專利名稱：里氏木霉液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果膠酶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種液體里氏木霉同時(shí)生產(chǎn) 纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果膠酶的方法。
背景技術(shù)：
國(guó)內(nèi)現(xiàn)在多是利用康氏木霉固體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶，發(fā)酵產(chǎn)品中除含有需要 的酶成分外，還會(huì)含有發(fā)酵的原料廢渣、發(fā)酵菌體和雜菌，會(huì)影響到產(chǎn)品在飼料 上的應(yīng)用效果。而國(guó)內(nèi)采用液體發(fā)酵的菌種或技術(shù)，主要是產(chǎn)生一種酶的產(chǎn)品， 除個(gè)別經(jīng)過菌種改良與工藝改變可以同時(shí)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶和木聚糖酶外，無相 關(guān)可以同時(shí)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果膠酶的報(bào)道與技術(shù)。但 是每一種植物的破壁分解，都需要這四種酶的聯(lián)合作用，所以生產(chǎn)一種產(chǎn)品同時(shí) 含有此四種酶對(duì)于植物破壁釋放有效原料十分必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種里氏木霉液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶、木聚糖酶、葡 聚糖酶和果膠酶的方法。
本發(fā)明選用菌種為里氏木霉，誘導(dǎo)物選用微晶纖維素與麩皮，其它培養(yǎng)制劑 為磷酸二氫鉀、檸檬酸鈉和硫酸銨，發(fā)酵制得纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和 果膠酶。
本發(fā)明具體工藝過程是
取種子罐培養(yǎng)基0.5-3%微晶纖維素，0.5_3%麩子，0.3-1%磷酸二氫鉀， 0.1-0.8%檸檬酸鈉，0.2-1%硫酸銨，余量為水，pH值在4.6-5.3之間。
二級(jí)罐培養(yǎng)基0.5-3%微晶纖維素，0.5-3%麩子，0.3-1%磷酸二氫鉀， 0.1-0.8%檸檬酸鈉，0.2-1%硫酸銨，余量為水，pH值在4.6-5.3之間。
發(fā)酵罐培養(yǎng)基2-5%微晶纖維素，1-4%麩子，0.3-1%磷酸二氫鉀，0.1-0.8%檸檬酸鈉，0.2-1%硫酸銨，余量為水，滅菌后pH值在4.6-5.3之間。
在無菌操作下，把斜面種子接入，在12rC下滅菌30分鐘并冷卻至3(TC的 種子罐中，在通風(fēng)量為1:0.2，罐壓0.05Mpa， 3(TC土rC的條件下培養(yǎng)30-48 小時(shí)；經(jīng)移種管路轉(zhuǎn)入到12rC滅菌30分鐘并冷卻到3(TC土rC二級(jí)罐中，在通 風(fēng)量為1:0.2，罐壓0.05Mpa，溫度30。C士rC的條件下培養(yǎng)24小時(shí)左右；經(jīng)移
種管路轉(zhuǎn)入到12rc滅菌30分鐘并冷卻到3o°c 土rc發(fā)酵罐中，在通風(fēng)量l :O. 5，
罐壓0. 05Mpa，溫度30'C士rC的條件下培養(yǎng)100-120小時(shí)，經(jīng)放料管路放入絮 凝罐加入硅藻土助濾劑，在板框壓濾機(jī)進(jìn)行壓濾，清液打入循環(huán)罐進(jìn)入超濾膜濃 縮器進(jìn)行超濾濃縮，把超濾濃縮好的半成品打入緩存罐再進(jìn)行刮板真空濃縮即制 得纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果膠酶。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)里氏木霉可以同時(shí)生產(chǎn)出纖維素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶和果膠 酶四種酶，并且發(fā)酵酶活纖維素酶1600u/ml，葡聚糖酶1400u/ml，木聚糖酶 500 u/ml，果膠酶500 u/ml。各種酶在pH值3. 5-5，溫度30-5(TC條件下可以 同時(shí)發(fā)揮效力分解植物細(xì)胞壁的纖維與半纖維成分。本發(fā)明應(yīng)用在詞料與中藥提 取上，破壞植物細(xì)胞壁，使有效成分得以釋放。本產(chǎn)品為纖維素酶、葡聚糖酶、 木聚糖酶、果膠酶的復(fù)合酶。
具體實(shí)施例方式
取種子罐培養(yǎng)基1%微晶纖維素，1%麩子，0.5%磷酸二氫鉀，0.25%檸檬酸 鈉，0.5%硫酸銨，水96.75%，滅菌后pH值在4.6-5.3之間。二級(jí)罐培養(yǎng)基1% 微晶纖維素，1%麩子，0. 5%磷酸二氫鉀，0. 25%檸檬酸鈉，0. 5%硫酸銨，水96. 75%， 滅菌后pH值在4.6-5.3之間。發(fā)酵罐培養(yǎng)基3%微晶纖維素，3%麩子，0. 5%磷 酸二氫鉀，0.25%檸檬酸鈉，0.5%硫酸銨，水92.75%，滅菌后pH值在4. 6-5. 3 之間。
在無菌操作下，把土豆斜面培養(yǎng)的里氏木霉菌種接入到121'C下滅菌30分 鐘并冷卻至30'C的700立升種子罐中，在不斷通入無菌空氣，通風(fēng)量為1:0.2， 罐壓0.05Mpa， 30。C土rC的條件下培養(yǎng)30-48小時(shí)，經(jīng)化驗(yàn)檢測(cè)成熟這到標(biāo)準(zhǔn)
后，經(jīng)滅菌后的移種管路轉(zhuǎn)入在12rc滅菌30分鐘并冷卻到3crc士rc含4T培養(yǎng)基的二級(jí)罐中，在通風(fēng)量1:0.2，罐壓0.05Mpa，溫度30°C± 1。C的條件下培 養(yǎng)24小時(shí)左右，經(jīng)化驗(yàn)檢測(cè)成熟這到標(biāo)準(zhǔn)后，經(jīng)滅菌后的移種管路轉(zhuǎn)入在121 。C滅菌30分鐘并冷卻到3crc土rc含IOT培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在通風(fēng)量l:O. 5， 罐壓0.05Mpa，溫度30。C土rC的條件下培養(yǎng)100-120小時(shí)，達(dá)到放罐標(biāo)準(zhǔn)后， 經(jīng)滅菌后的放料管路放入滅菌后的絮凝罐加入硅藻土助濾劑，在經(jīng)清洗處理過后 的板框壓濾機(jī)進(jìn)行壓濾，渾液回流絮凝罐，清液打入循環(huán)罐進(jìn)入超濾膜濃縮器進(jìn) 行超濾濃縮，把超濾濃縮好的半成品打入緩存罐再進(jìn)行刮板真空濃縮至要求的活 力即可制得纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果膠酶。
權(quán)利要求
1、一種里氏木霉液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果膠酶的方法，其特征在于選用菌種為里氏木霉，誘導(dǎo)物選用微晶纖維素與麩皮，其它培養(yǎng)制劑為磷酸二氫鉀、檸檬酸鈉和硫酸銨，發(fā)酵制得纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果膠酶。
2、 如權(quán)利要求所述的里氏木霉液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖 酶和果膠酶的方法，其特征在于取種子罐培養(yǎng)基0.5-3%微晶纖維素，0.5-3%麩子，0.3-1%磷酸二氫鉀， 0.卜0.挑檸檬酸鈉，0.2-1%硫酸銨，余量為水，pH值在4.6-5. 3之間；二級(jí)罐培養(yǎng)基0.5-3%微晶纖維素，0.5-3%麩子，0.3-1%磷酸二氫鉀， 0. 1-0.8%檸檬酸鈉，0.2-1%硫酸銨，余量為水，pH值在4.6-5.3之間；發(fā)酵罐培養(yǎng)基2-5%微晶纖維素，1-4%麩子，0.3-1%磷酸二氫鉀，0.1-0.8% 檸檬酸鈉，0.2-1%硫酸銨，余量為水，pH值在4.6-5.3之間；在無菌操作下，把斜面種子接入，在12rC下滅菌30分鐘并冷卻至3(TC的 種子罐中，在通風(fēng)量為1:0.2，罐壓0.05Mpa， 3CTC土rC的條件下培養(yǎng)30-48小時(shí)；經(jīng)移種管路轉(zhuǎn)入到i2rc滅菌3o分鐘并冷卻到3o。c土rc二級(jí)罐中，在通風(fēng)量為1:0.2，罐壓0.05Mpa，溫度30°C土rC的條件下培養(yǎng)24小時(shí)左右；經(jīng)移 種管路轉(zhuǎn)入到121°〇滅菌30分鐘并冷卻到30'C士rC發(fā)酵罐中，在通風(fēng)量1:0. 5， 罐壓0.05Mpa，溫度3(TC土rC的條件下培養(yǎng)100-120小時(shí)，經(jīng)放料管路放入絮 凝罐加入硅藻土助濾劑，在板框壓濾機(jī)進(jìn)行壓濾，清液打入循環(huán)罐進(jìn)入超濾膜濃 縮器進(jìn)行超濾濃縮，把超濾濃縮好的半成品打入緩存罐再進(jìn)行刮板真空濃縮即制 得纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果膠酶。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種里氏木霉液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果膠酶的方法。本發(fā)明選用菌種為里氏木霉，誘導(dǎo)物選用微晶纖維素與麩皮和其它培養(yǎng)制劑磷酸二氫鉀、檸檬酸鈉和硫酸銨，發(fā)酵制得纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果膠酶。發(fā)酵酶活纖維素酶1600u/ml，葡聚糖酶1400u/ml，木聚糖酶500u/ml，果膠酶500u/ml。各種酶在pH值3.5-5，溫度30-50℃條件下可以同時(shí)發(fā)揮效力分解植物細(xì)胞壁的纖維與半纖維成分。本發(fā)明應(yīng)用在飼料與中藥提取上，破壞植物細(xì)胞壁，使有效成分得以釋放。
文檔編號(hào)C12R1/885GK101407797SQ20081013739
公開日2009年4月15日 申請(qǐng)日期2008年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月23日
發(fā)明者任樹文, 勇 何, 孟令文, 張豐杰, 李樹俊, 梁東升, 王福興, 薛立新 申請(qǐng)人:肇東市日成酶制劑有限公司