飾位點做進一步研究。
[0061] 所述R取代基為甲氧基。
[0062] 所述R取代基為碳酸脂基團。
[0063] 一種檢測癌細胞中y -谷酰胺轉(zhuǎn)移酶熒光探針的制備方法，包括如下步驟：
[0064] (1)以乙基乙酰乙酸乙酯為原料經(jīng)成環(huán)、水解、脫羧、還原得到吲哚部分；
[0065] (2)以苯甲酰氯為原料經(jīng)酰化、縮合、叉硼反應(yīng)得到苯甲酰吡咯氯；
[0066] (3)所述的吲哚部分與苯甲酰吡咯氯反應(yīng)生成新型B0DIPY ;
[0067] (4)合成的新型B0DIPY通過脫甲基再修飾，再與谷胱甘肽（GSH)作用得到化合物 C-B0DIPY-GSH；
[0068]
[0069] 其中：R基團為任意基團，可通過變換R基團達到調(diào)節(jié)光物理性質(zhì)的作用，同時可 作為修飾位點做進一步研究。
[0070] 所述R取代基為甲氧基。
[0071] 所述R取代基為碳酸脂基團。
[0072] 所述化合物M-B0DIPY-GSH和C-B0DIPY-GSH的合成路線如下：
[0073]
[0074] (a，b)DCM，BF3 ? 0Et2, TEA;(c)GSH;(d)BBr3;(e，f)對硝基乙基碳酸苯脂，GSH
[0075] 本發(fā)明進一步提供一類靶向檢測癌細胞中y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的熒光探針在 檢測癌細胞中y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的應(yīng)用。
[0076] 本發(fā)明進一步提供一類靶向檢測癌細胞中y_谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的化合物在檢 測癌細胞中y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的應(yīng)用。
[0077] -種靶向檢測癌細胞中y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的熒光探針的制備方法，其具體 工藝流程為：
[0078] (1)化合物1的合成
[0079] 在圓底燒瓶中，加入0.2mol 2-乙基乙酰乙酸乙酯，以乙醇為溶劑，0°C下攪拌時 間為5~60min，備用；取0. 2mol間甲氧基苯胺加入到圓底燒瓶中，接著加入100ml的水和 50ml的濃鹽酸，攪拌，加入0? 22mol的亞硝酸鈉，攪拌15min ;接著加入0? 2mol的乙酸鈉，調(diào) 節(jié)pH，隨后將其加入到上述2-乙基乙酰乙酸乙酯和乙醇溶液中，接著加入0. 18mol的氫氧 化鉀和lmol的冰塊，調(diào)節(jié)pH之間，攪拌至反應(yīng)完全，萃取，干燥，旋干得深色液體；在70°C 下將深色液體滴入乙醇的氯化氫溶液中，滴完回流2h ;反應(yīng)完成后旋掉乙醇，萃取，干燥， 旋干；產(chǎn)物過硅膠柱；得到的產(chǎn)物溶于乙醇中，加入氫氧化鉀，回流，反應(yīng)結(jié)束旋掉乙醇，加 入稀鹽酸調(diào)至有沉淀析出，抽濾，洗滌，烘干得到固體。將固體溶于喹啉中，加入銅粉脫羧反 應(yīng)，氦氣保護下240°C反應(yīng)3h ;反應(yīng)完成后冷卻，調(diào)pH，萃取，洗滌，干燥，旋干；產(chǎn)物過硅膠 柱，得0. 62g棕色固體即為化合物1 ;
[0080] (2)化合物2的合成
[0081] 取02729mol苯甲酰嗎啡啉與0? 2729mol P0C13混合加入到圓底燒瓶中，室溫攪拌 均勻至全部溶解，在室溫下反應(yīng)；取吡咯滴加入反應(yīng)體系中反應(yīng)；待反應(yīng)完全，將體系至于 冰浴條件下，向其中滴加過量的飽和似 2(：03的水溶液，至沒有氣泡放出；萃取，干燥；旋干， 得到白色固體。然后稱取0. (Mmol CuCl2 ? 2H20溶解于CH3CN中，向體系中加入0. 02mol苯 甲酰吡略，升溫，待反應(yīng)完全，冷卻，加入H2S04溶液，攪拌，萃取，干燥，得到化合物2。
[0082] (3)化合物B0DIPY的合成
[0083] 稱取0. 2433mmol化合物2溶于DCM中，向其中加入0. 97mmol P0C13，室溫攪拌；將 0. 29mmol化合物1溶于DCM后加入上述體系；惰性氣體存在條件下，反應(yīng)2h ;反應(yīng)完成后， 加入飽和的碳酸氫鈉調(diào)節(jié)溶液pH至中性，萃取，水洗，干燥，旋干，將中間物重新溶于適量 DCM中，加入5ml Et3N攪拌5min，冰浴條件下加入5ml BF3 ? Et20，恢復(fù)至室溫，繼續(xù)均勻攪 拌3h，二氯甲烷萃取，水洗，合并有機相，干燥后旋干；過硅膠柱，得到紫黑色固體B0DIPY。
[0084] (4)化合物 M-B0DIPY-GSH 的合成
[0085] 取0. 035mmol B0DIPY溶于乙腈中，同時取0. 35mmol GSH溶于水中，加入上述體 系，反應(yīng)5h，反應(yīng)完畢，真空旋干溶劑，柱層析，得產(chǎn)物M-B0DIPY-GSH ;
[0086] (5)化合物3的合成
[0087] 取0? lmmol B0DIPY溶于干燥的DCM中，冰浴條件下加入0? 84mmol BBr3反應(yīng)24h， 反應(yīng)完畢加乙醇淬滅，然后DCM萃取，柱層析得化合物3 ;
[0088] (6)化合物C-B0DIPY-GSH的合成
[0089] 取0. 2618mmol化合物3溶于干燥的乙腈中，加入2ml TEA，然后加入對硝基乙基 碳酸苯脂，反應(yīng)lh，TLC檢測反應(yīng)完全，然后將0. 32mmol GSH溶于水中，加入上述反應(yīng)體系 中，反應(yīng)5h，反應(yīng)完全后，真空旋干，柱層析得產(chǎn)物C-B0DIPY-GSH。
[0090] 本發(fā)明提供的用于靶向檢測癌細胞中谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的化合物 R-B0DIPY-GSH，如下結(jié)構(gòu)：
[0091]
[0092] 其中：R基團為任意基團，可通過變換R基團達到調(diào)節(jié)光物理性質(zhì)的作用，同時可 作為修飾位點做進一步研究。
[0093]術(shù)語：
[0094] Absorption(a.u.)為吸光度值。
[0095] Fluoresence intensity (a. u.)為焚光強度。
[0096] B0DIPY分子為氟硼二吡咯（B0DIPY)。
[0097] M-B0DIPY-GSH為圖中所示結(jié)構(gòu)；
[0098] C-B0DIPY-GSH為圖中所示結(jié)構(gòu)；
[0099] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的積極效果是：
[0100] 本發(fā)明提供的用于靶向檢測癌細胞中y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的熒光探針可用 于檢測癌細胞中y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)，克服了現(xiàn)有技術(shù)中用于檢測癌細胞中y-谷酰 胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的諸多缺陷；本發(fā)明熒光探針利用了在熒光染料上創(chuàng)造性的嫁接谷胱甘肽 (GSH)來作為丫-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的底物，不僅大大提高了熒光染料的水溶性，解決了 傳統(tǒng)的熒光探針?biāo)苄圆畹膯栴}，而且谷胱甘肽（GSH)作為y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的反 應(yīng)底物，可以提高探針的高選擇性；本發(fā)明所述的熒光探針可以應(yīng)用于富含GGT的癌細胞 的檢測。本發(fā)明提供的熒光探針對Y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)具有特異選擇性，具有非常高 的靈敏性。其制備方法比較簡單易操作、環(huán)境友好、成本低廉、產(chǎn)率較高等優(yōu)點。
[0101] 本發(fā)明提供的靶向檢測癌細胞中y_谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)的化合物 R-B0DIPY-GSH，可用于檢測癌細胞中y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)，從而特異性檢測富含GGT的 癌細胞的檢測；化合物R-B0DIPY-GSH對y-谷酰胺轉(zhuǎn)移酶（GGT)選擇性好，靈敏度高。 【【附圖說明】】
[0102] 圖1是化合物M-B0DIPY-GSH在PBS緩沖溶液（pH = 7. 4)中，當(dāng)存在y -谷酰胺 轉(zhuǎn)移酶（GGT)時，探針的光物理性質(zhì)變化過程；
[0103] 圖1(a)紫外吸收光譜圖，圖1 (b)熒光發(fā)射光譜圖；
[0104] 圖2是化合物M-B0DIPY-GSH對于其它生理環(huán)境的熒光干擾變化圖；
[0105] 圖3是化合物M-B0DIPY-GSH對于不同細胞的激光共聚焦成像圖；
[0106] 圖4是化合物M-B0DIPY-GSH的氫譜，氘代試劑為CD30D;
[0107] 圖5是化合物M-B0DIPY-GSH的高分辨率質(zhì)譜圖HRMS (m/z);
[0108] 圖6是化合物C-B0DIPY-GSH的氫譜，氘代試劑為CD30D ;
[0109] 圖7是化合物C-B0DIPY-GSH的高分辨率質(zhì)譜圖HRMS (m/z)。 【【具體實施方式】】
[0110] 為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實施例進一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的 內(nèi)容不僅僅局限于下面的實施例。
[0111] 實施例1