本發(fā)明涉及微生物，具體涉及植物乳植桿菌ksfy202409及其用于結(jié)直腸癌。

背景技術(shù)：

1、結(jié)直腸癌是一種危害極大的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，結(jié)直腸癌的發(fā)生受遺傳因素和環(huán)境因素的影響，早起結(jié)直腸癌患者沒有明顯癥狀，典型的結(jié)直腸癌癥狀為無痛性便血，且伴有排便習(xí)慣改變，便條變細(xì)或有壓痕。左半結(jié)直腸癌易導(dǎo)致腸梗阻、腸穿孔，右半結(jié)直腸癌則更多的是引起全身癥狀。結(jié)直腸癌主要通過淋巴和血途徑播散，也可以通過種植的方式轉(zhuǎn)移。

2、結(jié)直腸癌的主要治療策略包括手術(shù)切除、放療、化療和生物藥物療法。手術(shù)完全切除原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移灶是較為理想的治療方式，但是對(duì)于晚期患者實(shí)施手術(shù)治療存在一定的困難，對(duì)不能切除的腫瘤病變和不能耐受手術(shù)的患者，放化療是最主要的措施，能夠縮小腫瘤和抑制腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。有研究表明，長(zhǎng)期使用阿司匹林可降低結(jié)直腸癌的發(fā)病率，但在應(yīng)用阿司匹林的同時(shí)，會(huì)出現(xiàn)一定的副作用（如消化不良、胃腸道出血、胃痛等），因此，提供一株具有抑制腫瘤作用的益生菌，對(duì)于降低結(jié)直腸癌的死亡率具有重要意義。

3、中國(guó)專利cn107629987a中公開了一種具有抑制結(jié)直腸癌發(fā)生功能的植物乳桿菌及其用途，該發(fā)明提供的植物乳桿菌ccfm164能耐受胃酸和膽鹽，能夠顯著地減輕結(jié)直腸癌模型小鼠結(jié)直腸部位的炎癥反應(yīng)，通過調(diào)節(jié)結(jié)直腸組織中notch1、notch2信號(hào)通路及vegfr2分子的表達(dá)，減少模型小鼠結(jié)、直腸部位的腫瘤數(shù)量。此外，植物乳桿菌ccfm164還可以改善腸道菌群結(jié)構(gòu)和腸道內(nèi)短鏈脂肪酸水平。

4、偶氮甲烷（aom）是一種化學(xué)誘變劑，可導(dǎo)致dna烷基化而誘導(dǎo)癌變。葡聚糖硫酸鈉（dss）是一種肝素樣多糖，可以損害上皮完整性，從而增加腸道通透性，這可能進(jìn)一步導(dǎo)致免疫細(xì)胞浸潤(rùn)和腸道炎癥。aom/dss模型被認(rèn)為是穩(wěn)定且可重復(fù)的，該模型的發(fā)病機(jī)制與人類結(jié)直腸腫瘤相似，且這些腫瘤很少具有侵襲性。首次注射aom然后在10個(gè)周期內(nèi)進(jìn)行三個(gè)七天周期的dss的炎癥驅(qū)動(dòng)結(jié)腸腫瘤，腫瘤包含浸潤(rùn)性炎癥細(xì)胞、增殖癌細(xì)胞、血管、腫瘤基質(zhì)以及構(gòu)成組織微環(huán)境的各種相關(guān)組織細(xì)胞。該模型誘導(dǎo)的腫瘤，在組織學(xué)和分子變化水平上與人類結(jié)直腸癌中發(fā)生的腫瘤非常相似，為結(jié)直腸癌疾病的腫瘤發(fā)生和預(yù)防研究提供了非常有價(jià)值的模型。因此使用aom/dss聯(lián)合誘導(dǎo)小鼠自發(fā)性腫瘤模型，來模擬人體結(jié)直腸癌的病程。

5、益生菌因具有安全高效、無毒副作用的特性被作為一種新型的潛在藥物替代物，目前對(duì)于具有防止結(jié)直腸癌的益生菌研究較少，亟需提供一種防治結(jié)直腸癌療效較好，安全高效的益生菌。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是公開植物乳植桿菌ksfy202409及其用于結(jié)直腸癌。

2、為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

3、一方面，本發(fā)明提供了一種植物乳植桿菌（ lactiplantibacillus?plantarum），保藏編號(hào)為cgmcc?no.?31103。

4、具體地，所述的植物乳植桿菌為植物乳植桿菌ksfy202409。

5、具體地，所述的植物乳植桿菌的菌落特征為顏色多為白色或乳白色，形狀為圓形，邊緣整齊，表面濕潤(rùn)光滑。

6、又一方面，本發(fā)明提供了植物乳植桿菌的培養(yǎng)方法，所述的培養(yǎng)方法為將植物乳植桿菌接種至培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

7、具體地，所述的培養(yǎng)基包括但不限于mrs培養(yǎng)基、m17培養(yǎng)基、pda培養(yǎng)基、lb培養(yǎng)基、tb培養(yǎng)基、sob培養(yǎng)基、tpy培養(yǎng)基、改良tja培養(yǎng)基、改良mc培養(yǎng)基、ycfa培養(yǎng)基。

8、具體地，所述的培養(yǎng)方法培養(yǎng)得到的培養(yǎng)物包括植物乳植桿菌發(fā)酵液、植物乳植桿菌發(fā)酵液沉淀、植物乳植桿菌發(fā)酵液上清。

9、具體地，所述的發(fā)酵液是指將菌種接種于培養(yǎng)基，培養(yǎng)后的液體。

10、進(jìn)一步具體地，所述的發(fā)酵液上清是指發(fā)酵液經(jīng)離心后的上層的澄清液體；內(nèi)含細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖過程豐富的代謝產(chǎn)物及一部分菌體碎片。

11、進(jìn)一步具體地，所述的發(fā)酵液沉淀是指離心后的液體沉淀，包括游離的蛋白，殘留的菌體，破碎的細(xì)胞，培養(yǎng)基質(zhì)的殘?jiān)?/p>

12、又一方面，本發(fā)明提供了一種益生菌制劑，所述的益生菌制劑包括上述的植物乳植桿菌或上述所述的培養(yǎng)方法培養(yǎng)得到的培養(yǎng)物。

13、具體地，所述的益生菌制劑為粉劑或液體制劑。

14、進(jìn)一步地，所述的菌劑可以為固體、液體、半固體或任意本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過當(dāng)前的或未來可能出現(xiàn)的技術(shù)獲得的包含實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所述任一應(yīng)用、功能或效果的必要活性成分的物理形式。

15、對(duì)于一些實(shí)施方式，所述的菌劑為固體形式。具體地，可以為凍干粉。

16、具體地，凍干粉的制備方法可以采用本領(lǐng)域當(dāng)前常規(guī)使用的方法，也可以采用未來可能出現(xiàn)的其他方法以獲得微生物或微生物培養(yǎng)物的固體形式的產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)闡明的是，凍干粉的制備方法不應(yīng)當(dāng)成為限制本發(fā)明保護(hù)范圍的條件。

17、又一方面，本發(fā)明提供了上述的植物乳植桿菌或上述的培養(yǎng)方法培養(yǎng)得到的培養(yǎng)物或上述的益生菌制劑在制備預(yù)防或治療結(jié)直腸癌的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

18、具體地，所述的結(jié)腸癌為炎癥性結(jié)腸癌。

19、具體地，所述的結(jié)腸癌包括左半結(jié)腸癌和右半結(jié)腸癌。

20、進(jìn)一步地，所述的左半結(jié)腸癌包括左1/3橫結(jié)腸癌、脾曲結(jié)腸癌、降結(jié)腸癌、乙狀結(jié)腸癌和直腸癌。

21、進(jìn)一步地，所述的右半結(jié)腸癌包括盲腸癌、闌尾癌、升結(jié)腸癌、肝曲結(jié)腸癌、右2/3橫結(jié)腸癌。

22、具體地，所述的產(chǎn)品中植物乳植桿菌的活菌數(shù)為1×103-1×1014cfu/ml或1×103-1×1014cfu/g，具體如1×103cfu/ml（cfu/g）、1×104cfu/ml（cfu/g）、1×105cfu/ml（cfu/g）、1×106cfu/ml（cfu/g）、1×107cfu/ml（cfu/g）、1×108cfu/ml（cfu/g）、1×109cfu/ml（cfu/g）、1×1010cfu/ml（cfu/g）、1×1011cfu/ml（cfu/g）、1×1012cfu/ml（cfu/g）、1×1013cfu/ml（cfu/g）、1×1014cfu/ml（cfu/g）等，該數(shù)值范圍內(nèi)的其他點(diǎn)值均可選擇。

23、進(jìn)一步地，所述的產(chǎn)品中植物乳植桿菌的活菌數(shù)為1×108-1×109cfu/ml或1×108-1×109cfu/g。

24、再進(jìn)一步地，所述的產(chǎn)品中植物乳植桿菌的活菌數(shù)為1×109cfu/ml或1×109cfu/g。

25、具體地，所述的產(chǎn)品為藥物。

26、進(jìn)一步地，所述的藥物中包括藥學(xué)上可接受的載體。

27、再進(jìn)一步地，所述的藥學(xué)上可接受的載體選自賦形劑、穩(wěn)定劑、稀釋劑、粘合劑、防腐劑、潤(rùn)滑劑中的一種或多種。

28、具體地，所述賦形劑選自微晶纖維素、乳糖、預(yù)膠化淀粉、環(huán)糊精、羧甲基纖維素、甘露醇中的至少一種。

29、具體地，所述穩(wěn)定劑選自瓊脂、藻酸、纖維素醚、羧甲基甲殼酯中的至少一種。

30、具體地，所述稀釋劑選自赤蘚糖醇、甘露醇、山梨糖醇、木糖醇、乳糖、蔗糖、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、磷酸鈣、檸檬酸鈣、結(jié)晶纖維素中的至少一種。

31、具體地，所述粘合劑選自乙醇、淀粉漿、糖漿、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一種。

32、具體地，所述防腐劑選自羥苯甲酸甲酯、對(duì)羥苯甲酸丙酯、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、三氯叔丁醇、硫柳汞、氧氰化汞、苯氧乙醇、氯己定、苯甲酸、苯甲酸鈉、氯甲酚、苯扎溴銨、苯扎氯銨、羥苯乙酯中的至少一種。

33、具體地，所述潤(rùn)滑劑選自硬脂酸鎂、硬脂酸、氯化鈉、油酸鈉、月桂醇硫酸鈉、泊洛沙姆中的至少一種。

34、具體地，所述的藥物的劑型根據(jù)給藥方式包括但不限于：經(jīng)胃腸道給藥劑型和非經(jīng)胃腸道給藥劑型。

35、進(jìn)一步地，所述的經(jīng)胃腸道給藥劑型包括但不限于片劑、散劑、顆粒劑、溶液劑、膠囊劑、乳劑、混懸劑、油劑。

36、進(jìn)一步地，所述的非經(jīng)胃腸道給藥劑型包括但不限于：注射給藥劑型、呼吸道給藥劑型、皮膚給藥劑型、粘膜給藥劑型和腔道給藥劑型。

37、再進(jìn)一步地，所述的注射給藥劑型包括但不限于靜脈注射劑、肌內(nèi)注射劑、皮下注射劑、皮內(nèi)注射劑、腔內(nèi)注射劑。

38、再進(jìn)一步地，所述的呼吸道給藥劑型包括但不限于噴霧劑、氣霧劑和粉霧劑。

39、再進(jìn)一步地，所述的皮膚給藥劑型包括但不限于洗劑、軟膏劑、外用溶液劑、硬稿劑、糊劑、貼劑。

40、再進(jìn)一步地，所述的粘膜給藥劑型包括但不限于滴眼劑、滴鼻劑、眼用軟膏劑、舌下片劑、貼膜劑。

41、再進(jìn)一步地，所述的腔道給藥劑型包括但不限于栓劑、氣霧劑、泡騰片、滴劑和滴丸劑。

42、具體地，所述的產(chǎn)品具有以下作用：

43、（1）提高患者的體重；

44、（2）降低脾臟和肝臟指數(shù)；

45、（3）減少結(jié)腸縮短和腸道指數(shù)；

46、（4）減少腫瘤數(shù)目；

47、（5）降低血清和結(jié)腸組織中炎癥細(xì)胞因子il-1β、il-6、tnf-α和inos的表達(dá)水平；

48、（6）下調(diào)結(jié)腸組織中 bcl-2、 bcl-xl和 bcl-w的mrna表達(dá)，上調(diào) bax的mrna表達(dá)。

49、又一方面，本發(fā)明提供了一種預(yù)防或治療結(jié)直腸癌的藥物組合物，所述的藥物組合物中包含上述的植物乳植桿菌或上述的培養(yǎng)方法培養(yǎng)得到的培養(yǎng)物或上述的益生菌制劑。

50、具體地，所述的藥物組合物中植物乳植桿菌的活菌數(shù)為1×103-1×1014cfu/ml或1×103-1×1014cfu/g，具體如1×103cfu/ml（cfu/g）、1×104cfu/ml（cfu/g）、1×105cfu/ml（cfu/g）、1×106cfu/ml（cfu/g）、1×107cfu/ml（cfu/g）、1×108cfu/ml（cfu/g）、1×109cfu/ml（cfu/g）、1×1010cfu/ml（cfu/g）、1×1011cfu/ml（cfu/g）、1×1012cfu/ml（cfu/g）、1×1013cfu/ml（cfu/g）、1×1014cfu/ml（cfu/g）等，該數(shù)值范圍內(nèi)的其他點(diǎn)值均可選擇。

51、進(jìn)一步地，所述的藥物組合物中植物乳植桿菌的活菌數(shù)為1×108-1×109cfu/ml或1×108-1×109cfu/g。

52、再進(jìn)一步地，所述的藥物組合物中植物乳植桿菌的活菌數(shù)為1×109cfu/ml或1×109cfu/g。

53、具體地，所述的藥物組合物中還包括藥學(xué)上可接受的載體。

54、再進(jìn)一步地，所述的藥學(xué)上可接受的載體選自賦形劑、穩(wěn)定劑、稀釋劑、粘合劑、防腐劑、潤(rùn)滑劑中的一種或多種。

55、本發(fā)明的有益效果為：

56、（1）植物乳植桿菌ksfy202409顯著改善結(jié)直腸癌小鼠因患癌導(dǎo)致的體重下降、臟器指數(shù)升高、結(jié)腸縮短和腸道指數(shù)升高的癥狀，有效減少患癌小鼠的腸道腫瘤發(fā)生率，改善直腸組織病理損傷。

57、（2）植物乳植桿菌ksfy202409的干預(yù)還顯著降低小鼠血清和結(jié)腸組織中炎癥細(xì)胞因子il-1β、il-6、tnf-α和信使分子inos的表達(dá)水平。

58、（3）植物乳植桿菌ksfy202409還可在基因?qū)用骘@著下調(diào)結(jié)腸組織中抗凋亡因子 bcl-2、 bcl-xl和 bcl-w的mrna表達(dá)，上調(diào)促凋亡因子 bax的mrna表達(dá)。

59、本發(fā)明首次提示了植物乳植桿菌ksfy202409在干預(yù)小鼠炎癥相關(guān)性結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的顯著效果，揭示了對(duì)炎癥相關(guān)性結(jié)直腸癌的抗炎作用和抗腫瘤作用，可用作預(yù)防和輔助治療炎癥相關(guān)性結(jié)直腸癌的潛力菌株。為ksfy202409對(duì)腸道的健康功能性提供了科學(xué)證據(jù)。

60、保藏說明

61、生物材料：ksfy202409

62、保藏編號(hào)：cgmcc?no.?31103；

63、分類命名：植物乳植桿菌 lactiplantibacillus?plantarum；

64、保藏時(shí)間：2024年06月27日；

65、保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；

66、保藏單位簡(jiǎn)稱：cgmcc；

67、保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。