本發(fā)明涉及植物提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及了一種從銀縷梅中提取單寧的方法。

背景技術(shù)：

單寧又稱植物多酚、鞣酸、單寧酸，是英文(tannins)的譯名，是一種多酚類化合物，廣泛存在于樹(shù)木的葉、芽、樹(shù)皮和果實(shí)中，以及受昆蟲(chóng)侵襲而生成的蟲(chóng)癭中。單寧為黃色或棕黃色無(wú)定形松散粉末，不溶于乙醚、苯、氯仿，易溶于水、乙醇、丙酮，水溶液有澀味。

單寧的提取方法現(xiàn)在主要有熱水提取法、有機(jī)溶劑萃取法、微波輔助法、超聲波法、超臨界co2萃取法、半仿生提取法等。目前，熱水提取法和有機(jī)溶劑萃取法因操作時(shí)間長(zhǎng)，效率較低，已很少被使用。半仿生提取法需要更換幾種提取劑，略顯繁瑣，超臨界co2萃取法需要大量夾帶劑。

單寧不是單一化合物，大致可分為兩種，一種是縮合單寧，另一種是可水解的單寧。水解單寧和縮合單寧在結(jié)構(gòu)組成上完全不同，因此它們?cè)诨瘜W(xué)性質(zhì)和應(yīng)用范圍上的差異顯著。水解單寧在酸、堿、酶的作用下不穩(wěn)定，易于水解；而縮合單寧則相對(duì)穩(wěn)定，但在強(qiáng)酸作用下會(huì)縮合成不溶于水的物質(zhì)，因而具有很強(qiáng)的生物和藥理活性。目前植物多酚已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、食品、制革和日用化工等相關(guān)領(lǐng)域，并發(fā)揮著不可替代的作用。近年來(lái)它在化妝品生產(chǎn)中也嶄露頭角。因單寧結(jié)構(gòu)復(fù)雜，人工合成不易。

銀縷梅作為被子植物最古老的物種，是僅存我國(guó)再發(fā)現(xiàn)的活化石樹(shù)種。銀縷梅樹(shù)干扭曲，凹凸不平，樹(shù)皮呈不規(guī)則薄片狀剝落，常有大型堅(jiān)硬蟲(chóng)癭。銀縷梅俗稱“葫蘆樹(shù)”，因樹(shù)干、枝條上經(jīng)常生長(zhǎng)蟲(chóng)癭，又叫“木魚(yú)樹(shù)”。其病蟲(chóng)害較多，制約生長(zhǎng)和開(kāi)花結(jié)果。經(jīng)?？煽吹饺~斑病、癭瘤病等。銀縷梅帶蟲(chóng)癭的葉片中含單寧，如果我們?cè)诹謽I(yè)中不加以重視，一味地丟棄，不加以利用，這在目前單寧只能靠提取的情況下是一種資源的浪費(fèi)。

銀縷梅曾名小葉金縷梅，隸屬金縷梅科。與“金縷梅”不是同一種物質(zhì)。因?yàn)殂y縷梅無(wú)花瓣，其花期特殊，2-5年才開(kāi)一次花，花期又短，只有一周，鑒別植物主要的依據(jù)是花、果特征，最初鑒定銀縷梅依據(jù)的是一份只帶果實(shí)的標(biāo)本，才造成名稱誤定。金縷梅的藥用價(jià)值、美容價(jià)值的研究、應(yīng)用較多。金縷梅內(nèi)含單寧質(zhì)多種如ellagtannin和hamamlitannin可以調(diào)節(jié)皮脂分泌、具保濕及嫩白作用；有舒緩、收斂、抗菌、抗衰老的效果。而銀縷梅的藥用及經(jīng)濟(jì)價(jià)值卻鮮見(jiàn)報(bào)到，主要原因，可能是銀縷梅是珍貴瀕稀植物，分布較狹窄，不易被發(fā)現(xiàn)。還有，研究者沒(méi)有采用銀縷梅提取單寧的原因，主要是銀縷梅是珍貴瀕危植物，分布較狹窄，不易被發(fā)現(xiàn)；再者，銀縷梅先花后葉，有時(shí)，2-5年才開(kāi)一次花，如果，沒(méi)有親眼見(jiàn)到銀縷梅開(kāi)花，植物鑒定都困難，更不要說(shuō)對(duì)其進(jìn)行研究了。鑒于此，有必要對(duì)它的藥用及經(jīng)濟(jì)價(jià)值等作全面的研究探討。

中國(guó)專利，申請(qǐng)公告號(hào)cn105348332a，公開(kāi)了一種柿子單寧的提取方法，包括以下步驟：1)將柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，將提取液過(guò)濾，取濾液備用；2)將濾液濃縮，加入95v％乙醇，放置過(guò)夜，離心，取上清液；3)將上清液過(guò)大孔樹(shù)脂，先用水洗柱至無(wú)色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，過(guò)濾，取濾液通過(guò)截留分子量為450～600的中空纖維膜，收集截留液備用；5)將截留液通過(guò)截留分子量為14000～15000的中空纖維膜，收集透過(guò)液，干燥，即為柿子單寧粉末。但關(guān)于從金縷梅科提取單寧，特別是從銀縷梅中提取單寧鮮有報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于背景技術(shù)存在的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明目的之一在于提出了一種從銀縷梅中提取單寧的方法。

本發(fā)明目的第二個(gè)目的在于從銀縷梅中提取單寧在保健護(hù)膚品、抑菌的應(yīng)用。

一種提取單寧的方法，其特征在于，從銀縷梅中提取單寧。

根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從銀縷梅中提取單寧的方法，方法步驟如下：

a)提?。簩⒑娓?、恒重后粉碎銀縷梅葉片，1.0000-3.000g，粉碎，加少許液氮，在研磨機(jī)中研磨成粉末，加80-90％乙醇，微波熱回流提取，合并提取液，離心,取上清液,通過(guò)減壓蒸餾裝置分離，即得單寧提取液；

b)步驟a)中單寧提取液用大孔樹(shù)脂除雜，先用10％乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用75％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75％乙醇洗脫液，減壓濃縮得75％乙醇洗脫物浸膏；

c)步驟b)中75％乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；

d)步驟c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；

e)步驟d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的單寧。

優(yōu)選地，所述步驟a)中葉片粉末與有機(jī)溶劑的質(zhì)量比為1∶10～15。

優(yōu)選地，所述步驟a)中微波熱回流提取時(shí)間為10-30min。

優(yōu)選地，所述步驟b)中大孔樹(shù)脂為ab-8型或d-101型大孔樹(shù)脂。

優(yōu)選地，任意一項(xiàng)所述制備方法制得的單寧。

單寧既能吸收紫外線，又能抑制酪氨酸酶和過(guò)氧化氫酶的活性，也能使黑色素還原脫色，還能有效清除活性氧，因此在化妝品中加入單寧具有綜合美白效果。

優(yōu)選地，所述的單寧在保健護(hù)膚品中的應(yīng)用。

單寧對(duì)多種細(xì)菌、真菌和微生物有顯著的抑制效果，在相同的抑制濃度下，不會(huì)影響人體細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育。單寧又有獨(dú)特的抗氧化性，能有效抵御生物氧化作用，它還有清除活性氧的功能，在化妝品中加入單寧能有效抑菌和具有保健防腐作用

優(yōu)選地，所述的單寧在抑菌中的應(yīng)用。

因此，本發(fā)明結(jié)合有機(jī)溶劑萃取法、微波輔助提取法原理和優(yōu)點(diǎn)，采用液氮研磨、微波輔助提取法結(jié)合，盡量縮短微波輔助提取時(shí)間，減少微波提取的副作用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的有益效果在于：

本發(fā)明將含單寧植物材料經(jīng)乙醇的水溶液通過(guò)微波方式提取，用離心法將提取液中的溶劑與固體物質(zhì)分離，得到單寧溶液，將單寧溶液經(jīng)大孔樹(shù)脂純化，洗脫液減壓濃縮，再經(jīng)真空冷凍干燥得到高純度單寧，提取時(shí)間短，提取率高，提取所得單寧的純度高。所得樣品純度為95-98％，提取時(shí)間10-30分鐘，純化后產(chǎn)物與原料比率為72-200mg/g.

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1制備的單定的紅外譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步解說(shuō)。

本申請(qǐng)中采用的銀縷梅葉片，都是岳西縣黃尾鎮(zhèn)林業(yè)站鑒定過(guò)的，掛牌保護(hù)的野生林植物。

實(shí)施例1

一種提取單寧的方法，從銀縷梅中提取單寧。

所述的一種從銀縷梅中提取單寧的方法，方法步驟如下：

a)提取：將烘干、恒重后粉碎銀縷梅葉片，1.000g，粉碎，加少許液氮，在研磨機(jī)中研磨成粉末，加80％乙醇，微波熱回流提取，合并提取液，離心，取上清液，通過(guò)減壓蒸餾裝置分離，即得單寧提取液；

b)步驟a)中單寧提取液用大孔樹(shù)脂除雜，先用10％乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用75％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75％乙醇洗脫液，減壓濃縮得75％乙醇洗脫物浸膏；

c)步驟b)中75％乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；

d)步驟c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；

e)步驟d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集8個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的單寧。

所述步驟a)中葉片粉末與有機(jī)溶劑的質(zhì)量比為1∶10。

所述步驟a)中微波熱回流提取時(shí)間為10min。

所述步驟b)中大孔樹(shù)脂為ab-8型大孔樹(shù)脂。上柱流速1.5ml/min，上樣質(zhì)量濃度1.2mg/ml；洗脫流速1.5ml/min，乙醇體積分?jǐn)?shù)60％。

ab-8型大孔樹(shù)脂預(yù)處理方法：將大孔吸附樹(shù)脂用無(wú)水乙醇浸泡24h后，用水沖洗至無(wú)醇味；用3％hcl處理3h，用水洗至中性；然后用3％naoh浸泡3h，用水洗至中性；再用3％hci處理3h，用水洗至中性后浸泡在無(wú)水乙醇中或直接使用。做大孔樹(shù)脂時(shí)應(yīng)在寬敞的容器中使樹(shù)脂充分溶脹，才能裝柱。

樹(shù)脂上柱：先給樹(shù)脂柱中加入1/3的水，然后將準(zhǔn)確量好體積的ab-8樹(shù)脂用水轉(zhuǎn)移到樹(shù)脂柱中，再用70％的乙醇2倍樹(shù)脂體積處理，流速為1倍樹(shù)脂體積，過(guò)完醇后用水洗至無(wú)醇味即可進(jìn)行使用。

藥液上柱：上樣量為200ml濃縮液/500g樹(shù)脂，提取的單寧，5mg/ml，過(guò)大孔樹(shù)脂柱，流速為1.5ml/min，靜置70min；用4l水洗脫去糖，直到流出液澄清為止。

樹(shù)脂的解吸：將60％乙醇洗脫單寧，800ml，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，稀釋至刻度，作為供試品溶液，于50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，再進(jìn)行真空冷凍干燥，得到淺棕色粉末狀的純化物。

樹(shù)脂的清洗、再生：先給樹(shù)脂柱中加入水，再10％-20％-30％-50％-95％的乙醇處理，逐漸加大乙醇的濃度，流速為1倍樹(shù)脂體積，過(guò)完醇后用水洗至無(wú)醇味即可進(jìn)行使用。一般洗至樹(shù)脂柱無(wú)色時(shí)，樹(shù)脂柱即可再生。如果樹(shù)脂顏色變深，可用稀酸或稀堿洗脫，最后再用水洗。

所得樣品純度為95％，純化后產(chǎn)物與原料比率為72mg/g.

任意一項(xiàng)所述制備方法制得的單寧。

單寧在保健護(hù)膚品中的應(yīng)用。

銀縷梅葉單寧的紅外譜圖見(jiàn)圖1，由圖1可見(jiàn)，波數(shù)3390.1cm^-1譜峰為酚類分子-oh的伸縮振動(dòng)；1712.97cm^-1譜峰、1613.87cm^-1譜峰、1537.46cm^-1譜峰、1514.56cm^-1譜峰、1446.71cm^-1譜峰共五個(gè)譜峰是苯環(huán)的骨架伸縮振動(dòng)，屬于明顯的五指峰；1321.15cm^-1譜峰是來(lái)自酚羥基的彎曲振動(dòng)；1200cm^-1譜峰是芳族和乙烯基的反對(duì)稱伸縮振動(dòng)，1032.9cm^-1譜峰是其對(duì)稱伸縮振動(dòng)，一般來(lái)說(shuō)，芳族和乙烯基的對(duì)稱伸縮振動(dòng)在1075-1020cm^-1處。圖1結(jié)果表明銀縷梅葉單寧提取物為多羥基苯酚脂類化合物。

實(shí)施例2

一種提取單寧的方法，從銀縷梅中提取單寧。

所述的一種從銀縷梅中提取單寧的方法，方法步驟如下：

a)提?。簩⒑娓?、恒重后粉碎銀縷梅葉片，3.0000g，粉碎，加少許液氮，在研磨機(jī)中研磨成粉末，加90％乙醇，微波熱回流提取，合并提取液，離心，取上清液，通過(guò)減壓蒸餾裝置分離，即得單寧提取液；

b)步驟a)中單寧提取液用大孔樹(shù)脂除雜，先用10％乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用75％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75％乙醇洗脫液，減壓濃縮得75％乙醇洗脫物浸膏；

c)步驟b)中75％乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；

d)步驟c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；

e)步驟d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的單寧。

所述步驟a)中葉片粉末與有機(jī)溶劑的質(zhì)量比為1∶15。

所述步驟a)中微波熱回流提取時(shí)間為30min。

所述步驟b)中大孔樹(shù)脂為ab-8型大孔樹(shù)脂。

所得樣品純度為98％，純化后產(chǎn)物與原料比率為200mg/g.

任意一項(xiàng)所述制備方法制得的單寧。

單寧在抑菌中的應(yīng)用。

實(shí)施例3

一種提取單寧的方法，從銀縷梅中提取單寧。

所述的一種從銀縷梅中提取單寧的方法，方法步驟如下：

a)提取：將烘干、恒重后粉碎銀縷梅葉片，1.3680g，粉碎，加少許液氮，在研磨機(jī)中研磨成粉末，加85％乙醇，微波熱回流提取，合并提取液，離心，取上清液，通過(guò)減壓蒸餾裝置分離，即得單寧提取液；

b)步驟a)中單寧提取液用大孔樹(shù)脂除雜，先用10％乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用75％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75％乙醇洗脫液，減壓濃縮得75％乙醇洗脫物浸膏；

c)步驟b)中75％乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；

d)步驟c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；

e)步驟d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的單寧。

所述步驟a)中葉片粉末與有機(jī)溶劑的質(zhì)量比為1∶12。

所述步驟a)中微波熱回流提取時(shí)間為18min。

所述步驟b)中大孔樹(shù)脂為ab-8型大孔樹(shù)脂。

所得樣品純度為96.5％，純化后產(chǎn)物與原料比率為138mg/g。

優(yōu)選地，任意一項(xiàng)所述制備方法制得的單寧。

單寧在保健護(hù)膚品中的應(yīng)用。

實(shí)施例4

一種提取單寧的方法，從銀縷梅中提取單寧。

所述的一種從銀縷梅中提取單寧的方法，方法步驟如下：

a)提?。簩⒑娓?、恒重后粉碎銀縷梅葉片，2.8750g，粉碎，加少許液氮，在研磨機(jī)中研磨成粉末，加88％乙醇，微波熱回流提取，合并提取液，離心，取上清液，通過(guò)減壓蒸餾裝置分離，即得單寧提取液；

b)步驟a)中單寧提取液用大孔樹(shù)脂除雜，先用10％乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用75％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75％乙醇洗脫液，減壓濃縮得75％乙醇洗脫物浸膏；

c)步驟b)中75％乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；

d)步驟c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；

e)步驟d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集9個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的單寧。

所述步驟a)中葉片粉末與有機(jī)溶劑的質(zhì)量比為1∶14。

所述步驟a)中微波熱回流提取時(shí)間為22min。

所述步驟b)中大孔樹(shù)脂為d-101型大孔樹(shù)脂。

所得樣品純度為97.2％，純化后產(chǎn)物與原料比率為186.4mg/g.

任意一項(xiàng)所述制備方法制得的單寧。

單寧在抑菌中的應(yīng)用。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。