加入800ml水，煮沸30min，用紗布過濾，濾液冷卻后加入20g葡萄糖，定容至1L，120°C下滅菌15min。在種子培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)，在溫度30°C、轉(zhuǎn)速130r/min的搖床中培養(yǎng)48h，振蕩培養(yǎng)后得到種子液。
[0047](2)按5%的接入量接入步驟⑴中得到的種子液到發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，在溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為130r/min的搖床中發(fā)酵70h。發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基的配方及制作方法為:稱取硫酸銨2g，胰蛋白胨0.4g，吐溫-80ImL,硫酸鎂0.3g，硫酸錳0.3g，氯化鈷0.0lg,氯化鈣0.3g，磷酸二氫鉀1.0g，乳糖3g，輻照水稻秸桿粉5g，加入IL水，120°C下滅菌15min。
[0048](3)將新鮮碳源通過無菌操作加入步驟(2)后的發(fā)酵體系中，在30°C下繼續(xù)發(fā)酵48ho新鮮碳源制作過程為:稱取干甜葉菊渣4g和輻照水稻稻桿粉4g，加入50ml水，100°C下保持30min。
[0049]上述步驟用到的輻照水稻秸桿粉的制作過程為:將干燥的水稻秸桿粉碎至40目，充氧密封包裝，包裝袋中氧氣濃度為80%，用6°Co-y射線輻照處理，處理劑量約為10kGy。
[0050](4)發(fā)酵結(jié)束后，將步驟(3)后獲得的發(fā)酵液進(jìn)行離心分離，在4000r/min離心機(jī)上離心lOmin，得到的上清液即為高產(chǎn)纖維素酶酶液。
[0051]對比例:
[0052]一種利用綠色木霉(Trichoderma viride)產(chǎn)纖維素酶的方法，包括以下步驟:
[0053](I)無菌環(huán)境下將綠色木霉的孢子接種于PDA平板培養(yǎng)基培養(yǎng)，于30°C下振蕩培養(yǎng)96h，然后挑取一環(huán)接種于種子培養(yǎng)基中。種子培養(yǎng)基的制作過程為:將200g馬鈴薯切成小塊加入800ml水，煮沸30min，用紗布過濾，濾液冷卻后加入20g葡萄糖，定容至1L，120°C下滅菌15min。在種子培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)，在溫度30°C、轉(zhuǎn)速130r/min的搖床中培養(yǎng)48h，振蕩培養(yǎng)后得到種子液。
[0054](2)按5%的接入量接入步驟(I)中得到的種子液到發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，在溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為130r/min的搖床中發(fā)酵136h。發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基的配方及制作方法為:稱取硫酸銨2g，胰蛋白胨0.4g，吐溫-801mL，硫酸鎂0.3g，硫酸錳0.3g，氯化鈷0.0lg,氯化鈣0.3g，磷酸二氫鉀1.0g，水稻稻桿粉20g，加入IL水，120°C下滅菌15min。
[0055](3)發(fā)酵結(jié)束后，將步驟(2)后獲得的發(fā)酵液進(jìn)行離心分離，在4000r/min離心機(jī)上離心lOmin，得到的上清液即為纖維素酶酶液。
[0056]通過本實施例1獲得的濾紙酶活力為279FPU/ml，而采用對比例的步驟獲得濾紙酶活力為188FPU/ml，本發(fā)明獲得的濾紙酶活力較對照提高了約48%。
[0057]實施例2:
[0058]—種如圖1所示的利用里氏木霉(Trichoderma reesei)高產(chǎn)纖維素酶的方法，包括以下步驟:
[0059](I)無菌環(huán)境下將里氏木霉的孢子接種于PDA平板培養(yǎng)基培養(yǎng)，于28°C下振蕩培養(yǎng)96h，然后挑取一環(huán)接種于種子培養(yǎng)基中。種子培養(yǎng)基的制作過程為:將200g馬鈴薯切成小塊加入800ml水，煮沸30min，用紗布過濾，濾液冷卻后加入20g葡萄糖，定容至1L，120°C下滅菌15min。在種子培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)，在溫度28°C、轉(zhuǎn)速130r/min的搖床中培養(yǎng)48h，振蕩培養(yǎng)后得到種子液。
[0060](2)按4%的接入量接入步驟⑴中得到的種子液到發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，在溫度為28°C、轉(zhuǎn)速為130r/min的搖床中發(fā)酵72h。發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基的配方及制作方法為:稱取硫酸銨2g，胰蛋白胨0.4g，吐溫-801mL，硫酸鎂0.3g，硫酸錳0.3g，氯化鈷0.015g，氯化鈣0.3g，磷酸二氫鉀1.0g，乳糖4g，輻照水稻秸桿粉6g，加入IL水，120°C下滅菌15min。
[0061](3)將新鮮碳源通過無菌操作加入步驟(2)后的發(fā)酵體系中，在28°C下繼續(xù)發(fā)酵48h。新鮮碳源制作過程為:稱取干甜葉菊渣4.5g和輻照水稻秸桿粉4g，加入40ml水，100 °C 下保持 20min。
[0062]上述步驟用到的輻照水稻秸桿粉的制作過程為:將干燥的水稻秸桿粉碎至40目，充氧密封包裝，包裝袋中氧氣濃度為90%，用6°Co-y射線輻照處理，處理劑量約為80kGy。
[0063](4)發(fā)酵結(jié)束后，將步驟(3)后獲得的發(fā)酵液進(jìn)行離心分離，在4000r/min離心機(jī)上離心lOmin，得到的上清液即為高產(chǎn)纖維素酶酶液。
[0064]對比例:
[0065]—種利用里氏木霉(Trichoderma reesei)產(chǎn)纖維素酶的方法，包括以下步驟:
[0066](I)無菌環(huán)境下將里氏木霉的孢子接種于PDA平板培養(yǎng)基培養(yǎng)，于30°C下振蕩培養(yǎng)96h，然后挑取一環(huán)接種于種子培養(yǎng)基中。種子培養(yǎng)基的制作過程為:將200g馬鈴薯切成小塊加入800ml水，煮沸30min，用紗布過濾，濾液冷卻后加入20g葡萄糖，定容至1L，120°C下滅菌15min。在種子培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)，在溫度30°C、轉(zhuǎn)速130r/min的搖床中培養(yǎng)48h，振蕩培養(yǎng)后得到種子液。
[0067](2)按5%的接入量接入步驟(I)中得到的種子液到發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，在溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為130r/min的搖床中發(fā)酵136h。發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基的配方及制作方法為:稱取硫酸銨2g，胰蛋白胨0.4g，吐溫-801mL，硫酸鎂0.3g，硫酸錳0.3g，氯化鈷0.0lg,氯化鈣0.3g，磷酸二氫鉀1.0g，水稻稻桿粉20g，加入IL水，120°C下滅菌15min。
[0068](3)發(fā)酵結(jié)束后，將步驟(2)后獲得的發(fā)酵液進(jìn)行離心分離，在4000r/min離心機(jī)上離心lOmin，得到的上清液即為纖維素酶酶液。
[0069]通過本實施例獲得的濾紙酶活力為261FPU/ml，而采用對比例的步驟獲得的濾紙酶活力僅為169FPU/ml，本發(fā)明獲得的濾紙酶活力較對照提高了約54%。
[0070]實施例3:
[0071]—種如圖1所示的利用康氏木霉(Trichoderma koningi)高產(chǎn)纖維素酶的方法，包括以下步驟:
[0072](I)無菌環(huán)境下將康氏木霉的孢子接種于PDA平板培養(yǎng)基培養(yǎng)，于30°C下振蕩培養(yǎng)96h，然后挑取一環(huán)接種于種子培養(yǎng)基中。種子培養(yǎng)基的制作過程為:將200g馬鈴薯切成小塊加入800ml水，煮沸30min，用紗布過濾，濾液冷卻后加入20g葡萄糖，定容至1L，120°C下滅菌15min。在種子培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)，在溫度30°C、轉(zhuǎn)速130r/min的搖床中培養(yǎng)48h，振蕩培養(yǎng)后得到種子液。
[0073](2)按6%的接入量接入步驟⑴中得到的種子液到發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，在溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為130r/min的搖床中發(fā)酵60h。發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基的配方及制作方法為:稱取硫酸銨2g，胰蛋白胨0.4g，吐溫-80ImL,硫酸鎂0.3g，硫酸錳0.3g，氯化鈷0.02g,氯化鈣0.3g，磷酸二氫鉀1.0g，乳糖3g，輻照水稻秸桿粉5g，加入IL水，120°C下滅菌15min。
[0074](3)將新鮮碳源通過無菌操作加入步驟(2)后的發(fā)酵體系中，在30°C下繼續(xù)發(fā)酵48ho新鮮碳源制作過程為:稱取干甜葉菊渣4g和輻照水稻稻桿粉4g，加入50ml水，100°C下保持30min。
[0075]上述步驟用到的輻照水稻秸桿粉的制作過程為:將干燥的水稻秸桿粉碎至40目，充氧密封包裝，包裝袋中氧氣濃度為90%，用6°Co-y射線輻照處理，處理劑量約為80kGy。
[0076](4)發(fā)酵結(jié)束后，將步驟(3)后獲得的發(fā)酵液進(jìn)行離心分離，在4000r/min離心機(jī)上離心lOmin，得到的上清液即為高產(chǎn)纖維素酶酶液。
[0077]對比例:
[0078]—種利用康氏木霉(Trichoderma koningi)產(chǎn)纖維素酶的方法，包括以下步驟:
[0079](I)無菌環(huán)境下將康氏木霉的孢子接種于PDA平板培養(yǎng)基培養(yǎng)，于30°C下振蕩培養(yǎng)96h，然后挑取一環(huán)接種于種子培養(yǎng)基中。種子培養(yǎng)基的制作過程為:將200g馬鈴薯切成小塊加入800ml水，煮沸30min，用紗布過濾，濾液冷卻后加入20g葡萄糖，定容至1L，120°C下滅菌15min。在種