NA ;所述miRNA2為所述細(xì)胞己具有的 特定miRNA ;
[0059] 所述巧光蛋白甲和所述巧光蛋白己具有不同的巧光顏色。
[0060] 將具有表達(dá)盒甲-II的重組載體甲-II、具有表達(dá)盒己-II的重組載體己-II和 具有表達(dá)盒丙的重組載體丙導(dǎo)入所述混合細(xì)胞，通過檢測巧光蛋白甲和/或巧光蛋白己的 強(qiáng)度分選所述細(xì)胞甲和/或所述細(xì)胞己。
[0061] 所述表達(dá)盒甲-II中，所述啟動子甲的上游具有1個所述TALm?蛋白己的祀點(diǎn)且 其下游具有1-3個所述TALm?蛋白己的祀點(diǎn)；
[0062] 所述表達(dá)盒己-II中，所述啟動子己的上游具有1個所述TALm?蛋白甲的祀點(diǎn)且 其下游具有1-3個所述TALER蛋白甲的祀點(diǎn)。
[0063] 所述表達(dá)盒甲-II中，所述啟動子甲上游的TALER蛋白己的祀點(diǎn)與所述啟動子甲 下游最鄰近的TALER蛋白己的祀點(diǎn)之間的距離為72-lOObp ;
[0064] 所述表達(dá)盒己-II中，所述啟動子己上游的TAL邸蛋白甲的祀點(diǎn)與所述啟動子己 下游最鄰近的TALm?蛋白甲的祀點(diǎn)之間的距離為72-lOObp。
[0065] 本發(fā)明保護(hù)的第二種從混合細(xì)胞中分選細(xì)胞甲和/或細(xì)胞己的試劑盒，為如下 姑或化）；
[0066] (a)包括表達(dá)盒甲-II、表達(dá)盒己-II和表達(dá)盒丙的試劑盒；
[0067] 化）包括具有所述表達(dá)盒甲-II的重組載體甲-II、具有所述表達(dá)盒己-II的重組 載體己-II和具有所述表達(dá)盒丙的重組載體丙的試劑盒；
[0068] 所述表達(dá)盒甲-II自上游至下游依次包括如下元件；反饋元件的編碼序列、啟動 子甲、通過自剪切多膚的編碼基因連接的巧光蛋白甲的編碼基因和TALER蛋白甲的編碼基 因、祀序列甲-II ;所述祀序列甲-II包括miRNAl-1的祀序列、……、miRNAl-n的祀序列， n為2W上的自然數(shù)；
[0069] 所述表達(dá)盒己-II自上游至下游依次包括如下元件；反饋元件的編碼序列、啟動 子己、通過自剪切多膚的編碼基因連接的巧光蛋白己的編碼基因和TALm?蛋白己的編碼基 因、祀序列己-II ;所述祀序列己-II包括miRNA2-l的祀序列、……、miRNA2-n的祀序列， n為2W上的自然數(shù)；
[0070] 所述表達(dá)盒甲-II中，所述啟動子甲的上游和下游各具有至少一個所述TALm?蛋 白己的祀點(diǎn)，或，所述啟動子甲的上游不具有所述TALm?蛋白己的祀點(diǎn)但其下游具有至少 一個所述TALER蛋白己的祀點(diǎn)；
[0071] 所述表達(dá)盒己-II中，所述啟動子己的上游和下游各具有至少一個所述TALm?蛋 白甲的祀點(diǎn)，或，所述啟動子己的上游不具有所述TALm?蛋白甲的祀點(diǎn)但其下游具有至少 一個所述TALER蛋白甲的祀點(diǎn)；
[0072] 所述表達(dá)盒丙自上游至下游依次包括組成型啟動子和激活元件的編碼序列；在所 述激活元件的刺激下，位于所述反饋元件的編碼序列的下游的DNA表達(dá)；
[0073] 所述miRNAl-1、......、miRNAl-n為細(xì)胞甲具有的特定miRNA ;
[0074] 所述miRNA2-l、......、miRNA2-n為細(xì)胞己具有的特定miRNA ;
[0075] 所述巧光蛋白甲和所述巧光蛋白己具有不同的巧光顏色。
[0076] 將具有表達(dá)盒甲-II的重組載體甲-II、具有表達(dá)盒己-II的重組載體己-II和 具有表達(dá)盒丙的重組載體丙導(dǎo)入所述混合細(xì)胞，通過檢測巧光蛋白甲和/或巧光蛋白己的 強(qiáng)度分選所述細(xì)胞甲和/或所述細(xì)胞己。
[0077] 所述表達(dá)盒甲-II中，所述啟動子甲的上游具有1個所述TALm?蛋白己的祀點(diǎn)且 其下游具有1-3個所述TALm?蛋白己的祀點(diǎn)；
[007引所述表達(dá)盒己-II中，所述啟動子己的上游具有1個所述TALm?蛋白甲的祀點(diǎn)且 其下游具有1-3個所述TALER蛋白甲的祀點(diǎn)。
[0079] 所述表達(dá)盒甲-II中，所述啟動子甲上游的TALER蛋白己的祀點(diǎn)與所述啟動子甲 下游最鄰近的TALER蛋白己的祀點(diǎn)之間的距離為72-lOObp ;
[0080] 所述表達(dá)盒己-II中，所述啟動子己上游的TALER蛋白甲的祀點(diǎn)與所述啟動子己 下游最鄰近的TALm?蛋白甲的祀點(diǎn)之間的距離為72-lOObp。
[0081] 本發(fā)明保護(hù)的第=種從混合細(xì)胞中分選細(xì)胞甲和/或細(xì)胞己的試劑盒，為如下 姑或化）；
[00間 （a)包括表達(dá)盒甲-II、表達(dá)盒己-II、表達(dá)盒丙和表達(dá)盒了 - II的試劑盒；
[0083] 化）包括具有所述表達(dá)盒甲-II的重組載體甲-II、具有所述表達(dá)盒己-II的重組 載體己-II、具有所述表達(dá)盒丙的重組載體丙和具有所述表達(dá)盒丙-II的重組載體丙-II 的試劑盒；
[0084] 所述表達(dá)盒甲-II自上游至下游依次包括如下元件；反饋元件的編碼序列、啟動 子甲、通過自剪切多膚的編碼基因連接的所述巧光蛋白甲的編碼基因和TALER蛋白甲的編 碼基因、祀序列甲-II ;所述祀序列甲-II包括miRNAl-1的祀序列、……、miRNAl-n的祀 序列，n為2 W上的自然數(shù)；
[0085] 所述表達(dá)盒己-II自上游至下游依次包括如下元件；反饋元件的編碼序列、啟動 子己、通過自剪切多膚的編碼基因連接的所述巧光蛋白己的編碼基因和TALm?蛋白己的編 碼基因、祀序列己-II ;所述祀序列己-II包括miRNA2-l的祀序列、……、miRNA2-n的祀 序列，n為2 W上的自然數(shù)；
[0086] 所述表達(dá)盒了 - II自上游至下游依次包括如下元件；反饋元件的編碼序列、啟動 子己、通過自剪切多膚的編碼基因連接的所述巧光蛋白己的編碼基因和TALm?蛋白己的編 碼基因、祀序列了 - II ;所述祀序列了 - II包括miRNA3-l的祀序列、……、miRNA3-n的祀 序列，n為2 W上的自然數(shù)；
[0087] 所述表達(dá)盒甲-II中，所述啟動子甲的上游和下游各具有至少一個所述TALm?蛋 白己的祀點(diǎn)，或，所述啟動子甲的上游不具有所述TALm?蛋白己的祀點(diǎn)但其下游具有至少 一個所述TALER蛋白己的祀點(diǎn)；
[008引所述表達(dá)盒己-II中，所述啟動子己的上游和下游各具有至少一個所述TALm?蛋 白甲的祀點(diǎn)，或，所述啟動子己的上游不具有所述TALm?蛋白甲的祀點(diǎn)但其下游具有至少 一個所述TALER蛋白甲的祀點(diǎn)；
[0089] 所述表達(dá)盒了 - II中，所述啟動子己的上游和下游各具有至少一個所述TALm?蛋 白甲的祀點(diǎn)，或，所述啟動子己的上游不具有所述TALm?蛋白甲的祀點(diǎn)但其下游具有至少 一個所述TALER蛋白甲的祀點(diǎn)；
[0090] 所述表達(dá)盒丙自上游至下游依次包括組成型啟動子和激活元件的編碼序列；在所 述激活元件的刺激下，位于所述反饋元件的編碼序列的下游的DNA表達(dá)。
[0091] 所述miRNAl-1、......、miRNAl-n為細(xì)胞甲具有的特定miRNA ;
[0092] 所述miRNA2-l、......、miRNA2-n為細(xì)胞己具有的特定miRNA ;
[0093] 所述miRNA3-l、......、miRNA3-n為細(xì)胞己具有的特定miRNA ;
[0094] 所述巧光蛋白甲和所述巧光蛋白己具有不同的巧光顏色。
[0095] 將具有表達(dá)盒甲-II的重組載體甲-II、具有表達(dá)盒己-II的重組載體己-II、具 有表達(dá)盒丙的重組載體丙和具有表達(dá)盒了 - II的重組載體了 - II導(dǎo)入所述混合細(xì)胞，通過 檢測巧光蛋白甲和/或巧光蛋白己的強(qiáng)度分選所述細(xì)胞甲和/或所述細(xì)胞己。
[0096] 所述表達(dá)盒甲-II中，所述啟動子甲的上游具有1個所述TALm?蛋白己的祀點(diǎn)且 其下游具有1-3個所述TALER蛋白己的祀點(diǎn)；
[0097] 所述表達(dá)盒己-II中，所述啟動子己的上游具有1個所述TALm?蛋白甲的祀點(diǎn)且 其下游具有1-3個所述TALER蛋白甲的祀點(diǎn)；
[009引所述表達(dá)盒了 - II中，所述啟動子己的上游具有1個所述TALm?蛋白甲的祀點(diǎn)且 其下游具有1-3個所述TALER蛋白甲的祀點(diǎn)。
[0099] 所述表達(dá)盒甲-II中，所述啟動子甲上游的TALER蛋白己的祀點(diǎn)與所述啟動子甲 下游最鄰近的TALm?蛋白己的祀點(diǎn)之間的距離為72-lOObp ;
[0100] 所述表達(dá)盒己-II中，所述啟動子己上游的TALER蛋白甲的祀點(diǎn)與所述啟動子己 下游最鄰近的TALm?蛋白甲的祀點(diǎn)之間的距離為72-lOObp ;
[0101] 所述表達(dá)盒了 - II中，所述啟動子己上游的TALER蛋白甲的祀點(diǎn)與所述啟動子己 下游最鄰近的TALm?蛋白甲的祀點(diǎn)之間的距離為72-lOObp。
[0102] 所述表達(dá)盒甲-I或所述表達(dá)盒甲-II中，所述反饋元件的編碼序列具體可為 5XUAS序列，所述啟動子甲具體可為CMVmini啟動子。所述表達(dá)盒己-I或所述表達(dá)盒 己-II中，所述反饋元件的編碼序列具體可為5 X UAS序列，所述啟動子己具體可為CMVmini 啟動子。所述表達(dá)盒丙中，所述組成型啟動子具體可為CAG啟動子，所述激活元件的編碼序 列具體可為Gal4/vpl6的編碼基因。所述表達(dá)盒了 - I或所述表達(dá)盒了-II中，所述反饋 元件的編碼序列具體可為5 XUAS序列，所述啟動子了具體可為CMVmini啟動子。
[0103] 所述5XUAS序列可為實施例1-6中所設(shè)及到的所有含有5XUAS序列的質(zhì)粒中 的任一所述5XUAS序列。所述CMVmini啟動子可為實施例1-6中所設(shè)及到的所有含有 CMVmini啟動子的質(zhì)粒中的任一所述CMVmini啟動子。所述CAG啟動子可為實施例1-6中 所設(shè)及到的所有含有CAG啟動子的質(zhì)粒中的任一所述CAG啟動子。所述Gal4/vpl6的編碼 基因可為實施例1-6中所設(shè)及到的所有含有Gal4/vpl6的編碼基因的質(zhì)粒中的任一所述 CAG啟動子。
[0104] 所述TALER蛋白甲的編碼基因可為實施例1-6中所設(shè)及到的所有含有TALER蛋白 的編碼基因的質(zhì)粒中的任一所述TALER蛋白的編碼基因。所述TALER蛋白己的編碼基因可 為實施例1-6中所設(shè)及到的所有含有TALER蛋白的編碼基因的質(zhì)粒中的任一所述TALER蛋 白的編碼基因。所述TALER蛋白甲的祀點(diǎn)可為實施例1-6中所設(shè)及到的所有含有TALER蛋 白的祀點(diǎn)序列的質(zhì)粒中的任一所述TALER蛋白的祀點(diǎn)序列。所述TALER蛋白己的祀點(diǎn)可為 實施例1-6中所設(shè)及到的所有含有TALER蛋白的祀點(diǎn)序列的質(zhì)粒中的任一所述TALER蛋白 的祀點(diǎn)序列。
[01化]所述自剪切多膚的編碼基因（又稱2A連接膚）的編碼基因可為實施例1-6中的 任一所述質(zhì)粒中的2A連接膚的編碼基因或自剪切多膚的編碼基因。
[0106] 所述巧光蛋白甲具體可為mKate2或EYFP。所述巧光蛋白己具體可為mKate2或 EYFP。所述mKate2的編碼基因可為實施例1-6中所設(shè)及到的所有含有mKate2的編碼基因 的質(zhì)粒中的任一所述mKate2的編碼基因。所述EYFP的編碼基因可為實施例1-6中所設(shè)及 到的所有含有EYFP的編碼基因的質(zhì)粒中的任一所述EYFP的編碼基因。
[0107] 所述shRNAl的祀序列具體可為shRNA-FF3的祀序列、shRNA-FF4的祀序列、 shRNA-F巧的祀序列或shRNA-FTO的祀序列。所述shRNA2的祀序列具體可為shRNA-FF3的 祀序列、shRNA-FF4的祀序列、shRNA-FF5的祀序列或shRNA-FF6的祀序列。所述shRNAl-1 的祀序列、……、shRNA 1 -n的祀序列、shRNA2-1的祀序列、……、shRNA2-n的祀序列、 shRNA2-l的祀序列、......或shRNA2-n的祀序列具體可為shRNA-FF3的祀序列、shRNA-FF4 的祀序列、shRNA-FF5的祀序列或shRNA-FF6的祀序列。所述shRNA-FF3的祀序列具體可 為實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的shRNA-FF3的祀序列。所述shRNA-FF4的祀序列具體可 為實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的shRNA-FF4的祀序列。所述shRNA-F巧的祀序列具體可 為實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的shRNA-F巧的祀序列。所述shRNA-Fro的祀序列具體可 為實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的shRNA-FF6的祀序列。
[010引 所述shRNAl具體可為shRNA-FF3的編碼基因編碼的RNA、shRNA-FF4的編碼基因 編碼的RNA、shRNA-FF5的編碼基因編碼的RNA或shRNA-FF6的編碼基因編碼的RNA。所 述shRNA2具體可為shRNA-FF3的編碼基因編碼的RNA、shRNA-FF4的編碼基因編碼的RNA、 shRNA-F巧的編碼基因編碼的RNA或shRNA-FTO的編碼基因編碼的RNA。所述shRNA3具體 可為shRNA-FF3的編碼基因編碼的RNA、shRNA-FF4的編碼基因編碼的RNA、shRNA-FF5的編 碼基因編碼的RNA或shRNA-FTO的編碼基因編碼的RNA。所述shRNA-FF3的編碼基因可為 實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的shRNA-FF3的編碼基因。所述shRNA-FF4的編碼基因可為 實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的shRNA-FF4的編碼基因。所述shRNA-FF5的編碼基因可為 實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的shRNA-FF5的編碼基因。所述shRNA-FF6的編碼基因可為 實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的shRNA-FF6的編碼基因。
[0109] 所述miRNAl的祀序列具體可為miR21的祀序列、miRlSa的祀序列、miR19油的祀 序列或miR191的祀序列。所述miRNA2的祀序列具體可為miR21的祀序列、miRlSa的祀序 列、miR19油的勒1序列或miR191的勒1序列。所述miRNAl-l的勒1序列、......、miRNAl-n的革己 序列、miRNA2-l的祀序列、......、miRNA2-n的祀序列、miRNA3-l的祀序列、......或miRNA3-n 的祀序列具體可為miR21的祀序列、miRlSa的祀序列、miR19油的祀序列或miR191的祀序 列。所述miR21的祀序列具體可為實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的miR21的祀序列。所述 miRlSa的祀序列具體可為實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的miRlSa的祀序列。所述miR19油 的祀序列具體可為實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的miR19油的祀序列。所述miR191的祀 序列具體可為實施例1-6中任一所述質(zhì)粒中的miR191的祀序列。
[0110] 所述重組載體丙具體可為pCAG-Gal4/vpl6-2A-I'a濁FP-2A-Bla質(zhì)粒或 pCAG-Gal4/vpl6 質(zhì)粒。
[0111] 所述重組載體甲-I具體可為實