本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種無花果多糖及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

無花果為?？浦参餆o花果樹ficuscaricalinn.的果實。具有健胃清腸，消腫解毒。治腸炎，痢疾，便秘，痔瘡，喉痛，癰瘡疥癬，利咽喉，開胃驅(qū)蟲的作用，用于食欲不振，脘腹脹痛，痔瘡便秘，消化不良，痔瘡，脫肛，腹瀉、乳汁不足，咽喉腫痛，熱痢，咳嗽多痰等癥。無花果中含有多種化學(xué)成分，主要為酚類化合物、類黃酮化合物和多糖類化合物。在現(xiàn)有技術(shù)中無花果多糖的制備方法一般采用水提醇沉法，獲得粗多糖，再通過去除蛋白，上陰離子交換柱，通過蒽酮-硫酸法在線檢測，收集水洗部分峰位，以純化多糖。存在工藝復(fù)雜，操作繁瑣，無法規(guī)模化生產(chǎn)的問題。且對無花果多糖的研究集中在增強(qiáng)免疫方面，未對無花果多糖進(jìn)行更深入的研究，綜合利用度低。

肥胖癥是一種由多種因素引起的慢性代謝性疾病，以體內(nèi)脂肪細(xì)胞的體積和細(xì)胞數(shù)增加致體脂占體重的百分比異常增高并在某些局部過多沉積脂肪為特點。單純性肥胖患者全身脂肪分布比較均勻，沒有內(nèi)分泌紊亂現(xiàn)象，也無代謝障礙性疾病，其家族往往有肥胖病史。肥胖不僅影響形體美，而且給生活帶來不便，更重要是容易引起多種并發(fā)癥，加速衰老和死亡。

據(jù)統(tǒng)計，因病而死亡的患者中有15～20％合并有肥胖癥。肥胖癥是心血管疾病，特別是冠心病的發(fā)作原因。許多高血壓的病人同時又是肥胖癥患者。肥胖癥患者血漿甘油三脂及低密度脂蛋白粒子含量增高，高密度脂蛋白粒子濃度低下，當(dāng)其體重恢復(fù)正常水平以后，血漿中甘油三脂及脂蛋白的濃度又恢復(fù)正常水平。糖尿病特別是晚發(fā)性糖尿病與肥胖癥有直接關(guān)系，肥胖癥患者血液內(nèi)胰島素濃度比正常人高。此外肥胖癥者動作遲緩，工作疲勞，常有腰、背、腿疼，不能耐受高溫，影響體型美。隨著現(xiàn)代社會的發(fā)展，生活水平的提高，肥胖癥有逐年增加的趨勢。據(jù)統(tǒng)計在發(fā)達(dá)國家肥胖癥占成年人口的35％。

目前對于肥胖治療的藥物主要分為兩大類：一是作用于中樞的食欲抑制劑：此類藥物又稱厭食性藥物，它是通過影響神經(jīng)遞質(zhì)的活性，減少5羥色胺和去甲腎上腺素再攝取，從而減少食物攝入量，抑制食欲和提高基礎(chǔ)代謝率來減重，如西布曲明。二是作用于外周的脂肪酶抑制劑：通過阻斷飲食中部分脂肪的吸收達(dá)到減肥目的，如奧利司他，在胃腸道道抑制胃脂肪酶和胰，從而減少脂肪的吸收約30％。此兩類藥物均存在療效不夠確切、不良反應(yīng)大的問題，長期使用不利于人體健康。

因此提供一種具有減肥作用的物質(zhì)，效果確切，不良反應(yīng)小，成為了本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提供一種無花果多糖，解決現(xiàn)有技術(shù)中減肥藥物作用效果不確切，不良反應(yīng)大的問題。

本發(fā)明還提供了一種無花果多糖的制備方法。

本發(fā)明又提供了無花果多糖在制備具有減肥作用的

本發(fā)明還提供了無花果多糖在制備具有減肥作用的食品、保健食品及藥品中的用途。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明所述的一種無花果多糖，該無花果多糖由無花果經(jīng)脫脂、酶法提取，醇沉除雜后，再經(jīng)透析截取分子量8000－12000道爾頓的組分，經(jīng)大孔弱堿性陰離子交換樹脂分離制得。

本發(fā)明所述的一種無花果多糖的制備方法，包括以下步驟：

1)取無花果，加入高濃度的乙醇加熱回流，過濾，無花果揮干乙醇，備用；

2)取脫脂后的無花果加入酸性溶液，加酶進(jìn)行保溫酶解，然后升溫浸提，過濾，濾液濃縮，得濃縮液；

3)將所述濃縮液加入乙醇，冷藏，靜置，離心，取沉淀；

4)將所述沉淀加水溶解后，用截留分子量為8000－12000道爾頓的透析袋在水中透析24～48小時；濃縮透析液，冷凍干燥，得無花果多糖粗品；

5)將所述無花果多糖粗品加水溶解后上大孔弱堿性陰離子交換樹脂，依次用水、nacl溶液梯度洗脫，收集nacl溶液洗脫液，濃縮后，冷凍干燥，即得。

進(jìn)一步地，所述步驟1中，加入無花果3－5倍質(zhì)量的70－100％乙醇水溶液加熱回流提取2－4小時，過濾，無花果揮干乙醇，備用。

進(jìn)一步地，所述步驟2中，取脫脂后的無花果加入ph值為3.0－6.8的酸性溶液，加纖維酶于40－50℃酶解2－8小時后，于60－90℃加熱浸提1－4次，過濾，濾液濃縮，得密度為1.04－1.18(50℃)的濃縮液。

進(jìn)一步地，所述步驟2中，取脫脂后的無花果加入ph值為3.5的酸性溶液，加纖維酶于45℃酶解4小時后，于70℃加熱浸提3次，過濾，濾液濃縮，得密度為1.08(50℃)的濃縮液。

進(jìn)一步地，所述步驟3中，在攪拌條件下，向所述濃縮液中加入80-95％的乙醇，使其含醇量為60-75％，冷藏條件為0-6℃，靜置時間為12-24小時。

進(jìn)一步地，所述大孔弱堿性陰離子交換樹脂的型號為d-301、d-335、d-315或d-345中的一種。

進(jìn)一步地，所述nacl溶液梯度洗脫為0.5-3molnacl溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集4-6倍柱體積的洗脫液。

本發(fā)明所述的無花果在制備具有減肥作用的食品、保健食品及藥品中的用途。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明無花果多糖的制備工藝簡單，操作簡便，所得無花果多糖純度高，具有確切的減肥效果，且不良反應(yīng)小。

本發(fā)明對脫脂后的無花果采用酶法提取，條件溫和，增加提取效率；再采用醇沉法與雜質(zhì)分離后，再加水復(fù)溶，去除不溶性雜質(zhì)，再將去雜后的水溶液上大孔弱堿性陰離子交換樹脂，采用水和nacl溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集nacl洗脫液，實現(xiàn)了無花果多糖的分離、純化和富集。該方法簡單，易操作，且對環(huán)境友好。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，本發(fā)明的方式包括但不僅限于以下實施例。

實施例1

無花果多糖的制備

無花果多糖的制備方法，包括以下步驟：

1)取無花果，加入無花果3倍質(zhì)量的95％乙醇水溶液加熱回流提取4小時，過濾，無花果揮干乙醇，備用。

2)取脫脂后的無花果加入ph值為3.4的酸性溶液，加纖維酶于50℃酶解7小時后，于88℃加熱浸提3次，過濾，濾液濃縮，得密度為1.04(50℃)的濃縮液。

3)在攪拌條件下，向所述濃縮液中加入95％的乙醇，使其含醇量為75％，冷藏條件為4℃，靜置時間為12小時。

4)將所述沉淀加水溶解后，用截留分子量為8000－12000道爾頓的透析袋在水中透析24小時；濃縮透析液，冷凍干燥，得無花果多糖粗品；

5)將所述無花果多糖粗品加水溶解后上d-301大孔弱堿性陰離子交換樹脂，依次用水、0.5-3molnacl溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集4倍柱體積的nacl溶液洗脫液，濃縮后，冷凍干燥，即得。

本實施例中，所得無花果多糖的總糖含量為95.9％。

實施例2

無花果多糖的制備

無花果多糖的制備方法，包括以下步驟：

1)取無花果，加入無花果5倍質(zhì)量的70％乙醇水溶液加熱回流提取4小時，過濾，無花果揮干乙醇，備用。

2)取脫脂后的無花果加入ph值為6.8的酸性溶液，加纖維酶于50℃酶解2小時后，于65℃加熱浸提1次，過濾，濾液濃縮，得密度為1.16(50℃)的濃縮液。

3)在攪拌條件下，向所述濃縮液中加入80％的乙醇，使其含醇量為60％，冷藏條件為0℃，靜置時間為24小時。

4)將所述沉淀加水溶解后，用截留分子量為8000－12000道爾頓的透析袋在水中透析24小時；濃縮透析液，冷凍干燥，得無花果多糖粗品；

5)將所述無花果多糖粗品加水溶解后上d-345大孔弱堿性陰離子交換樹脂，依次用水、0.5-3molnacl溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集4倍柱體積的nacl溶液洗脫液，濃縮后，冷凍干燥，即得。

本實施例中，所得無花果多糖的總糖含量為97.2％。

實施例3

無花果多糖的制備

無花果多糖的制備方法，包括以下步驟：

1)取無花果，加入無花果5倍質(zhì)量的80％乙醇水溶液加熱回流提取3小時，過濾，無花果揮干乙醇，備用。

2)取脫脂后的無花果加入ph值為3.5的酸性溶液，加纖維酶于45℃酶解4小時后，于70℃加熱浸提3次，過濾，濾液濃縮，得密度為1.08(50℃)的濃縮液。

3)在攪拌條件下，向所述濃縮液中加入80％的乙醇，使其含醇量為75％，冷藏條件為4℃，靜置時間為24小時。

4)將所述沉淀加水溶解后，用截留分子量為8000－12000道爾頓的透析袋在水中透析48小時；濃縮透析液，冷凍干燥，得無花果多糖粗品；

5)將所述無花果多糖粗品加水溶解后上d-315大孔弱堿性陰離子交換樹脂，依次用水、0.5-3molnacl溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集4倍柱體積的nacl溶液洗脫液，濃縮后，冷凍干燥，即得。

本實施例中，所得無花果多糖的總糖含量為94.9％。

實施例4

無花果多糖的減肥作用試驗。

(一)受試藥：

取實施例1制備所得樣品進(jìn)行減肥作用實驗。人口服推薦用量為每人(成人)每日3次，每次120mg，成人體重按60kg計算，每日折合給藥劑量為6mg/kg。

劑量選擇與受試物給予方式：根據(jù)人口服用推薦用量，設(shè)樣品低、中、高劑量組分別為30、60、120mg/kg(分別相當(dāng)于人體推薦用量的5、10、20倍)，同時設(shè)一個陰性對照組，每組10只動物。

分別稱取樣品，加水制成不同濃度的混懸液。分別給予相應(yīng)劑量組動物灌胃，灌胃體積為0.2ml/10gbw(體重)，陰性對照組給予等體積的蒸餾水，每天灌胃一次，連續(xù)灌胃30天。

(二)試驗動物：雄性wistar大鼠，體重約220±10g。

(三)試驗數(shù)據(jù)采用spss10.0forwindows軟件包處理。對照組與劑量組的數(shù)據(jù)經(jīng)方差齊性檢驗，方差齊，進(jìn)行方差分析，如p值小于0.05，則用dunnett法進(jìn)行兩兩比較；若方差不齊，則進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，仍不齊，改用秩和檢驗，如p值小于0.05，則用dunnett'st3法進(jìn)行兩兩比較。

(四)試驗方法及結(jié)果

1.建立食源性肥胖大鼠模型：

用營養(yǎng)飼料喂養(yǎng)大鼠45天，與標(biāo)準(zhǔn)全價鼠飼料喂養(yǎng)的同齡大鼠相比，體重增加，有顯著性差異。營養(yǎng)飼料為標(biāo)準(zhǔn)全價鼠飼料60％、豬油10％、蔗糖6％、奶粉6％、花生5％、雞蛋10％、麻油1％、食鹽2％。

2.連續(xù)喂養(yǎng)30天，定期稱重，記錄攝食量。實驗結(jié)束，稱重，處死大鼠，取肩胛下項后脂肪(棕色脂肪)稱重；取腎周腹壁脂肪和附睪脂肪(白色脂肪)，以兩者之和代表體內(nèi)脂肪量。

3.試驗結(jié)果表明，連續(xù)灌胃30天后，本發(fā)明制劑1～5組動物攝食量與對陰性對照組無顯著差異。對大鼠體重及脂肪量的影響見表6、表7。

表1對大鼠體重的影響

由表1可見，連續(xù)灌胃30天后，本發(fā)明3組動物體重明顯降低，與陰性對照組相比較，有顯著性差異(p<0.05)。

表2對大鼠脂肪量的影響

由表2可見，連續(xù)灌胃30天后，本發(fā)明3組動物脂肪量與陰性對照組相比較，有顯著性差異(p<0.05)。

綜上所述，本發(fā)明減肥作用確切。同時，動物試驗表明，連續(xù)灌胃30天后，小鼠各項指標(biāo)正常，無異常反應(yīng)。本發(fā)明不良反應(yīng)小。

上述實施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式之一，不應(yīng)當(dāng)用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，但凡在本發(fā)明的主體設(shè)計思想和精神上作出的毫無實質(zhì)意義的改動或潤色，其所解決的技術(shù)問題仍然與本發(fā)明一致的，均應(yīng)當(dāng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。