本發(fā)明涉及組織保存，特別是涉及一種用于類器官培養(yǎng)的組織保存液及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、類器官是體外細(xì)胞的三維培養(yǎng)物，包含其來源器官的一些關(guān)鍵特性。類器官通常由組織樣本培養(yǎng)得到，組織樣本離體后，為保持組織的活性，提高類器官培養(yǎng)成功率，往往需要在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行處理及培養(yǎng)，一旦樣本離體時(shí)間超過4小時(shí)不作任何處理，就容易導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。但是由于交通運(yùn)輸時(shí)間長(zhǎng)和其他現(xiàn)實(shí)原因，離體的組織往往不能立即進(jìn)行處理，而是先把組織浸泡在相應(yīng)的組織保存液中，后再進(jìn)行處理。

2、目前，常見的組織體外保存液為磷酸緩沖鹽溶液（phosphate?buffer?saline，pbs）和細(xì)胞培養(yǎng)基。其中pbs緩沖液的主要成分包括磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉和氯化鉀等，具有鹽平衡、可調(diào)整的適宜的ph緩沖作用；細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成分包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、牛血清、抗生素等，可用于維持細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。但是在實(shí)際使用過程中發(fā)現(xiàn)，pbs緩沖液成分簡(jiǎn)單，但是功能局限，不能很好地保持體外組織的生物活性；細(xì)胞培養(yǎng)基成分復(fù)雜，成本較高不是作為組織保存液的最佳選擇。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種用于類器官培養(yǎng)的組織保存液及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供的組織保存液可低溫保存類器官培養(yǎng)用的組織樣本72小時(shí)，維持組織細(xì)胞活性，減少細(xì)胞損傷，提高類器官培養(yǎng)成功率。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種用于類器官培養(yǎng)的組織保存液，所述組織保存液以advanceddmem/f12培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包括以下濃度的組分：2-巰基乙醇（2-mercaptoethanol）50~60μm、牛血清白蛋白（bsa）10~30g/l、原代細(xì)胞抗生素100~200μg/ml和rock抑制劑8~12μm。

4、優(yōu)選的，所述組織保存液包括以下濃度的組分：2-巰基乙醇55μm、牛血清白蛋白10g/l、原代細(xì)胞抗生素100μg/ml和rock抑制劑10μm。

5、優(yōu)選的，所述原代細(xì)胞抗生素包括primocin。

6、優(yōu)選的，所述rock抑制劑包括y-27632。

7、本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述組織保存液的制備方法，包括以下步驟：

8、將2-巰基乙醇、牛血清白蛋白、原代細(xì)胞抗生素、rock抑制劑和advanced?dmem/f12培養(yǎng)基按比例混合后，用0.22μm的濾膜進(jìn)行過濾，得到濾液為所述組織保存液。

9、本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述組織保存液或利用上述技術(shù)方案所述制備方法制備得到的組織保存液在類器官培養(yǎng)用的組織樣本保存和/或運(yùn)輸中的應(yīng)用。

10、優(yōu)選的，所述組織樣本包括肺癌組織樣本、乳腺癌組織樣本和腸癌組織樣本中的一種或多種。

11、本發(fā)明提供了一種用于類器官培養(yǎng)的組織保存和/或運(yùn)輸方法，包括以下步驟：

12、將用于類器官培養(yǎng)的組織樣本放入組織保存液中，在4℃條件下運(yùn)輸或保存；所述組織保存液為上述技術(shù)方案所述組織保存液或利用上述技術(shù)方案所述制備方法制備得到的組織保存液。

13、優(yōu)選的，所述運(yùn)輸或保存的時(shí)間≤72小時(shí)。

14、優(yōu)選的，所述組織樣本包括肺癌組織樣本、乳腺癌組織樣本和腸癌組織樣本中的一種或多種。

15、有益效果：

16、本發(fā)明提供了一種用于類器官培養(yǎng)的組織保存液，所述組織保存液以advanceddmem/f12培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包括以下濃度的組分：2-巰基乙醇50~60μm、bsa?10~30g/l、原代細(xì)胞抗生素100~200μg/ml和rock抑制劑8~12μm。本發(fā)明提供的組織保存液中的2-巰基乙醇為生物抗氧化劑，可清除羥基自由基；bsa是血清主要蛋白成分，替代fbs作為細(xì)胞生長(zhǎng)和維持代謝活動(dòng)的氮源，并可減少細(xì)胞附著在離心管壁上；原代細(xì)胞抗生素可抑制細(xì)菌-真菌-支原體；rock抑制劑可抑制細(xì)胞凋亡。本發(fā)明通過適宜濃度的各組分復(fù)配，得到的組織保存液可低溫保存類器官培養(yǎng)用的組織樣本72小時(shí)，維持組織細(xì)胞活性，減少細(xì)胞損傷，并且不影響類器官的培養(yǎng)，提高類器官培養(yǎng)成功率。

技術(shù)特征：

1.一種用于類器官培養(yǎng)的組織保存液，其特征在于，以advanced?dmem/f12培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包括以下濃度的組分：2-巰基乙醇50~60μm、牛血清白蛋白10~30g/l、原代細(xì)胞抗生素100~200μg/ml和rock抑制劑8~12μm。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織保存液，其特征在于，所述組織保存液包括以下濃度的組分：2-巰基乙醇55μm、牛血清白蛋白10g/l、原代細(xì)胞抗生素100μg/ml和rock抑制劑10μm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組織保存液，其特征在于，所述原代細(xì)胞抗生素包括primocin。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組織保存液，其特征在于，所述rock抑制劑包括y-27632。

5.權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述組織保存液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

6.權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述組織保存液或利用權(quán)利要求5所述制備方法制備得到的組織保存液在類器官培養(yǎng)用的組織樣本保存和/或運(yùn)輸中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述組織樣本包括肺癌組織樣本、乳腺癌組織樣本和腸癌組織樣本中的一種或多種。

8.一種用于類器官培養(yǎng)的組織保存和/或運(yùn)輸方法，其特征在于，包括以下步驟：

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的保存和/或運(yùn)輸方法，其特征在于，所述運(yùn)輸或保存的時(shí)間≤72小時(shí)。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的保存和/或運(yùn)輸方法，其特征在于，所述組織樣本包括肺癌組織樣本、乳腺癌組織樣本和腸癌組織樣本中的一種或多種。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及組織保存技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種用于類器官培養(yǎng)的組織保存液及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供的組織保存液，以Advanced?DMEM/F12培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包括以下濃度的組分：2?巰基乙醇50~60μM、牛血清白蛋白10~30g/L、原代細(xì)胞抗生素100~200μg/ml和ROCK抑制劑8~12μM。本發(fā)明通過適宜濃度的各組分復(fù)配，得到的組織保存液可低溫保存類器官培養(yǎng)用的組織樣本72小時(shí)，維持組織細(xì)胞活性，減少細(xì)胞損傷，并且不影響類器官的培養(yǎng)，提高類器官培養(yǎng)成功率。

技術(shù)研發(fā)人員：王玉瑩,楊博,方改華
受保護(hù)的技術(shù)使用者：芯潮澎湃生物科技（南京）有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19