本申請是申請日為2012年12月5日、申請?zhí)枮椤?01280066416.2”、發(fā)明名稱為“芳香族陽離子肽及其用途”的發(fā)明專利申請的分案申請。與相關申請的交叉參考本專利申請要求于2011年12月9日提交的美國臨時申請?zhí)?1/569,120的優(yōu)先權和利益，所述美國臨時申請全文以引用方式并入本文。本技術總體涉及預防或治療疾病的組合物和方法。特別地，該方法涉及給有此需要的受試者施用芳香族陽離子肽。
背景技術：
：本文公開的芳香族陽離子肽可用于涉及氧化損傷和細胞死亡的治療應用中。當施用于有此需要的哺乳動物時，該肽定位至線粒體且改善該細胞器的完整性和功能。該肽對有此需要的受試者的施用減少經(jīng)歷線粒體通透性轉(zhuǎn)變的線粒體數(shù)目，減少對細胞和組織的氧化損傷水平，并且增加線粒體atp合成率。技術實現(xiàn)要素：在一個方面，本發(fā)明提供了芳香族陽離子肽或其藥學可接受的鹽。在一些實施例中，該鹽包含三氟乙酸鹽或乙酸鹽。在一些實施例中，該肽選自下述：其中cha是環(huán)己基丙氨酸。在一個實施例中，該肽由式i限定：其中r1和r2獨立地選自(i)氫；(ii)線性或分支c1-c6烷基；(iii)其中m＝1-3；(iv)(v)r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、r11和r12各自獨立地選自(i)氫；(ii)線性或分支c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷基氨基；(vi)c1-c4二烷基氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”包含氯、氟、溴和碘；和n為1-5的整數(shù)。在特定實施例中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、r11和r12均為氫；并且n為4。在另一個實施例中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9和r11均為氫；r8和r12為甲基；r10為羥基；并且n為4。在一個實施例中，該肽由式ii限定：其中r1和r2各自獨立地選自(i)氫；(ii)線性或分支c1-c6烷基；(iii)其中m＝1-3；(iv)(v)r3和r4各自獨立地選自(i)氫；(ii)線性或分支c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷基氨基；(vi)c1-c4二烷基氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”包含氯、氟、溴和碘；和r5、r6、r7、r8和r9各自獨立地選自(i)氫；(ii)線性或分支c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷基氨基；(vi)c1-c4二烷基氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”包含氯、氟、溴和碘；和n為1-5的整數(shù)。在特定實施例中，r1和r2為氫；r3和r4為甲基；r5、r6、r7、r8和r9均為氫；并且n為4。在一個實施例中，芳香族陽離子肽具有交替的芳香族和陽離子氨基酸的核心結構基序。例如，該肽可以是由下文所示式iii-vi中的任一個限定的四肽：芳香族的-陽離子的-芳香族的-陽離子的(式iii)陽離子的-芳香族的-陽離子的-芳香族的(式iv)芳香族的-芳香族的-陽離子的-陽離子的(式v)陽離子的-陽離子的-芳香族的-芳香族的(式vi)其中，芳香族的是選自下述的殘基：phe(f)、tyr(y)、trp(w)和環(huán)己基丙氨酸(cha)；并且陽離子的是選自下述的殘基：arg(r)、lys(k)、正亮氨酸(nle)和2-氨基-庚酸(ahe)。在一些實施例中，該肽由式vii限定：在一些實施例中，該肽是式vii的同分異構體，其中式iii的手性中心定義為h-(r)-arg-(s)-dmt-(s)-lys-(s)-phe-nh2，并且其中立體異構體由下式描述r-s-s-ss-r-r-rs-s-s-sr-r-r-rr-r-s-ss-s-r-rs-r-s-sr-s-r-rr-s-r-ss-r-s-rr-r-s-rs-s-r-sr-r-r-ss-s-s-rr-s-s-rs-r-r-s在一些實施例中，該肽是選自下述的式vii的組成成分同分異構體：arg-dmt-lys-phe-nh2phe-dmt-arg-lys-nh2phe-lys-dmt-arg-nh2dmt-arg-lys-phe-nh2lys-dmt-arg-phe-nh2phe-dmt-lys-arg-nh2arg-lys-dmt-phe-nh2arg-dmt-phe-lys-nh2在一些實施例中，該肽由式viii限定：其中r選自(i)ome，和(ii)h。在一些實施例中，該肽由式ix限定：其中r選自(i)f，(ii)cl，和(iii)h。在一些實施例中，該肽由式x限定：其中r1-r4選自(i)ac，(ii)h，(iii)h，(iv)h，(i)h，(ii)ac，(iii)h，(iv)h，(i)h，(ii)h，(iii)ac，(iv)h，和(i)h，(ii)h，(iii)h，(iv)oh。在一些實施例中，該肽由式xi限定：在一些方面，本文提供了藥物組合物。在一些實施例中，藥物組合物包含一種或多種芳香族陽離子肽或其藥學可接受的鹽，例如乙酸鹽或三氟乙酸鹽。在一些實施例中，藥物組合物包括一種或多種藥學可接受的載體。在一個方面，本公開內(nèi)容提供了減少有此需要的哺乳動物中經(jīng)歷線粒體通透性轉(zhuǎn)變(mpt)的線粒體數(shù)目或預防有此需要的哺乳動物中線粒體通透性轉(zhuǎn)變的方法，該方法包括給哺乳動物施用有效量的本文描述的一種或多種芳香族陽離子肽，或其藥學可接受的鹽例如乙酸鹽或三氟乙酸鹽。在另一個方面，本公開內(nèi)容提供了用于增加有此需要的哺乳動物中的atp合成率的方法，該方法包括給哺乳動物施用有效量本文描述的一種或多種芳香族陽離子肽，或其藥學可接受的鹽例如乙酸鹽或三氟乙酸鹽。在另外一個方面，本公開內(nèi)容提供了用于減少有此需要的哺乳動物中的氧化損傷的方法，該方法包括給哺乳動物施用有效量本文描述的一種或多種芳香族陽離子肽，或其藥學可接受的鹽例如乙酸鹽或三氟乙酸鹽。在一些方面，提供了用于測定受試者中芳香族陽離子肽的存在或存在的芳香族陽離子肽量的方法。通常，該方法包括檢測來自受試者的生物樣品中的該肽。在一些實施例中，該肽在將該肽施用于受試者的過程中進行檢測；在一些實施例中，該肽在將該肽施用于受試者后進行檢測。在一些實施例中，檢測包括hplc例如反相hplc或離子交換hplc。在一些實施例中，檢測包括質(zhì)譜法。在一些實施例中，生物樣品包含流體；在一些實施例中，生物樣品包含細胞。在一些實施例中，生物樣品包含組織。在其他實施例中，生物樣品包含活組織檢查樣本(biopsy)。在一些實施例中，檢測的芳香族陽離子肽選自下述中的一種或多種：其中cha是環(huán)己基丙氨酸。在一些方面，提供了用于檢測芳香族陽離子肽的試劑盒。在一些實施例中，該試劑盒包括收集來自受試者的樣品的生物樣品收集器，和用于保存生物樣品的樣品貯存裝置。在一些實施例中，生物樣品包含流體。在一些實施例中，生物樣品包含細胞。在一些實施例中，生物樣品包含組織。在其他實施例中，生物樣品包含活組織檢查樣本。具體實施方式應當理解本發(fā)明的某些方面、模式、實施例、變化和特點在下文以不同的詳細水平描述，以便提供本發(fā)明的基本理解。在實踐本發(fā)明中，使用分子生物學、蛋白質(zhì)生物化學、細胞生物學、免疫學、微生物學和重組dna的許多常規(guī)技術。這些技術是眾所周知的，并且分別在例如下述中說明：currentprotocolsinmolecularbiology,第i-iii卷，ausubel，編輯(1997)；sambrook等人，molecularcloning:alaboratorymanual,第二版(coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,ny,1989)；dnacloning:apracticalapproach,第i和ii卷，glover，編輯(1985)；oligonucleotidesynthesis,gait，編輯(1984)；nucleicacidhybridization,hames&higgins，編輯(1985)；transcriptionandtranslation,hames&higgins，編輯(1984)；animalcellculture,freshney，編輯(1986)；immobilizedcellsandenzymes(irlpress,1986)；perbal,apracticalguidetomolecularcloning；系列，meth.enzymol.,(academicpress,inc.,1984)；genetransfervectorsformammaliancells,miller&calos，編輯(coldspringharborlaboratory,ny,1987)；和meth.enzymol.,第154和155卷，wu&grossman和wu，編輯。如本說明書中使用的某些術語的定義在下文提供。除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語一般具有與本發(fā)明所屬領域普通技術人員通常理解相同的含義。如本說明書和所附權利要求中使用的，除非內(nèi)容另有明確說明，單數(shù)形式“一個”、“一種”和“該/所述”包括復數(shù)指代物。例如，提及“一個(種)細胞”包括兩個(種)或更多個(種)細胞的組合等等。如本文使用的，試劑、藥物或肽對受試者的“施用”包括將化合物引入或遞送至受試者以執(zhí)行其預期功能的任何途徑。施用可通過任何合適途徑執(zhí)行，包括經(jīng)口、鼻內(nèi)、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下)或局部。施用包括自施用和通過另一者的施用。如本文使用的，術語“氨基酸”包括天然存在的氨基酸和合成氨基酸，以及氨基酸類似物和氨基酸模擬物，其以類似于天然存在的氨基酸的方式起作用。天然存在的氨基酸是由遺傳密碼編碼的氨基酸，以及以后修飾的氨基酸，例如羥脯氨酸、γ-羧基谷氨酸鹽和o-磷酸絲氨酸。氨基酸類似物指這樣的化合物，其具有與天然存在的氨基酸相同的基本化學結構，即與氫、羧基、氨基和r基結合的α-碳，例如高絲氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亞砜、甲硫氨酸甲基锍。此類類似物具有經(jīng)修飾的r基(例如正亮氨酸)或經(jīng)修飾的肽主鏈，但保留與天然存在的氨基酸相同的基本化學結構。氨基酸模擬物指這樣的化學化合物，其具有不同于氨基酸的一般化學結構的結構，但以類似于天然存在的氨基酸的方式起作用。氨基酸在本文中可由其通常已知的三字母符號或由iupac-iub生物化學命名委員會推薦的單字母符號提及。如本文使用的，術語“生物樣品”指源自活細胞或由活細胞接觸的材料。該術語包含從受試者中分離的組織、細胞和生物流體，以及存在于受試者內(nèi)的組織、細胞和流體。生物樣品包括但不限于全血、分餾血液、精液、唾液、淚、尿、糞便材料、汗、頰、皮膚、腦脊髓液和毛發(fā)。生物樣品還包括內(nèi)臟和癌癥的活組織檢查樣本。生物樣品可得自受試者用于診斷或研究，或可得自未患病的個體，作為對照或用于基礎研究。如本文使用的，術語“有效量”指足以實現(xiàn)所需治療和/或預防效應的數(shù)量。在治療或預防應用的背景下，施用于受試者的組合物量將取決于疾病的類型和嚴重性，以及個體的特征，例如一般健康、年齡、性別、體重和對藥物的耐受。它還將取決于疾病的程度、嚴重性和類型。取決于這些及其他因素，技術人員將能夠測定適當劑量。組合物還可與一種或多種另外的治療化合物組合施用。“分離的”或“純化的”多肽或肽基本上不含來自試劑源自其的細胞或組織來源的細胞材料或其他污染多肽，或當化學合成時，基本上不含化學前體或其他化學品。例如，分離的芳香族陽離子肽將不含干擾試劑的診斷或治療用途的材料。此類干擾材料可包括酶、激素及其他蛋白質(zhì)性和非蛋白質(zhì)性溶質(zhì)。如本文使用的，術語“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”在本文中可互換使用，以意指包含通過肽鍵或經(jīng)修飾的肽鍵彼此連接的兩個或更多個氨基酸的聚合物，即肽等排物。多肽指通常被稱為肽、糖肽或寡聚物的短鏈，和一般被稱為蛋白質(zhì)的更長鏈兩者。多肽可含有20種基因編碼的氨基酸以外的氨基酸。多肽包括通過天然過程例如翻譯后加工、或通過本領域眾所周知的化學修飾技術進行修飾的氨基酸序列。如本文使用的，術語“處理”或“治療”或“減輕”指治療性處理和預防或防止措施兩者，其中目的是預防或減慢(減輕)靶向病理學病癥或障礙。還應當理解如所述的醫(yī)學病癥的多種治療或預防模式意指“基本的”，其包括完全治療或預防以及少于完全治療或預防，并且其中達到一些生物學或醫(yī)學相關結果。如本文使用的，障礙或病癥的“預防”或“防止”指這樣的化合物，相對于未經(jīng)處理的對照樣品，其在統(tǒng)計樣品中減少經(jīng)處理的樣品中的障礙或病癥的出現(xiàn)，或者相對于未經(jīng)處理的對照樣品，延遲障礙或病癥的一種或多種癥狀的發(fā)作或降低障礙或病癥的一種或多種癥狀的嚴重性。預防或治療方法本技術涉及通過施用某些芳香族陽離子肽的疾病治療或預防。芳香族陽離子肽是水溶性和高度極性的。盡管有這些特性，該肽仍可容易地穿透細胞膜。芳香族陽離子肽通常包括由肽鍵共價連接的最少兩個或三個氨基酸或最少四個氨基酸。芳香族陽離子肽中存在的氨基酸的最大數(shù)目是由肽鍵共價連接的約二十個氨基酸。適當?shù)?，氨基酸的最大?shù)目是約十二、更優(yōu)選約九且最優(yōu)選約六。芳香族陽離子肽的氨基酸可以是任意氨基酸。如本文使用的，術語“氨基酸”用于指含有至少一個氨基和至少一個羧基的任何有機分子。通常，至少一個氨基在相對于羧基的α位置處。氨基酸可以是天然存在的。天然存在的氨基酸包括例如在哺乳動物蛋白質(zhì)中通常發(fā)現(xiàn)的二十種最常見的左旋(l)氨基酸，即丙氨酸(ala)、精氨酸(arg)、天冬酰胺(asn)、天冬氨酸(asp)、半胱氨酸(cys)、谷氨酰胺(gln)、谷氨酸(glu)、甘氨酸(gly)、組氨酸(his)、異亮氨酸(ile)、亮氨酸(leu)、賴氨酸(lys)、甲硫氨酸(met)、苯丙氨酸(phe)、脯氨酸(pro)、絲氨酸(ser)、蘇氨酸(thr)、色氨酸(trp)、酪氨酸(tyr)和纈氨酸(val)。其他天然存在的氨基酸包括例如在與蛋白質(zhì)合成不相關的代謝過程中合成的氨基酸。例如，氨基酸鳥氨酸和瓜氨酸在尿素生產(chǎn)過程中的哺乳動物代謝中合成。天然存在的氨基酸的另一個例子包括羥脯氨酸(hyp)。該肽任選含有一種或多種非天然存在的氨基酸。最佳地，該肽不具有天然存在的氨基酸。天然存在的氨基酸可以是左旋的(l-)、右旋的(d-)或其混合物。非天然存在的氨基酸是這樣的氨基酸，其通常在活生物體中的正常代謝過程中未合成，并且在蛋白質(zhì)中未天然存在。另外，天然存在的氨基酸適當?shù)匾膊挥沙Ｒ姷鞍酌缸R別。天然存在的氨基酸可存在于肽中的任何位置處。例如，非天然存在的氨基酸可在n末端、c末端或n末端和c末端之間的任何位置處。非天然氨基酸可例如包含在天然氨基酸中未發(fā)現(xiàn)的烷基、芳基或烷基芳基。非天然烷基氨基酸的一些例子包括α-氨基丁酸、β-氨基丁酸、γ-氨基丁酸、δ-氨基戊酸和ε-氨基己酸。非天然芳基氨基酸的一些例子包括鄰、間和對氨基苯甲酸。非天然烷基芳基氨基酸的一些例子包括鄰、間和對氨基苯乙酸和γ-苯基-β-氨基丁酸。非天然存在的氨基酸包括天然存在的氨基酸的衍生物。天然存在的氨基酸的衍生物可例如包括一個或多個化學基團對天然存在的氨基酸的添加。例如，一個或多個化學基團可加入苯丙氨酸或酪氨酸殘基的芳環(huán)的2′、3′、4′、5′或6′位置或者色氨酸殘基的苯并環(huán)的4′、5′、6′或7′位置中的一個或多個?；鶊F可以是可加入芳環(huán)的任何化學基團。此類基團的一些例子包括分支或未分支的c1-c4烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基或叔丁基、c1-c4烷基氧基(即烷氧基)、氨基、c1-c4烷基氨基和c1-c4二烷基氨基(例如甲基氨基、二甲氨基)、硝基、羥基、鹵素(即氟、氯、溴或碘)。天然存在的氨基酸的非天然存在的衍生物的一些具體例子包括正纈氨酸(nva)和正亮氨酸(nle)。肽中的氨基酸修飾的另一個例子是肽的天冬氨酸或谷氨酸殘基的羧基的衍生化。一個衍生化例子是由氨或者由伯胺或仲胺酰胺化，所述伯胺或仲胺例如甲胺、乙胺、二甲胺或二乙胺。另一個衍生化例子包括由例如甲醇或乙醇酯化。另一種此類修飾包括賴氨酸、精氨酸或組氨酸殘基的氨基的衍生化。例如，此類氨基可以是?；?。一些合適的?；ɡ绫郊柞；虬衔奶峒暗腸1-c4烷基中的任一個的烷?；缫阴；虮；?。非天然存在的氨基酸優(yōu)選對常見蛋白酶是抗性，并且更優(yōu)選對常見蛋白酶是不敏感的。對蛋白酶抗性或不敏感的非天然存在的氨基酸的例子包括右旋(d-)形式的上述天然存在的l-氨基酸中的任一個，以及l(fā)-和/或d-非天然存在的氨基酸。d-氨基酸通常不存在于蛋白質(zhì)中，盡管它們在某些肽抗生素中發(fā)現(xiàn)，所述肽抗生素由細胞的正常核糖體蛋白合成機制以外的方法合成。如本文使用的，d-氨基酸視為非天然存在的氨基酸。為了使蛋白酶敏感性降到最低，該肽應具有由常見蛋白酶識別的小于五個、優(yōu)選小于四個、更優(yōu)選小于三個且最優(yōu)選小于兩個鄰接l-氨基酸，與氨基酸是天然存在的還是非天然存在的無關。最佳地，該肽僅具有d-氨基酸，且不具有l(wèi)-氨基酸。如果該肽含有蛋白酶敏感的氨基酸序列，則氨基酸中的至少一個優(yōu)選是非天然存在的d-氨基酸，由此賦予蛋白酶抗性。蛋白酶敏感序列的例子包括由常見蛋白酶例如內(nèi)肽酶和胰蛋白酶容易切割的兩個或更多個鄰接的堿性氨基酸。堿性氨基酸的例子包括精氨酸、賴氨酸和組氨酸。與肽中的氨基酸殘基總數(shù)目相比較，芳香族陽離子肽應在生理ph下具有最小數(shù)目的凈正電荷。在生理ph下的凈正電荷的最小數(shù)目在下文將被稱為(pm)。肽中的氨基酸殘基總數(shù)目在下文將被稱為(r)。下文討論的凈正電荷的最小數(shù)目均在生理ph下。如本文使用的術語“生理ph”指在哺乳動物機體的組織和器官的細胞中的正常ph。例如，人的生理ph通常為大約7.4，但哺乳動物中的正常生理ph可以是約7.0-約7.8的任何ph。如本文使用的“凈電荷”指由肽中存在的氨基酸攜帶的正電荷數(shù)目和負電荷數(shù)目的平衡。在本說明書中，應當理解凈電荷在生理ph下測量。在生理ph下帶正電的天然存在的氨基酸包括l-賴氨酸、l-精氨酸和l-組氨酸。在生理ph下帶負電的天然存在的氨基酸包括l-天冬氨酸和l-谷氨酸。通常，肽具有帶正電的n末端氨基和帶負電的c末端羧基。電荷在生理ph下彼此抵消。作為計算凈電荷的例子，肽tyr-arg-phe-lys-glu-his-trp-d-arg具有一個帶負電的氨基酸(即glu)和四個帶正電的氨基酸(即兩個arg殘基、一個lys和一個his)。因此，上述肽具有凈正電荷三。在一個實施例中，該肽由式i限定：其中r1和r2獨立地選自(i)氫；(ii)線性或分支c1-c6烷基；(iii)其中m＝1-3；(iv)(v)r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、r11和r12各自獨立地選自(i)氫；(ii)線性或分支c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷基氨基；(vi)c1-c4二烷基氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”包含氯、氟、溴和碘；和n為1-5的整數(shù)。在特定實施例中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、r11和r12均為氫；并且n為4。在另一個實施例中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9和r11均為氫；r8和r12為甲基；r10為羥基；并且n為4。在一個實施例中，該肽由式ii限定：其中r1和r2各自獨立地選自(i)氫；(ii)線性或分支c1-c6烷基；(iii)其中m＝1-3；(iv)(v)r3和r4各自獨立地選自(i)氫；(ii)線性或分支c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷基氨基；(vi)c1-c4二烷基氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”包含氯、氟、溴和碘；和r5、r6、r7、r8和r9各自獨立地選自(i)氫；(ii)線性或分支c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷基氨基；(vi)c1-c4二烷基氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”包含氯、氟、溴和碘；和n為1-5的整數(shù)。在特定實施例中，r1和r2為氫；r3和r4為甲基；r5、r6、r7、r8和r9均為氫；并且n為4。在一個實施例中，芳香族陽離子肽具有交替的芳香族和陽離子氨基酸的核心結構基序。例如，該肽可以是由下文所示式iii-vi中的任一個限定的四肽：芳香族的-陽離子的-芳香族的-陽離子的(式iii)陽離子的-芳香族的-陽離子的-芳香族的(式iv)芳香族的-芳香族的-陽離子的-陽離子的(式v)陽離子的-陽離子的-芳香族的-芳香族的(式vi)其中，芳香族的是選自下述的殘基：phe(f)、tyr(y)、trp(w)和環(huán)己基丙氨酸(cha)；并且陽離子的是選自下述的殘基：arg(r)、lys(k)、正亮氨酸(nle)和2-氨基-庚酸(ahe)。在一個方面，本公開內(nèi)容提供了減少有此需要的哺乳動物中經(jīng)歷線粒體通透性轉(zhuǎn)變(mpt)的線粒體數(shù)目或預防有此需要的哺乳動物中線粒體通透性轉(zhuǎn)變的方法，該方法包括給哺乳動物施用有效量的本文描述的一種或多種芳香族陽離子肽。在另一個方面，本公開內(nèi)容提供了用于增加有此需要的哺乳動物中的atp合成率的方法，該方法包括給哺乳動物施用有效量本文描述的一種或多種芳香族陽離子肽。在另外一個方面，本公開內(nèi)容提供了用于減少有此需要的哺乳動物中的氧化損傷的方法，該方法包括給哺乳動物施用有效量本文描述的一種或多種芳香族陽離子肽。在一個實施例中，芳香族陽離子肽具有的在生理ph下的凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基的總數(shù)目(r)之間的關系為：其中3pm是小于或等于r+1的最大數(shù)。在該實施例中，凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基總數(shù)目(r)之間的關系如下：表1.氨基酸數(shù)目和凈正電荷(3pm≤p+1)(r)34567891011121314151617181920(pm)112223334445556667在另一個實施例中，芳香族陽離子肽具有的在凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基的總數(shù)目(r)之間的關系為：其中2pm是小于或等于r+1的最大數(shù)。在該實施例中，凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基總數(shù)目(r)之間的關系如下：表2.氨基酸數(shù)目和凈正電荷(2pm≤p+1)(r)34567891011121314151617181920(pm)22334455667788991010在一個實施例中，凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基的總數(shù)目(r)相等。在另一個實施例中，該肽具有三個或四個氨基酸殘基和最少一個凈正電荷、適當?shù)刈钌俣€凈正電荷和更優(yōu)選地最少三個凈正電荷。還重要的是，芳香族陽離子肽具有與凈正電荷的總數(shù)目(pt)相比較最小數(shù)目的芳香族基團。芳香族基團的最小數(shù)目在下文將被稱為(a)。具有芳香族基團的天然存在的氨基酸包括氨基酸組氨酸、色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。例如，六肽lys-gln-tyr-d-arg-phe-trp具有凈正電荷二(由賴氨酸殘基和精氨酸殘基貢獻)以及三個芳香族基團(由酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基貢獻)。芳香族陽離子肽還應具有的在芳香族基團的最小數(shù)目(a)和在生理ph下的凈正電荷的總數(shù)目(pt)之間的關系為：其中3a是小于或等于pt+1的最大數(shù)，除了當pt是1時，a也可以是1之外。在該實施例中，芳香族基團的最小數(shù)目(a)和凈正電荷的總數(shù)目(pt)之間的關系如下：表3.芳香族基團和凈正電荷(3a≤pt+1或a＝pt＝1)(pt)1234567891011121314151617181920(a)11112223334445556667在另一個實施例中，芳香族陽離子肽具有的在芳香族基團的最小數(shù)目(a)和凈正電荷的總數(shù)目(pt)之間的關系為：其中2a是小于或等于pt+1的最大數(shù)。在該實施例中，芳香族氨基酸殘基的最小數(shù)目(a)和凈正電荷的總數(shù)目(pt)之間的關系如下：表4.芳香族基團和凈正電荷(2a≤pt+1或a＝pt＝1)(pt)1234567891011121314151617181920(a)1122334455667788991010在另一個實施例中，芳香族基團的數(shù)目(a)和凈正電荷的總數(shù)目(pt)相等。在一個實施例中，芳香族陽離子肽可具有(a)至少一個凈正電荷；(b)最少三個氨基酸；(c)最多約二十個氨基酸；(d)凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基的總數(shù)目(r)之間的關系為：其中3pm是小于或等于r+1的最大數(shù)；和(e)芳香族基團的最小數(shù)目(a)和凈正電荷的總數(shù)目(pt)之間的關系為：其中3a是小于或等于pt+1的最大數(shù)，除了當a是1時，pt也可以是1之外。羧基且尤其是c末端氨基酸的末端羧基適當?shù)赜衫绨滨０坊?，以形成c末端酰胺。作為另外一種選擇，c末端氨基酸的末端羧基可由任一伯胺或仲胺酰胺化。所述伯胺或仲胺可以例如是烷基胺，尤其是分支的或無分支的c1-c4烷基胺或者芳基胺。相應地，在肽的c末端處的氨基酸可轉(zhuǎn)化為酰胺基、n-甲基酰胺基、n-乙基酰胺基、n,n-二甲基酰胺基、n,n-二乙基酰胺基、n-甲基-n-乙基酰胺基、n-苯基酰胺基或n-苯基-n-乙基酰胺基。未存在于芳香族陽離子肽的c末端處的天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸和谷氨酸殘基的游離羧酸基也可被酰胺化，不論它們是否存在于肽內(nèi)。在這些內(nèi)部位置處的酰胺化可以是由氨或者上述伯胺或仲胺中的任一個進行。芳香族陽離子肽包括但不限于下述示例性肽：其中cha是環(huán)己基丙氨酸。在一個實施方式中，該肽具有μ型阿片樣(mu-opioid)受體激動劑活性(即，它們活化μ型阿片樣受體)。通過與克隆的μ型阿片樣受體的放射性配體結合或通過利用豚鼠回腸的生物測定可評估μ型阿片樣的活性(schiller等人，eurjmedchem,35:895-901,2000；zhao等人，jpharmacolexpther,307:947-954,2003)。μ型阿片樣受體的活化通常引發(fā)鎮(zhèn)痛作用。在某些情況下，具有μ型阿片樣受體激動劑活性的芳香族陽離子肽是優(yōu)選的。例如，在短期治療過程中，例如在急性病或病癥中，使用活化μ型阿片樣受體的芳香族陽離子肽可以是有利的。此類急性病和病癥通常與中等疼痛或嚴重疼痛有關。在這些情況下，芳香族陽離子肽的鎮(zhèn)痛作用在人患者或其他哺乳動物的治療方案中可以是有利的。然而，不活化μ型阿片樣受體的芳香族陽離子肽也可根據(jù)臨床需要連同或不連同鎮(zhèn)痛藥一起使用。具有μ型阿片樣受體激動劑活性的肽通常是在n末端(即，第一氨基酸位置)處具有酪氨酸殘基或酪氨酸衍生物的那些肽。作為另外一種選擇，在其他情況下，不具有μ型阿片樣受體激動劑活性的芳香族陽離子肽是優(yōu)選的。例如，在長期治療過程中，例如在慢性疾病狀態(tài)或病癥中，活化μ型阿片樣受體的芳香族陽離子肽的使用可能是禁忌的。在這些情況下，芳香族陽離子肽的潛在副作用或上癮作用可排除活化μ型阿片樣受體的芳香族陽離子肽在人患者或其他哺乳動物的治療方案中的使用。潛在的副作用可包括鎮(zhèn)靜、便秘和呼吸抑制。在此類情況下，不活化μ型阿片樣受體的芳香族陽離子肽可以是適當?shù)闹委煛２痪哂笑贪⑵瑯邮荏w激動劑活性的肽通常在n末端(即氨基酸位置1)處不具有酪氨酸殘基或酪氨酸衍生物。在n末端處的氨基酸可以是與酪氨酸不同的任何天然存在的氨基酸或非天然存在的氨基酸。在一個實施例中，在n末端處的氨基酸是苯丙氨酸或其衍生物。苯丙氨酸的示例性衍生物包括2′-甲基苯丙氨酸(mmp)、2′,6′-二甲基苯丙氨酸(2′,6′-dmp)、n,2′,6′-三甲基苯丙氨酸(tmp)和2′-羥基-6′-甲基苯丙氨酸(hmp)。本文提及的肽及其衍生物還可包括功能變體。如果變體具有與所述肽相同的功能，則肽視為功能變體。類似物例如可以是肽的置換變體，其中一個或多個氨基酸由另一個氨基酸置換。適當?shù)碾闹脫Q變體包括保守氨基酸置換。氨基酸可根據(jù)其物理化學特征如下分組：(a)非極性氨基酸：ala(a)ser(s)thr(t)pro(p)gly(g)cys(c)；(b)酸性氨基酸：asn(n)asp(d)glu(e)gln(q)；(c)堿性氨基酸：his(h)arg(r)lys(k)；(d)疏水氨基酸：met(m)leu(l)ile(i)val(v)；和(e)芳香族氨基酸：phe(f)tyr(y)trp(w)his(h)。肽中的氨基酸由相同組的另一種氨基酸的置換被稱為保守置換，并且可保存初始肽的物理化學特征。相比之下，肽中的氨基酸由不同組的另一種氨基酸的置換一般更可能改變初始肽的特征。在一些實施例中，本文公開的肽源自前體，例如肽前體。例如，在一些實施例中，前體包含其也是治療試劑或藥物的芳香族陽離子肽。芳香族陽離子肽的合成可通過本領域眾所周知的方法的任一種來合成本文公開的芳香族陽離子肽。用于化學方式合成蛋白質(zhì)的合適方法包括例如液相和固相合成，以及由stuart和young在solidphasepeptidesynthesis,第二版，piercechemicalcompany(1984)和在methodsenzymol.,289,academicpress,inc,newyork(1997)中描述的那些方法?？墒褂梅肿由飳W、蛋白質(zhì)生物化學、細胞生物學和微生物學中的常規(guī)技術生成重組肽，所述技術例如下述中分別所述的那些：currentprotocolsinmolecularbiology,第i-iii卷，ausubel，編輯(1997)；sambrook等人，molecularcloning:alaboratorymanual,第二版(coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,ny,1989)；dnacloning:apracticalapproach,第i和ii卷，glover，編輯(1985)；oligonucleotidesynthesis,gait，編輯(1984)；nucleicacidhybridization,hames&higgins，編輯(1985)；transcriptionandtranslation,hames&higgins，編輯(1984)；animalcellculture,freshney，編輯(1986)；immobilizedcellsandenzymes(irlpress,1986)；perbal,apracticalguidetomolecularcloning；系列，meth.enzymol.,(academicpress,inc.,1984)；genetransfervectorsformammaliancells,miller&calos，編輯(coldspringharborlaboratory,ny,1987)；和meth.enzymol.,第154和155卷，wu&grossman和wu，編輯。芳香族陽離子肽的檢測和表征本文描述的芳香族陽離子肽可使用本領域已知的方法進行檢測和/或表征。樣品中的肽可例如使用高效液相色譜法(hplc)方法進行檢測，所述hplc方法例如aguilar,hplcofpeptidesandproteins:methodsandprotocols,humanapress,newjersey(2004)中所述的那些。肽可例如使用反相hplc(rp-hplc)或離子交換hplc進行檢測。高效液相色譜法(或高壓液相色譜法，hplc)是這樣的色譜技術，其可分離化合物的混合物，并且用于生物化學和分析化學中，以鑒定、定量且純化混合物的各個組分。hplc通常利用不同類型的靜止相，移動一種或多種流動相和分析物通過柱的泵，和提供分析物的特征性保留時間的檢測器。該檢測器還可提供關于分析物的另外的信息(例如如果如此配備，則分析物的紫外/可見光譜數(shù)據(jù))。分析物保留時間取決于其與靜止相的相互作用強度、使用的一種或多種溶劑的比/組成和流動相的流速而改變。通常，對于hplc，泵(而不是重力)提供移動流動相和分析物通過相對致密填充的柱所需的更高壓。增加的密度起于較小的粒子大小。當與普通柱色譜法相比較時，這允許在更短長度的柱上的更佳分離。在一些實施例中，肽使用反相hplc(rp-hplc)進行檢測和/或表征。反相hplc(rp-hplc或rpc)通常包括非極性靜止相和水性、中等極性的流動相。一種常見靜止相是已用rme2sicl處理的二氧化硅，其中r是直鏈烷基例如c18h37或c8h17。對于這些靜止相，保留時間對于較少極性的分子更長，而極性分子更容易洗脫。在一些實施例中，肽使用離子交換hplc進行檢測和/或表征。通常，在離子交換色譜法中，保留基于溶質(zhì)離子和與靜止相結合的荷電位點之間的吸引。排除相同電荷的離子。通常類型的離子交換劑包括但不限于下述。聚苯乙烯樹脂。這些樹脂允許增加鏈的穩(wěn)定性的交聯(lián)。一般而言，更高的交聯(lián)降低轉(zhuǎn)彎(swerving)，這增加平衡時間且最終改善選擇性。纖維素和右旋糖酐離子交換劑(凝膠)：這些具有更大的孔徑和低電荷密度，使得它們適合于蛋白質(zhì)分離?？煽乜锥炔ＡЩ蚨嗫锥趸?。一般而言，離子交換劑有利于更高電荷和更小半徑的離子的結合。通常，反離子(就樹脂中的官能團而言)濃度的增加減少保留時間。通常，ph的增加減少陽離子交換中的保留時間，而ph的降低減少陰離子交換中的保留時間。另外，樣品中的肽可例如使用質(zhì)譜法(ms)的方法進行表征。關于質(zhì)譜法的方法的一般參考文獻是sparkman,massspectrometrydeskreference,pittsburgh:globalviewpub(2000)。本領域技術人員應當理解本文描述的芳香族陽離子肽可使用本領域已知的任何常規(guī)生物化學方法進行檢測和/或表征。本文描述的hplc和ms法是舉例說明性的，而不應以任何方式解釋為限制性的。芳香族陽離子肽的預防和治療用途本文中描述的芳香族陽離子肽可用于預防或治療疾病。具體地，公開內(nèi)容提供了通過施用本文描述的芳香族陽離子肽來治療處于疾病的危險中(或易受疾病影響)的受試者的預防和治療方法。因此，本方法提供了通過將有效量的芳香族陽離子肽施用于有此需要的受試者來預防和/或治療受試者中的疾病。在一個實施例中，上文描述的肽可用于治療與線粒體通透性轉(zhuǎn)變(mpt)相關的任何疾病或病癥。減少經(jīng)歷mpt的線粒體數(shù)目和預防m(xù)pt是重要的，因為mpt與哺乳動物中的幾種常見疾病和病癥相關。此類疾病和病癥包括但不限于組織或器官的缺血和/或再灌注、缺氧和神經(jīng)退行性疾病等。需要治療或預防m(xù)pt的哺乳動物是那些患有這些疾病或病癥的哺乳動物。哺乳動物的組織或器官中的缺血是多方面的病理狀態(tài)，其由氧剝奪(缺氧)和/或葡萄糖(例如底物)剝奪引起。組織或器官的細胞中的氧和/或葡萄糖剝奪導致能量生成能力的減少或全部喪失，和后續(xù)跨越細胞膜的離子主動轉(zhuǎn)運功能的喪失。氧和/或葡萄糖剝奪還導致其他細胞膜中的病理變化，包括線粒體膜中的通透性轉(zhuǎn)變。另外，其他分子，例如通常在線粒體內(nèi)區(qū)室化的細胞凋亡蛋白質(zhì)，可泄漏到細胞質(zhì)內(nèi)且引起細胞凋亡性細胞死亡。顯著的缺血可導致壞死性細胞死亡。特定組織或器官中的缺血或缺氧可由對該組織或器官的血液供應的喪失或嚴重減少引起。血液供應中的喪失或嚴重減少可以例如是由于血栓栓塞性中風、冠狀動脈粥樣硬化或周圍血管疾病導致。受缺血或缺氧影響的組織通常為肌肉，例如心肌、骨骼肌或平滑肌。受缺血或缺氧影響的器官可以是遭受缺血或缺氧的任何器官。受缺血或缺氧影響的器官的例子包括腦、心臟、腎和前列腺。例如，心肌缺血或缺氧通常由動脈粥樣硬化或血栓性堵塞引起，其導致由心臟動脈和毛細血管血液供應對心臟組織的氧輸送的減少或喪失。此類心肌缺血或缺氧可引起受累心肌的疼痛和壞死，且最終可導致心力衰竭。骨骼肌或平滑肌中的缺血或缺氧可起于相似原因。例如，腸平滑肌或四肢骨骼肌中的缺血或缺氧也可由動脈粥樣硬化或血栓性堵塞引起。再灌注是對其中血流降低或阻塞的任何器官或組織的血流恢復。例如，血流可恢復至受缺血或缺氧影響的任何器官或組織。血流的恢復(再灌注)可通過本領域技術人員已知的任何方法發(fā)生。例如，缺血性心臟組織的再灌注可起于血管成形術、冠狀動脈旁路移植術或溶栓藥的使用。本文描述的方法還可用于治療或預防與mpt相關的神經(jīng)退行性疾病。與mpt相關的神經(jīng)退行性疾病包括例如帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、亨廷頓氏病和肌萎縮側(cè)索硬化(als，也稱為葛雷克氏病)。本文公開的方法可用于延遲這些及其他與mpt相關的神經(jīng)退行性疾病的發(fā)作，或減慢這些及其他與mpt相關的神經(jīng)退行性疾病的進展。本文公開的方法可特別用于治療患有早期與mpt相關的神經(jīng)退行性疾病的人和易患這些疾病的人。上文描述的芳香族陽離子肽還可用于預防或治療胰島素抗性、代謝綜合征、燒傷和繼發(fā)并發(fā)癥、心力衰竭、糖尿病并發(fā)癥(例如糖尿病性視網(wǎng)膜病變)、眼病癥(例如脈絡膜新生血管化、視網(wǎng)膜變性和氧誘導的視網(wǎng)膜病變)。上文描述的芳香族陽離子肽還可用于降低有此需要的哺乳動物中的氧化損傷。需要降低氧化損傷的哺乳動物是患有與氧化損傷相關的疾病、病癥或治療的哺乳動物。通常，通過例如活性氧(ros)和/或活性氮(rns)的自由基導致氧化損傷。ros和rns的例子包括羥基自由基(ho·)、超氧陰離子自由基(o2-)、一氧化氮(no·)、過氧化氫(h2o2)、次氯酸(hocl)和過氧亞硝酸鹽陰離子(onoo-)。在一個實施例中，有此需要的哺乳動物可以是經(jīng)歷與氧化損傷相關的治療的哺乳動物。例如，哺乳動物可經(jīng)歷再灌注、缺血或缺氧。在另一個實施例中，芳香族陽離子肽可用于就疾病或病癥預防與氧化損傷相關的脂質(zhì)過氧化和/或炎癥過程。脂質(zhì)過氧化指脂質(zhì)的氧化修飾。脂質(zhì)可存在于細胞的膜中。這種膜脂質(zhì)修飾通常導致細胞膜功能的改變和/或損害。另外，脂質(zhì)過氧化還可在細胞外源性的脂質(zhì)或脂蛋白中發(fā)生。例如，低密度脂蛋白對脂質(zhì)過氧化是敏感的。與脂質(zhì)過氧化相關的病癥的例子是動脈粥樣硬化。減少與動脈粥樣硬化相關的氧化損傷是重要的，因為動脈粥樣硬化牽涉例如心臟病發(fā)作和冠狀動脈疾病。炎癥過程包括免疫系統(tǒng)的活化。通常，免疫系統(tǒng)由抗原物質(zhì)活化?？乖镔|(zhì)可以是由免疫系統(tǒng)識別的任何物質(zhì)，并且包括自衍生的顆粒和外源衍生的顆粒。由針對自衍生顆粒的炎癥過程發(fā)生的疾病或病癥的例子包括關節(jié)炎和多發(fā)性硬化。外源顆粒的例子包括病毒和細菌。病毒可以是任何病毒，其活化炎癥過程，并且與氧化損傷相關。病毒的例子包括甲型、乙型或丙型肝炎病毒，人免疫缺陷病毒，流感病毒和牛腹瀉病毒。例如，肝炎病毒可引發(fā)炎癥過程和自由基的形成，由此損害肝。細菌可以是任何細菌，并且包括革蘭氏陰性菌或革蘭氏陽性菌。革蘭氏陰性菌含有在細菌壁中的脂多糖。革蘭氏陰性菌的例子包括大腸桿菌(escherichiacoli)、肺炎克雷伯氏菌(klebsiellapneumoniae)、變形桿菌屬(proteus)物種、銅綠假單胞菌(pseudomonasaeruginosa)、沙雷氏菌屬(serratia)和擬桿菌屬(bacteroides)。革蘭氏陽性菌的例子包括肺炎球菌和鏈球菌。與由細菌引起的氧化性應激相關的炎癥過程的例子是膿毒癥。通常，當革蘭氏陰性菌進入血流時，發(fā)生膿毒癥。由毒性試劑引起的肝損害是與炎癥過程和氧化性應激相關的另一種病癥。毒性試劑可以是對肝引起損害的任何試劑。例如，毒性試劑可引起肝細胞的細胞凋亡和/或壞死。此類試劑的例子包括酒精和藥劑，例如為治療疾病或病癥而服用的處方藥和非處方藥。本文公開的方法還可用于降低與任何神經(jīng)變性疾病或病癥相關的氧化損傷。神經(jīng)變性疾病可影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的任何細胞、組織或器官。此類細胞、組織和器官的例子包括腦、脊髓、神經(jīng)元、神經(jīng)節(jié)、許旺細胞、星形細胞、少突膠質(zhì)細胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細胞。神經(jīng)變性病癥可以是急性病癥例如中風或腦創(chuàng)傷或脊髓損傷。在另一個實施例中，神經(jīng)變性疾病或病癥可以是慢性神經(jīng)變性病癥。在慢性神經(jīng)變性病癥中，自由基例如可引起對蛋白質(zhì)的損傷。此類蛋白質(zhì)的例子為β淀粉樣蛋白。與通過自由基的損傷相關的慢性神經(jīng)變性疾病的例子包括帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、亨廷頓氏病和肌萎縮側(cè)索硬化(也稱為葛雷克氏病)。測定基于芳香族陽離子肽的治療劑的生物效應。在多個實施例中，進行合適的體外測定或體內(nèi)測定，來測定特定的基于芳香族陽離子肽的治療劑的效應以及其施用是否適于治療。在多個實施例中，可對代表性動物模型進行體外測定，以測定給定的基于芳香族陽離子肽的治療劑是否在預防或治療疾病或醫(yī)學病癥方面發(fā)揮所需效應。在人受試者中的測試之前，可在合適的動物模型系統(tǒng)中測試用于治療的化合物，所述動物模型系統(tǒng)包括但不限于大鼠、小鼠、雞、豬、牛、猴、兔等等。類似地，對于體內(nèi)測試，在施用于人受試者之前，可使用本領域已知的動物模型系統(tǒng)中的任一種。預防方法。在一個方面，本發(fā)明提供了通過將預防病癥起始或進展的芳香族陽離子肽施用于受試者來預防受試者中的疾病的方法。在預防應用中，將芳香族陽離子肽的藥物組合物或藥劑施用于易遭受疾病或病癥或者另外處于疾病或病癥的危險中的受試者，其量足以消除或降低疾病的危險、減輕疾病的嚴重性或延遲疾病的發(fā)作，包括疾病的生物化學、組織學和/或行為癥狀、其并發(fā)癥和在該疾病發(fā)展過程中呈現(xiàn)的中間病理表型。預防性芳香族陽離子肽的施用可在反常的癥狀特征體現(xiàn)之前發(fā)生，使得疾病或障礙得到預防或可替代地延遲其進展?？苫谏衔拿枋龅暮Y選測定來測定適當?shù)幕衔?。治療方法。該技術的另一個方面包括為了治療目的治療受試者中的疾病的方法。在治療應用中，將組合物或藥劑施用于疑似患有此類疾病或已患有此類疾病的受試者，其量足以治愈或至少部分地阻止該疾病的癥狀，包括其并發(fā)癥和在該疾病發(fā)展過程中的中間病理表型。像這樣，本發(fā)明提供了治療患有疾病或醫(yī)學病癥的個體的方法。施用模式和有效劑量可采用本領域的技術人員已知的用于使細胞、器官或組織與肽接觸的任何方法。合適方法包括體外、離體或體內(nèi)方法。體內(nèi)方法通常包括將芳香族陽離子肽(例如上文描述的芳香族陽離子肽)施用于哺乳動物、適當?shù)娜?。當在體內(nèi)用于治療時，芳香族陽離子肽可以有效量(即具有所需療效的量)施用于受試者。劑量和給藥方案將取決于受試者中的損傷的程度、所使用的特定的芳香族陽離子肽的特征(例如其治療指數(shù))、受試者以及受試者的病史?？稍谂R床前試驗和臨床試驗過程中通過醫(yī)生和臨床醫(yī)生熟悉的方法來測定有效量。在所述方法中有用的肽的有效量可通過用于施用藥物組合物的多種眾所周知方法中的任一種施用于有此需要的哺乳動物。肽可全身或局部施用。該肽可配制成藥學可接受的鹽。術語“藥學可接受的鹽”意指由適于施用于患者例如哺乳動物的堿或酸制備成的鹽(例如對于給定的給藥方案，具有可接受的哺乳動物安全性的鹽)。然而，應當理解，所述鹽無需是藥學可接受的鹽，例如不預期施用于患者的中間化合物的鹽。藥學可接受的鹽可源自藥學可接受的無機堿或有機堿以及藥學可接受的無機酸或有機酸。另外，當肽包含堿性部分(例如胺、吡啶或咪唑)和酸性部分(例如羧酸或四唑)兩者時，可形成兩性離子，且包括在如本文使用的術語“鹽”中。源自藥學可接受的無機堿的鹽包括銨鹽、鈣鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽、亞錳鹽、鉀鹽、鈉鹽和鋅鹽等等。源自藥學可接受的有機堿的鹽包括伯胺鹽、仲胺鹽和叔胺鹽，包括取代胺鹽、環(huán)胺鹽、天然存在的胺鹽等等，所述胺例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、n,n’-二芐乙烯二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基嗎啉、n-乙基哌啶、葡糖胺、葡萄糖胺、組氨酸、海巴青霉素(hydrabamine)、異丙胺、賴氨酸、葡甲胺、嗎啉、哌嗪、哌啶(piperadine)、多胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等等。源自藥學可接受的無機酸的鹽包括硼酸鹽、碳酸鹽、氫鹵酸(氫溴酸、鹽酸、氫氟酸或氫碘酸)鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、氨基磺酸鹽和硫酸鹽。源自藥學可接受的有機酸的鹽包括脂肪族羥基酸(例如檸檬酸、葡糖酸、乙醇酸、乳酸、乳糖酸、蘋果酸和酒石酸)鹽、脂肪族單羧酸(例如乙酸、丁酸、甲酸、丙酸和三氟乙酸)鹽、氨基酸(例如天冬氨酸和谷氨酸)鹽、芳香族羧酸(例如苯甲酸、對氯苯甲酸、二苯乙酸、龍膽酸、馬尿酸和三苯基乙酸)鹽、芳香族羥基酸(例如鄰羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸、1-羥基萘-2-羧酸和3-羥基萘-2-羧酸)鹽、抗壞血酸鹽、二羧酸(例如富馬酸、馬來酸、草酸和琥珀酸)鹽、葡糖醛酸鹽、扁桃酸鹽、粘酸鹽、煙酸鹽、乳清酸鹽、撲酸鹽、泛酸鹽、磺酸(例如苯磺酸、樟腦磺酸、乙二磺酸(edisylicacid)、乙磺酸、羥乙磺酸、甲磺酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸和對甲苯磺酸)的鹽、辛那酸鹽等等。在一些實施例中，該鹽包含三氟乙酸鹽或乙酸鹽。本文描述的芳香族陽離子肽或其藥學可接受的鹽例如乙酸鹽或三氟乙酸鹽，可摻入藥物組合物內(nèi)用于單獨或組合施用于受試者，以治療或預防本文描述的疾病或醫(yī)學病癥。此類組合物通常包括活性劑和藥學可接受的載體。如本文使用的，術語“藥學可接受的載體”包括與藥物施用相容的鹽水、溶劑、分散介質(zhì)、涂層、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。補充性活性化合物也可摻入組合物內(nèi)。通常將藥物組合物配制成與其預期施用途徑相容。施用途徑的例子包括腸胃外(例如，靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下)、經(jīng)口、吸入、經(jīng)皮(局部)、眼內(nèi)、電離子透入和經(jīng)粘膜施用。用于腸胃外、皮內(nèi)或皮下應用的溶液或懸浮液可包括下述組分：無菌稀釋劑，例如注射用水、鹽水溶液、不揮發(fā)油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其他合成溶劑；抗菌劑，例如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩沖劑，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽以及用于調(diào)節(jié)張度的試劑，例如氯化鈉或右旋糖。可用酸或堿例如鹽酸或氫氧化鈉來調(diào)節(jié)ph。腸胃外制劑可封裝在玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多劑量小瓶中。為了患者或治療醫(yī)生的方便，劑量制劑可在試劑盒中提供，所述試劑盒含有治療過程(例如治療7天)所需的所有設備(例如，藥物小瓶、稀釋小瓶、注射器和針)。適合于注射用途的藥物組合物可包括無菌水溶液(在水溶性的情況下)或者用于臨時制備無菌注射液或分散體的分散體和無菌粉末。對于靜脈內(nèi)施用，合適的載體包括生理鹽水、抑菌水、cremophoreltm(basf,parsippany,n.j.)或磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)。在所有情況下，用于腸胃外施用的組合物必須是無菌的，且應流動至存在容易注射性的程度。它在制造和儲存條件下應是穩(wěn)定的，且必須針對微生物例如細菌和真菌的污染作用進行防腐。芳香族陽離子肽組合物或其藥學可接受的鹽例如乙酸鹽或三氟乙酸鹽可包括載體，該載體可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，丙三醇、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇等等)及其合適混合物的溶劑或分散介質(zhì)。可通過例如下述來保持適當?shù)牧鲃有裕菏褂猛繉永缏蚜字?，在分散體的情況下維持所需粒子大小，和使用表面活性劑?？赏ㄟ^多種抗菌劑和抗真菌劑來實現(xiàn)微生物作用的預防，所述抗菌劑和抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等等?？砂ü入赘孰募捌渌寡趸瘎┮苑乐寡趸?。在許多情況下，將優(yōu)選在組合物中包括等滲劑，例如糖、多元醇例如甘露醇、山梨糖醇或氯化鈉?？赏ㄟ^在組合物中包括延遲吸收的制劑來造成可注射組合物的延長吸收，所述延遲吸收的制劑例如單硬脂酸鋁或明膠?？赏ㄟ^將所需量的活性化合物摻入具有上文列舉的成分之一或組合的適當溶劑中，根據(jù)需要隨后過濾滅菌來制備無菌可注射溶液。一般地，通過將活性化合物摻入無菌媒介物中來制備分散體，所述無菌媒介物含有基本分散介質(zhì)和來自上文列舉的所需其他成分。在用于制備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況下，典型的制備方法包括真空干燥和冷凍干燥，其可獲得活性成分加上來自其先前滅菌過濾的溶液的任何另外所需成分的粉末?？诜M合物一般包括惰性稀釋劑或可食用載體。為了經(jīng)口治療施用的目的，活性化合物可與賦形劑一起摻入，并以片劑、錠劑或膠囊例如明膠膠囊的形式使用。還可使用流體載體制備口服組合物，以用作漱口劑。藥學相容的粘合劑和/或輔助材料可被包括作為該組合物的一部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等等可含有下述成分或具有相似性質(zhì)的化合物中的任一種：粘合劑，例如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，例如淀粉或乳糖；崩解劑，例如海藻酸、羧甲淀粉鈉(primogel)或玉米淀粉；潤滑劑，例如硬脂酸鎂或sterotes；助流劑，例如膠態(tài)二氧化硅；甜味劑，例如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑，例如薄荷、水楊酸甲酯或橙調(diào)味料。關于通過吸入施用，化合物可以來自含有合適推進劑(例如氣體，例如二氧化碳)的加壓容器或分配器或者噴霧器的氣溶膠噴霧形式進行遞送。此類方法包括美國專利號6,468,798中描述的方法。如本文描述的治療化合物的全身施用還可通過經(jīng)粘膜或經(jīng)皮方法來進行。對于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮施用，適合于待滲透的屏障的滲透劑用于制劑中。此類滲透劑一般是本
技術領域：
已知的，并且對于經(jīng)粘膜施用，包括例如去污劑、膽汁鹽和夫西地酸衍生物。可通過使用鼻腔噴霧來完成經(jīng)粘膜施用。對于經(jīng)皮施用，將活性化合物配制成本領域一般已知的軟膏、藥膏、凝膠或乳膏。在一個實施例中，經(jīng)皮施用可通過電離子透入來進行。治療肽或其藥學可接受的鹽例如乙酸鹽或三氟乙酸鹽可在載體系統(tǒng)中進行配制。該載體可以是膠態(tài)系統(tǒng)。該膠態(tài)系統(tǒng)可以是脂質(zhì)體、磷脂雙層媒介物。在一個實施例中，治療肽包封在脂質(zhì)體中，同時維持肽完整性。如本領域技術人員理解的，存在多種制備脂質(zhì)體的方法。(參見lichtenberg等人，methodsbiochem.anal.,33:337-462(1988)；anselem等人，liposometechnology,crcpress(1993))。脂質(zhì)體制劑可延遲清除并增加細胞攝取(參見reddy,ann.pharmacother.,34(7-8):915-923(2000))?；钚詣┻€可裝載到由藥學可接受的成分制備的顆粒內(nèi)，所述藥學可接受的成分包括但不限于可溶、不可溶、可滲透、不可滲透、生物可降解或胃滯留的聚合物或脂質(zhì)體。此類顆粒包括但不限于納米顆粒、生物可降解的納米顆粒、微粒、生物可降解的微粒、納米球、生物可降解的納米球、微球、生物可降解的微球、膠囊、乳劑、脂質(zhì)體、膠粒以及病毒載體系統(tǒng)。該載體還可以是聚合物，例如生物可降解、生物相容的聚合物基質(zhì)。在一個實施例中，治療肽可嵌入到聚合物基質(zhì)中，同時維持蛋白質(zhì)完整性。聚合物可以是天然的，例如多肽、蛋白質(zhì)或多糖；或合成的，例如聚α-羥酸。例子包括由例如下述物質(zhì)制成的載體：膠原蛋白、纖連蛋白、彈性蛋白、乙酸纖維素、硝酸纖維素、多糖、纖維蛋白、明膠及其組合。在一個實施例中，聚合物是聚乳酸(pla)或乳酸/乙醇酸共聚物(pgla)。聚合物基質(zhì)可以多種形式和大小進行制備并分離，包括微球和納米球。聚合物制劑可導致療效的延長持續(xù)時間(參見reddy,ann.pharmacother.,34(7-8):915-923(2000))。用于人生長激素(hgh)的聚合物制劑已用在臨床試驗中。(參見kozarich和rich,chemicalbiology,2:548-552(1998))。聚合物微球持續(xù)釋放制劑的例子在pct公開wo99/15154(tracy等人)、美國專利號5,674,534和5,716,644(兩者均屬于zale等人)、pct公開wo96/40073(zale等人)和pct公開wo00/38651(shah等人)中進行描述。美國專利號5,674,534和5,716,644以及pct公開wo96/40073描述了含有促紅細胞生成素顆粒的聚合物基質(zhì)，所述促紅細胞生成素顆粒用鹽針對聚集進行穩(wěn)定。在一些實施例中，治療化合物與保護該治療化合物不受從機體快速消除的載體一起制備，所述載體例如控制釋放制劑，包括埋植劑和裝入微膠囊的遞送系統(tǒng)。可使用生物可降解、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸?？墒褂靡阎夹g來制備此類制劑。還可例如從alzacorporationandnovapharmaceuticals,inc.商購獲得材料。脂質(zhì)體懸浮液(包括靶向具有針對細胞特異性抗原的單克隆抗體的特定細胞的脂質(zhì)體)也可用作藥學可接受的載體。這些可根據(jù)本領域技術人員已知的方法進行制備，例如如美國專利號4,522,811中描述的。治療化合物還可配制為增強細胞內(nèi)遞送。例如，脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)是本領域已知的，參見例如chonn和cullis,“recentadvancesinliposomedrugdeliverysystems,”currentopinioninbiotechnology6:698-708(1995)；weiner,“l(fā)iposomesforproteindelivery:selectingmanufactureanddevelopmentprocesses,”immunomethods,4(3):201-9(1994)；和gregoriadis,“engineeringliposomesfordrugdelivery:progressandproblems,”trendsbiotechnol.,13(12):527-37(1995)。mizguchi等人，cancerlett.,100:63-69(1996)描述了使用膜融合脂質(zhì)體在體內(nèi)和在體外將蛋白質(zhì)遞送至細胞?？赏ㄟ^細胞培養(yǎng)或?qū)嶒瀯游镏械臉藴仕帉W程序來測定治療劑的劑量、毒性和治療效果，例如，用于測定ld50(對50％群體致命的劑量)和ed50(在50％群體中治療有效的劑量)。毒性和療效之間的劑量比是治療指數(shù)，并且它可表示為比率ld50/ed50。顯示出高治療指數(shù)的化合物是優(yōu)選的。盡管可使用顯示出毒性副作用的化合物，但應當小心設計遞送系統(tǒng)，該遞送系統(tǒng)將此類化合物靶向受累組織部位，以便使對未感染細胞的潛在損傷降到最低，且由此降低副作用。得自細胞培養(yǎng)測定和動物研究的數(shù)據(jù)可用于配制在人中使用的劑量范圍中。此類化合物的劑量優(yōu)選位于包括具有很少毒性或無毒性的ed50的循環(huán)濃度的范圍中。取決于采用的劑型和利用的施用途徑，劑量可在該范圍內(nèi)變化。對于該方法中使用的任何化合物，可最初由細胞培養(yǎng)測定來估計治療有效劑量?？稍趧游锬Ｐ椭信渲苿┝縼韺崿F(xiàn)循環(huán)血漿濃度范圍，其包括如在細胞培養(yǎng)中測定的ic50(即，實現(xiàn)癥狀的半數(shù)最大抑制的測試化合物濃度)。此類制劑可用于更準確地測定人中的有用劑量。可例如通過高效液相色譜法測量血漿水平。劑量還可通過檢測來自受試者的生物樣品中的芳香族陽離子肽憑經(jīng)驗進行測定。得自已施用芳香族陽離子肽的受試者的生物樣品可實施hplc和/或ms，以檢測且表征受試者的體液和組織中存在的芳香族陽離子肽。生物樣品包括源自活細胞或由活細胞接觸的任何材料。生物樣品的例子包括但不限于全血、分餾血液、精液、唾液、淚、尿、糞便材料、汗、頰、皮膚、腦脊髓液和毛發(fā)。生物樣品還包括內(nèi)臟活組織檢查樣本、因移植或癌癥而摘除的器官。通過比較對于參考樣品獲得的數(shù)據(jù)例如實例6中提供的那些，確定生物樣品中的芳香族陽離子肽的存在。樣品中存在的芳香族陽離子肽的水平可充當基礎，以增加或降低對給定受試者施用的芳香族陽離子肽或其前體的劑量，其中該前體可以是其也是治療試劑或藥物的芳香族陽離子肽。通常，足以實現(xiàn)治療或預防效應的芳香族陽離子肽的有效量范圍為約0.000001mg/千克體重/天-約10,000mg/千克體重/天。優(yōu)選地，劑量范圍為約0.0001mg/千克體重/天-約100mg/千克體重/天。例如，劑量可以是每天、每兩天或每三天1mg/kg體重或10mg/kg體重，或者在每周、每兩周或每三周1-10mg/kg的范圍內(nèi)。在一個實施例中，肽的單次劑量范圍為0.1-10,000毫克/kg體重。在一個實施例中，在載體中的芳香族陽離子肽濃度范圍為0.2-2000毫克/遞送的毫升。示例性治療方案需要每天一次或每周一次的施用。在治療應用中，在相對短的間隔中相對高的劑量有時是需要的，直到疾病的進展降低或終止，且優(yōu)選直到受試者顯示疾病癥狀的部分或完全改善。其后，可對患者施用預防方案。在一些實施例中，芳香族陽離子肽的治療有效量可限定為在靶標組織處10-11-10-6摩爾、例如大約10-7摩爾的肽濃度。該濃度可通過0.01-100mg/kg的全身劑量或體表面積的等效劑量來遞送。最佳化劑量的時間表，以維持在靶標組織處的治療濃度，最優(yōu)選通過每天或每周單次施用，但也包括連續(xù)施用(例如，腸胃外輸注或經(jīng)皮應用)。在一些實施例中，芳香族陽離子肽的劑量以“低”、“中”或“高”劑量水平提供。在一個實施例中，低劑量由約0.001-約0.5mg/kg/h、適當?shù)丶s0.01-約0.1mg/kg/h提供。在一個實施例中，中劑量由約0.1-約1.0mg/kg/h、適當?shù)丶s0.1-約0.5mg/kg/h的劑量提供。在一個實施例中，高劑量由約0.5-約10mg/kg/h、適當?shù)丶s0.5-約2mg/kg/h的劑量提供。本領域技術人員應當理解，某些因素可影響有效治療受試者所需的劑量和時機，包括但不限于疾病或障礙的嚴重性、先前治療、受試者的一般健康和/或年齡以及存在的其他疾病。此外，使用本文描述的治療有效量的治療組合物治療受試者可包括單次治療或一系列治療。在一些實施例中，將多個劑量或不同量的芳香族陽離子肽施用于受試者。在一些實施例中，在操作(例如手術)過程自始至終或者在疾病或病癥過程自始至終施用多個劑量或不同量的肽。例如，在一些實施例中，該肽例如在手術過程中靜脈內(nèi)施用，并且給受試者提供的肽量在操作過程中進行調(diào)整。在其他實施例中，約每10分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時一次，每天一次，每隔一天一次或每周一次給受試者施用肽劑量(例如經(jīng)口或通過注射，例如真皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、骨內(nèi)和腹膜內(nèi))。在一些實施例中，監(jiān)控受試者中存在的肽量(受試者的肽水平)，以測定維持受試者中的所需肽水平所需的適當劑量和時間表。在一些實施例中，肽水平在施用過程中定期測定，和/或在施用后的一個或多個時間點測定。例如，在一些實施例中，肽水平在施用數(shù)分鐘內(nèi)，施用后約10分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時、24小時、二天、3天5天、7天或14天進行測定。在其他實施例中，對于預定時間例如在手術操作過程中，每10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘、每小時、每二小時、每4小時、每6小時或每12小時測定受試者肽水平。取決于測定的肽水平，可提供一個或多個另外的劑量，以實現(xiàn)維持療效的所需肽水平。在一些實施例中，肽水平可能發(fā)現(xiàn)足以延遲另外的一個或多個劑量。在一些實施例中，檢測到的芳香族陽離子肽水平與健康對照受試者(例如已經(jīng)由基本上相同的施用途徑施用基本上相同的肽劑量的受試者)中的芳香族陽離子肽水平相比較。另外或可替代地，在一些實施例中，肽水平在受試者的不同器官、系統(tǒng)和/或流體中進行測定。在一些實施例中，肽水平在受試者的不同器官、系統(tǒng)和/或流體中進行測定，并且與對照受試者的可比較系統(tǒng)、器官和流體中的肽水平相比較。在一些實施例中，此類分析提供關于肽的可用性和與對照相比較肽在受試者身體各處的轉(zhuǎn)運的信息。例如，施用途徑可對于特定受試者改變，以優(yōu)化對特定組織或器官的肽遞送(例如以實現(xiàn)更局限性的肽分布)。另外或可替代地，施用途徑可對于特定受試者改變，以用于更全身的肽分布。用于鑒定且測定受試者樣品中的芳香族陽離子肽的存在或量(水平)的方法是本領域已知的，并且包括但不限于hplc和質(zhì)譜法。如先前指出的，在一些實施例中，肽水平在來自受試者的生物樣品中進行測定，并且包括但不限于血樣、組織樣品(例如器官或腫瘤活組織檢查樣品)、尿和唾液。本文還公開的是用于檢測芳香族陽離子肽的試劑盒。在一些實施例中，該試劑盒包括收集來自受試者的樣品的樣品收集裝置，和用于保存生物樣品的樣品貯存裝置。取決于預期的檢測方法，將樣品貯存于也在試劑盒中提供的適當緩沖液或防腐劑中。在一些實施例中，樣品收集器包括液體容器，例如小瓶或管(例如用于血液、血液制品、尿)。在其他實施例中，樣品收集器是吸收性材料，例如無菌棉簽(例如以收集頰樣品、唾液、鼻拭子等)、載玻片、無菌紙、卡、注射器等。樣品貯存裝置可以是將包圍樣品且在運輸、裝運和/或貯存過程中保護樣品的任何裝置。例如，在一些實施例中，樣品貯存裝置是可密封管。在一些實施例中，該試劑盒還包括用于獲得樣品且適當貯存樣品直至分析時的說明書。在一些實施例中，樣品包括體液、一種或多種細胞、組織或器官的一部分、活組織檢查樣品和/或腫瘤的一部分。依照本方法治療的哺乳動物可以是任何哺乳動物，包括例如農(nóng)場動物，例如綿羊、豬、牛和馬；寵物動物，例如犬和貓；實驗室動物，例如大鼠、小鼠和兔。在合適實施例中，哺乳動物是人。實例通過下述實例進一步舉例說明本發(fā)明，所述實例不應解釋為以任何方式限制本發(fā)明。實例1–本技術的芳香族陽離子肽抑制通過分離的線粒體的h2o2生成在本實例中，研究本發(fā)明的芳香族陽離子肽對通過分離的線粒體的h2o2生成的作用。h2o2使用如y.li,h.zhu,m.a.trush,biochim.biophys.acta1428,1-12(1999))中所述的魯米諾化學發(fā)光進行測量。簡言之，在芳香族陽離子肽的不存在或存在下，將0.1mg線粒體蛋白質(zhì)加入0.5ml磷酸鉀緩沖液(100mm,ph8.0)中。加入魯米諾(25mm)和0.7iu辣根過氧化物酶，并且用chronolog型號560凝聚計(havertown,pa.)在37℃下監(jiān)控化學發(fā)光共20分鐘。產(chǎn)生的h2o2量定量為經(jīng)過20分鐘的曲線下面積(auc)，并且所有數(shù)據(jù)針對由單獨的線粒體產(chǎn)生的auc標準化。預測芳香族陽離子肽將減少通過分離的線粒體的自發(fā)h2o2產(chǎn)生。像這樣，芳香族陽離子肽可用于減少氧化損傷，并且可用于治療或預防涉及氧化損傷的疾病或病癥。實例2–本技術的芳香族陽離子肽減少細胞內(nèi)ros且增加細胞存活為了顯示請求保護的肽當施加于全細胞時是有效的抗氧化劑，將神經(jīng)元n2a細胞以1x104/孔的密度在96孔板中鋪平板，并且允許生長2天，然后用tbhp(0.5或1mm)處理40分鐘。將細胞洗滌兩次，并且替換為單獨的培養(yǎng)基或含有不同濃度的芳香族陽離子肽(10-12m至10-9m)的培養(yǎng)基共4小時。細胞內(nèi)ros通過羧基-h2dcfda(molecularprobes,portland,oreg.)進行測量。細胞死亡通過細胞增殖測定(mtsassay,promega,madison,wis.)進行評價。與tbhp一起溫育將導致細胞內(nèi)ros的增加和細胞活力的降低。然而，預測這些細胞與芳香族陽離子肽一起溫育將減少細胞內(nèi)ros且增加細胞存活。像這樣，芳香族陽離子肽可用于減少氧化損傷，并且可用于治療或預防涉及氧化損傷的疾病或病癥。實例3–本技術的芳香族陽離子肽保護不受由ca2+和3-硝基丙酸誘導的mpt為了從小鼠肝中分離線粒體，通過斷頭術處死小鼠。取出肝且快速置于制冷的肝勻漿化介質(zhì)中。使用剪刀將肝精細絞碎，并且隨后使用玻璃勻漿器手動勻漿化。勻漿物以1000g在4℃下離心10分鐘。將上清液抽吸且轉(zhuǎn)移至聚碳酸酯管中，并且再次在3000g、4℃下離心10分鐘。去除所得的上清液，并且小心擦掉在管的側(cè)壁上的脂肪脂質(zhì)。將團塊重懸浮于肝勻漿介質(zhì)中，并且將勻漿化重復兩次。將最后純化的線粒體團塊重懸浮于介質(zhì)中。通過bradford操作測定線粒體制劑中的蛋白質(zhì)濃度。為了研究本發(fā)明的芳香族陽離子肽的定位，將在400μl緩沖液中的約1.5mg線粒體與標記的芳香族陽離子肽一起在37℃下溫育5-30分鐘。隨后將線粒體向下離心，并且測量在線粒體級分和緩沖液級分中的標記量。假定0.7μl/mg蛋白質(zhì)的線粒體基質(zhì)體積(lim等人，jphysiol545:961-974,2002)，可測定線粒體中的肽濃度。預測與緩沖液級分相比較，請求保護的芳香族陽離子肽在線粒體中將更濃縮。為了研究本發(fā)明的芳香族陽離子肽對線粒體膜電位的作用，使分離的小鼠肝線粒體與100-200μm芳香族陽離子肽一起溫育。使用四甲基羅丹明甲酯(tmrm)測量線粒體膜電位。線粒體的添加導致tmrm信號的立即猝滅，所述猝滅容易地通過添加fccp逆轉(zhuǎn)，從而指示線粒體去極化。ca2+(150μm)的添加導致立即去極化，隨后為進行性的猝滅喪失，這指示mpt。芳香族陽離子肽單獨(即使以200μm)的添加也不預測引起線粒體去極化或mpt。還預測芳香族陽離子肽將不改變線粒體功能，包括在狀態(tài)3或狀態(tài)4過程中的耗氧量或呼吸比(狀態(tài)3/狀態(tài)4)。為了顯示請求保護的肽有效保護不受由ca2過負荷誘導的mpt，在添加ca2+前，分離的線粒體用芳香族陽離子肽(10μm)預處理2分鐘。預測本發(fā)明的芳香族陽離子肽將增加線粒體對累積的ca2+攻擊的耐受。3-硝基丙酸(3np)是電子傳遞鏈的復合物ii中的琥珀酸脫氫酶的不可逆抑制劑。3np(1mm)對分離的線粒體的添加引起線粒體電位的消散和mpt的發(fā)作。線粒體用本發(fā)明的芳香族陽離子肽的預處理預測延遲由3np誘導的mpt的發(fā)作。為了證實本發(fā)明的芳香族陽離子肽可穿透細胞膜且保護不受由3np引發(fā)的線粒體去極化，在芳香族陽離子肽的不存在或存在下，將caco-2細胞用3np(10mm)處理4小時，并且隨后與tmrm一起溫育且在lscm下檢查。在對照細胞中，線粒體明確顯現(xiàn)為在細胞質(zhì)各處的細條紋。在用3np處理的細胞中，tmrm熒光大幅減少，從而指示泛發(fā)的去極化。相比之下，預測用本發(fā)明的芳香族陽離子肽的同時處理將保護不受由3np引起的線粒體去極化。像這樣，芳香族陽離子肽可用于預防m(xù)pt，并且可用于治療或預防涉及mpt的疾病或病癥。實例4–本技術的芳香族陽離子肽保護不受線粒體腫脹和細胞色素c釋放mpt孔打開導致線粒體腫脹。本實例通過測量在540nm處的吸光度(a540)的減少，檢查本發(fā)明的芳香族陽離子肽對線粒體腫脹的作用。一旦測量吸光度，隨后就使線粒體懸浮液離心，并且通過商購可得的elisa試劑盒測定線粒體團塊和上清液中的細胞色素c。預測用本發(fā)明的芳香族陽離子肽預處理分離的線粒體，將抑制由ca2+過負荷誘導的腫脹和細胞色素c釋放。除預防由ca2+過負荷誘導的mpt之外，預測本發(fā)明的芳香族陽離子肽還將預防由mpp+(1-甲基-4-苯基吡啶鎓離子)誘導的線粒體腫脹，所述mpp+是線粒體電子傳遞鏈的復合物i的抑制劑。像這樣，芳香族陽離子肽可用于預防m(xù)pt，并且可用于治療或預防涉及mpt的疾病或病癥。實例5–本技術的肽增加分離的線粒體中的atp合成率。本實例將證實本技術的肽對線粒體atp合成率的影響。通過測量在添加400mmadp后1分鐘從分離的線粒體收集的呼吸緩沖液中的atp，來測定線粒體atp合成率。atp將通過hplc進行測定。所有實驗將一式三份進行，其中n＝3。預測本技術的肽對分離的線粒體的添加將以劑量依賴性方式增加atp合成率。該結果將證實本技術的肽可用于增加線粒體atp合成率的方法和組合物中。實例6–芳香族陽離子肽的表征本技術的芳香族陽離子肽可使用固相合成進行合成，并且使用hplc和ms進行表征。示例性hplc和ms方法在下文實例7和8中提供。實例7–生物樣品中的芳香族陽離子肽的檢測本實例證實通過hplc檢測生物樣品中的芳香族陽離子肽。取決于樣品的性質(zhì)，以合適方式從受試者中收集生物樣品。生物樣品包括源自活細胞或由活細胞接觸的任何材料。生物樣品的例子包括但不限于全血、分餾血液、精液、唾液、淚、尿、糞便材料、汗、頰、皮膚、腦脊髓液和毛發(fā)。生物樣品還包括內(nèi)臟或癌癥活組織檢查樣本。一旦獲得，生物樣品就以與檢測方法相容的方式貯存，直至執(zhí)行該方法時，以確保樣品中存在的芳香族陽離子肽的保存。將樣品裝載到250x4.6(i.d.)mmc185μm柱上，并且根據(jù)下述方案實施在乙腈中的0.1％三氟乙酸(溶液a)和在hplc級別水中的0.1％三氟乙酸(溶液b)的梯度：通過比較對于參考樣品獲得的數(shù)據(jù)例如實例6中提供的那些，確定生物樣品中的芳香族陽離子肽的存在。前述方法僅是舉例說明性的，并且不應以任何方式解釋為限制性的。本領域技術人員應當理解，本文描述的芳香族陽離子肽可通過多種hplc方法進行分析，所述hplc方法例如aguilar,hplcofpeptidesandproteins:methodsandprotocols,humanapress,newjersey(2004)中所述的那些。實例8通過ms檢測生物樣品中的芳香族陽離子肽該實例證實通過ms檢測生物樣品中的芳香族陽離子肽。取決于樣品的性質(zhì)，以合適方式從受試者中收集生物樣品。生物樣品包括源自活細胞或由活細胞接觸的任何材料。生物樣品的例子包括但不限于全血、分餾血液、精液、唾液、淚、尿、糞便材料、汗、頰、皮膚、腦脊髓液和毛發(fā)。生物樣品還包括內(nèi)臟或癌癥活組織檢查樣本。一旦獲得，生物樣品就以與檢測方法相容的方式貯存，直至執(zhí)行該方法時，以確保樣品中存在的芳香族陽離子肽的保存。樣品在20μl體積中裝載且在下述示例性條件下分析。本領域技術人員應當理解，本文描述的芳香族陽離子肽可通過多種ms方法進行分析，所述ms方法例如sparkman,massspectrometrydeskreference,pittsburgh:globalviewpub(2000)中所述的那些。本發(fā)明并不限于在本申請中描述的特定實施例，所述特定實施例預期用作本發(fā)明的單個方面單獨舉例說明。如對于本領域技術人員顯而易見的，可作出本發(fā)明的多種修改和變化而不背離其精神和范圍。根據(jù)上述說明書，除本文中列舉的之外，在本發(fā)明范圍內(nèi)的功能上等價的方法和儀器對于本領域的技術人員將是顯而易見的。此類修改和變化預期落入所附權利要求的范圍內(nèi)。本發(fā)明僅受所附權利要求書連同此類權利要求書賦予權力的等價物的全部范圍限制。應當理解，本發(fā)明并不限于特定的方法、試劑、化合物、組合物或生物系統(tǒng)，當然，所述方法、試劑、組合物或生物系統(tǒng)可變化。還應理解，本文中使用的術語僅用于描述特定實施例，并不預期是限制性的。另外，當公開內(nèi)容的特征或方面按照markush組進行描述時，本領域技術人員將認識到公開內(nèi)容由此也按照markush組的任何個別成員或成員亞組進行描述。如本領域的技術人員應當理解的，為了任何和所有目的，特別是在提供書面說明書方面，本文公開的所有范圍還涵蓋任何和所有可能的子范圍及其子范圍的組合。任何列出的范圍可容易地視為充分描述并使相同范圍能夠分解成至少相等的二分之一、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作為非限制性實例，本文討論的每個范圍可容易地分解成下三分之一、中三分之一和上三分之一等。如本領域技術人員還應理解的，所有的語言例如“上至”、“至少”、“大于“、“小于”等等包括所述數(shù)目，并且指隨后可分解成如上文討論的子范圍的范圍。最后，如本領域的技術人員應當理解的，范圍包括每一個別成員。因此，例如，具有1-3個單元的組指具有1、2或3個單元的組。類似地，具有1-5個單元的組指具有1、2、3、4或5個單元的組等等。本文提及或引用的所有專利、專利申請、臨時申請和出版物包括所有附圖和表格全文以引用的方式并入，到它們不與本說明書的明確教導相矛盾的程度。在下述權利要求中闡述了其他實施例。序列表<110>康肽德生物醫(yī)藥技術有限公司(stealthpeptidesinternational,inc.)<120>芳香族陽離子肽及其用途<130>091151-0282<140>pct/us2012/067984<141>2012-12-05<150>61/569,120<151>2011-12-09<160>5<170>patentin版本3.5<210>1<211>5<212>prt<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：合成肽<220><221>mod_res<222>(2)..(2)<223>dmt<400>1argxaalysphecys15<210>2<211>4<212>prt<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：合成肽<400>2argtyrlysphe1<210>3<211>4<212>prt<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：合成肽<220><223>c-termnh2<400>3pheargphelys1<210>4<211>4<212>prt<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：合成肽<400>4pheargphelys1<210>5<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：合成肽<400>5pheargphelysglucysgly15當前第1頁12