細(xì)胞因子受體鏈的制作方法
【專利說(shuō)明】細(xì)胞因子受體鏈
[0001] 本申請(qǐng)是1999年12月13日遞交的申請(qǐng)?zhí)枮?9815591. 8,發(fā)明名稱為"細(xì)胞因子 受體鏈"的分案申請(qǐng)。
[0002] 本發(fā)明是1997年4月30日提交的申請(qǐng)序列號(hào)No. 08/841，751申請(qǐng)的部分繼續(xù)申 請(qǐng)，而序列號(hào)為No. 08/841，751的申請(qǐng)是1996年3月1日提交的序列號(hào)No. 08/609, 572申 請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0003] 本發(fā)明的領(lǐng)域
[0004] 本發(fā)明涉及對(duì)IL-13具有親和力的哺乳動(dòng)物細(xì)胞因子受體蛋白質(zhì)（包括但不限于 人類和鼠科動(dòng)物受體蛋白質(zhì)），其片段和用來(lái)表達(dá)這種蛋白質(zhì)的重組多核苷酸和細(xì)胞。
[0005] 本發(fā)明的背景
[0006] 已有多種調(diào)節(jié)分子，稱為細(xì)胞因子被確定，包括白細(xì)胞介素-13(IL-13)。IL-13 的多種蛋白質(zhì)形式和編碼多種形式的IL-13活性的DNA也在McKenzie等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA90 :3735 (1993) ;Minty 等人，自然 362 :248 (1993);和 Aversa 等人， W094/04680中作了描述。因此，"IL-13"包括具有這些文獻(xiàn)中所描述的序列和/或生物活 性的蛋白質(zhì)，不論是通過(guò)重組基因工程技術(shù)制備的，從自然產(chǎn)生因子或用其他因子誘導(dǎo)產(chǎn) 生因子的細(xì)胞源中提純的，或是通過(guò)化學(xué)技術(shù)合成的，或前述技術(shù)的組合中獲得的。
[0007] IL-13是與幾種生物活性的產(chǎn)生有關(guān)的細(xì)胞因子，包括誘導(dǎo)IgG4和IgE轉(zhuǎn)換，包含 在人類未成熟B細(xì)胞中[Punnonen等人，免疫學(xué)期刊，152 :1094(1994)];在正常人類B細(xì)胞 中誘導(dǎo)種系 IgE 重鏈（ε )轉(zhuǎn)錄和 CD23 表達(dá)[Punnonen 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 : 3730 (1993)];在存在⑶40L或抗⑶40mAb情況下誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖[Cocks等人，國(guó)際免疫學(xué)， 5 :657 (1993)]。盡管IL-13的許多活性與IL-4的活性相似，但與IL-4相反，IL-13對(duì)活化 的T細(xì)胞或T細(xì)胞克隆體沒有生長(zhǎng)促進(jìn)作用[Zurawski等人，EMBO J. 12 :2663 (1993)]。
[0008] 如同多數(shù)細(xì)胞因子，IL-13通過(guò)與在靶細(xì)胞表面的IL-13受體（"IL-13R"）相互 作用表現(xiàn)出某些生物活性。IL-13R和IL-4受體（"IL-4R"）具有相同的組分，其是受體 活化所需的；然而，IL-13不與用130kD IL-4R轉(zhuǎn)染的細(xì)胞結(jié)合（Zurawski等人，同上）。 因此，IL-13R必須含有至少一條其他配體結(jié)合鏈。細(xì)胞因子受體通常含有兩條或三條鏈。 IL-13的一條配體結(jié)合鏈的克隆最近已有報(bào)道（Hilton等人，Proc. Natl. Acad. Sci. 93 : 497-501)〇
[0009] 因此需要鑒別和克隆IL-13R的任何其他IL-13結(jié)合鏈的序列，以使IL-13R蛋白 質(zhì)可為各種目的制備，包括制備治療試劑，篩查IL-13結(jié)合受體的抑制劑和受體信號(hào)傳遞。
[0010] 本發(fā)明的概述
[0011] 依據(jù)本發(fā)明，公開了編碼白細(xì)胞介素-13受體的IL-13結(jié)合鏈的多核苷酸，包括但 不限于鼠科動(dòng)物和人類受體的多核苷酸。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括從下列組 中選取的核苷酸序列的分離多核苷酸：
[0012] (a)從核苷酸256到核苷酸1404的SEQ ID NO :1核苷酸序列；
[0013] (b)從核苷酸103到核苷酸1242的SEQ ID NO :3核苷酸序列；
[0014] (c)由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并從（a)或（b)定義的核苷酸序列的序列中變化而來(lái)的核 苷酸序列；
[0015] (d)在嚴(yán)格條件下能與（a)或（b)定義的核苷酸雜交的核苷酸序列；
[0016] (e)編碼（a)或（b)定義的序列的物種同源體的核苷酸序列；
[0017] (f) (a)或（b)定義的核苷酸序列的等位基因變體。
[0018] 較好地，核苷酸序列編碼具有人類IL-13受體生物活性的蛋白質(zhì)。核苷酸序列可 操作地與表達(dá)控制序列結(jié)合。在較好的實(shí)施方案中，多核苷酸包括從核苷酸256到核苷酸 1404的SEQ ID NO :1的核苷酸序列；從核苷酸319到核苷酸1257的SEQ ID NO :1的核苷 酸序列；從核苷酸1324到核苷酸1404的SEQ ID NO :1的核苷酸序列；從核苷酸103到核 苷酸1242的SEQ ID NO :3的核苷酸序列；從核苷酸178到核苷酸1125的SEQ ID NO :3的 核苷酸序列；從核苷酸1189到核苷酸1242的SEQ ID NO :3的核苷酸序列。
[0019] 本發(fā)明還提供了含有編碼包括在下列組中選取的氨基酸序列的肽或蛋白質(zhì)的核 苷酸序列的分離多核苷酸：
[0020] (a) SEQ ID NO :2 的氨基酸序列；
[0021] (b)從氨基酸22到氨基酸334的SEQ ID NO :2的氨基酸序列；
[0022] (c)從氨基酸357到氨基酸383的SEQ ID NO :2的氨基酸序列；
[0023] (d) SEQ ID NO :4 的氨基酸序列；
[0024] (e)從氨基酸26到氨基酸341的SEQ ID NO :4的氨基酸序列；
[0025] (f)從氨基酸363到氨基酸380的SEQ ID NO :4的氨基酸序列；
[0026] (g)具有IL-13受體結(jié)合鏈生物活性的（a)-(f)的片段。
[0027] 其他較好的實(shí)施方案編碼從氨基酸1到331的SEQ ID NO :2的氨基酸序列和從氨 基酸26到331的SEQ ID NO :2的氨基酸序列。
[0028] 本發(fā)明還提供了用多核苷酸轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，較好地是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
[0029] 在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了制備IL_13bc蛋白質(zhì)的方法。該方法包括：
[0030] (a)在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細(xì)胞培養(yǎng)物；
[0031] (b)從培養(yǎng)物中提純IL_13bc蛋白質(zhì)。
[0032] 本發(fā)明還提供了包括在下列組中選取的氨基酸序列的分離IL_13bc蛋白質(zhì)：
[0033] (a) SEQ ID NO :2 的氨基酸序列；
[0034] (b)從氨基酸22到氨基酸334的SEQ ID NO :2的氨基酸序列；
[0035] (c)從氨基酸357到氨基酸383的SEQ ID NO :2的氨基酸序列；
[0036] (d) SEQ ID NO :4 的氨基酸序列；
[0037] (e)從氨基酸26到氨基酸341的SEQ ID NO :4的氨基酸序列；
[0038] (f)從氨基酸363到氨基酸380的SEQ ID NO :4的氨基酸序列；
[0039] (g)具有IL-13受體結(jié)合鏈生物活性的（a)-(f)的片段。
[0040] 較好地，蛋白質(zhì)包括SEQ ID NO :2的氨基酸序列；從氨基酸22到氨基酸334的SEQ ID NO :2的氨基酸序列；SEQ ID NO :4的氨基酸序列；從氨基酸26到氨基酸341的SEQ ID NO :4的氨基酸序列。在其他較好的實(shí)施方案中，特異氨基酸序列組成融合蛋白（含有不是 從IL-13bc衍生的其他氨基酸序列）。較好的融合蛋白質(zhì)包括抗體片段，如Fc片段。特別 較好的實(shí)施方案包括從氨基酸1到氨基酸331的SEQ ID NO :2的氨基酸序列和從氨基酸26 到氨基酸331的SEQ ID NO :2的氨基酸序列。
[0041] 本發(fā)明還提供了含有本發(fā)明的蛋白質(zhì)和藥學(xué)可接受的載體的藥學(xué)組合物。
[0042] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了包括與本發(fā)明的蛋白質(zhì)特異反應(yīng)的抗體的組合物。
[0043] 本發(fā)明還提供了鑒別結(jié)合IL_13bc或IL-13受體的抑制劑的方法。這些方法包 括：
[0044] (a)將IL_13bc蛋白質(zhì)或其片段與IL-13或其片段結(jié)合，所說(shuō)的結(jié)合形成第一結(jié)合 混合物；
[0045] (b)測(cè)定在第一結(jié)合混合物中蛋白質(zhì)和IL-13或片段結(jié)合的量；
[0046] (c)將一種化合物與蛋白質(zhì)和IL-13或片段結(jié)合形成第二結(jié)合混合物；
[0047] (d)測(cè)定在第二結(jié)合混合物中結(jié)合的量；
[0048] (e)比較在第一結(jié)合混合物中的結(jié)合量和在第二結(jié)合混合物中的結(jié)合量；
[0049] 其中當(dāng)?shù)诙Y(jié)合混合物的結(jié)合量降低發(fā)生時(shí)，化合物能抑制IL-13與IL-13受體 的結(jié)合。
[0050] 本發(fā)明還提供了通過(guò)這些方法鑒別的IL-13R的抑制劑和含抑制劑的藥學(xué)組合 物。
[0051] 本發(fā)明還公開了在哺乳動(dòng)物受試體中抑制IL-13與IL-13bc蛋白質(zhì)或IL-13受體 結(jié)合的方法，其包括服用治療上有效量的含有IL_13bc蛋白質(zhì)，IL-13bc或IL-13R抑制劑 或IL-13bc蛋白質(zhì)抗體的組合物。
[0052] 本發(fā)明還提供了改善IL-13活性的方法，其包括將具有IL-13活性的蛋白質(zhì)與權(quán) 利要求11的蛋白質(zhì)結(jié)合，并將這樣的結(jié)合物與除了 IL_13bc外至少表達(dá)IL-13R-條鏈的 細(xì)胞接觸。較好地，接觸步驟通過(guò)給哺乳動(dòng)物受試體服用治療上有效量的這種結(jié)合物來(lái)實(shí) 施。
[0053] 本發(fā)明還提供了在哺乳動(dòng)物受試體內(nèi)治療與IL-13相關(guān)的病況的方法。所說(shuō)的方 法包括服用治療上有效量的含有IL-13拮抗劑和藥學(xué)可接受的載體的組合物。其他方法提 供了一種在哺乳動(dòng)物受試體中抑制IL-13和IL-13bc蛋白質(zhì)相互作用的方法，包括服用治 療上有效量的含有IL-13拮抗劑和藥學(xué)可接受的載體的組合物。較好地，拮抗劑是從下列 組中選取的，包括：IL-13bc蛋白質(zhì)，IL-13Ra 1的可溶形式，IL-13或其IL-13結(jié)合片段的 抗體，IL_13bc或其IL_13bc結(jié)合片段的抗體，IL-13R a 1或其IL-13R a 1結(jié)合片段的抗體， IL-4的IL-13R結(jié)合突變體，能抑制IL-13與IL-13bc相