成摻入重組蛋白質(zhì)的包含體。因此，為了制備活性或更具 活性的物質(zhì)，可能需要重組蛋白質(zhì)的重折疊。從細(xì)菌包含體中獲得正確折疊的異源蛋白 質(zhì)的幾種方法在此領(lǐng)域中是眾所周知的。這些方法通常包括從包含體中溶解蛋白質(zhì)，然 后使用離液試劑完全使蛋白質(zhì)變性。當(dāng)半胱氨酸殘基在蛋白質(zhì)的初級氨基酸序列中存在 時，常常需要在可以正確形成二硫鍵的環(huán)境（氧化還原系統(tǒng)）中實施重折疊。重折疊的常 用方法在Kohno,酶學(xué)方法，185 :187-195(1990)中公開。EP0433225和共同待審的USSN 08/163,877中描述了其他適用的方法。
[0074] 本發(fā)明的IL_13bc蛋白質(zhì)也可表達(dá)為轉(zhuǎn)基因動物的產(chǎn)品，如表達(dá)為轉(zhuǎn)基因牛，山 羊，豬或綿羊的奶，其特點在于體細(xì)胞或生殖細(xì)胞含有編碼IL_13bc蛋白質(zhì)的多核苷酸序 列。
[0075] 本發(fā)明的IL_13bc蛋白質(zhì)可在表達(dá)所需蛋白質(zhì)需要的培養(yǎng)條件下，通過培養(yǎng)轉(zhuǎn)化 宿主細(xì)胞的培養(yǎng)物來制備。然后將產(chǎn)物表達(dá)蛋白質(zhì)從培養(yǎng)基或細(xì)胞提取物中提純。本發(fā)明 IL-13bc蛋白質(zhì)的可溶形式可從條件培養(yǎng)基中提純。本發(fā)明的IL-13bc蛋白質(zhì)的膜結(jié)合形 式可通過從表達(dá)細(xì)胞中制備總膜組分，并用非-離子清洗劑如Triton X-100萃取膜來提 純。
[0076] IL_13bc蛋白質(zhì)可使用此領(lǐng)域中的技術(shù)人員已知的方法來提純。如本發(fā)明的 IL-13bc蛋白質(zhì)可使用購得的蛋白質(zhì)濃縮濾膜，如Amicon或Millipore Pellicon超濾單 元來濃縮。濃縮步驟后，濃縮物可加入到提純基質(zhì)如凝膠過濾介質(zhì)中?？商鎿Q地，也可使 用陰離子交換樹脂，如具有二乙氨基乙基（DEAE)或聚乙烯亞胺（PEI)側(cè)基團(tuán)的基質(zhì)或底 物?；|(zhì)可以是丙烯酰胺，瓊脂糖，右旋糖苷，纖維素或通常使用在蛋白質(zhì)提純中的其他種 類?？商鎿Q地，也可使用陽離子交換步驟。適當(dāng)?shù)臉与x子交換劑包括多種含有磺丙基和 羧甲基基團(tuán)的不溶基質(zhì)，?；潜禽^好的（如S-瓊脂糖柱）。從培養(yǎng)物上清液中提純 IL-13bc蛋白質(zhì)也可包括流經(jīng)一個或多個親和樹脂柱的步驟，如伴刀豆球蛋白A-瓊脂糖， 肝磷脂-toyopearl或Cibacrom藍(lán)3GA瓊脂糖；或使用樹脂如苯基醋，丁基醋，或丙基醋通 過疏水相互作用層析步驟；或通過免疫親和層析步驟。最后，使用疏水RP-HPLC介質(zhì)，如含 有甲基或其他脂肪族側(cè)基團(tuán)的硅膠，可實施一個或多個反相高效液相層析（RP-HPLC)步驟 進(jìn)一步提純IL_13bc蛋白質(zhì)。依據(jù)已知方法，含有IL-13或其片段的親和柱或含有IL-13bc 蛋白質(zhì)抗體的親和柱也可使用在提純步驟中。一些或全部前述提純步驟，以多種組合方式 或連同其他已知方法，都可用來提供基本上純的分離重組蛋白質(zhì)。較好地，分離IL-13bc蛋 白質(zhì)是純的，以致基本上其不含其他哺乳動物蛋白質(zhì)。
[0077] 本發(fā)明IL_13bc蛋白質(zhì)可用來篩查能結(jié)合IL_13bc或IL-13R的試劑，或篩查干擾 IL-13與IL-13或IL-13bc結(jié)合的（胞外或胞內(nèi)域）并因此能用作為正常結(jié)合和細(xì)胞因子 活性抑制劑（"IL-13R抑制劑"）的試劑。使用所需蛋白質(zhì)（固定的或不固定的）的結(jié)合 測試法在此領(lǐng)域中是眾所周知的，并可使用本發(fā)明的IL-13bc蛋白質(zhì)用作這種目的。基于 提純細(xì)胞的或基于蛋白質(zhì)（不含細(xì)胞）的篩查測試可用來鑒別這種試劑。如，IL_13bc蛋 白質(zhì)可以提純形式固定在載體上，在存在和不存在可能的抑制試劑的情況下，測定與提純 IL-13bc蛋白質(zhì)的結(jié)合。適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合測試可以可替換地使用本發(fā)明的IL-13bc蛋白質(zhì)的可 溶形式。其中抑制劑可得到篩查的系統(tǒng)的另一個實施例在如下的實施例2中描述。
[0078] 在這樣的篩查測試中，通過將IL-13或其片段與IL_13bc蛋白質(zhì)結(jié)合形成第一結(jié) 合混合物，測定在第一結(jié)合混合物（B tj)中的結(jié)合量。通過將IL-13或其片段，IL-13bc蛋白 質(zhì)與要進(jìn)行篩查的化合物或試劑結(jié)合形成第二結(jié)合混合物，測定第二結(jié)合混合物（B)中的 結(jié)合量。比較第一結(jié)合混合物中和第二結(jié)合混合物中的結(jié)合量，如，通過計算B/^的比率。 與第一結(jié)合混合物相比，如果在第二結(jié)合混合物中觀察到結(jié)合量下降，那么可以認(rèn)為化合 物或試劑能抑制結(jié)合。任意地，IL-13R的第二條鏈可加入到一種或兩種結(jié)合混合物中。結(jié) 合混合物的配制和優(yōu)化在此領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)，這樣的結(jié)合混合物也可含有需要增強(qiáng)或優(yōu)化 結(jié)合的緩沖液和鹽，其他對照測試也包括在本發(fā)明的篩查測試中。
[0079] 因此可鑒別發(fā)現(xiàn)能將IL_13bc蛋白質(zhì)與IL-13或其片段結(jié)合活性降低到任何程度 的化合物，較好地至少約10%，更好地大于約50%或更多，然后再在其他結(jié)合測試中和體 內(nèi)測試中進(jìn)行篩查。通過這些方法，也可鑒別對IL-13bc結(jié)合具有抑制性活性的適于作治 療試劑的化合物。
[0080] IL-13bc蛋白質(zhì)，和編碼它們的多核苷酸，也可用作診斷試劑，來檢測IL-13bc， IL-13R，IL-13或表達(dá)IL-13bc，IL-13R或IL-13的細(xì)胞的存在或表達(dá)。使用這些種類的物 質(zhì)，蛋白質(zhì)或多核苷酸可在標(biāo)準(zhǔn)方法中用作這種目的進(jìn)行診斷測試。適合的方法對此領(lǐng)域 中的技術(shù)人員是眾所周知的。
[0081] 如本文所使用的，"IL-13R"是指IL-13bc和/或稱為"IL-13Ra 1"或"NR4"第二 條IL-13受體鏈（參看：鼠科動物受體鏈，Hilton等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA1996,93 : 497-501 ;人類受體鏈，Aman等人，生物化學(xué)期刊，1996, 271 :29265-70,和Gauchat等人，歐 洲免疫學(xué)期刊，1997, 27 :971-8)。
[0082] IL-13bc作為IL-13已知生物活性的中介體。因此，IL-13bc蛋白質(zhì)（較好地是可 溶IL-13bc蛋白質(zhì)），IL-13R抑制劑（即，IL-13與IL-13R相互作用的拮抗劑（如，IL-13R 的抗體（具體包括IL_13bc或IL-13R a 1的抗體）））和其片段，IL-13的抗體和其片段，可 溶IL-13Ra 1蛋白質(zhì)，和IL-13與IL-13R相互作用（包括與IL-13bc和/或與IL-13Ra 1 的相互作用）的小分子和其他抑制劑，可用在治療或調(diào)理多種IL-3與其有關(guān)或受到IL-13 的活性（或其降低）影響的醫(yī)學(xué)病況（總稱"與IL-13相關(guān)病況"）。結(jié)合IL-13R的IL-4 的突變形式也可用作為IL-13詰抗劑（參看，如在Shanafelt等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA1998,95 :9454-8 ;Aversa 等人，醫(yī)學(xué)專家期刊，1993,178 :2213-8 ;和 Grunewald 等人， 免疫學(xué)期刊，1998,160 :4004-9中所描述的）。
[0083] 與IL-13相關(guān)病況包括但不限于Ig-調(diào)節(jié)的病況和疾病，具體地是IgE調(diào)節(jié)的病 況[包括但不限于遺傳性過敏癥，過敏性病況，哮喘，免疫復(fù)合疾?。ㄈ?，狼瘡，腎病綜合癥， 腎炎，血管球性腎炎，甲狀腺炎和Grave癥）];肺的炎性病況；免疫缺損，造血祖細(xì)胞的特異 缺損，和與其相關(guān)的病變；癌癥和其他疾病。這種病理狀況可由疾病，放射或藥物治療引起， 包括如，白血球減少癥，細(xì)菌性和病毒性感染，B細(xì)胞或T細(xì)胞缺少如骨髓移植后免疫細(xì)胞 或造血細(xì)胞缺損。因為IL-13抑制巨噬細(xì)胞活化，所以IL-13bc蛋白質(zhì)也可用來增強(qiáng)巨噬 細(xì)胞活化（即，在疫苗中，治療真菌或胞內(nèi)微生物，或寄生性感染）。
[0084] IL_13bc蛋白質(zhì)還可用來在體內(nèi)和體外加強(qiáng)IL-13的作用。如，IL_13bc蛋白質(zhì)可 與具有IL-13活性的蛋白質(zhì)（較好地是IL-13)結(jié)合，產(chǎn)生的組合物可與除IL-13bc鏈外表 達(dá)至少一條IL-13R鏈細(xì)胞接觸（較好地所有鏈?zhǔn)荌L-13R不是IL-13bc，如IL-13R α 1)。較 好地，接觸步驟通過給哺乳動物受試體體內(nèi)服用治療上有效量的這種組合物來實施。預(yù)建 立的IL-13蛋白質(zhì)和IL-13bc蛋白質(zhì)的締合可協(xié)助形成特定信號所需的完全I(xiàn)L-13/IL-13R 復(fù)合物。參看實施例，由Economides等人描述的方法，科學(xué)，270 ;1351 (1995)。
[0085] 從細(xì)胞中提純或重組制備的，IL_13bc蛋白質(zhì)和IL-13R抑制劑，當(dāng)與藥學(xué)可接受 的載體組合時，可用作為藥學(xué)組合物。這樣的組合物可含有，除了 IL-13bc或抑制劑和載體 夕卜，多種稀釋劑，填充劑，鹽，緩沖液，穩(wěn)定劑，溶劑，和其他此領(lǐng)域中眾所周知的物質(zhì)。"藥學(xué) 可接受的"意指不干擾活性組分的生物活性效果的無-毒性物質(zhì)。載體的特性將取決于服 用途徑。
[0086] 本發(fā)明的藥學(xué)組合物也可含有細(xì)胞因子，淋巴因子，或其他造血因子如M-CSF， GM-CSF，IL-1，IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11，IL-12, IL-14， IL-15，G-CSF，干細(xì)胞因子，和促紅細(xì)胞生成素。藥學(xué)組合物也可包括抗細(xì)胞因子抗體。藥 學(xué)組合物可含有溶血栓因子或抗-溶血栓因子，如血纖蛋白溶酶原激活物和因子VIII。藥 學(xué)組合物還進(jìn)一步包括其他抗炎性試劑。這種額外的因子和/或試劑可包括在藥學(xué)組合物 中，以與分離IL_13bc蛋白質(zhì)或IL-13bc抑制劑一起產(chǎn)生配合效果，或減小由分離IL-13bc 蛋白質(zhì)或IL-13bc抑制劑產(chǎn)生的副作用。相反地，分離IL-13bc或IL-13bc抑制劑可包含在 具體細(xì)胞因子，淋巴因子，其他造血因子，溶血栓因子或抗溶血栓因子，或抗-炎性試劑的 配方中，以減小細(xì)胞因子，淋巴因子，其他造血因子，溶血栓因子或抗溶血栓因子，或抗-炎 性試劑的副作用。
[0087] 本發(fā)明的藥學(xué)組合物可以是在脂質(zhì)體形式中，其中，除了其他藥學(xué)可接受的載體， 分離IL-13bc蛋白質(zhì)和IL-13bc抑制劑與兩親性試劑組合，兩親性試劑如以聚集形式如膠 束，不溶單層，液晶，或水溶液中的片晶形式存在的脂質(zhì)。適合脂質(zhì)體配方的脂質(zhì)包括，沒有 限制地，單酸甘油酯，甘油二酯，硫脂，溶血卵磷脂，磷脂，皂角苷，膽酸等等。這種脂質(zhì)體配 方的制備在此領(lǐng)域中技術(shù)范圍內(nèi)，如在美國專利No. 4, 235, 871 ;美國專利No. 4, 501，728 ; 美國專利No. 4, 837, 028 ;美國專利No. 4, 737, 323中所描述的，所有