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促進羅漢果UGT72B21基因表達的方法與流程

文檔序號:11278774閱讀:280來源:國知局

本發(fā)明屬于植物生物技術領域,涉及一種促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法。



背景技術:

羅漢果甜苷v屬于葫蘆烷型四環(huán)三萜類物質(zhì),申請人前期根據(jù)羅漢果轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),已推導出甜苷v可能的生物合成途徑。羅漢果甜苷v生物合成的前體物質(zhì)是異戊烯二磷酸(ipp)和3,3-二甲基烯內(nèi)基焦磷酸(dmapp),二者是通過甲羥戊酸(mva)和甲基赤蘚糖醇磷酸化(mep)兩條途徑形成,mva途徑發(fā)生在胞質(zhì)中,mep途徑發(fā)生在質(zhì)體中。來源于上述兩途徑的ipp或dmapp經(jīng)牻牛兒基焦磷酸合酶(gps)催化形成牻牛兒基焦磷酸(gpp),ipp與gpp在法呢基焦磷酸合酶(fps)的催化作用下進而形成法呢基焦磷酸(fpp),然后經(jīng)角鯊烯合酶(ss)、角鯊烯環(huán)氧化酶(se)的催化形成2,3-氧化角鯊烯,葫蘆二烯醇合酶(cs)進一步催化形成葫蘆二烯醇,最后在cyp450酶和葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(ugt)的作用下,形成羅漢果甜苷v。

異戊二烯類物質(zhì)的產(chǎn)生受到限速酶活性的嚴格調(diào)控,一直被認為在其生物合成途徑中起著重要的調(diào)控作用。作為異戊二烯途徑中的限速酶,ugt基因的表達對羅漢果甜苷v的生物合成起著決定性作用。過表達ugt基因,可以促進羅漢果甜苷v的積累;相反,如果抑制ugt基因的表達,羅漢果甜苷v的產(chǎn)量將顯著降低。然,ugt基因是個超基因家族,申請人前期研究發(fā)現(xiàn),ugt72b21可能參與羅漢果甜苷v的合成途徑?,F(xiàn)有技術中未見有促進羅漢果ugt72b21基因表達的報道。



技術實現(xiàn)要素:

本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷,并提供至少后面將說明的優(yōu)點。

本發(fā)明還有一個目的是提供一種促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法,具有見效快、成本低、操作簡單、方便實施等特征,為有效地促進羅漢果甜苷v的積累奠定基石。

為此,本發(fā)明提供的技術方案為:

一種促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法,包括如下步驟:在羅漢果組培過程中和羅漢果栽培過程中,施加濃度50-400μmol/l的茉莉酸甲酯,以促進羅漢果ugt72b21基因的表達。

優(yōu)選的是,所述的促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法中,所述羅漢果組培過程中,將所述茉莉酸甲酯添加到所述羅漢果組培過程中的固體培養(yǎng)基中。

優(yōu)選的是,所述的促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法中,所述羅漢果栽培過程中,于羅漢果授粉后20~30天后,向羅漢果表面噴灑所述濃度50-400μmol/l的茉莉酸甲酯至其表面滴水為止,每天于早上、中午和晚上各噴灑一次,連續(xù)噴施5天。

優(yōu)選的是,所述的促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法中,所述羅漢果組培過程中所述固體培養(yǎng)基包含:ms,1.5mg/l6-ba,0.3mg/liba,3.5g/l瓊脂,30g/l蔗糖和1.0g/l活性炭。

優(yōu)選的是,所述的促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法中,所述羅漢果組培過程中的培養(yǎng)條件為:于相對濕度60-66%,光照強度1400lux,光照時間8h/d和溫度21~25℃條件下培養(yǎng)30d。

優(yōu)選的是,所述的促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法,還包括:茉莉酸母液配制:用2%(v/v)的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯,配制成10000μmol/l的母液,并用0.22μm的微孔濾膜滅菌,得到滅菌后的茉莉酸甲酯母液;

將該茉莉酸甲酯母液添加到羅漢果組培過程中的固體培養(yǎng)基中,至茉莉酸甲酯的終濃度為50-400μmol/l;

用乙醇助溶,將茉莉酸甲酯母液配成50-400μmol/l的溶液,施加于所述羅漢果栽培過程中。

優(yōu)選的是,所述的促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法中,還包括如下步驟:

qrt-pcr檢測ugt72b21基因的表達:

1)采集羅漢果果實,切成2-4mm小塊并分別用錫箔紙包好,立即置于液氮中速凍,保存于-80℃?zhèn)溆茫?/p>

2)采用trizol法提取羅漢果果實總rna;

3)將rna反轉(zhuǎn)錄為cdna;

4)采用abi7500實時熒光定量pcr儀檢測ugt72b21基因的表達量,其中,擴增ugt72b21的引物序列為:上游引物cgccatatgcaccaccaccaccaccacatggaagctacgcagagagacg,下游引物ccctcgagttaagactcaagaaatgcaaactta,內(nèi)參基因用ubq5基因,擴增引物序列為:上游引物ataaaagacccagcaccacattc,下游引物cccttgccgactacaacatcc。

優(yōu)選的是,所述的促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法中,所述羅漢果栽培過程中,向羅漢果表面噴灑的茉莉酸甲酯的溫度為4~10℃,同時,還采用注射的方式將茉莉酸甲酯注射入羅漢果植株的主莖中,注射量為5~16ml,注射的速率為4~8ml/h。

本發(fā)明至少包括以下有益效果:

(1)本發(fā)明通過在羅漢果組培苗和栽培羅漢果施加茉莉酸甲酯,短期內(nèi)快速誘導羅漢果甜苷v生物合成途徑中關鍵酶基因ugt72b21的高表達,為促進羅漢果甜苷v含量的積累打下堅實基礎;

(2)本發(fā)明操作簡便,成本低,對環(huán)境友好,適于規(guī)?;a(chǎn),具有較強的實用性和推廣價值。

本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn),部分還將通過對本發(fā)明的研究和實踐而為本領域的技術人員所理解。

具體實施方式

下面結合實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明,以令本領域技術人員參照說明書文字能夠據(jù)以實施。

應當理解,本文所使用的諸如“具有”、“包含”以及“包括”術語并不配出一個或多個其它元件或其組合的存在或添加。

本發(fā)明提供一種促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法,包括如下步驟:在羅漢果組培過程中和羅漢果栽培過程中,施加濃度50-400μmol/l的茉莉酸甲酯,以促進羅漢果ugt72b21基因的表達。

在本發(fā)明的其中一個實施例中,作為優(yōu)選,所述羅漢果組培過程中,將所述茉莉酸甲酯添加到所述羅漢果組培過程中的固體培養(yǎng)基中。

在上述方案中,作為優(yōu)選,所述羅漢果組培過程中所述固體培養(yǎng)基包含:ms,1.5mg/l6-ba,0.3mg/liba,3.5g/l瓊脂,30g/l蔗糖和1.0g/l活性炭。

在本發(fā)明的其中一個實施例中,作為優(yōu)選,所述羅漢果栽培過程中,于羅漢果授粉后20~30天后,向羅漢果表面噴灑所述濃度50-400μmol/l的茉莉酸甲酯至其表面滴水為止,每天于早上、中午和晚上各噴灑一次,連續(xù)噴施5天。

在本發(fā)明的其中一個實施例中,作為優(yōu)選,所述羅漢果組培過程中的培養(yǎng)條件為:于相對濕度60-66%,光照強度1400lux,光照時間8h/d和溫度21~25℃條件下培養(yǎng)30d。

在本發(fā)明的其中一個實施例中,作為優(yōu)選,還包括:茉莉酸母液配制:用2%(v/v)的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯,配制成10000μmol/l的母液,并用0.22μm的微孔濾膜滅菌,得到滅菌后的茉莉酸甲酯母液;

將該茉莉酸甲酯母液添加到羅漢果組培過程中的固體培養(yǎng)基中,至茉莉酸甲酯的終濃度為50-400μmol/l;

用乙醇助溶,將茉莉酸甲酯母液配成50-400μmol/l的溶液,施加于所述羅漢果栽培過程中。

在本發(fā)明的其中一個實施例中,作為優(yōu)選,還包括如下步驟:

qrt-pcr檢測ugt72b21基因的表達:

1)采集羅漢果果實,切成2-4mm小塊并分別用錫箔紙包好,立即置于液氮中速凍,保存于-80℃?zhèn)溆茫?/p>

2)采用trizol法提取羅漢果果實總rna;

3)將rna反轉(zhuǎn)錄為cdna;

4)采用abi7500實時熒光定量pcr儀檢測ugt72b21基因的表達量,其中,擴增ugt72b21的引物序列為:上游引物cgccatatgcaccaccaccaccaccacatggaagctacgcagagagacg(seqidno:1),下游引物ccctcgagttaagactcaagaaatgcaaactta(seqidno:2),內(nèi)參基因用ubq5基因,擴增引物序列為:上游引物ataaaagacccagcaccacattc(seqidno:3),下游引物cccttgccgactacaacatcc(seqidno:4)。

在本發(fā)明的其中一個實施例中,作為優(yōu)選,所述羅漢果栽培過程中,向羅漢果表面噴灑的茉莉酸甲酯的溫度為4~10℃,同時,還采用注射的方式將茉莉酸甲酯注射入羅漢果植株的主莖中,注射量為5~16ml,注射的速率為4~8ml/h。在羅漢果栽培過程中,向羅漢果表面噴灑此溫度的茉莉酸甲酯溶液,對羅漢果的果實給予一定的冷刺激,能夠進一步誘導ugt72b21基因的表達。將茉莉酸甲酯直接注射于羅漢果體內(nèi),能夠便于羅漢果植株對其的直接吸收,進一步加大吸收效率,且由于是直接注射到體內(nèi),冷刺激更加明顯,能夠進一步促進ugt72b21基因的表達。

實施例1

一種促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法,包括以下步驟:

(1)羅漢果組培苗施加茉莉酸甲酯;用2%的乙醇水溶液(v/v)溶解茉莉酸甲酯,配制成10000μmol/l的母液,并用0.22μm的微孔濾膜滅菌,將滅菌后的茉莉酸甲酯母液添加到固體培養(yǎng)基中,至茉莉酸甲酯最終濃度為50μmol/l,滅菌并冷卻至24℃;固體培養(yǎng)基配比為ms+6-ba1.5mg/l+iba0.3mg/l+3.5g/l瓊脂+30g/l蔗糖+1.0g/l活性炭。將羅漢果組培苗接種在含有茉莉酸甲酯的固體培養(yǎng)基中,置于相對濕度60%、光照強度1400lux,光照時間8h/d,溫度23℃條件下培養(yǎng)30d。

(2)栽培羅漢果施加茉莉酸甲酯;用少量乙醇助溶,將茉莉酸甲酯原液配成50μmol/l的溶液,噴灑于授粉后20d的羅漢果表面,至表面滴水為止,早、中、晚各噴灑一次,連續(xù)噴施5d。

同時設置對比例1,

1)將羅漢果組培苗接種于不含有茉莉酸甲酯的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng);

2)不對羅漢果植株噴灑茉莉酸甲酯;其他條件與實施例1一致。

(3)qrt-pcr檢測ugt72b21基因的表達。

采集果實,挑取果肉,切成2mm小塊并分別用錫箔紙包好,立即置于液氮中速凍,保存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

采用改良trizol法提取羅漢果果實總rna。

采用abi7500實時熒光定量pcr儀。

將rna反轉(zhuǎn)錄為cdna的反應體系為rna10.0μl,primescriptrtenzymemixi1.0μl,rtprimermix1.0μl,5×primescriptbuffer24.0μl,rnasefreedh2o4.0μl;反應條件為37℃(15min)→85℃(5s)→4℃。

采用primerpremier5.0軟件設計引物,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。其中,ugt72b21引物序列為(fp:cgccatatgcaccaccaccaccaccacatggaagctacgcagagagacg,rp:ccctcgagttaagactcaagaaatgcaaactta),內(nèi)參基因用ubq5,序列為(fp:ataaaagacccagcaccacattc,rp:cccttgccgactacaacatcc)。

qrt-pcr反應體系(20μl)為sybrpremixextaqii(tlirnasehplus)(2×)10.0μl,pcrforwardprimer(10μm)0.8μl,pcrreverseprimer(10μm)0.8μl,roxreferencedyeofdyeii(50×)0.4μl,template2.0μl,dh2o6.0μl。反應條件為95℃(30s),接著進行40個cycles[95℃(5s),95℃(34s)]。

qrt-pcr檢測結果顯示,對比例1中,羅漢果ugt72b21基因的表達量為1,而實施例1中,羅漢果ugt72b21基因的表達量高達7.3,較對比例1提高了630%,可見,實施例1可以顯著促進羅漢果ugt72b21基因的高表達;hplc檢測結果顯示,對比例1中,羅漢果甜苷v含量為0.80%,而實施例1中,羅漢果甜苷v含量高達1.60%,較對比例1提高了100%,可見,實施例1還可以顯著促進羅漢果甜苷v產(chǎn)量的提高。

實施例2

一種促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法,包括以下步驟:

(1)羅漢果組培苗施加茉莉酸甲酯;用2%的乙醇水溶液(v/v)溶解茉莉酸甲酯,配制成10000μmol/l的母液,并用0.22μm的微孔濾膜滅菌,將滅菌后的茉莉酸甲酯母液添加到固體培養(yǎng)基中,至茉莉酸甲酯最終濃度為400μmol/l,滅菌并冷卻至26℃;固體培養(yǎng)基配比為ms+6-ba1.5mg/l+iba0.3mg/l+3.5g/l瓊脂+30g/l蔗糖+1.0g/l活性炭。將羅漢果組培苗接種在含有茉莉酸甲酯的固體培養(yǎng)基中,置于相對濕度66%、光照強度1400lux,光照時間8h/d,溫度21℃條件下培養(yǎng)30d。

(2)栽培羅漢果施加茉莉酸甲酯;用少量乙醇助溶,將茉莉酸甲酯原液配成400μmol/l的溶液,噴灑于授粉后30d的羅漢果表面,至表面滴水為止,早、中、晚各噴灑一次,連續(xù)噴施5d。

同時設置對比例2,

1)將羅漢果組培苗接種于不含有茉莉酸甲酯的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng);

2)不對羅漢果植株噴灑茉莉酸甲酯;其他條件與實施例1一致。

(3)qrt-pcr檢測ugt72b21基因的表達。

采集果實,挑取果肉,切成4mm小塊并分別用錫箔紙包好,立即置于液氮中速凍,保存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

采用改良trizol法提取羅漢果果實總rna。

采用abi7500實時熒光定量pcr儀。

將rna反轉(zhuǎn)錄為cdna的反應體系為rna10.0μl,primescriptrtenzymemixi1.0μl,rtprimermix1.0μl,5×primescriptbuffer24.0μl,rnasefreedh2o4.0μl;反應條件為37℃(15min)→85℃(5s)→4℃。

采用primerpremier5.0軟件設計引物,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。其中,ugt72b21引物序列為(fp:cgccatatgcaccaccaccaccaccacatggaagctacgcagagagacg,rp:ccctcgagttaagactcaagaaatgcaaactta),內(nèi)參基因用ubq5,序列為(fp:ataaaagacccagcaccacattc,rp:cccttgccgactacaacatcc)。

qrt-pcr反應體系(20μl)為sybrpremixextaqii(tlirnasehplus)(2×)10.0μl,pcrforwardprimer(10μm)0.8μl,pcrreverseprimer(10μm)0.8μl,roxreferencedyeofdyeii(50×)0.4μl,template2.0μl,dh2o6.0μl。反應條件為95℃(30s),接著進行40個cycles[95℃(5s),95℃(34s)]。

qrt-pcr檢測結果顯示,對比例2中,羅漢果ugt72b21基因的表達量為1,而實施例2中,羅漢果ugt72b21基因的表達量高達10.3,較對比例2提高了930%,可見,實施例2可以顯著促進羅漢果ugt72b21基因的高表達;hplc檢測結果顯示,對比例2中,羅漢果甜苷v含量為0.80%,而實施例2中,羅漢果甜苷v含量高達2.43%,較對比例2提高了203.75%,可見,實施例2還可以顯著促進羅漢果甜苷v產(chǎn)量的提高。

實施例3

一種促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法,包括以下步驟:

(1)羅漢果組培苗施加茉莉酸甲酯;用2%的乙醇水溶液(v/v)溶解茉莉酸甲酯,配制成10000μmol/l的母液,并用0.22μm的微孔濾膜滅菌,將滅菌后的茉莉酸甲酯母液添加到固體培養(yǎng)基中,至茉莉酸甲酯最終濃度為225μmol/l,滅菌并冷卻至24-26℃;固體培養(yǎng)基配比為ms+6-ba1.5mg/l+iba0.3mg/l+3.5g/l瓊脂+30g/l蔗糖+1.0g/l活性炭。將羅漢果組培苗接種在含有茉莉酸甲酯的固體培養(yǎng)基中,置于相對濕度63%、光照強度1400lux,光照時間8h/d,溫度25℃條件下培養(yǎng)30d。

(2)栽培羅漢果施加茉莉酸甲酯;用少量乙醇助溶,將茉莉酸甲酯原液配成225μmol/l的溶液,噴灑于授粉后25d的羅漢果表面,至表面滴水為止,早、中、晚各噴灑一次,連續(xù)噴施5d。

同時設置對比例3,

1)將羅漢果組培苗接種于不含有茉莉酸甲酯的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng);

2)不對羅漢果植株噴灑茉莉酸甲酯;其他條件與實施例1一致。

(3)qrt-pcr檢測ugt72b21基因的表達。

采集果實,挑取果肉,切成3mm小塊并分別用錫箔紙包好,立即置于液氮中速凍,保存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

采用改良trizol法提取羅漢果果實總rna。

采用abi7500實時熒光定量pcr儀。

將rna反轉(zhuǎn)錄為cdna的反應體系為rna10.0μl,primescriptrtenzymemixi1.0μl,rtprimermix1.0μl,5×primescriptbuffer24.0μl,rnasefreedh2o4.0μl;反應條件為37℃(15min)→85℃(5s)→4℃。

采用primerpremier5.0軟件設計引物,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。其中,ugt72b21引物序列為(fp:cgccatatgcaccaccaccaccaccacatggaagctacgcagagagacg,rp:ccctcgagttaagactcaagaaatgcaaactta),內(nèi)參基因用ubq5,序列為(fp:ataaaagacccagcaccacattc,rp:cccttgccgactacaacatcc)。

qrt-pcr反應體系(20μl)為sybrpremixextaqii(tlirnasehplus)(2×)10.0μl,pcrforwardprimer(10μm)0.8μl,pcrreverseprimer(10μm)0.8μl,roxreferencedyeofdyeii(50×)0.4μl,template2.0μl,dh2o6.0μl。反應條件為95℃(30s),接著進行40個cycles[95℃(5s),95℃(34s)]。

qrt-pcr檢測結果顯示,對比例3中,羅漢果ugt72b21基因的表達量為1,而實施例3中,羅漢果ugt72b21基因的表達量高達18.7,較對比例3提高了1770%,可見,實施例3可以顯著促進羅漢果ugt72b21基因的高表達;hplc檢測結果顯示,對比例3中,羅漢果甜苷v含量為0.80%,而實施例3中,羅漢果甜苷v含量高達2.96%,較對比例3提高了270%,可見,實施例3還可以顯著促進羅漢果甜苷v產(chǎn)量的提高。

實施例4

一種促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法,包括以下步驟:

(1)羅漢果組培苗施加茉莉酸甲酯;用2%的乙醇水溶液(v/v)溶解茉莉酸甲酯,配制成10000μmol/l的母液,并用0.22μm的微孔濾膜滅菌,將滅菌后的茉莉酸甲酯母液添加到固體培養(yǎng)基中,至茉莉酸甲酯最終濃度為100μmol/l,滅菌并冷卻至24-26℃;固體培養(yǎng)基配比為ms+6-ba1.5mg/l+iba0.3mg/l+3.5g/l瓊脂+30g/l蔗糖+1.0g/l活性炭。將羅漢果組培苗接種在含有茉莉酸甲酯的固體培養(yǎng)基中,置于相對濕度64%、光照強度1400lux,光照時間8h/d,溫度24℃條件下培養(yǎng)30d。

(2)栽培羅漢果施加茉莉酸甲酯;用少量乙醇助溶,將茉莉酸甲酯原液配成300μmol/l的溶液,置于冰箱中降溫,使茉莉酸甲酯的溫度降至4~10℃,再噴灑于授粉后23d的羅漢果表面,至表面滴水為止,早、中、晚各噴灑一次,連續(xù)噴施5d。,同時,還采用注射的方式將茉莉酸甲酯注射入羅漢果植株的主莖中,注射量為5~16ml,注射的速率為4~8ml/h。

同時設置對比例4

1)將羅漢果組培苗接種于不含有茉莉酸甲酯的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng);

2)不對羅漢果植株噴灑和注射茉莉酸甲酯;其他條件與實施例4一致。

(3)qrt-pcr檢測ugt72b21基因的表達。

采集果實,挑取果肉,切成2-4mm小塊并分別用錫箔紙包好,立即置于液氮中速凍,保存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

采用改良trizol法提取羅漢果果實總rna。

采用abi7500實時熒光定量pcr儀。

將rna反轉(zhuǎn)錄為cdna的反應體系為rna10.0μl,primescriptrtenzymemixi1.0μl,rtprimermix1.0μl,5×primescriptbuffer24.0μl,rnasefreedh2o4.0μl;反應條件為37℃(15min)→85℃(5s)→4℃。

采用primerpremier5.0軟件設計引物,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。其中,ugt72b21引物序列為(fp:cgccatatgcaccaccaccaccaccacatggaagctacgcagagagacg,rp:ccctcgagttaagactcaagaaatgcaaactta),內(nèi)參基因用ubq5,序列為(fp:ataaaagacccagcaccacattc,rp:cccttgccgactacaacatcc)。

qrt-pcr反應體系(20μl)為sybrpremixextaqii(tlirnasehplus)(2×)10.0μl,pcrforwardprimer(10μm)0.8μl,pcrreverseprimer(10μm)0.8μl,roxreferencedyeofdyeii(50×)0.4μl,template2.0μl,dh2o6.0μl。反應條件為95℃(30s),接著進行40個cycles[95℃(5s),95℃(34s)]。

qrt-pcr檢測結果顯示,對比例4中,羅漢果ugt72b21基因的表達量為1,而實施例4中,羅漢果ugt72b21基因的表達量高達20.33,較對比例4提高了1933%,可見,實施例4可以顯著促進羅漢果ugt72b21基因的高表達;hplc檢測結果顯示,對比例4中,羅漢果甜苷v含量為0.80%,而實施例4中,羅漢果甜苷v含量高達3.07%,較對比例4提高了283.75%,可見,實施例4還可以顯著促進羅漢果甜苷v產(chǎn)量的提高。

這里說明的模塊數(shù)量和處理規(guī)模是用來簡化本發(fā)明的說明的。對本發(fā)明的促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法的應用、修改和變化對本領域的技術人員來說是顯而易見的。

盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上,但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用,它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領域,對于熟悉本領域的人員而言,可容易地實現(xiàn)另外的修改,因此在不背離權利要求及等同范圍所限定的一般概念下,本發(fā)明并不限于特定的細節(jié)和這里示出與描述的實施例。

sequencelisting

<110>李華政

<120>促進羅漢果ugt72b21基因表達的方法

<130>2016

<160>4

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>49

<212>dna

<213>人工序列

<400>1

cgccatatgcaccaccaccaccaccacatggaagctacgcagagagacg49

<210>2

<211>33

<212>dna

<213>人工序列

<400>2

ccctcgagttaagactcaagaaatgcaaactta33

<210>3

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>3

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<210>4

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