技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種基于數(shù)字PCR的蛋白質(zhì)活性濃度測(cè)定基準(zhǔn)方法，包括如下步驟(1)準(zhǔn)備待測(cè)目標(biāo)蛋白質(zhì)的抗體；(2)將獲得的抗體用生物素進(jìn)行標(biāo)記；(3)合成三段單鏈寡聚核苷酸；(4)分別將兩段寡聚核苷酸的5’端和3’端用親和素進(jìn)行標(biāo)記；(5)設(shè)計(jì)Taqman探針和對(duì)應(yīng)的引物；(6)利用生物素?親和素之間的放大親和反應(yīng)，用寡聚核苷酸標(biāo)記抗體。(6)將待測(cè)目標(biāo)蛋白用緩沖溶液稀釋至5000分子/μL以下的濃度，并在其中加入寡聚核酸標(biāo)記的兩種抗體、第三條寡聚核酸片段及DNA連接酶，形成抗原?抗體復(fù)合物。然后進(jìn)行數(shù)字PCR擴(kuò)增反應(yīng)，得到的拷貝數(shù)記為濃度c0；(7)再次進(jìn)行數(shù)字PCR擴(kuò)增反應(yīng)，得到的拷貝數(shù)記為c1；(8)待測(cè)目標(biāo)蛋白的濃度為c0?c1。

技術(shù)研發(fā)人員：武利慶;董蓮華;高運(yùn)華;王晶;鄭康樂;盛靈慧;金有訓(xùn);米薇;楊彬;王志棟
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院
技術(shù)研發(fā)日：2017.07.06
技術(shù)公布日：2017.10.20