技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于生物質(zhì)新能源技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用木質(zhì)素降解菌強(qiáng)化廢棄生物質(zhì)fenton反應(yīng)預(yù)處理的方法。

背景技術(shù)：
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近年來，為了降低對(duì)化石燃料的依賴，各國政府和科研機(jī)構(gòu)大力開展對(duì)可再生能源的開發(fā)和研究。廢棄生物質(zhì)中的木質(zhì)纖維素主要由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素組成，蘊(yùn)藏著巨量的碳資源，成為第二代生物質(zhì)能源，是當(dāng)前生物乙醇、生物塑料、生物柴油等綠色產(chǎn)品生物發(fā)酵最重要的碳源。木質(zhì)纖維素中的半纖維素和木質(zhì)素緊密鑲嵌在纖維素的周圍，如不進(jìn)行任何處理，其糖化發(fā)酵效率極低。因此，預(yù)處理成為了廢棄生物質(zhì)開發(fā)利用的首要環(huán)節(jié)，即疏松或破壞纖維素的致密結(jié)構(gòu)以及木質(zhì)素和半纖維素的包裹，使纖維素、半纖維素和木質(zhì)素分離，從而提高酶對(duì)纖維素的可及度和作用效率。

目前的預(yù)處理工藝主要分為物理法、化學(xué)法和生物法。其中fenton反應(yīng)是部分真菌用于攻擊廢棄生物質(zhì)過程中的非酶途徑，因此成為了一種有效的廢棄生物質(zhì)預(yù)處理方法。通常認(rèn)為fenton反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生高反應(yīng)性羥基自由基攻擊廢棄生物質(zhì)使得纖維素鏈內(nèi)部裂解及木質(zhì)素解聚，而使半纖維素含量升高。目前，已有人采用真菌法或真菌-化學(xué)聯(lián)合預(yù)處理實(shí)現(xiàn)了廢棄生物質(zhì)中木質(zhì)素的深度去除。但真菌生長所需時(shí)間過長(10～50天)，不利于工藝擴(kuò)大化和商業(yè)化。與真菌相比，木質(zhì)素降解細(xì)菌的數(shù)量雖然較少，但可大大縮短生物處理接種時(shí)間(<7天)，因此采用細(xì)菌替代真菌進(jìn)行廢棄生物質(zhì)預(yù)處理具有重要意義。目前，國內(nèi)外尚無木質(zhì)素降解細(xì)菌強(qiáng)化廢棄生物質(zhì)fenton反應(yīng)預(yù)處理的相關(guān)報(bào)道。

由于木質(zhì)素具有天然異質(zhì)性、多變性和極強(qiáng)的穩(wěn)定性，當(dāng)fenton反應(yīng)條件較溫和時(shí)，木質(zhì)素難以全部去除，不僅降低了糖純度，也給纖維素的后續(xù)酶解和生物轉(zhuǎn)化造成阻礙。若改用高強(qiáng)度條件，又極易造成纖維素的過度破壞和流失。因此，減弱fenton預(yù)處理?xiàng)l件，同時(shí)利用微生物深度去除渣中殘留木質(zhì)素是提高廢棄生物質(zhì)中碳源利用和資源化產(chǎn)率的關(guān)鍵。

此外，廢棄生物質(zhì)秸稈也就是原生木質(zhì)纖維素，不僅包括木質(zhì)素，還包括纖維素和半纖維素，三者緊密結(jié)合連接；其中的原生木質(zhì)素高度聚合，木質(zhì)素降解細(xì)菌作用原生木質(zhì)纖維素時(shí)比純的堿木質(zhì)素要更加復(fù)雜，作用難度更大，因此，找尋合適的培養(yǎng)基成分以及條件，最大程度的去除fenton反應(yīng)預(yù)處理渣中殘留木質(zhì)素也是亟待解決的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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為了解決現(xiàn)有廢棄生物質(zhì)fenton反應(yīng)預(yù)處理技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種利用木質(zhì)素降解菌強(qiáng)化廢棄生物質(zhì)fenton反應(yīng)預(yù)處理的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種利用木質(zhì)素降解菌強(qiáng)化廢棄生物質(zhì)fenton反應(yīng)預(yù)處理的方法，包括以下步驟：

(1)fenton反應(yīng)預(yù)處理：廢棄生物質(zhì)加入fecl3和h2o2；或者fecl2和h2o2，震蕩反應(yīng)，過濾分離，所得固體清洗至ph呈中性，烘干，得到fenton反應(yīng)預(yù)處理廢棄生物質(zhì)；

(2)木質(zhì)素降解菌強(qiáng)化預(yù)處理：將保藏編號(hào)為cgmccno.4240的木質(zhì)素降解菌cupriavidusbasilensisb-8接種于含fenton反應(yīng)預(yù)處理廢棄生物質(zhì)的無菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后，過濾分離所得固體，清洗，烘干，得到細(xì)菌強(qiáng)化fenton反應(yīng)預(yù)處理的廢棄生物質(zhì)。

步驟(1)所述的廢棄生物質(zhì)包括：水稻秸稈，玉米秸稈，小麥秸稈，甘蔗渣或柳枝稷等。

步驟(1)將廢棄生物質(zhì)粉碎后20-100目過篩，超純水清洗兩遍，于60℃烘干至恒重。

步驟(1)fenton反應(yīng)預(yù)處理：廢棄生物質(zhì)固液比為1:5-1:20(g/ml)，加入濃度為0.01-0.03mol/l的fecl3和0.75-2.25mol/l的h2o2或0.01-0.03mol/l的fecl2和0.75-2.25mol/l的h2o2，于室溫環(huán)境中震蕩2h，過濾分離，所得固體用超純水清洗至ph呈中性，烘干至恒重，得到fenton反應(yīng)預(yù)處理廢棄生物質(zhì)。

步驟(2)木質(zhì)素降解菌強(qiáng)化預(yù)處理：將木質(zhì)素降解菌接種于含fenton反應(yīng)預(yù)處理廢棄生物質(zhì)的無菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)1-2天后，過濾分離所得固體，用超純水清洗3次，烘干至恒重，得到細(xì)菌強(qiáng)化fenton反應(yīng)預(yù)處理的廢棄生物質(zhì)。

步驟(2)所述木質(zhì)素降解菌培養(yǎng)條件為接種量5-15％(移入種子液的體積和接種后培養(yǎng)液體積的比例)，溫度25-40℃，自然ph條件，培養(yǎng)時(shí)間1-2天。

步驟(2)所述的含fenton反應(yīng)預(yù)處理廢棄生物質(zhì)的無菌培養(yǎng)基為：fenton反應(yīng)處理后的廢棄生物質(zhì)5～15g/l，(nh4)2so42g/l，k2hpo41g/l，kh2po41g/l，mgso4·7h2o0.2g/l，cacl20.01g/l，feso4·7h2o0.015g/l，mnso4·h2o0.01g/l。

本發(fā)明提供的預(yù)處理方法的優(yōu)勢在于：

(1)利用木質(zhì)素降解菌預(yù)處理可實(shí)現(xiàn)fenton反應(yīng)預(yù)處理廢棄生物質(zhì)木質(zhì)素和半纖維素的深度去除，同時(shí)破壞廢棄生物質(zhì)結(jié)構(gòu)，廢棄生物質(zhì)結(jié)構(gòu)變得松散，增加了酶解糖化時(shí)的可及表面。

(2)當(dāng)化學(xué)反應(yīng)條件較溫和時(shí)，木質(zhì)素難以全部去除，不僅降低了糖純度，也給纖維素的后續(xù)酶解和生物轉(zhuǎn)化造成阻礙。若改用高強(qiáng)度條件，又極易造成纖維素的過度破壞和流失，也影響了酶解率。因此，本發(fā)明通過減弱化學(xué)預(yù)處理?xiàng)l件，同時(shí)采用微生物深度去除渣中殘留木質(zhì)素，提高廢棄生物質(zhì)中碳源利用和資源化產(chǎn)率。

(3)廢棄生物質(zhì)秸稈中的原生木質(zhì)素高度聚合，木質(zhì)素降解細(xì)菌作用時(shí)比純的堿木質(zhì)素要更加復(fù)雜，作用難度更大，本發(fā)明找尋了合適的培養(yǎng)基成分以及條件，最大程度的去除了fenton反應(yīng)預(yù)處理廢棄生物質(zhì)中殘留木質(zhì)素。

(4)能夠大幅提高酶解糖化效率，相比于未經(jīng)預(yù)處理的廢棄生物質(zhì)，酶解效率提高為原來的3倍以上，比傳統(tǒng)fenton反應(yīng)預(yù)處理提高了約60％-120％。

(5)具有操作簡單、二次污染小、處理時(shí)間短、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明所使用的木質(zhì)素降解菌(cupriavidusbasilensisb-8)，保藏編號(hào)cgmccno.4240，是由本申請(qǐng)人篩選的已經(jīng)做過專利保藏和專利申請(qǐng)的菌株。

附圖說明:

圖1：實(shí)施例中預(yù)處理后廢棄生物質(zhì)糖產(chǎn)量變化；

圖2：實(shí)施例中預(yù)處理后廢棄生物質(zhì)各組分變化；

圖3：實(shí)施例中預(yù)處理的廢棄生物質(zhì)預(yù)處理前后掃描電鏡分析，(a)為未處理的水稻秸稈，(b)為單獨(dú)fenton反應(yīng)處理的水稻秸稈，(c)、(d)為cupriavidusbasilensisb-8強(qiáng)化處理后的水稻秸稈。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述，但不作為對(duì)本發(fā)明的限定。

實(shí)施例1

(1)將水稻秸稈粉碎后60目過篩，超純水清洗兩遍，于60℃烘干至恒重。

(2)進(jìn)一步將廢棄生物質(zhì)置于適當(dāng)大小容器中，按固液比為1:10(g/ml)加入濃度為0.02mol/l的fecl3和1.5mol/l的h2o2，于室溫環(huán)境中震蕩2h，過濾分離得到濕渣a。

(3)進(jìn)一步用蒸餾水反復(fù)沖洗過濾分離得到的濕渣a，直至沖洗液ph呈中性，置于60℃烘干至恒重得干渣b。

(4)將保存在lb斜面的b-8菌體接種于lb液體培養(yǎng)基中，于30℃溫度下，培養(yǎng)18h(600nm處光密度達(dá)到0.8-1.0)，得到b-8的種子液；其中所述lb液體培養(yǎng)基各成分配比為：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化鈉10g，蒸餾水1l；所述lb斜面是在上述配方的基礎(chǔ)上加入15g/l的瓊脂；

(5)將上一步所得到的b-8種子液在12000rpm條件下離心5分鐘，棄去上層清液，收集菌體；

(6)進(jìn)一步將收集的b-8菌體按10％接種量(移入種子液的體積和接種后培養(yǎng)液體積的比例)，接種于干渣b培養(yǎng)基中，于30℃溫度下，自然ph，培養(yǎng)2天，過濾分離得濕渣c(diǎn)；其中干渣b培養(yǎng)基各成分配比為：干渣b10.0g，k2hpo41.0g，(nh4)2so42.0g，kh2po41.0g，mgso40.2g，cacl20.01g，feso4·7h2o0.015g，mnso4·h2o0.01g，蒸餾水1l；

(7)進(jìn)一步用蒸餾水反復(fù)沖洗過濾分離得到的濕渣c(diǎn)，置于60℃烘干至恒重得干渣d；

(8)將干渣d按固液比1:40(g/ml)加入50mmph＝4.8的檸檬酸緩沖液及纖維素酶12pfu/g水稻秸稈干重，在50℃條件下，酶解24h，得到糖。

通過本實(shí)施例的實(shí)施，水稻秸稈各組分含量發(fā)生顯著變化，fenton反應(yīng)產(chǎn)生高反應(yīng)性羥基自由基攻擊廢棄生物質(zhì)使得纖維素鏈內(nèi)部裂解及木質(zhì)素解聚，而使半纖維素含量升高，后經(jīng)過細(xì)菌強(qiáng)化處理進(jìn)一步去除了木質(zhì)素和半纖維素(如附圖2)。木質(zhì)素和半纖維素的去除，使得水稻秸稈的結(jié)構(gòu)更容易被酶解糖化；掃描電鏡圖(如附圖3)所示，預(yù)處理前的直桿狀結(jié)構(gòu)消失，表面變成十分不規(guī)則且疏松多孔，可提高后續(xù)酶解的效率，最終使細(xì)菌強(qiáng)化fenton反應(yīng)預(yù)處理后的酶解效率提高為未處理的5.5倍，還原糖含量達(dá)到12.6g/l比本發(fā)明條件下單一fenton反應(yīng)預(yù)處理提高了近一倍(如附圖1)，效果顯著。

實(shí)施例2

(1)將水稻秸稈粉碎后60目過篩，超純水清洗兩遍，于60℃烘干至恒重。

(2)進(jìn)一步將廢棄生物質(zhì)置于適當(dāng)大小容器中，按固液比為1:10(g/ml)加入濃度為0.03mol/l的fecl3和2.25mol/l的h2o2，于室溫環(huán)境中震蕩2h，過濾分離得到濕渣a。

(3)進(jìn)一步用蒸餾水反復(fù)沖洗過濾分離得到的濕渣a，直至沖洗液ph呈中性，置于60℃烘干至恒重得干渣b。

(4)將保存在lb斜面的b-8菌體接種于lb液體培養(yǎng)基中，于30℃溫度下，培養(yǎng)18h(600nm處光密度達(dá)到0.8-1.0)，得到b-8的種子液；其中所述lb液體培養(yǎng)基各成分配比為：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化鈉10g，蒸餾水1l；所述lb斜面是在上述配方的基礎(chǔ)上加入15g/l的瓊脂；

(5)將上一步所得到的b-8種子液在12000rpm條件下離心5分鐘，棄去上層清液，收集菌體；

(6)進(jìn)一步將收集的b-8菌體按10％接種量(移入種子液的體積和接種后培養(yǎng)液體積的比例)，接種于干渣b培養(yǎng)基中，于30℃溫度下，自然ph，培養(yǎng)2天，過濾分離得濕渣c(diǎn)；其中所述干渣b培養(yǎng)基各成分配比為：干渣b10.0g，k2hpo41.0g，(nh4)2so42.0g，kh2po41.0g，mgso40.2g，cacl20.01g，feso4·7h2o0.015g，mnso4·h2o0.01g，蒸餾水1l；

(7)進(jìn)一步用蒸餾水反復(fù)沖洗過濾分離得到的濕渣c(diǎn)，置于60℃烘干至恒重得到干渣d；

(8)將干渣d按固液比1:40(g/ml)加入50mmph＝4.8的檸檬酸緩沖液及纖維素酶12pfu/g水稻秸稈干重，在50℃條件下，酶解24h，得到糖。

經(jīng)本實(shí)施例細(xì)菌強(qiáng)化預(yù)處理后的水稻秸稈酶解液中還原糖含量從未處理的2.3g/l提高到9.43g/l，酶解效率提高為未處理的4.1倍(如附圖1)，較本發(fā)明條件下單獨(dú)fenton反應(yīng)預(yù)處理提高了約45％。

實(shí)施例3

(1)將水稻秸稈粉碎后60目過篩，超純水清洗兩遍，于60℃烘干至恒重。

(2)進(jìn)一步將廢棄生物質(zhì)置于適當(dāng)大小容器中，按固液比為1:10(g/ml)加入濃度為0.01mol/l的fecl3和0.75mol/l的h2o2，于室溫環(huán)境中震蕩2h，過濾分離得到濕渣a。

(3)進(jìn)一步用蒸餾水反復(fù)沖洗過濾分離得到的濕渣a，直至沖洗液ph呈中性，置于60℃烘干至恒重得干渣b。

(4)將保存在lb斜面的b-8菌體接種于lb液體培養(yǎng)基中，于30℃溫度下，培養(yǎng)18h(600nm處光密度達(dá)到0.8-1.0)，得到b-8的種子液；其中所述lb液體培養(yǎng)基各成分配比為：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化鈉10g，蒸餾水1l；所述lb斜面是在上述配方的基礎(chǔ)上加入15g/l的瓊脂；

(5)將上一步所得到的b-8種子液在12000rpm條件下離心5分鐘，棄去上層清液，收集菌體；

(6)進(jìn)一步將收集的b-8菌體按10％接種量(移入種子液的體積和接種后培養(yǎng)液體積的比例)，接種于干渣b培養(yǎng)基中，于30℃溫度下，自然ph，培養(yǎng)2天，過濾分離得濕渣c(diǎn)；其中所述干渣b培養(yǎng)基各成分配比為：干渣b10.0g，k2hpo41.0g，(nh4)2so42.0g，kh2po41.0g，mgso40.2g，cacl20.01g，feso4·7h2o0.015g，mnso4·h2o0.01g，蒸餾水1l；

(7)進(jìn)一步用蒸餾水反復(fù)沖洗過濾分離得到的濕渣c(diǎn)，置于60℃烘干至恒重得到干渣d；

(8)將干渣d按固液比1:40(g/ml)加入50mmph＝4.8的檸檬酸緩沖液及纖維素酶12pfu/g水稻秸稈干重，在50℃條件下，酶解24h，得到糖。

經(jīng)本實(shí)施例細(xì)菌強(qiáng)化預(yù)處理后的水稻秸稈酶解液中還原糖含量從未處理的2.3g/l提高到7.84g/l，酶解效率提高為未處理的2.4倍(如附圖1)，較本發(fā)明條件下單獨(dú)fenton反應(yīng)預(yù)處理提高了約58％。

對(duì)比例1

本對(duì)比例中采用的木質(zhì)纖維素預(yù)處理方法，僅包括高濃度fenton反應(yīng)預(yù)處理過程，具體步驟如下：

(1)將水稻秸稈粉碎后60目過篩，超純水清洗兩遍，于60℃烘干至恒重。

(2)進(jìn)一步將廢棄生物質(zhì)置于適當(dāng)大小容器中，按固液比為1:10(g/ml)加入濃度為0.04mol/l的fecl3和3mol/l的h2o2，于室溫環(huán)境中震蕩2h，過濾分離得到濕渣a。

(3)用蒸餾水反復(fù)沖洗過濾分離得到的濕渣a，直至沖洗液ph呈中性，置于60℃烘干至恒重得干渣b；

(4)將干渣b按固液比1:40(g/ml)加入50mmph＝4.8的檸檬酸緩沖液及纖維素酶12pfu/g水稻秸稈干重，在50℃條件下，酶解24h，得到糖。

對(duì)比例1中的fecl3和h2o2的濃度均高于實(shí)施例1～3，然而經(jīng)此對(duì)比例預(yù)處理后的水稻秸稈酶解液中還原糖含量為7.1g/l，低于實(shí)施例，說明高濃度預(yù)處理效果不及本發(fā)明低濃度fenton反應(yīng)條件下的細(xì)菌強(qiáng)化預(yù)處理。

對(duì)比例2

本對(duì)比例中采用的木質(zhì)纖維素預(yù)處理方法，僅包括本發(fā)明條件下單獨(dú)的fenton反應(yīng)預(yù)處理過程，具體步驟如下：

(1)將水稻秸稈粉碎后60目過篩，超純水清洗兩遍，于60℃烘干至恒重。

(2)進(jìn)一步將廢棄生物質(zhì)置于適當(dāng)大小容器中，按固液比為1:10(g/ml)加入濃度為0.01mol/l的fecl3和0.75mol/l的h2o2，于室溫環(huán)境中震蕩2h，過濾分離得到濕渣a。

(3)用蒸餾水反復(fù)沖洗過濾分離得到的濕渣a，直至沖洗液ph呈中性，置于60℃烘干至恒重得干渣b；

(4)將干渣b按固液比1:40(g/ml)加入50mmph＝4.8的檸檬酸緩沖液及纖維素酶12pfu/g水稻秸稈干重，在50℃條件下，酶解24h，得到糖。

經(jīng)此對(duì)比例溫和fenton化學(xué)條件預(yù)處理后的水稻秸稈酶解液中還原糖含量為4.9g/l低于實(shí)施例，且處理后木質(zhì)素含量為(15％)高于實(shí)施例(10～13％)，不僅降低了糖純度，也給纖維素的后續(xù)酶解和生物轉(zhuǎn)化造成阻礙。

對(duì)比例3

本對(duì)比例中采用的木質(zhì)纖維素預(yù)處理方法，僅包括本發(fā)明細(xì)菌cupriavidusbasilensisb-8預(yù)處理過程，具體步驟如下：

(1)將水稻秸稈粉碎后60目過篩，超純水清洗兩遍，于60℃烘干至恒重。

(2)將保存在lb斜面的cupriavidusbasilensisb-8菌體接種于lb液體培養(yǎng)基中，于30℃溫度下，培養(yǎng)18h(600nm處光密度達(dá)到0.8-1.0)，得到cupriavidusbasilensisb-8的種子液；其中所述lb液體培養(yǎng)基各成分配比為：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化鈉10g，蒸餾水1l；所述lb斜面是在上述配方的基礎(chǔ)上加入15g/l的瓊脂；

(3)將上一步所得到的cupriavidusbasilensisb-8種子液在12000rpm條件下離心5分鐘，棄去上層清液，收集菌體；

(4)將收集的cupriavidusbasilensisb-8菌體按20％接種量(移入種子液的體積和接種后培養(yǎng)液體積的比例)，接種于水稻秸稈培養(yǎng)基中，于30℃溫度下，自然ph，培養(yǎng)3天，過濾分離得濕渣；其中水稻秸稈培養(yǎng)基各成分配比為：干渣b10.0g，k2hpo41.0g，(nh4)2so42.0g，kh2po41.0g，mgso40.2g，cacl20.01g，feso4·7h2o0.015g，mnso4·h2o0.01g，蒸餾水1l；

(5)用蒸餾水反復(fù)沖洗過濾分離得到的濕渣，置于60℃烘干至恒重得到干渣；

(6)將干渣按固液比1:40(g/ml)加入50mmph＝4.8的檸檬酸緩沖液及纖維素酶12pfu/g水稻秸稈干重，在50℃條件下，酶解24h，得到糖。

經(jīng)本對(duì)比例預(yù)處理后的水稻秸稈的還原糖產(chǎn)量約為2.4g/l，略高于未處理水稻秸稈(2.3g/l)，但遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于實(shí)施例中的還原糖產(chǎn)量。說明單獨(dú)采用cupriavidusbasilensisb-8預(yù)處理未能達(dá)到理想效果。而本發(fā)明在fenton法預(yù)處理的基礎(chǔ)上，通過cupriavidusbasilensisb-8的作用產(chǎn)生了意想不到的效果。

對(duì)比例4

本對(duì)比例中采用的木質(zhì)纖維素預(yù)處理方法為細(xì)菌cupriavidusbasilensisb-8強(qiáng)化高濃度fenton反應(yīng)預(yù)處理過程，具體步驟如下：

(1)將水稻秸稈粉碎后60目過篩，超純水清洗兩遍，于60℃烘干至恒重。

(2)進(jìn)一步將廢棄生物質(zhì)置于適當(dāng)大小容器中，按固液比為1:10(g/ml)加入濃度為0.04mol/l的fecl3和3mol/l的h2o2，于室溫環(huán)境中震蕩2h，過濾分離得到濕渣a。

(3)用蒸餾水反復(fù)沖洗過濾分離得到的濕渣a，直至沖洗液ph呈中性，置于60℃烘干至恒重得干渣b。

(4)將保存在lb斜面的cupriavidusbasilensisb-8菌體接種于lb液體培養(yǎng)基中，于30℃溫度下，培養(yǎng)18h，得到cupriavidusbasilensisb-8的種子液；其中所述lb液體培養(yǎng)基各成分配比為：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化鈉10g，蒸餾水1l；所述lb斜面是在上述配方的基礎(chǔ)上加入15g/l的瓊脂；

(5)將上一步所得到的cupriavidusbasilensisb-8種子液在12000rpm條件下離心5分鐘，棄去上層清液，收集菌體；

(6)將收集的cupriavidusbasilensisb-8菌體按10％接種量(移入種子液的體積和接種后培養(yǎng)液體積的比例)，接種于干渣b培養(yǎng)基中，于30℃溫度下，自然ph，培養(yǎng)2天，過濾分離得濕渣c(diǎn)；其中所述水稻秸稈培養(yǎng)基各成分配比為：干渣b10.0g，k2hpo41.0g，(nh4)2so42.0g，kh2po41.0g，mgso40.2g，cacl20.01g，feso4·7h2o0.015g，mnso4·h2o0.01g，蒸餾水1l；

(7)用蒸餾水反復(fù)沖洗過濾分離得到的濕渣c(diǎn)，置于60℃烘干至恒重得到干渣d；

(8)將干渣d按固液比1:40(g/ml)加入50mmph＝4.8的檸檬酸緩沖液及纖維素酶12pfu/g水稻秸稈干重，在50℃條件下，酶解24h，得到糖。

經(jīng)本實(shí)施例經(jīng)過細(xì)菌強(qiáng)化預(yù)處理后的水稻秸稈酶解液中還原糖含量為7.7g/l，仍然不及本發(fā)明溫和低濃度條件下細(xì)菌強(qiáng)化預(yù)處理的還原糖產(chǎn)量(8.4～10.3g/l)，說明高強(qiáng)度條件極易造成纖維素的過度破壞和流失，影響了后續(xù)微生物處理的效果。

對(duì)比例5

本對(duì)比例中采用的木質(zhì)纖維素預(yù)處理方法與實(shí)施例中的過程相同，僅將實(shí)施例步驟(6)中的大部分培養(yǎng)基成分改為與專利(申請(qǐng)?zhí)枺?01610569477.0)相同，以本發(fā)明實(shí)施例制備的干渣b10.0g/l，代替堿木質(zhì)素1-6g，其他組分為：(nh4)2so40.28g，k2hpo41g，mgso40.2g，cacl20.1g，feso40.05g，mnso40.02g，kh2po41g，蒸餾水1000ml。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利用專利(申請(qǐng)?zhí)枺?01610569477.0)中的培養(yǎng)基條件后，細(xì)菌生物量顯著減少，預(yù)處理后的水稻秸稈的酶解效果僅約為實(shí)施例中的1/2。對(duì)比說明本發(fā)明經(jīng)過培養(yǎng)基成分和條件的篩選，得到了適合于本發(fā)明廢棄生物質(zhì)預(yù)處理的培養(yǎng)基成分和方法。