用于多產(chǎn)色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素的發(fā)酵培養(yǎng)基及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種發(fā)酵培養(yǎng)基，更具體地說，尤其涉及一種用于多產(chǎn)色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素的發(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明同時(shí)涉及一種制備上述發(fā)酵培養(yǎng)基的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對(duì)多種真菌具有很強(qiáng)抗菌作用、對(duì)細(xì)菌無抗菌作用的廣譜抗真菌物質(zhì)抗生素，且為世界公認(rèn)的安全、廣譜、高效的抗菌活性物質(zhì)，不能被人體的胃、腸道吸收。多烯大環(huán)內(nèi)酯類的納他霉素、金褐霉素在臨床在用于治療真菌引起的皮膚病等，且使用多半個(gè)世紀(jì)幾乎沒有出現(xiàn)抗藥性，近年國內(nèi)外已廣泛用作乳制品、肉制品等加工食品等的安全防腐劑。多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素還有用于防治農(nóng)作物病害防治的研宄報(bào)道。目前多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素產(chǎn)生菌的生產(chǎn)能力低、產(chǎn)品售價(jià)過高，難在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用。
[0003]多產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomycespolychromogenes)產(chǎn)的抗菌物質(zhì)有 350nm、332nm及317nm的3個(gè)吸收峰，為多烯大環(huán)內(nèi)酯類廣譜抗真菌抗生素，但迄今無多產(chǎn)色鏈霉菌產(chǎn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的報(bào)道。多產(chǎn)色鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)多種引起水果腐爛的病原具有突出的抗菌作用，是開發(fā)安全高效的、新生物農(nóng)藥的寶貴資源。
[0004]開發(fā)多產(chǎn)色鏈霉菌產(chǎn)活性物質(zhì)用于水果采后的安全防腐或高附加值農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)中的真菌性病害的防治，將具有重要的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)與生態(tài)效益。開發(fā)多產(chǎn)色鏈霉菌產(chǎn)此物質(zhì)的先決條件是掌握菌種生產(chǎn)能力充分表達(dá)的發(fā)酵培養(yǎng)基。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的前一目的在于提供一種多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素產(chǎn)量高、抗菌作用強(qiáng)的發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0006]本發(fā)明的后一目的在于提供一種制備上述發(fā)酵培養(yǎng)基的方法。
[0007]本發(fā)明的前一技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的:一種用于多產(chǎn)色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素的發(fā)酵培養(yǎng)基，包括糖類碳源、有機(jī)氮源、無機(jī)氮源、無機(jī)鹽、酵母膏和淀粉酶，其中所述糖類碳源的濃度為20?100g/L ;有機(jī)氮源的濃度為10?100g/L ;無機(jī)氮源的濃度為I?10g/L ;無機(jī)鹽的濃度為0.001?10g/L ;酵母膏的濃度為0.1?10g/L ;淀粉酶的濃度為0.1?10g/L。
[0008]上述的用于多產(chǎn)色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述糖類碳源為玉米淀粉、大米淀粉、小麥淀粉、可溶性淀粉、紅薯粉、馬鈴薯粉、木薯粉、糊精、麥芽糖、甘油中的任意一種。
[0009]上述的用于多產(chǎn)色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述有機(jī)氮源為大豆餅粉、花生餅粉、蠶蛹粉、魚粉、牛肉膏、蛋白胨中的任意一種。
[0010]上述的用于多產(chǎn)色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述無機(jī)氮源為硝酸鉀、硝酸銨、硝酸鈉、硫酸銨、氯化銨、硫酸銨、碳酸銨中的任意一種。
[0011]上述的用于多產(chǎn)色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述無機(jī)鹽為磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、硫酸銅、硼酸鈉、鉬酸銨中的任意一種。
[0012]上述的用于多產(chǎn)色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述淀粉酶為α-淀粉酶。
[0013]本發(fā)明的后一技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的:一種制備權(quán)利要求1所述發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，其特征在于，包括下述步驟:(I)將糖類碳源與淀粉酶混均后，加入I?20倍的水調(diào)成糊狀，在40?90°C溫度下加熱10?180分鐘，形成糖類碳源物質(zhì)酶解液；(2)將有機(jī)氮源、無機(jī)氮源、無機(jī)鹽和酵母膏混合并加入有機(jī)氮源I?50倍體積的水?dāng)嚢杈鶆?，?0?200°C溫度下加熱10?180分鐘，形成氮源物質(zhì)混合液；(3)將糖類碳源物質(zhì)酶解液和氮源物質(zhì)混合液混合，然后補(bǔ)足水，最后用鹽酸與氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液PH值至3?10即成。
[0014]上述的發(fā)酵培養(yǎng)基的方法中，步驟(2)中，有機(jī)氮源、無機(jī)氮源、無機(jī)鹽和酵母膏混合并加入有機(jī)氮源I?50倍體積的水?dāng)嚢杈鶆蚝?，首先用鹽酸與氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液PH值至6?12，然后再進(jìn)行加熱。
[0015]上述的發(fā)酵培養(yǎng)基的方法中，步驟(2)中，有機(jī)氮源首先進(jìn)行干燥、破碎，然后過30-120目篩后，再與無機(jī)氮源、無機(jī)鹽和酵母膏混合。
[0016]本發(fā)明采用上述成份并結(jié)合科學(xué)的方法制備發(fā)本地培養(yǎng)基，其中各成份來源廣泛，成本低廉，無特殊要求。將本發(fā)明方法制備的發(fā)酵培養(yǎng)基作為多產(chǎn)色鏈霉菌液體深層通氣發(fā)酵生產(chǎn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素的發(fā)酵液，具有抗菌活性強(qiáng)、抗生素產(chǎn)量高的優(yōu)點(diǎn)，發(fā)酵液多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的粗提物可達(dá)12.lg/L，同時(shí)，20 μ L發(fā)酵液對(duì)青霉菌的抑菌圈面積達(dá)637.62mm2。并且由于來源廣泛易得，具有較大的應(yīng)用價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制。
[0018]本發(fā)明的一種用于多產(chǎn)色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素的發(fā)酵培養(yǎng)基，包括糖類碳源、有機(jī)氮源、無機(jī)氮源、無機(jī)鹽、酵母膏和淀粉酶，所述糖類碳源的濃度為20?100g/L ;有機(jī)氮源的濃度為10?100g/L ;無機(jī)氮源的濃度為I?10g/L ;無機(jī)鹽的濃度為0.001?10g/L ;酵母膏的濃度為0.1?10g/L ;淀粉酶的濃度為0.1?10g/L。
[0019]具體地，在本實(shí)施例中，所述糖類碳源為玉米淀粉、大米淀粉、小麥淀粉、可溶性淀粉、紅薯粉、馬鈴薯粉、木薯粉、糊精、麥芽糖、甘油中的任意一種。
[0020]所述有機(jī)氮源為大豆餅粉、花生餅粉、蠶蛹粉、魚粉、牛肉膏、蛋白胨中的任意一種。
[0021]所述無機(jī)氮源為硝酸鉀、硝酸銨、硝酸鈉、硫酸銨、氯化銨、硫酸銨、碳酸銨中的任意一種。
[0022]所述無機(jī)鹽為磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、硫酸銅、硼酸鈉、鉬酸銨中的任意一種。
[0023]所述淀粉酶為α -淀粉酶。
[0024]本發(fā)明的一種制備權(quán)利要求1所述發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，包括下述步驟:
[0025](I)將糖類碳源與淀粉酶混均后，加入I?20倍的水調(diào)成糊狀，在40?90°C溫度下加熱10?180分鐘，形成糖類碳源物質(zhì)酶解液；
[0026](2)將有機(jī)氮源首先進(jìn)行干燥、破碎，然后過30-120目篩后，再與無機(jī)氮源、無機(jī)鹽和酵母膏混合，并加入有機(jī)氮源I?50倍體積的水?dāng)嚢杈鶆蚝?，首先用鹽酸與氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液PH值至6?12，再在20?200°C溫度下加熱10?180分鐘，形成氮源物質(zhì)混合液；
[0027](3)將糖類碳源物質(zhì)酶解液和氮源物質(zhì)混合液混合，然后補(bǔ)足水，最后用鹽酸與氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液PH值至3?10即成。
[0028]實(shí)施例1
[0029]培養(yǎng)基成分:玉米淀粉40g/L、大豆餅粉45g/L、硝酸鉀5g/L、a-淀粉酶0.5g/L、酵母膏1.5g/L、硫酸銅0.02g/L，自來水補(bǔ)足至1000mL。
[0030]制備方法:將玉米淀粉與a -淀粉酶混勻，再加入玉米淀粉5倍體積的自來水調(diào)為糊狀，在70?80度加熱40分鐘，形成糖類碳源物質(zhì)酶解液；然后將大豆餅粉進(jìn)行干燥、破碎，然后過30目篩后，再與硝酸鉀、硫酸銅和酵母膏混合，并加入大豆餅粉3倍體積的水?dāng)嚢杈鶆蚝螅紫扔名}酸與氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液PH值至8.5，再在20-50°C溫度下加熱180分鐘，形成氮源物質(zhì)混合液；將糖類碳源物質(zhì)酶解液和氮源物質(zhì)混合液混合，然后補(bǔ)足水，最后用鹽酸與氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液P