本實用新型屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒，具體涉及一種超高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒。
背景技術(shù)：
在自然條件下,很多質(zhì)粒都可通過細(xì)菌接合作用轉(zhuǎn)移到新的宿主內(nèi),但在人工構(gòu)建的質(zhì)粒載體中,一般缺乏此種轉(zhuǎn)移所必需的特定基因,因此不能自行完成從一個細(xì)胞到另一個細(xì)胞的接合轉(zhuǎn)移。如需將質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)移進(jìn)受體細(xì)菌，需誘導(dǎo)受體細(xì)菌產(chǎn)生一種短暫的感受態(tài)以攝取外源DNA。轉(zhuǎn)化過程所用的受體細(xì)胞一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株，即不含限制性內(nèi)切酶和甲基化酶的突變體,它可以容忍外源DNA分子進(jìn)入體內(nèi)并穩(wěn)定地遺傳給后代。受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法 (如電擊法,CaCl2,RbCl(KCl)等化學(xué)試劑法)的處理后,細(xì)胞膜的通透性發(fā)生了暫時性的改變,成為能允許外源DNA分子進(jìn)入的感受態(tài)細(xì)胞(Competentcell)。
目前感受態(tài)細(xì)胞制備技術(shù)成熟，但各科研機構(gòu)、高校實驗室或市場已有產(chǎn)品均有針對制備方法進(jìn)行不同的優(yōu)化改進(jìn)，但所制備的感受態(tài)細(xì)胞往往有轉(zhuǎn)化率低下，或轉(zhuǎn)化率不穩(wěn)定的缺點，致使后續(xù)試驗存在受到感受態(tài)細(xì)胞質(zhì)量差的影響或?qū)嶒灲Y(jié)果不可靠的問題，因此開發(fā)一種可以快速、操作簡單、所制備的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化率高的超高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒顯得尤為重要。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本實用新型要解決的技術(shù)問題為目前市場上針對感受態(tài)細(xì)胞制備的試劑盒操作復(fù)雜、耗時長、所制備感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化率低下或不穩(wěn)定的問題，本實用新型能較好的應(yīng)用于超高效感受態(tài)細(xì)胞的制備，體積小，操作簡單、便于運輸攜帶和使用。
為實現(xiàn)上述目的，本實用新型采用以下技術(shù)方案：
一種超高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒,其包括盒體(1)、海綿襯墊(2)，所述的海綿襯墊(2)置于盒體(1)內(nèi)，海綿襯墊(2)上設(shè)有容器孔并裝有多個裝有試劑的試劑瓶或試劑管，分別為裝有試劑A的試劑瓶(3)、裝有試劑B的試劑瓶(4)、裝有pUC19質(zhì)粒的試劑管(5)。
所述的容器孔較佳的為3個，容器孔在所述的襯墊上為單排排列，上述的裝有試劑A的試劑瓶為20ml試劑瓶，裝有試劑B的試劑瓶為20ml試劑瓶,裝有 pUC19質(zhì)粒的試劑管為0.5ml試劑管。
上述的超高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒試劑A主要包括20mmol/L的CaCl2,試劑B主要包括80mmol/L的MgCl2溶液中。.
優(yōu)選地，所述的pUC19質(zhì)粒為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒。
本實用新型的保存溫度為-20℃，盡量減少反復(fù)凍融。
本實用新型較佳的使用方法為：
1.菌體的培養(yǎng)；
2.菌體的收集；
3.菌體的重懸；
4.分裝并保存；
5.轉(zhuǎn)化效率的測試。
優(yōu)選地，所述的高效感受態(tài)細(xì)胞制備步驟包括：
1.菌體的培養(yǎng)，挑取凍存的甘油菌或挑取劃線活化的單菌落至70ml的LB 培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，直至OD600達(dá)0.3至0.4；
2.菌體的收集，冰浴15分鐘，4攝氏度10000g離心5分鐘，棄上清；
3.加入預(yù)冷5ml的試劑A和試劑B，輕輕晃動并用移液器捶打重懸菌體；
4.重懸的菌體即為感受態(tài)細(xì)胞，冰上分裝，-80攝氏度保存；
5.轉(zhuǎn)化效率的測試。
應(yīng)用本實用新型的有益效果為：本實用新型提供的一種超高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒，通過使用優(yōu)化設(shè)計的制備方法，有效克服了常規(guī)制備方法步驟繁瑣，耗時長，制備的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化率低下或轉(zhuǎn)化率不穩(wěn)定等問題。
本實用新型提供的超高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒設(shè)計合理，內(nèi)部結(jié)構(gòu)及各試劑瓶和試劑管排列有序，大小適宜，便于運輸和使用。
附圖說明
圖1為本發(fā)明的超高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施方式
為了能夠更清楚地描述本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，下面結(jié)合具體實施例來進(jìn)行進(jìn)一步的描述。
本發(fā)明所述的一種超高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒，包括試劑A，試劑B，pUC19 質(zhì)粒。
所述的，本實用新型優(yōu)選的試劑A和試劑B的體積均為15ml，試劑瓶規(guī)格為20ml。
所述的pUC19質(zhì)粒為本領(lǐng)域常規(guī)的質(zhì)粒，pUC19質(zhì)粒的體積為0.05ml，離心管規(guī)格為0.5ml。
所述的超高效感受態(tài)細(xì)胞制備用試劑A包括主要包括20mmol/L的CaCl2,試劑B主要包括80mmol/L的MgCl2溶液中。
所述的裝有超高效感受態(tài)細(xì)胞制備用試劑A、試劑B的試劑瓶，裝有pUC19 質(zhì)粒的試劑管均放置于海綿襯墊上的容器孔，海綿襯墊放置于試劑盒內(nèi)。
本發(fā)明所述的超高效感受態(tài)細(xì)胞制備方法如下：
1.菌體的培養(yǎng)，挑取凍存的EcoliDH5α甘油菌或挑取劃線活化的單菌落至 5ml的LB培養(yǎng)基，37攝氏度250轉(zhuǎn)進(jìn)行培養(yǎng)12小時，吸取2ml培養(yǎng)液至70ml 的LB培養(yǎng)基，37攝氏度250轉(zhuǎn)進(jìn)行培養(yǎng)直至OD600達(dá)0.3至0.4；
2.菌體的收集，冰浴15分鐘，4攝氏度10000g離心5分鐘，棄上清；
3.加入預(yù)冷5ml的試劑A和試劑B，輕輕晃動并用移液器捶打重懸菌體；
4.重懸的菌體即為感受態(tài)細(xì)胞，冰上分裝，100ul/管，-80攝氏度保存或立
即使用；
5.取100ul感受態(tài)細(xì)胞，將2ul(5pg/ul)的pUC19質(zhì)粒加入EcoliDH5α大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中，吹打混勻，置于冰上，靜置30min(同時設(shè)置一加入無菌水的感受態(tài)細(xì)胞作為空白對照)；
6.將步驟5中混合物迅速放入42℃水浴中熱激，90s；
7.加入500μlLB培養(yǎng)基(不加抗生素)，37℃，250g·min-1，搖培40min；
8.離心，13000g·min-1，室溫，1min；
9.棄400μl上清，留余100μl上清并將菌吹打重懸，并加入到加有氨芐抗生素的抗性LB平板；
10.涂板，灼燒涂布棒，待冷卻后將菌液涂布在平板上，37℃倒置培養(yǎng)，12～ 15h；
11.計算菌落數(shù)及轉(zhuǎn)化率。
在此說明書中，本發(fā)明已參照其特定的實施例作了描述。但是，很顯然仍可以作出各種修改和變換而不背離本發(fā)明的精神和范圍。因此，說明書和附圖應(yīng)被認(rèn)為是說明性的而非限制性的。
綜上所述，本實用新型結(jié)構(gòu)簡單、使用方便、設(shè)計合理、制備過程無需特殊實驗環(huán)境和儀器設(shè)備，該試劑盒在超高效感受態(tài)細(xì)胞制備時具有操作簡單、耗時短、所制備感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化率高、便于運輸攜帶和使用等優(yōu)點。