本發(fā)明涉及單細胞水平食源性致病菌的顯微觀測方法，特別涉及一種基于固體或固液雙層培養(yǎng)基的食源性致病菌單細胞個體生長過程的顯微觀測方法。

背景技術(shù)：

常見的食源性致病菌有沙門氏菌、副溶血性弧菌、單增李斯特氏菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、臘樣芽孢桿菌等。近年來，國內(nèi)外由食源性致病菌引起的食物中毒事件越來越受到人們的廣泛關(guān)注。而多數(shù)食物中毒事件是由低菌量污染食品而引起的，所以在食源性致病菌生長規(guī)律研究中，食源性致病菌單細胞個體研究顯得極為重要。

目前食源性致病菌單細胞水平研究中，觀測方法十分重要，但現(xiàn)有的觀測方法仍有很多不足。常用的探究微生物單細胞水平下生長規(guī)律的方法有比濁法和顯微觀測法。其中比濁法的檢測指標是菌懸液的渾濁度，無法直接觀測到細胞個體的生長及分裂過程。而基于光學顯微鏡從單細胞水平來研究食源性致病菌單細胞個體的真實生長分裂過程的方法仍存在一些問題。比如，kelly等[1]將接種好的瓊脂薄膜置于定時拍照顯微鏡下觀察酵母細胞分裂的過程，其中瓊脂薄片可防止酵母細胞無序運動，定時拍照則可以記錄酵母單細胞個體的分裂過程。然而在長時間觀測過程中，細胞個體會由于生長環(huán)境營養(yǎng)不足而停止生長或死亡，進而影響對其生長的連續(xù)觀測。同時，隨著時間增長，瓊脂薄片易產(chǎn)生脫水現(xiàn)象。當觀測基質(zhì)為液體[2]時，分裂的子代細胞被流動的營養(yǎng)液帶走，導致觀測過程中無法觀測到食源性致病菌單細胞個體的整個生長分裂過程。

因此，目前尚未有合適的方法對食源性致病菌單細胞個體開展觀測工作。

參考文獻：

[1]、kellycd,rahno.thegrowthrateofindividualbacterialcells[j].journalofbacteriology,1932,23(2):147-153

[2]、elfwinga,lemarcy,baranyij,etal.observinggrowthanddivisionoflargenumbersofindividualbacteriabyimageanalysis[j].appliedandenvironmentalmicrobiology,2004,70(2):675-678。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種食源性致病菌單細胞個體生長過程的顯微觀測方法，該觀測方法選用了適用于所有食源性致病菌的固體培養(yǎng)基或固液雙層培養(yǎng)基，因此該方法適用于所有食源性致病菌單細胞個體過程的觀測，并可不間斷直接觀測細胞個體的分裂過程。選用固體培養(yǎng)基作為食源性致病菌個體的固定介質(zhì)時，可避免具有鞭毛的食源性致病菌個體自由運動的問題。用固/液雙層培養(yǎng)基時，該方法即固定了細菌，同時避免了因長時間觀測而導致生長環(huán)境營養(yǎng)不足及固體培養(yǎng)基脫水的問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案

一種食源性致病菌單細胞個體生長過程的顯微觀測方法，即在食源性致病菌上覆蓋適應食源性致病菌生長的固體培養(yǎng)基或固液雙層培養(yǎng)基，然后再用顯微鏡進行觀測食源性致病菌單細胞個體生長過程；

所述的覆蓋固液雙層培養(yǎng)基，即從下到上，依次為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基；

當在食源性致病菌上覆蓋適應食源性致病菌生長的固體培養(yǎng)基時，采用正置型或倒置型顯微鏡進行觀測；

當在食源性致病菌上覆蓋適應食源性致病菌生長的固液雙層培養(yǎng)基時，采用倒置型顯微鏡進行觀測。

上述的一種食源性致病菌單細胞個體生長過程的顯微觀測方法，具體包括如下步驟：

（1）、培養(yǎng)基的制備

本發(fā)明的實施例中僅以單核細胞增生性李斯特氏菌（listeriamonocytogenesatcc13932，以下簡稱單增李斯特菌，上海理工大學劉箐教授贈送（贈送人地址：上海市楊浦區(qū)軍工路516號上海理工大學，聯(lián)系方式：13916919896）為例進行說明，但并不限制本觀測方法在其他食源性致病菌的使用，只是采用其他食源性致病菌時，對適應該食源性致病菌生長的固體培養(yǎng)基或固液雙層培養(yǎng)基要做適應性的調(diào)整；

所述的適應該食源性致病菌即單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932生長的固體培養(yǎng)基為tsa-ye培養(yǎng)基，其原料組成，按每升計算，由17g胰蛋白胨、3g多價胨、6g酵母膏、5g氯化鈉、2.5g磷酸氫二鉀、2.5g葡萄糖、15g瓊脂和余量的水組成；

上述tsa-ye培養(yǎng)基通過包括如下步驟方法制備而成：

參考gb4789.30-2016：在容器中依次加入胰蛋白胨、多價胨、酵母膏、氯化鈉、磷酸氫二鉀、葡萄糖和瓊脂，然后加水定容至1升，然后加熱攪拌至完全溶解，調(diào)節(jié)ph至7.2±0.2，分裝，121℃高壓滅菌15min，然后放于50℃的恒溫箱中備用；

所述的適應該食源性致病菌即單增李斯特菌生長的液體培養(yǎng)基為tsb-ye培養(yǎng)基，其原料組成，按每升計算，由17g胰蛋白胨、3g多價胨、6g酵母膏、5g氯化鈉、2.5g磷酸氫二鉀、2.5g葡萄糖和余量的水組成；

上述tsb-ye培養(yǎng)基通過包括如下步驟方法制備而成：

參考gb4789.30-2016：在容器中依次加入胰蛋白胨、多價胨、酵母膏、氯化鈉、磷酸氫二鉀和葡萄糖，然后加水定容至1升，然后加熱攪拌至完全溶解，用調(diào)節(jié)ph至7.2±0.2，分裝，121℃高壓滅菌15min，然后放于超凈工作臺備用；

（2）、稀釋后的單細胞單增李斯特菌菌懸液的制備

取增菌后的待測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液，將其用步驟（1）所配制的tsb-ye培養(yǎng)基進行稀釋至單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌體濃度達到3cfu/ml(cfu(colony-formingunits，菌落形成單位)，即得稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液，其中cfu/ml指的是每毫升稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液中含有的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932的菌落總數(shù)；

（3）、基于固體培養(yǎng)基或固液雙層培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本的制備

首先，取20μl步驟（2）稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液至無菌的35mm的玻底培養(yǎng)皿中，并緩慢旋搖，使稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液平鋪在玻底培養(yǎng)皿的底部，靜置5min；

然后吸取100μl步驟（1）滅菌后的tsa-ye培養(yǎng)基稍冷卻后，加入到玻底培養(yǎng)皿中稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液上，靜置直至tsa-ye培養(yǎng)基完全凝固，然后蓋上玻底培養(yǎng)皿的上蓋，即得基于固體培養(yǎng)基用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本；

或者首先吸取100μl步驟（1）滅菌后的tsa-ye培養(yǎng)基稍冷卻后，加入到玻底培養(yǎng)皿中稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液上，靜置直至tsa-ye培養(yǎng)基完全凝固，再吸取100-200μl步驟（1）滅菌后的tsb-ye培養(yǎng)基，覆蓋于上述凝固后的tsa-ye培養(yǎng)基之上，然后蓋上玻底培養(yǎng)皿的上蓋，即得基于固液雙層培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本；

（4）、顯微鏡進行觀測

采用正置型或倒置型顯微鏡的100倍物鏡，在玻底培養(yǎng)皿的底部對應于稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液的觀測窗處，通過調(diào)節(jié)分辨率、視野亮度、焦距，找到步驟（3）所得的基于固體培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本中的單細胞個體，然后進行觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞的分裂過程及細胞分裂隨時間變化的過程；

或采用倒置型顯微鏡的100倍物鏡，在玻底培養(yǎng)皿的底部對應于稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液的觀測窗處，通過調(diào)節(jié)分辨率、視野亮度、焦距，找到步驟（3）所得的基于固液雙層培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本中的單細胞個體，然后進行觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞的分裂過程及細胞分裂隨時間變化的過程。

本發(fā)明的有益技術(shù)效果

本發(fā)明的一種基于固體培養(yǎng)基或基于固液雙層培養(yǎng)基的用于觀測食源性致病菌單細胞個體生長過程的方法，由于選用了適用于待觀測的食源性致病菌的固體培養(yǎng)基或固液雙層培養(yǎng)基對菌體觀測的全過程進行營養(yǎng)供給，因此對食源性致病菌單細胞個體生長過程進行觀測時，可不間斷直接觀測細胞個體的分裂過程。

進一步，本發(fā)明的基于固體培養(yǎng)基的用于觀測食源性致病菌單細胞個體生長過程的方法，由于選用固體培養(yǎng)基作為食源性致病菌個體的固定介質(zhì)時，因此可避免具有鞭毛的食源性致病菌個體自由運動的問題。并且，本發(fā)明中的固體培養(yǎng)基為適應于食源性致病菌生長的固體培養(yǎng)基，在觀測過程中，可為食源性致病菌提供營養(yǎng)物質(zhì)。

進一步，基于固液雙層培養(yǎng)基的用于觀測食源性致病菌單細胞個體生長過程的方法，由于固/液雙層培養(yǎng)基的使用，該方法即固定了細菌，同時避免了因長時間觀測而導致生長環(huán)境營養(yǎng)不足及固體培養(yǎng)基脫水的問題。

進一步，本發(fā)明的固體培養(yǎng)基或基于固液雙層培養(yǎng)基的用于觀測食源性致病菌單細胞個體生長過程的方法，可根據(jù)顯微鏡系統(tǒng)的類型（正置型或倒置型顯微鏡系統(tǒng)）來選擇所需要的觀測體系，固體單層培養(yǎng)基體系適于正置型與倒置型顯微鏡系統(tǒng)的觀測，而固液雙層培養(yǎng)基體系適于倒置型顯微系統(tǒng)的長時間觀測。

附圖說明

1、基于固液雙層培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本的結(jié)構(gòu)示意圖；

2、基于固液雙層培養(yǎng)基的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞裂變的生長過程示意圖；

3、以時間為橫坐標，以裂變后的細胞數(shù)為縱坐標繪圖，所得的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞裂變后的細胞數(shù)隨時間變化情況的示意圖。

具體實施方式

下面通過實施例對本發(fā)明進行進一步闡述，但并不限制本方法在其他類似觀測系統(tǒng)中的應用。

以下的實施例中僅以單增李斯特氏菌listeriamonocytogenesatcc13932，上海理工大學劉箐教授贈送（贈送人地址：上海市楊浦區(qū)軍工路516號上海理工大學，聯(lián)系方式：13916919896）為舉例進行說明，但并不限制本方法在其他食源性致病菌單細胞個體生長過程觀測中的應用。

實施例中所用的正置型顯微鏡是bx41tf-5型生物顯微鏡，購于日本奧林巴斯株式會社；

倒置型顯微鏡是ts100倒置型生物顯微鏡，購于日本奧林巴斯株式會社。

本發(fā)明各實施例中所用的胰蛋白胨、多價胨、酵母膏、氯化鈉、磷酸氫二鉀、葡萄糖和瓊脂均為國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)。

實施例1

一種食源性致病菌即單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的顯微觀測方法，即在單增李斯特氏菌listeriamonocytogenesatcc13932上覆蓋適應單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932生長的固液雙層培養(yǎng)基，然后采用倒置型顯微鏡進行觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程；

所述的適用單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932生長的固液雙層培養(yǎng)基，即從下到上，依次為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基。

所述的固體培養(yǎng)基為tsa-ye培養(yǎng)基，其原料組成，按每升計算，由17g胰蛋白胨、3g多價胨、6g酵母膏、5g氯化鈉、2.5g磷酸氫二鉀、2.5g葡萄糖、15g瓊脂和余量的水組成；

上述tsa-ye培養(yǎng)基通過包括如下步驟方法制備而成：

參考gb4789.30-2016：在容器中依次加入胰蛋白胨、多價胨、酵母膏、氯化鈉、磷酸氫二鉀、葡萄糖和瓊脂，然后加水定容至1升，然后加熱攪拌至完全溶解，調(diào)節(jié)ph至7.2±0.2，分裝，121℃高壓滅菌15min，備用；

所述的液體培養(yǎng)基為tsb-ye培養(yǎng)基，其原料組成，由按每升計算，由17g胰蛋白胨、3g多價胨、6g酵母膏、5g氯化鈉、2.5g磷酸氫二鉀、2.5g葡萄糖和余量的水組成；

上述tsb-ye培養(yǎng)基通過包括如下步驟方法制備而成：

參考gb4789.30-2016：在容器中依次加入胰蛋白胨、多價胨、酵母膏、氯化鈉、磷酸氫二鉀和葡萄糖，然后加水定容至1升，然后加熱攪拌至完全溶解，用調(diào)節(jié)ph至7.2±0.2，分裝，121℃高壓滅菌15min，備用。

上述的一種單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的顯微觀測方法，具體包括如下步驟：

（1）、tsa-ye培養(yǎng)基、tsb-ye培養(yǎng)基的制備

①、tsa-ye培養(yǎng)基的配制

參考gb4789.30-2016即在容器中依次加17g胰蛋白胨、3g多價胨、6g酵母膏、5g氯化鈉、2.5g磷酸氫二鉀、2.5g葡萄糖、15g瓊脂，然后加水定容至1升，然后加熱攪拌至完全溶解，調(diào)節(jié)ph至7.2±0.2，分裝，121℃高壓滅菌15min，即得tsa-ye培養(yǎng)基；

②、tsb-ye培養(yǎng)基的配制

參考gb4789.30-2016即在容器中依次加入17g胰蛋白胨、3g多價胨、6g酵母膏、5g氯化鈉、2.5g磷酸氫二鉀、2.5g葡萄糖，然后加水定容至1升，然后加熱攪拌至完全溶解，調(diào)節(jié)ph至7.2±0.2，分裝，121℃高壓滅菌15min，即得tsb-ye培養(yǎng)基，然后放于超凈工作臺上備用；

（2）、稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液的制備

取增菌后的待測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液，將其用步驟（1）所配制的tsb-ye培養(yǎng)基進行稀釋至單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌體濃度達到3cfu/ml(cfu(colony-formingunits，菌落形成單位)，即得稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932懸液，其中cfu/ml指的是每毫升稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液中含有的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932的菌落總數(shù)；

（3）、基于固液雙層培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本的制備，所述的基于固液雙層培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本的結(jié)構(gòu)示意圖如圖1所示，其中1為玻底培養(yǎng)皿、2為玻底培養(yǎng)皿的上蓋、3為稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液、4為tsa-ye培養(yǎng)基、5為tsb-ye培養(yǎng)基，其制備過程的具體步驟如下；

首先，取20μl步驟（2）稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液3至無菌的35mm的玻底培養(yǎng)皿1中，并緩慢旋搖，使稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液3平鋪在玻底培養(yǎng)皿1的底部，靜置5min；

然后吸取100μl步驟（1）滅菌后的tsa-ye培養(yǎng)基4稍冷卻后，加入到玻底培養(yǎng)皿中稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液3上，靜置直至tsa-ye培養(yǎng)基4完全凝固；

然后再吸取100-200μl步驟（1）滅菌后的tsb-ye培養(yǎng)基5，覆蓋于上述凝固后的tsa-ye培養(yǎng)基4之上，然后蓋上玻底培養(yǎng)皿的上蓋2，即得基于固液雙層培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本；

（4）、顯微鏡進行觀測

采用倒置型顯微鏡的100倍物鏡，在玻底培養(yǎng)皿2的底部對應于稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液3的觀測窗處，通過調(diào)節(jié)分辨率、視野亮度、焦距，找到步驟（3）所得的基于固液雙層培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本中的單細胞個體，然后進行觀測，觀測過程記錄單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞的分裂過程及細胞分裂隨時間變化的過程。

所得的基于固液雙層培養(yǎng)基的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞裂變的生長過程示意圖如圖2所示，從圖2中可以看出食源性致病菌第一次分裂時間較之后幾次分裂時間長，由此表明了細胞平均分裂時間隨分裂次數(shù)增加而逐漸減少，說明細胞分裂速度在一定時間內(nèi)呈增加的趨勢，其與傳統(tǒng)的單細胞生長流動槽觀測單細胞分裂進行對比，表明了本發(fā)明方法保證母代細胞與子代細胞在共存條件下生長分裂，而非僅獨立地觀測母代細胞的生長分裂，更加符合實際介質(zhì)中單個細胞的生長過程。

以時間為橫坐標，以裂變后的細胞個數(shù)隨機生成總數(shù)為縱坐標繪圖，所得的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞裂變后的細胞數(shù)隨時間變化情況的示意圖如圖3所示，從圖3中可以看出，由該數(shù)據(jù)擬合得到的隨機生長示意圖符合微生物生長的基本規(guī)律，由此表明了本發(fā)明方法可以為微生物單細胞生長模型的構(gòu)建提供數(shù)據(jù)來源。

實施例2

一種食源性致病菌即單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的顯微觀測方法，即在單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932上覆蓋適應單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932生長的固體培養(yǎng)基，然后用正置型或倒置型顯微鏡進行觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程；

所述的適用單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932生長所用的固體培養(yǎng)基為tsa-ye培養(yǎng)基；

所述的tsa-ye培養(yǎng)基，其原料組成，按每升計算，由17g胰蛋白胨、3g多價胨、6g酵母膏、5g氯化鈉、2.5g磷酸氫二鉀、2.5g葡萄糖、15g瓊脂和余量的水組成；

上述tsa-ye培養(yǎng)基通過包括如下步驟方法制備而成：

參考gb4789.30-2016：在容器中依次加入胰蛋白胨、多價胨、酵母膏、氯化鈉、磷酸氫二鉀、葡萄糖和瓊脂，然后加水定容至1升，然后加熱攪拌至完全溶解，調(diào)節(jié)ph至7.2±0.2，分裝，121℃高壓滅菌15min，備用。

上述的一種單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的顯微觀測方法，具體包括如下步驟：

（1）、tsa-ye培養(yǎng)基、tsb-ye培養(yǎng)基的制備

①、tsa-ye培養(yǎng)基的配制

參考gb4789.30-2016：在容器中依次加入胰蛋白胨、多價胨、酵母膏、氯化鈉、磷酸氫二鉀、葡萄糖和瓊脂，然后加水定容至1升，然后加熱攪拌至完全溶解，調(diào)節(jié)ph至7.2±0.2，分裝，121℃高壓滅菌15min，然后放于50℃的恒溫箱中備用；

②、稀釋增菌后的待測單增李斯特菌菌懸液所用的tsb-ye培養(yǎng)基的配制

上述tsb-ye培養(yǎng)基通過包括如下步驟方法制備而成：

參考gb4789.30-2016即在容器中依次加入17g胰蛋白胨、3g多價胨、6g酵母膏、5g氯化鈉、2.5g磷酸氫二鉀、2.5g葡萄糖，然后加水定容至1升，然后加熱攪拌至完全溶解，調(diào)節(jié)ph至7.2±0.2，分裝，121℃高壓滅菌15min，即得tsb-ye培養(yǎng)基，然后放于超凈工作臺上備用；

（2）、稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液的制備

取增菌后的待測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液，將其用tsb-ye培養(yǎng)基進行稀釋至單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌體濃度達到3cfu/ml(cfu(colony-formingunits，菌落形成單位)，即得稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液，其中cfu/ml指的是每毫升稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液中含有的單細胞單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932的菌落總數(shù)；

（3）、基于固體培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本的制備

首先，取20μl步驟（2）所得的稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液至無菌的35mm的玻底培養(yǎng)皿中，并緩慢旋搖，使稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液鋪平在玻底培養(yǎng)皿的底部，靜置5min；

然后，吸取100μl步驟（1）滅菌后的tsa-ye培養(yǎng)基，稍冷卻至室溫后加入到玻底培養(yǎng)皿中稀釋后的單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932菌懸液上，靜置直至tsa-ye培養(yǎng)基完全凝固，然后蓋上玻底培養(yǎng)皿的上蓋并密封，即得基于固體培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本；

（4）、顯微鏡進行觀測

采用正置型或倒置型顯微鏡的100倍物鏡，調(diào)節(jié)分辨率、視野亮度、焦距，從玻底培養(yǎng)皿的底部向上的觀測窗進行觀測，直至找到步驟（3）所得的基于固體培養(yǎng)基的用于觀測單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體生長過程的樣本中的單細胞個體，記錄單增李斯特菌listeriamonocytogenesatcc13932單細胞個體細胞分裂情況及其細胞裂變隨時間變化的情況。

綜上所述，本發(fā)明的一種食源性致病菌單細胞個體生長過程的顯微觀測方法，由于通過固體培養(yǎng)基將食源性致病菌單細胞個體固定于培養(yǎng)基上，因此，可觀測到食源性致病菌單細胞連續(xù)分裂的全過程，并且由于固體培養(yǎng)基的存在，觀測過程不受營養(yǎng)物質(zhì)不足而干擾。

以上所述內(nèi)容僅為本發(fā)明構(gòu)思下的基本說明，而依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案所做的任何等效變換，均應屬于本發(fā)明的保護范圍。