:化合物1的合成
[0112] 在圓底燒瓶中，加入適量2-乙基乙酰乙酸乙酯和乙醇，0 °C下攪拌一段時間，備 用。取間甲氧基苯胺加入到圓底燒瓶中，接著加入水和濃鹽酸，攪拌，加入亞硝酸鈉。，攪 拌15min。接著加入乙酸鈉，調(diào)節(jié)pH，隨后將其加入到上述2-乙基乙酰乙酸乙酯和乙醇溶 液中，接著加入氫氧化鉀和冰塊，調(diào)節(jié)pH之間，攪拌至反應(yīng)完全，萃取，干燥，旋干得深色液 體。在70°C下將深色液體滴入乙醇的氯化氫溶液中，滴完回流2h。反應(yīng)完成后旋掉乙醇， 萃取，干燥，旋干。產(chǎn)物過硅膠柱，
[0113] 得到的產(chǎn)物溶于乙醇中，加入氫氧化鉀，回流，反應(yīng)結(jié)束旋掉乙醇，加入稀鹽酸調(diào) 至有沉淀析出，抽濾，洗滌，烘干得到固體。將固體溶于喹啉中，加入銅粉，氦氣保護下240°C 反應(yīng)3h。反應(yīng)完成后冷卻，調(diào)pH，萃取，洗滌，干燥，旋干。產(chǎn)物過硅膠柱，得0.62g棕色固 體即為化合物1.
[0114] 實施例2:化合物2的合成
[0115] 取苯甲酰嗎啡啉與P0CV混合加入到圓底燒瓶中，室溫攪拌均勻至全部溶解，在室 溫下反應(yīng)；取吡咯滴加入反應(yīng)體系中反應(yīng)；待反應(yīng)完全，將體系至于冰浴條件下，向其中滴 加過量的飽和Na 2C〇d9水溶液，至沒有氣泡放出；萃取，干燥；旋干，得到白色固體。然后稱 取CuCl2 ? 2H20溶解于CH3CN中，向體系中加入苯甲酰吡咯，升溫，待反應(yīng)完全，冷卻，加入 H 2S04溶液，攪拌，萃取，干燥，得到化合物2。
[0116] 實施例3:化合物B0DIPY的合成
[0117] 稱取化合物2溶于DCM中，向其中加入P0C13，室溫攪拌。將化合物1溶于少量DCM 后加入上述體系。惰性氣體存在條件下，反應(yīng)2h。反應(yīng)完成后，加入飽和的碳酸氫鈉調(diào)節(jié)溶 液pH至中性，萃取，水洗，干燥，旋干，將中間物重新溶于適量DCM中，加入Et 3N攪拌5min，冰 浴條件下加入BF3 ? Et20，恢復至室溫，繼續(xù)均勻攪拌3h，二氯甲烷萃取，水洗，合并有機相， 干燥后旋干。過硅膠柱，得到紫黑色固體B0DIPY。
[0118] 實施例4:化合物M-B0DIPY-GSH的合成
[0119] 取適量B0DIPY溶于乙腈中，同時取適量的GSH溶于水中，加入上述體系，反 應(yīng)5h，反應(yīng)完畢，真空旋干溶劑，柱層析，得產(chǎn)物M-BODIPY-GSH A NMR(CD30D，400MHz): S 7. 61-7. 58 (m，3H)，7. 48-7. 46 (m，2H)，7. 43-7. 41 (d，1H)，7. 05 (s，1H)，6. 96-6. 95 (d，1H)， 6. 77-6. 75 (d，1H)，6. 68-6. 66 (dd，1H)，4. 57-4. 53 (m，1H)，3. 94 (s，3H)，3. 76-3. 73 (m，2H)， 3. 59-3. 57 (t，1H)，3. 07-3. 02 (m，2H)，2. 62-2. 57 (m，2H)，2. 17-2. 15 (m，2H)，1. 77 (s，3H) ;13C NMR(CD30D，100MHz) : S 193.38,189.75,188.86,186.59,182.92,179.29,175. 34,173. 09， 166. 71，156. 96,147. 92,134. 30,132. 84,130. 66,130. 23,127. 34,117.62,115.06,108.88， 95. 17,64. 34,60. 76,54. 56,53. 76,44. 80,30. 80,30. 36,23. 79,13. 02 ；HRMS (ESI) calcd for C31H32BF2N5Na07S ：690. 1981, Found ：690. 1967[M+Na]+.
[0120] 實施例5 :化合物3的合成
[0121] 取適量BODIPY溶于干燥的DCM中，冰浴條件下加入適量的BBr 3反應(yīng)4h，反應(yīng)完畢 加乙醇淬滅，然后DCM萃取，柱層析得化合物3
[0122] 實施例6 :化合物C-B0DIPY-GSH的合成
[0123] 取化合物3溶于干燥的乙腈中，加入適量TEA，然后加入對硝基乙基碳酸苯脂， 反應(yīng)lh，TLC檢測反應(yīng)完全，然后將適量的GSH溶于適量的水中，加入上述反應(yīng)體系中， 反應(yīng)5h，反應(yīng)完全后，真空旋干，柱層析得產(chǎn)物C-BODIPY-GSHA NMR(CD30D，400MHz): S 7. 61-7. 58 (m，3H)，7. 56-7. 53 (d，1H)，7. 49-7. 46 (m，2H)，7. 36 (s，1H)，7. 11-7. 09 (d，1H)， 6. 92-6. 91 (d，1H)，6. 85-6. 82 (dd，1H)，4. 54-4. 51 (m，1H)，4. 35-4. 29 (q，2H)，3. 85-3. 80 (m， 2H)，3. 65-3. 62 (t，1H)，2. 87-2. 82 (m，2H)，2. 61-2. 50 (m，2H)，2. 20-2. 05 (m，2H)，1. 78 (s， 3H)，1.40-1.36 (t，3H) ;13C 匪R(CD30D，100MHz) :S 200.66，181.05，176.26，175.46， 175. 32,174. 61，174. 21，173. 91，172. 41，171. 54,169. 94,153. 52,152. 07,130. 65,129. 93， 123. 30, 123. 05, 122. 21，114. 75, 113. 76,79. 86,59. 65, 57. 20, 54. 04, 52. 91，43. 01， 33. 04,27. 78,26. 78,14. 53,11. 96 ；HRMS (ESI) calcd for C33H35BF2N509S ： 726. 2217, Found： 726. 2221 [M+H]+.
[0124] 效果例：
[0125]參看圖1化合物M-B0DIPY-GSH在PBS緩沖溶液（pH = 7. 4)中，當存在y-谷酰 胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)時，探針的光物理性質(zhì)變化過程；圖（a)紫外吸收光譜圖，圖（b)熒光發(fā)射 光譜圖。
[0126] 由圖中得出：化合物M-B0DIPY-GSH在沒有加入y -谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)時的情況 下，其在緩沖溶液中的紫外吸收波長在578nm，在601nm處能產(chǎn)生微弱的熒光。而加入y -谷 酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)后，化合物M-B0DIPY-GSH與y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)在30min之內(nèi)反應(yīng) 完全，紫外吸收出現(xiàn)了較大的藍移，由原來的578nm藍移到510nm處，并在528nm處產(chǎn)生等 吸收點，如圖la ;此時熒光不僅發(fā)生藍移，而且在582nm處，強度也顯著增強（圖lb)。由此 可以看出M-B0DIPY-GSH能夠?qū)-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)進行特異性識別并具有很高的靈 敏性。
[0127] 參看圖2是化合物M-B0DIPY-GSH對于其它生理環(huán)境下的熒光干擾變化圖。
[0128] 從圖中我們可以發(fā)現(xiàn)：M-B0DIPY_GSH在PBS緩沖液體系中當含有10%胎牛血清， 10%人血漿，膠原蛋白水解酶，磷酸酯酶，肽酶以及糖化酶等條件下時，我們的探針仍然表 現(xiàn)的很穩(wěn)定，光學性質(zhì)基本沒有變化，這說明我們的探針具有很強的抗干擾能力，分子的特 異性識別非常好。
[0129] 參看圖3是化合物M-B0DIPY-GSH對于不同細胞以及加不同量抑制劑的激光共聚 焦成像圖。
[0130] 從圖中我們可以看出：對于缺少Y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的細胞，細胞成像的黃色 通道和紅色通道比值ratio在0. 4左右，也就是熒光仍然以紅色的形式存在；而對于y-谷 酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)過表達的癌細胞，它們在兩個通道的ratio比值則為1. 4左右，這說明， 我們的探針與T-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)作用后探針已經(jīng)主要以黃色熒光的形式存在，這說 明我們設(shè)計的探針在生物成像方面得到了很好的應(yīng)用。
[0131] 參看圖 4,5,6,7 為 M-B0DIPY-GSH 和 C-B0DIPY-GSH 的表征圖。
[0132] 本發(fā)明所要求保護的熒光探針經(jīng)實驗證明均具有類似上述效果例所述的功能，即 本發(fā)明提供的檢測癌細胞中y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的熒光探針和化合物R-B0DIPY-GSH; 其中化合物R-