本發(fā)明屬于多糖藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種金針菇多糖、提取方法及其在制備治療功能性便秘藥物方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

功能性便秘（functionalconstipation，fc）是一種常見的胃腸道疾病，由于生活規(guī)律改變、情緒抑郁、飲食因素、排便習慣不良、藥物作用等因素所致的便秘，例如，外出旅行的人，由于生活規(guī)律、周圍環(huán)境的改變，以及勞累等因素的影響，多會出現(xiàn)便秘，這種便秘則屬于功能性便秘。

一般來講，功能性便秘的臨床癥狀為排便困難、排便時間延長等。便秘對患者的生活質(zhì)量造成了極大地影響，甚至威脅到病人的生命。功能性便秘的病人，除腸道易激綜合征外，均可通過生活規(guī)律化、合理飲食、調(diào)暢情志、養(yǎng)成良好排便習慣以及去除其他病因等手段達到治愈便秘的目的。而患有腸道易激綜合征的病人，其發(fā)生的便秘雖屬功能性便秘，但必須去醫(yī)院做進一步的檢查。目前，市場上用于治療功能性便秘的藥物多存在療效不佳、有毒副作用，極易產(chǎn)生藥物依賴性等缺陷。

金針菇，又名樸菇、樸蕈、金菇等，作為一種藥食兩用的菌類被廣泛使用，具有較高的營養(yǎng)價值和市場價值，其銷售量僅次于香菇和蘑菇。金針菇含有較豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，主要有蛋白質(zhì)、維生素、碳水化合物和粗纖維等，是一種極富營養(yǎng)的食物。多糖作為金針菇中最主要的活性物之一，保健功效越來越受重視。目前，關(guān)于金針菇多糖的研究較多，主要功效在于抗疲勞、抗氧化、抗腫瘤、抗衰老和提高記憶力等，尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)于金針菇多糖有治療功能性便秘的研究與報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種可用于治療功能性便秘的金針菇多糖，其治療效果顯著，且無毒副作用，不會引起耐藥性。

本發(fā)明還提供了上述金針菇多糖的提取方法及其在制備治療功能性便秘藥物方面的應(yīng)用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種金針菇多糖的提取方法，其將粉碎過的金針菇實體依次用石油醚、75±10%乙醇進行室溫浸提（用以脫脂、脫小分子等），所得殘渣再用水于90±5℃進行熱煎煮，過濾，濾液醇沉，取沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、石油醚洗滌，再經(jīng)冷凍干燥即得金針菇多糖。

具體的，室溫浸提時浸提2－4次，每次浸提時間為1－3天；熱煎煮時煎煮2－4次，每次煎煮時間為2－5h。

本發(fā)明提供了采用上述提取方法制備得到的金針菇多糖。

本發(fā)明還提供了上述金針菇多糖的應(yīng)用。本發(fā)明經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)：上述金針菇多糖具有治療功能性便秘的功效，可用于制備治療功能性便秘藥物。

和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明采用鹽酸洛哌丁胺建立大鼠便秘模型，利用金針菇多糖進行給藥治療，通過測定中藥金針菇多糖對大鼠功能性便秘各項生化指標，考察其治療功能性便秘的效果。試驗結(jié)果證明：本發(fā)明金針菇多糖具有治療功能性便秘的效果且療效顯著，無毒副作用。

具體實施方式

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步地詳細介紹，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此。

下述實施例中，未經(jīng)特殊說明，乙醇濃度均指體積濃度。

實施例1

一種金針菇多糖，其經(jīng)下述步驟提取獲得：取金針菇實體粉末706.21g，先用石油醚于室溫下進行三次浸提脫脂，三次加入的石油醚量分別為1500ml、800ml和500ml，每次浸提時間均為1天。浸提結(jié)束后，過濾，濾渣干燥后稱重得698.83g金針菇粉渣。然后將金針菇粉渣在室溫下用75%乙醇進行三次浸提以脫除小分子，三次加入的75%乙醇量分別為2000ml、550ml、500ml，每次浸提時間均為1天。浸提結(jié)束后，過濾、干燥獲得581.14g殘渣。按料液比1g：20ml的比例向殘渣中加水，然后于90℃熱煎煮三次，每次煎煮3h。煎煮結(jié)束后過濾，濾渣備用，濾液合并，濃縮，添加95%乙醇至終濃度為70%，常溫下靜置24h以醇沉，取沉淀物，分別用無水乙醇、丙酮、石油醚各淋洗3次，再經(jīng)冷凍干燥(在冷凍干燥機中進行，-40℃真空冷凍干燥12h)即得到35g金針菇多糖。

應(yīng)用試驗

一、大鼠功能性便秘模型的建立。

（1）試驗動物

spf級的sprague-dawley(sd)雄性大鼠，體重200-220g。動物購買于河南省實驗動物中心，許可證號：scxk（豫）2015-0004。

（2）試驗試劑

氯化鈉注射液（辰欣藥業(yè)股份有限公司，批號：1611032707）；鹽酸洛哌丁胺（imodium,西安楊森制藥有限公司，批號：160729316）；麻仁丸（湖北諾得勝制藥有限公司，批號：20160507）；阿拉伯樹膠粉：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；大鼠胃動素(mtl)elisa試劑盒（批號：2017z020701）、大鼠胃泌素(gas)elisa試劑盒（批號：2017z020702）、大鼠p物質(zhì)(sp)elisa試劑盒（批號：2017z020703）、大鼠生長抑素(ss)elisa試劑盒（批號：2017z0207040），均由深圳子科生物科技有限公司提供。

活性炭懸浮液：用電子天平稱取25g的阿拉伯樹膠粉，放入500ml的燒杯中，加入200ml的蒸餾水，加熱攪拌，至溶液呈透明狀，此時溶液沸騰。再稱取12.5g的活性炭并加入到前述的溶液中，邊加熱邊攪拌，煮沸3次，直至成黑色糊狀，待冷卻后，加水定容至250ml，放入4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

（3）試驗方法。

spf級的sprague-dawley(sd)雄性大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周（溫度25±2℃，光照12h/d，濕度40-45%），喂養(yǎng)標準飼料，自由飲水。給藥前一天稱量每只大鼠的體重，按體重隨機分組，共分為5組，即：空白組8只，模型組8只，陽性對照組8只，金針菇多糖高劑量組8只，金針菇多糖低劑量組8只。以2mg·kg/d的鹽酸洛哌丁胺與生理鹽水配制成2ml的懸浮液。

空白組以2ml/只灌胃生理鹽水，其余各組以2mg·kg/d的鹽酸洛哌丁胺與生理鹽水配制成2ml的懸浮液給大鼠進行灌胃10天。將空白組、模型組、陽性對照組、金針菇多糖高劑量組及金針菇多糖低劑量組的24h便粒重量進行比較，觀察大鼠便秘重量、大鼠活動、毛色等指標。除空白組外，其它各組大鼠的活動減少，毛色變得無光，證明造模成功。各組大鼠的便秘重量結(jié)果見下表1。

表124h便粒重量

表1中可以看出：與空白組相比，模型組、陽性對照、金針菇高劑量組和金針菇低劑量組24h便粒重量均非常顯著降低(^***p﹤0.001)，表明造模成功。

二、藥物治療。

大鼠功能性便秘模型建立成功后，將造模成功的大鼠進行給藥治療，空白組與模型組每天以1ml/100g灌胃生理鹽水，陽性對照組每天以3mg麻仁丸/kg灌胃給藥，金針菇多糖高劑量組每天以1000mg/kg灌胃給藥，金針菇多糖低劑量組每天以600mg/kg灌胃給藥，連續(xù)給藥一周。給藥期間，每天收集6h便粒，稱取重量，記錄數(shù)據(jù)。給藥結(jié)束后，禁食不禁水12h后，全部以2ml灌胃活性炭懸浮液，灌胃1h后，用10%水合氯醛對大鼠進行麻醉，將大鼠剪取幽門至下端盲腸處的小腸輕拉平鋪至直線。測量剪取的小腸長度（即小腸全長）及其幽門一直到活性炭運動前端的長度（即墨汁推進長度），計算小腸推進率。腹主動脈取血，3000轉(zhuǎn)離心10min，離心得到血清并檢測大鼠的胃動素mtl、胃泌素gas、生長抑素ss及p物質(zhì)的含量。

數(shù)據(jù)處理：結(jié)果采用算術(shù)平均值和標準差表示，數(shù)值統(tǒng)計采用spss19.0軟件單因素方差分析法(one-wayanova)比較其顯著性差異。測定結(jié)果見下表2至7。

表2小腸推進率

表2中可以看出：模型組與空白組相比，模型組的大鼠小腸推進率極顯著降低(^***p﹤0.001)。與模型組相比，陽性對照組和金針菇多糖低劑量組的大鼠小腸推進率極顯著升高(^##p﹤0.01)。

表36h便粒重量

表3中可以看出：模型組與空白組相比，模型組大鼠6h便粒重量顯著性降低(^***p﹤0.001)。與模型組相比，陽性對照組和金針菇多糖低劑量組大鼠的6h便粒重量顯著性增加(^#p﹤0.05）。

表4大鼠胃動素mtl含量

表4中可以看出：模型組與空白組相比，大鼠胃動素含量極顯著降低(^***p﹤0.001)。與模型組相比，陽性對照組、金針菇多糖高劑量組和低劑量組的大鼠胃動素含量顯著性增加(^###p﹤0.001)。

表5大鼠胃泌素gas含量

表5中可以看出：模型組與空白組相比，大鼠胃泌素含量極顯著降低(^***p﹤0.001)。與模型組相比，陽性對照組和金針菇多糖低劑量組的大鼠胃泌素含量有極顯著性增加(^##p﹤0.01)。

表6大鼠p物質(zhì)含量

表6中可以看出：模型組與空白組相比，大鼠p物質(zhì)含量極顯著降低(^**p﹤0.01)。與模型組相比，陽性對照組和金針菇多糖低劑量組的大鼠p物質(zhì)含量有顯著性增加(^#p﹤0.05)。

表7大鼠生長抑素ss含量

表7中可以看出：模型組與空白組相比，模型組大鼠生長抑素ss含量顯著升高(^*p﹤0.05)。與模型組相比，陽性對照組、金針菇多糖高劑量組和低劑量組的大鼠生長抑素ss含量顯著性降低(^###p﹤0.001)。

結(jié)論：金針菇多糖能顯著升高大鼠血清中的胃動素mtl、胃泌素gas及p物質(zhì)含量，降低生長抑素ss含量，改善功能性便秘，其中金針菇多糖低劑量組效果最顯著。說明：金針菇多糖具有顯著治療功能性便秘的作用，是治療功能性便秘的理想藥物。