素的濃縮物與脂肪醇混合，然后冷卻；和
[0097] k)過濾和干燥富含反式_隱黃素的葉黃素濃縮物以獲得純化的反式_隱黃 素的濃縮物。
[0098] 在某些實施方式中，植物材料的含油樹脂中的葉黃素酯以約2-12重量％、約4-10 重量％，或約6-8重量％存在。
[0099] 在某些實施方式中，脂肪醇包括源自脂族的、非芳族的烴片段，且選自乙醇、甲醇、 異丙醇，和其混合物。在一些實施方式中，脂肪醇為乙醇。
[0100] 在某些實施方案中，含油樹脂與醇的比例在約1:0. 25至約1:1重量/體積的范圍 中。在一些實施方式中，該比例為約1:1、約1:0. 75,或約1:50。
[0101] 在某些實施方式中，堿為堿金屬的可溶性氫氧化物，所述堿金屬包括鋰、鈉、鉀、 銣，或銫，所述堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀和其混合物。在一些實施方式中，堿為氫氧化鈉。 在其他的實施方式中，堿為氫氧化鉀。
[0102] 在某些實施方式中，含油樹脂與堿的比例在約1:0. 25至約1:0. 5重量/重量的范 圍中。在一些實施方式中，該比例為約1:0.25。
[0103] 在某些實施方式中，用于皂化的升高的溫度高于室溫。在一些實施方式中，該升高 的溫度在約65至約95°C、約70至約90°C、約75至約85°C、約75至約80°C、或約80至約 85°C的范圍中。
[0104] 在某些實施方式中，步驟（c)中用來形成稀釋的生成混合物所加入的水為含油樹 脂的約2至約10倍、約3至約9倍、約4至約8倍或約5至約7倍（重量/重量）。在一些 實施方式中，加入的水為含油樹脂的約4倍、約5倍或約6倍（重量/重量）。在一些實施 方式中，加入的水為含油樹脂的約5倍（重量/重量）。
[0105] 在某些實施方式中，在本發(fā)明方法中使用的稀釋的有機酸為乙酸或磷酸。在某些 實施方式中，稀釋的有機酸為有機酸的約20 %至約50 %的溶液。在一些實施方式中，稀釋 的有機酸為有機酸的約20%至約30%、約30%至約40%、約40%至約50%、約20%至約 40 %、約30 %至約50 %。在一些實施方式中，稀釋的有機酸為有機酸的約20 %、約25 %、約 30%、約 35%、約 40%、約 45%，或約 50%。
[0106] 在某些實施方式中，用于洗滌沉淀的葉黃素物質(zhì)的極性溶劑為水。
[0107] 在某些實施方式中，用于本發(fā)明方法中的非-極性溶劑選自己烷、戊烷、庚烷，和 其混合物。
[0108] 在某些實施方式中，粗制的葉黃素物質(zhì)和非-極性溶劑的比例為約1:5至約1:20 重量/體積，約7. 5至約17. 5重量/體積，或約1:10至約1:15重量/體積。
[0109] 在某些實施方式中，濃縮的粗制的葉黃物物質(zhì)和非-極性溶劑的比例為約1:2至 約1:14重量/體積、約1:3至約1:12重量/體積、約1:4至約1:10重量/體積，或約1:5 至約1:8重量/體積。
[0110] 在某些實施方式中，通過蒸餾上述步驟（h)中的非-極性溶劑洗滌物獲得胡蘿卜 素。在某些實施方式中，胡蘿卜素濃縮物為胡蘿卜素。
[0111] 在某些實施方式中，用于本發(fā)明中的極性溶劑選自丙酮、戊酮，和其混合物。
[0112] 在某些實施方式中，上述步驟（i)中的非-極性溶劑和極性溶劑的比例為約90:10 至約99:1、約92. 5至約99:1、約94:6至約98:2,或約95:5至約98:2 (體積/體積）。
[0113] 在某些實施方式中，用于冷卻富含反式隱黃素的葉黃素濃縮物的溫度為約 5°C至約15°C或約7. 5°C至約12. 5°C。在一些實施方式中，該溫度為約7°C、約8°C、約9°C、 約 10°C、約 11°C，或約 12°C。
[0114] 在某些實施方式中，富含反式-0-隱黃素的葉黃素濃縮物包含至少約10重量％ 的總的葉黃素，反式_ 0 _隱黃素的含量為所述的總的葉黃素的至少約75重量％。
[0115] 在某些實施方式中，純化的反式_隱黃素濃縮物包含至少約40重量％的總的 葉黃素，反式_ 0 _隱黃素的含量為所述的總的葉黃素的至少約90重量％。
[0116] 在某些實施方式中，上述的方法另外地包括步驟（1):將純化的反式-0-隱黃 素的濃縮物用非-極性溶劑和酯溶劑的混合物洗滌，并冷卻來沉淀以獲得高純度的反 式 _ _隱黃素晶體。
[0117] 在某些實施方式中，步驟（1)的高純度的反式隱黃素晶體包含至少約80重 量％的總的葉黃素，反式_隱黃素的含量為所述的總的葉黃素的至少約98重量％。
[0118] 在某些實施方式中，步驟（1)的酯溶劑為乙酸乙酯和步驟（1)的非-極性溶劑為 己燒。
[0119] 在某些實施方式中，步驟（1)的非-極性溶劑和酯溶劑的比例為約70:30至約 90:10、約80:20至約90:10、約75:25至約95:5,或約85:15至約95:5 (體積/體積）。
[0120] 在某些實施方式中，上述步驟（1)中的冷卻溫度為約_5°C至約-15°C或約-7. 5°C 至約-12. 5°C。在一些實施方式中，上述步驟（1)的冷卻溫度為約-7°C、約-8°C、約-9°C、 約-10°C、約-11°C、約-12°C。
[0121] 在某些實施方式中，總的葉黃素包含選自以下的副產(chǎn)物：玉米黃素、反式-辣椒 紅、胡蘿卜素、微量的其他類胡蘿卜素，和其任何組合。在一些實施方式中，微量的其 他類胡蘿卜素包括辣椒玉紅素或紫黃質(zhì)。
[0122] 在某些實施方式中，植物材料選自水果、蔬菜和其混合物。在一些實施方式中，植 物材料來自辣椒屬。
[0123] 在某些實施方式中，本發(fā)明方法中使用的溶劑通過包括但不限于真空蒸發(fā)的方法 除去。在某些實施方式中，將葉黃素酯的皂化反應在攪拌下進行至少2小時。在一些實施 方式中，將該皂化反應進行約2至約20小時、約2至約15小時、約2至約10小時、約3至 約8小時、約3至約6小時，或約3至5小時。
[0124] 在一些實施方式中，本發(fā)明方法中使用的非-極性烴溶劑為己烷或低沸點烴（例 如戊烷或庚烷）的混合物。在一些實施方式中，用于皂化的脂肪醇為乙醇，和使用的堿選自 氫氧化鈉或氫氧化鉀。
[0125] 在一些實施方式中，將包含葉黃素濃縮物的硅膠柱用非-極性溶劑洗脫以除去胡 蘿卜素來獲得0 _隱黃素的濃縮物。
[0126] 在一些實施方式中，本發(fā)明的方法包括進一步地用非-極性溶劑：極性溶劑洗滌 柱，和將洗滌物濃縮產(chǎn)生0 _隱黃素的濃縮物，該濃縮物包含約10重量％的總的葉黃素，反 式-0-隱黃素的含量為所述總的葉黃素的至少約75重量％和剩