心機(jī)12000g離心10分鐘，除去沉淀和膜 狀漂浮物后獲得粗提液；將濾渣按上述步驟進(jìn)行再浸提、離心，共浸提、離心二次，然后把三 次的濾液混合； (4) pH沉淀法脫蛋白：用HCL溶液將以上離心所得混合濾液調(diào)至pH=4. 2,1000 Og離心 15分鐘，棄沉淀；所得濾液再用10%的NaOH溶液調(diào)至pH=8. 0,1000 Og離心15分鐘后棄沉 淀； (5) 蒸發(fā)濃縮：采用上海亞榮旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52A將以上濾液濃縮至25% ; (6) 有機(jī)溶劑沉淀法去除多糖：在上述濃縮后的濾液中加入2倍體積99%的乙醇， 12000g離心10分鐘，棄沉淀； (7) 吸附：使用AB-8大孔吸附樹脂吸附色素，待大孔吸附樹脂飽和形成均勻色帶后，采 用20%-30%(v/v)的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，去除雜質(zhì)； (8) 用60%的乙醇溶液解吸樹脂中吸附的色素，至大孔吸附樹脂無(wú)色為止，收集洗脫 液； (9) 鈉濾膜濃縮：將上述步驟所得洗脫液倒入容器中，啟動(dòng)真空栗抽濾，再用耐乙醇的 有機(jī)鈉濾膜對(duì)洗脫液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的10% ; (10) 蒸發(fā)濃縮：采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行再濃縮，設(shè)置真空度為〇. 6MPa，濃縮至25% ; (11) 離心去雜：對(duì)上述濃縮液高速離心，12000g離心10分鐘棄沉淀，去除雜質(zhì)和不溶 絡(luò)合物； (12) 噴霧干燥：設(shè)定干燥器進(jìn)風(fēng)溫度為140°C，出風(fēng)溫度為60°C，電加熱補(bǔ)償輔助干燥 后得到花色苷成品I. 4g，色價(jià)為170 ;取少量樣品溶解于30%乙醇溶液中進(jìn)行紫外-可見光 譜掃描，從圖1中可以看出只在520-540nm處有較強(qiáng)的花色苷吸收峰出現(xiàn)，310-355nm花 青素峰位沒有出現(xiàn)，表明本方法提取的花色苷純度較高。
DMPD+法測(cè)定花色苷抗氧化活性：酸性條件下DMPD(4-氨基-N，N-二甲基苯胺鹽酸鹽） 可被H2O2氧化生成穩(wěn)定有顏色的DMro+，加入抗氧化劑后，抗氧化劑能轉(zhuǎn)移1個(gè)氫原子給DMPD+,導(dǎo)致溶液迅速脫色；DMPD+在490nm處有吸收峰，脫色程度越強(qiáng)，說(shuō)明抗氧化劑的抗氧 化能力越強(qiáng)，此法可有效監(jiān)測(cè)花色苷抗氧化活性。具體步驟為：將0. 1DMH)溶液和0.Imol/ L，pH5. 25的醋酸鹽緩沖液各IOmL混勾，加入0. 05mol/L的H2O2溶液5mL啟動(dòng)反應(yīng)，產(chǎn)生 DMPD+自由基溶液。取ImLDMPD+溶液，分別加入不同濃度的花色苷和水溶性維生素E，25°C 下反應(yīng)10分鐘，測(cè)490nm處吸光值。
[0012] DMPD+清除率=1 - A490-丄/A490-2X 100% 其中A490-2為DMPD+初始濃度的吸光值;A490-1為存在抗氧化劑時(shí)剩余DMPD+濃度的 吸光值，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取平均值。
[0013] 花色苷與水溶性維生素E相比能有效清除DMPD+,濃度為2%的時(shí)候，其清除率為 18%。隨著濃度升高，花色苷對(duì)DMPD+的清除作用逐漸增強(qiáng)，當(dāng)濃度達(dá)到60%時(shí)，清除率幾乎 達(dá)到100%，而水溶性維生素E對(duì)DMPD+清除作用相對(duì)較弱。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種紫小麥麥麩花色苷提取方法，以紫小麥麥麩為原料，其特征是： (1) 粉碎：將磨面產(chǎn)生的紫小麥麥麩放入麥麩粉碎機(jī)中粉碎至200目； (2) 浸提：將粉碎后的麥麩粉按照質(zhì)量/體積比為1/5加入至CTAB提取液中，溫度保 持在50-55°C，每隔30分鐘充分?jǐn)嚢?次，使花色苷充分溶解，浸提1小時(shí)，其中麥麩粉的質(zhì) 量與CTAB提取液的體積單位比為克比毫升或千克比升； 所述CTAB浸提液組份為：十六烷基三甲基溴化銨23g/L，乙二胺四乙酸二鈉3g/L，蔗糖 5g/L，梓檬酸6g/L ;加水定容； (3) 離心獲得粗提液：將上述浸提液用高速離心機(jī)12000g離心10分鐘，除去沉淀和膜 狀漂浮物后獲得粗提液；將濾渣按上述步驟進(jìn)行再浸提、離心，共浸提、離心二次，然后把三 次的濾液混合； (4) pH沉淀法脫蛋白：用HCL溶液將以上離心所得混合濾液調(diào)至pH=4. 2, 1000 Og離心 15分鐘，棄沉淀；所得濾液再用10%的NaOH溶液調(diào)至pH=8. 0, 1000 Og離心15分鐘后棄沉 淀； (5) 蒸發(fā)濃縮：采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將以上濾液濃縮至25% ; (6) 有機(jī)溶劑沉淀法去除多糖：在上述濃縮后的濾液中加入2倍體積99%的乙醇， 12000g離心10分鐘，棄沉淀； (7) 吸附：使用大孔吸附樹脂吸附色素，待大孔吸附樹脂飽和形成均勻色帶后，采用 20%-30%(v/v)的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，去除雜質(zhì)； (8) 用60%的乙醇溶液解吸樹脂中吸附的色素，至大孔吸附樹脂無(wú)色為止，收集洗脫 液； (9) 鈉濾膜濃縮：將上述步驟所得洗脫液倒入容器中，啟動(dòng)真空栗抽濾，再用耐乙醇的 有機(jī)鈉濾膜對(duì)洗脫液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的10% ; (10) 蒸發(fā)濃縮：采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行再濃縮，設(shè)置真空度為〇. 6MPa，濃縮至25% ; (11) 離心去雜：對(duì)上述濃縮液高速離心，12000g離心10分鐘棄沉淀，去除雜質(zhì)和不溶 絡(luò)合物； (12) 噴霧干燥：設(shè)定干燥器進(jìn)風(fēng)溫度為140°C，出風(fēng)溫度為60°C，采用電加熱補(bǔ)償輔助 干燥，得到粉末狀色素。2. 如權(quán)利要求1所述的紫小麥麥麩花色苷提取方法，其特征是所述紫小麥采用寧春46 號(hào)或農(nóng)大3753。3. 如權(quán)利要求1或2所述的紫小麥麥麩花色苷提取方法，其特征是所述的大孔吸附樹 脂采用AB-8大孔吸附樹脂。4. 如權(quán)利要求1或2所述的紫小麥麥麩花色苷提取方法，其特征是麥麩粉碎機(jī)的型號(hào) 為 WFJ-15。5. 如權(quán)利要求1或2所述的紫小麥麥麩花色苷提取方法，其特征是旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器采用上 海亞榮旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52A。
【專利摘要】一種紫小麥麥麩花色苷提取方法，目的是有效減少提取過(guò)程中花色苷的降解率；本發(fā)明先將紫小麥麥麩粉碎至200目；加入至CTAB提取液中使花色苷充分溶解，浸提后再離心除去沉淀和膜狀漂浮物后獲得粗提液；用HCL溶液調(diào)至pH=4.2，10000g離心15分鐘棄沉淀；用NaOH調(diào)至pH=8.0，10000g離心15分鐘后棄沉淀；采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至25%；加入乙醇，12000g離心10分鐘棄沉淀；使用大孔吸附樹脂吸附色素，用60%的乙醇溶液解吸樹脂中吸附的色素，再用耐乙醇的有機(jī)鈉濾膜對(duì)洗脫液濃縮至原體積的10%；采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行再濃縮至25%；用12000g離心10分鐘棄沉淀，去除雜質(zhì)和不溶絡(luò)合物；噴霧干燥得到粉末狀色素；所述CTAB浸提液組份為：十六烷基三甲基溴化銨23g/L，乙二胺四乙酸二鈉3g/L，蔗糖5g/L，檸檬酸6g/L；加水定容。
【IPC分類】C07H17/065, A61P39/06, C07H1/08
【公開號(hào)】CN105001284
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510396246
【發(fā)明人】鄭軍, 謝福來(lái), 李世平, 高煒, 靖金蓮, 楊三維, 曹勇, 喬麟軼, 常建忠, 曲運(yùn)琴, 王鎮(zhèn), 鄭海澤
【申請(qǐng)人】山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院小麥研究所
【公開日】2015年10月28日
【申請(qǐng)日】2015年7月8日