本申請是申請日為2012年10月3日、申請?zhí)枮?01280048965.7、發(fā)明名稱為“制備抗病毒核苷酸類似物的方法”的中國發(fā)明專利申請的分案申請。
相關(guān)申請案交叉參考
本申請案主張于2011年10月7日提出申請的美國臨時(shí)專利申請案第61/544,950號(hào)的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，其全部內(nèi)容以引用方式并入本文中。
背景技術(shù)：
美國專利第7,390,791號(hào)和第7,803,788號(hào)(每一專利的全部內(nèi)容均以引用方式并入本文中)描述了可用于療法中的某些膦酸酯核苷酸類似物前藥。一種此類前藥是9-{(r)-2-[((s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物16)：
此化合物也由化學(xué)文摘(chemicalabstract)命名為n-[(s)-[[(1r)-2-(6-氨基-9h-嘌呤-9-基)-1-甲基乙氧基]甲基]苯氧基氧膦基]-l-丙氨酸1-甲基乙基酯。美國專利第7,390,791號(hào)和第7,803,788號(hào)還揭示了此化合物的單富馬酸形式和其制備方法(例如，參見實(shí)例4)。
化合物12、化合物13(其中x為鹵基)和化合物15：
是可用于制備化合物16的合成中間體?；衔?5描繪為在磷中心處的非對映異構(gòu)體的混合物。組成化合物15的混合物的兩種非對映異構(gòu)體在此處示為化合物15a和15b。異構(gòu)體15a在結(jié)構(gòu)上與化合物16相同。
當(dāng)前，業(yè)內(nèi)需要制備化合物12、13、15和16的改進(jìn)方法。具體來說，需要以高非對映異構(gòu)體純度制備化合物13、15和16的改進(jìn)方法。所述改進(jìn)方法可提供較高產(chǎn)率，更容易執(zhí)行，或使用成本或毒性低于現(xiàn)行方法的試劑。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明描述使用結(jié)晶誘導(dǎo)性動(dòng)態(tài)拆分來分離9-{(r)-2-[((s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物16)的改進(jìn)方法；以高非對映異構(gòu)體純度制備化合物13和15的改進(jìn)方法；和制備化合物12的改進(jìn)方法。
因此，在一個(gè)實(shí)施例中，提供一種方法，其包含使包含以下的溶液經(jīng)歷提供9-{(r)-2-[((s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤的選擇性結(jié)晶的條件：a)適宜溶劑；b)適宜堿；c)非對映異構(gòu)體混合物9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤；和任選地，d)9-{(r)-2-[((s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤的一種或多種晶種。
在另一實(shí)施例中，提供一種通過以下方式制備為至少約90％非對映異構(gòu)體純的化合物13的方法：用亞硫酰氯處理化合物12的甲苯溶液：
以提供化合物13，其中x＝cl。
在另一實(shí)施例中，提供一種制備為至少約90％非對映異構(gòu)體純的化合物16的9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物15)的方法，所述方法包含將至少約90％非對映異構(gòu)體純的化合物13：
(其中x為鹵基)；在提供為至少約90％非對映異構(gòu)體純的化合物16(即，異構(gòu)體15a)的條件下用胺11處理：
在另一實(shí)施例中，提供制備化合物12的方法：
其包含在適宜堿存在下用亞磷酸三苯酯處理pmpa：
以提供化合物12。
本發(fā)明還提供本文所揭示的新穎方法和中間體。
具體實(shí)施方式
下文針對基團(tuán)、取代基和范圍所列示的具體值只是為了進(jìn)行說明；其不排除其它定義值或在針對所述基團(tuán)和取代基所定義范圍內(nèi)的其它值。
通過結(jié)晶誘導(dǎo)性動(dòng)態(tài)拆分制備化合物16
在一個(gè)實(shí)施例中，提供結(jié)晶誘導(dǎo)性動(dòng)態(tài)拆分9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物15)以提供9-{(r)-2-[((s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物16)的方法
所述方法包含在還提供9-{(r)-2-[((s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤的選擇性結(jié)晶的條件下使包含以下的溶液經(jīng)歷提供磷中心的差向異構(gòu)化的條件：a)適宜溶劑；b)適宜堿；c)9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤；和任選地，d)9-{(r)-2-[((s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤的一種或多種晶種。
結(jié)晶可在任一適宜溶劑中實(shí)施。例如，其可在非質(zhì)子性有機(jī)溶劑中或在其混合物中實(shí)施。例如，非質(zhì)子性有機(jī)溶劑可包含乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、二乙醚、二異丙醚、四氫呋喃、二氯甲烷、丙酮、甲基乙基酮、甲基叔丁基醚、甲苯或乙腈或其混合物。在一個(gè)實(shí)施例中，所述溶劑包含乙腈。
拆分可在任一適宜堿存在下實(shí)施。例如，拆分可在選自以下的堿存在下實(shí)施：1,5-重氮雙環(huán)[4.3.0]壬-5-烯(dbn)、1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(dbu)、7-甲基-l,5,7-三氮雜雙環(huán)[4.4.0]癸-5-烯(mtbd)、四甲基胍、維可堿(verkadebase)(例如，2,8,9-三異丙基-2,5,8,9-四氮雜-1-磷雜雙環(huán)[3.3.3]十一烷和2,8,9-三異丁基-2,5,8,9-四氮雜-1-磷雜雙環(huán)[3.3.3]十一烷)、金屬碳酸鹽(例如，mxco3)、金屬酚鹽(m+-oph)和photms與氟離子源(例如，r4n+-f、tasf(二氟三甲基硅酸三(二甲基氨基)锍)或tbat(三苯基二氟硅酸四丁基銨))的組合和其混合物，其中每一m為適宜金屬，例如堿金屬或堿土金屬，并且每一r為例如(c1-c6)烷基。在一個(gè)特定實(shí)施例中，堿為dbu。
拆分還可在任一適宜溫度(例如，在約0℃到約50℃范圍內(nèi)的溫度)下實(shí)施。在一個(gè)特定實(shí)施例中，拆分在約20℃的溫度下實(shí)施。
在一個(gè)特定實(shí)施例中，拆分在苯酚存在下實(shí)施。
起始非對映異構(gòu)體混合物中的化合物16的百分比可為在約0％到約99％范圍內(nèi)的任何值。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，起始非對映異構(gòu)體混合物中的化合物16的百分比在約0％到約20％范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施例中，起始非對映異構(gòu)體混合物中的化合物16的百分比在約20％到約99％范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施例中，起始非對映異構(gòu)體混合物中的化合物16的百分比在約50％到約99％范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施例中，最終化合物16為至少約90％、約95％、約97％或約99％非對映異構(gòu)體純。在一個(gè)實(shí)施例中，最終化合物16含有小于1％的任何非對映異構(gòu)體雜質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施例中，最終化合物16不含任何可檢測的非對映異構(gòu)體雜質(zhì)。
具有高的非對映異構(gòu)體純度的化合物13的制備
為至少約90％非對映異構(gòu)體純的化合物13(其中x為鹵基)可通過用適宜鹵化劑處理化合物12來制備。例如，化合物13可通過用鹵化劑(例如，亞硫酰氯(socl2)、草酰氯(c2o2cl2)、三氯化磷(pcl3)、氯三苯基膦鹽、亞硫酰溴(sobr2)、草酰溴(c2o2br2)、三溴化磷(pbr3)或溴三苯基膦鹽)處理化合物12來制備。所述反應(yīng)可在適宜溫度(例如，在約-20℃到約100℃范圍內(nèi)的溫度)下在適宜有機(jī)溶劑中實(shí)施。適宜溶劑包括四氫呋喃、2-甲基四氫呋喃、二氯甲烷、乙腈、甲苯、氯苯、1,2-二氯乙烷、1,4-二噁烷、環(huán)丁砜和三氯乙烯和其混合物。
在一個(gè)實(shí)施例中，在約22℃到約110℃的溫度下在甲苯中用亞硫酰氯處理化合物12以提供化合物13a：
所述化合物13a為至少約90％非對映異構(gòu)體純。在一個(gè)實(shí)施例中，最終化合物13a為至少約90％、約95％、約97％或約99％非對映異構(gòu)體純。在一個(gè)實(shí)施例中，最終化合物13a含有小于1％的任何非對映異構(gòu)體雜質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施例中，最終化合物13a不含任何可檢測的非對映異構(gòu)體雜質(zhì)。
以高非對映異構(gòu)體純度制備化合物15
化合物15可通過在提供化合物15的條件下用胺11處理為至少約90％非對映異構(gòu)體純的化合物13(其中x為鹵基)來制備，所述化合物15為至少約90％非對映異構(gòu)體純的的特定異構(gòu)體15a，在本文中也表示為化合物16。例如，化合物15可通過在適宜溫度(例如，在約-78℃到約25℃范圍內(nèi)的溫度)下在適宜有機(jī)溶劑中用胺11處理化合物13來制備。適宜溶劑包括有機(jī)溶劑，例如四氫呋喃、2-甲基四氫呋喃、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、三氯乙烯、1,4-二噁烷、乙腈、甲苯、氯苯、環(huán)丁砜和乙酸異丙酯和其混合物。所述反應(yīng)可方便地在適宜堿存在下實(shí)施，所述適宜堿是例如三乙胺((c2h5)3n)、n,n-二異丙基乙基胺([(ch3)2ch]2nc2h5)或1,8-雙(二甲基氨基)-萘(質(zhì)子海綿(protonsponge)，c14h18n2)。在所述反應(yīng)后，可用含有適宜洗滌試劑的水溶液洗滌所得材料，所述適宜洗滌試劑是例如磷酸二氫鈉(nah2po4)、碳酸氫鉀(khco3)、檸檬酸(c6h8o7)或碳酸氫鈉(nahco3)。所得有機(jī)溶液可經(jīng)適宜干燥劑(例如，硫酸鈉、硫酸鎂或氯化鈣)干燥以提供化合物15，所述化合物15為至少約90％非對映異構(gòu)體純的化合物16。
在一個(gè)實(shí)施例中，在-25℃到25℃的溫度下在三乙胺存在下在二氯甲烷中用胺11處理為至少約90％非對映異構(gòu)體純的化合物13(其中x為氯)。然后用含有磷酸二氫鈉(nah2po4)和碳酸氫鉀(khco3)的水溶液洗滌所得反應(yīng)混合物并且經(jīng)硫酸鈉干燥以提供化合物15，所述化合物15為至少約90％非對映異構(gòu)體純的化合物16。在一個(gè)實(shí)施例中，起始化合物13和所得化合物15為至少約95％或97％非對映異構(gòu)體純。在一個(gè)實(shí)施例中，最終化合物15含有至少約90％、約95％、約97％或約99％非對映異構(gòu)體純的化合物16。在一個(gè)實(shí)施例中，最終化合物15含有小于1％的任何非對映異構(gòu)體雜質(zhì)。
化合物12的制備
化合物12可如例如美國專利第7,390,791號(hào)中所述制備，或其可如本文所述制備。在一個(gè)實(shí)施例中，提供制備化合物12的方法，其包含在適宜堿存在下用亞磷酸三苯酯處理pmpa以提供化合物12。所述反應(yīng)可方便地在適宜溶劑中實(shí)施，所述適宜溶劑是例如乙腈、n-甲基吡咯烷酮(nmp)、二氯乙烷、吡啶、乙酸烷基酯(例如，乙酸乙酯)或二烷基醚(例如，二乙醚)或其混合物。所述反應(yīng)還可方便地在適宜堿存在下實(shí)施，所述適宜堿是例如三烷基胺(例如，三乙胺)、2-甲基咪唑、二甲基氨基吡啶(dmap)、1,5-重氮雙環(huán)[4.3.0]壬-5-烯(dbn)、1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(dbu)或吡啶或其混合物。所述反應(yīng)方便地還可在適宜溫度(例如，約20℃到約120℃(例如，約20℃到約82℃)的溫度)下實(shí)施。在一個(gè)特定實(shí)施例中，在約80℃下在三乙胺和二甲基氨基吡啶存在下在乙腈中用亞磷酸三苯酯處理pmpa以提供化合物12。
以下為非限制性說明性實(shí)例。
實(shí)例1：非對映異構(gòu)體混合物9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物15)的制備
a.化合物11的制備.將l-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽(化合物10)(1kg,5.97mol,1.0當(dāng)量)和碳酸氫鉀(1.45kg,14.5mol,2.43當(dāng)量)于dcm(4kg)中以最大攪動(dòng)攪動(dòng)10到14小時(shí)，將罐溫度維持在19℃與25℃之間。然后將混合物過濾并且進(jìn)一步用dcm(2kg)沖洗。在
b.化合物13a的制備.在60℃下經(jīng)2小時(shí)將化合物12(1kg,2.75mol,1.00當(dāng)量)以10份相等部分添加到亞硫酰氯(0.72kg,6.02mol,2.19當(dāng)量)存于乙腈(5.5kg)中的溶液中。然后將罐溫度調(diào)節(jié)到70℃并且攪拌1到3小時(shí)直到認(rèn)為反應(yīng)完成。然后將罐溫度調(diào)節(jié)到40℃并且施加真空。將混合物蒸餾到干燥，最高夾套溫度維持在40℃。然后將干燥殘余物吸收于二氯甲烷(30kg)中并且將罐溫度調(diào)節(jié)到19℃到25℃。保持含有化合物13a的所得漿液以供進(jìn)一步使用。
c.化合物15的制備.在-25℃下經(jīng)最長2小時(shí)向l-丙氨酸異丙酯11(4.82當(dāng)量)的母液中添加含有化合物13a(1.0當(dāng)量)的漿液，罐溫度維持≤-10℃。然后使所述混合物在≤-10℃的溫度下保持至少30分鐘，隨后使用水潤濕的ph紙檢查ph。如果ph<4，那么用三乙胺調(diào)節(jié)到ph4-7。然后將罐溫度調(diào)節(jié)到室溫(19℃到25℃)。在單獨(dú)容器中，制備磷酸二氫鈉(2.2kg,18mol,6.90當(dāng)量)存于水(16kg)中的溶液。將一半的磷酸二氫鈉溶液裝入膦酸酰胺化物(phosphonamidate)反應(yīng)器中，并且劇烈地?cái)嚢琛３两挡⒎峙涓鲗?。再次用剩余一半的磷酸二氫鈉溶液洗滌有機(jī)層。在單獨(dú)容器中，制備碳酸氫鉀(1.1kg,11mol,4.22當(dāng)量)存于水(5.5kg)中的溶液。將一半的碳酸氫鉀溶液裝入有機(jī)相中，并且劇烈地?cái)嚢?。沉降并分配各層。再次用剩余一半的碳酸氫鉀溶液洗滌有機(jī)層，之后進(jìn)行最終水(3.3kg)洗滌。然后保留有機(jī)相并且將其蒸餾到約6l的體積。分析所得溶液的水含量。如果水含量>1.0％，那么可裝入dcm并且重復(fù)蒸餾到約6l。當(dāng)溶液水含量小于1.0％或?yàn)榧s1.0％時(shí)，將罐溫度調(diào)節(jié)到19℃到25℃，然后排出存于dcm中的母液以提供非對映異構(gòu)體混合物9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物15)。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.20-1.33(m,12h),3.62-3.74(m,1h),3.86-4.22(m,5h),4.30-4.44(m,1h),4.83-5.10(m,1h),6.02(brs,3h),7.18-7.34(m,5h),7.98-8.02(m,1h),8.32-8.36(m,1h)；31pnmr(162mhz,cdcb):δ.21.5,22.9。
實(shí)例2：對非對映異構(gòu)體混合物9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物15)進(jìn)行結(jié)晶誘導(dǎo)性動(dòng)態(tài)拆分以提供9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物16)
將9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物15)存于乙腈中的22wt％溶液(2.3kg溶液，0.51kg化合物15，1.1mol，1當(dāng)量)中裝入配備有頂置式攪拌器、蒸餾設(shè)備和氮入口的容器中。通過在100毫巴到300毫巴下在45℃到55℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行蒸餾將混合物濃縮到30wt％到35wt％的最終濃度。然后去除蒸餾設(shè)備并且將溶液冷卻到20℃。利用2.0％化合物16向溶液中加晶種并且在20℃下攪拌1小時(shí)。添加苯酚(9.9g,0.11mol,0.1當(dāng)量)和dbu(16g,0.11mol,0.1當(dāng)量)并且將混合物再攪拌24小時(shí)，或直到溶液中殘留的化合物16的重量百分比小于12％。然后將漿液冷卻到0℃并且在0℃下再攪拌18小時(shí)。在0℃下將漿液過濾并且用乙酸異丙酯:乙腈的1:1溶液(1.5l)洗滌。在50℃真空爐中干燥固體，得到0.40kg呈白色固體形式的化合物16(80％產(chǎn)率)。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.21(m,9h),1.28(d,j＝7.0hz,3h),3.65(dd,j＝13.1,10.7,1h)4.00(m,4h),4.33(dd,j＝14.4,3.1hz,1h),5.00(m,1h)6.00(bs,2h),6.99(m,2h),7.07(m,1h),7.19(m,2h),7.97(s,1h),8.33(s,1h)。31pnmr(162mhz,cdcl3):δ.20.8。
實(shí)例3：以高非對映異構(gòu)體純度制備化合物13a
在環(huán)境溫度下向化合物12(10.0g,27.5mmol,1.00當(dāng)量)存于甲苯(60ml)中的漿液中添加亞硫酰氯(3.0ml,41mmol,1.5當(dāng)量)。將漿液加熱到70℃并且攪動(dòng)48到96小時(shí)直到通過hplc認(rèn)為反應(yīng)和非對映異構(gòu)體富集完成(目標(biāo)：化合物12到化合物13a的轉(zhuǎn)化率>97.0％并且化合物13a的非對映異構(gòu)體比>90:10)。通過真空蒸餾將混合物濃縮干燥，并且將干燥殘余物吸收于甲苯(50ml)中。在環(huán)境溫度下保持含有化合物13a的所得漿液以供進(jìn)一步使用。
實(shí)例4：以高非對映異構(gòu)體純度制備9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物15)
在-25℃下經(jīng)最少45分鐘向l-丙氨酸異丙酯11(4.50當(dāng)量)存于dcm(80ml)中的溶液中添加含有至少90％非對映異構(gòu)體純的化合物13a(1.00當(dāng)量)存于甲苯(50ml)中的漿液，內(nèi)部溫度維持≤-20℃。然后使混合物在≤-20℃的溫度下保持至少30分鐘，并且使用水潤濕的ph紙檢查ph。如果ph<4，那么用三乙胺將其調(diào)節(jié)到ph4到7。將罐溫度調(diào)節(jié)到室溫(19℃到25℃)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗并且依序用10％w/v磷酸二氫鈉水溶液(2×50ml)、15％w/v碳酸氫鉀水溶液(2×20ml)和水(50ml)洗滌。經(jīng)無水硫酸鈉干燥最終有機(jī)層，進(jìn)行過濾并且在真空中濃縮成粘稠琥珀色油狀物。將油狀物溶解于甲苯/乙腈(4:1)(50ml)中，并利用9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(約1mg,99:1非對映異構(gòu)體比)向溶液中加晶種并且在環(huán)境溫度下攪拌2小時(shí)。將所得漿液過濾并用甲苯/乙腈(4:1)(15ml)洗滌濾餅并且在40℃真空爐中干燥16小時(shí)，得到呈白色固體形式的產(chǎn)物9-{(r)-2-[((r,s)-{[(s)-1-(異丙氧基羰基)乙基]氨基}苯氧基氧膦基)甲氧基]丙基}腺嘌呤(化合物15)(10.0g,76.4％,97.5:2.5非對映異構(gòu)體比，有利于化合物16)。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.20-1.33(m,12h),3.62-3.74(m,1h),3.86-4.22(m,5h),4.30-4.44(m,1h),4.83-5.10(m,1h),6.02(brs,3h),7.18-7.34(m,5h),7.98-8.02(m,1h),8.32-8.36(m,1h)；31pnmr(162mhz,cdcl3):δ.21.5,22.9。
實(shí)例5：化合物12的制備
將pmpa(100.0g,0.35mol,1當(dāng)量)裝入配備有頂置式攪拌器、回流冷凝器和氮入口的容器中，之后裝入乙腈(800ml)。向所述容器中添加三乙胺(71.0g,0.70mol,2當(dāng)量)，之后添加dmap(42.6g,0.35mol,1當(dāng)量)和亞磷酸三苯酯(162.1g,0.52mol,1.5當(dāng)量)。將混合物加熱到80℃并且在80℃下攪動(dòng)≥48小時(shí)或直到通過31pnmr確定反應(yīng)完成。(直接從所述反應(yīng)取樣品并且添加含有存于d2o中的10％h3po2的插入物。所形成的中間體為pmpa酸酐并且為7ppm到8ppm；產(chǎn)物為12.3ppm到12.6ppm。當(dāng)存在小于5％的酸酐時(shí)，認(rèn)為反應(yīng)完成)。將反應(yīng)混合物蒸餾到約1.5體積的乙腈并且用乙酸乙酯(200ml)和水(300ml)稀釋。分離水層并且用乙酸乙酯(200ml)洗滌兩次。將水層再次裝入容器中并且使用12.1mhcl(21.0ml)將ph調(diào)節(jié)到ph3。然后利用0.05％化合物12向反應(yīng)物中加晶種并且在25℃下進(jìn)行攪拌。經(jīng)20分鐘添加額外12.1mhcl(7.0ml)直到實(shí)現(xiàn)ph2。在環(huán)境溫度下將結(jié)晶攪拌30分鐘并且然后經(jīng)2小時(shí)冷卻到10℃。一旦達(dá)到10℃，那么在10℃下將結(jié)晶攪拌2.5小時(shí)。將漿液過濾并用ph1.5水(200g)洗滌。在真空爐中干燥后，獲得102.2g呈白色固體形式的化合物12(81％產(chǎn)率)。1hnmr(400mhz,d2o):δ1.31(d,j＝6.1hz,3h),3.59(dd,j＝14.0,9.0hz,1h),3.85(dd,j＝14.0,9.0hz,1h),4.1(m,1h),4.3(dd,j＝15.0,9,0hz,1h),4.5(dd,j＝15.0,2hz,1h),6.75(d,j＝7hz,2h),7.15(t,j＝7hz,1h),7.25(t,j＝7hz,2h),8.26(s,1h),8.35(s,1h)。31pnmr(162mhz,d2o):δ.14.8。
所有出版物、專利和專利文獻(xiàn)均以引用方式并入本文中，如同個(gè)別地以引用方式并入一般。已參照各具體和優(yōu)選的實(shí)施例和技術(shù)描述了本發(fā)明。然而，應(yīng)理解，可作出許多變化和修改，同時(shí)仍保持屬于本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)。