本發(fā)明屬于天然提取物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種高活性秋葵多糖的發(fā)酵提取方法及其活性制品。
背景技術(shù)：
：秋葵(abelmoschusesculentusl.moench)又名黃秋葵、羊角豆、咖啡黃葵、毛茄，黃蜀葵，民間也稱"洋辣椒"。原產(chǎn)于非洲，20世紀(jì)初由印度引入中國，多見于中國南方。其可食用部分是果莢，分綠色和紅色兩種，口感脆嫩多汁，滑潤不膩，香味獨(dú)特，種子可榨油。秋葵性味淡、寒，具有利咽、通淋、下乳、調(diào)經(jīng)之功效。秋葵含有豐富的維生素和礦物質(zhì)，每100克秋葵的嫩果中，約含有4毫克的維生素c、1.03毫克的維生素e以及310微克的胡蘿卜素。秋葵中富含的鋅和硒等微量元素，對(duì)增強(qiáng)人體防癌抗癌能力很有幫助。其次，秋葵嫩果中有黏黏的液體物質(zhì)，這種黏液含有果膠和黏多糖類等多糖。黏多糖具有增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，維護(hù)人體關(guān)節(jié)腔里關(guān)節(jié)膜和漿膜的光滑效果，削減脂類物質(zhì)在動(dòng)脈管壁上的堆積，避免肝臟和腎臟中結(jié)締組織萎縮等功效。再者，秋葵含水量高，脂肪很少，每100克秋葵嫩果只含有0.1克脂肪，很適合想要減肥瘦身的女士，而且它富含的維生素c和膳食纖維，還能使皮膚嫩白。此外，黃秋葵的粘性物質(zhì)，可促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)，有益于助消化，益腸胃；秋葵的粘性物質(zhì)中含有50％的可溶性纖維素，有利通便、排毒、防癌，能有效降低血清膽固醇，預(yù)防心血管病、可提高耐缺氧能力；黃秋葵中含有的果膠和多糖可有護(hù)肝功效，防治便秘；同時(shí)，黃秋葵不僅含鈣量與鮮奶相當(dāng)，且鈣的吸收率在50-60％，高于牛奶1倍，是理想的鈣源；黃秋葵為低能量食物，且黃酮含量為2.8％，可延緩衰老、具有抗氧化、防衰老作用，防治糖尿病。秋葵多糖在秋葵物質(zhì)中不僅是作為能量資源或結(jié)構(gòu)材料，更重要的是它參與了生命科學(xué)中細(xì)胞的各種活動(dòng)，不僅具有多方面的生物活性，而且具有增強(qiáng)免疫、降低血糖和抗癌等作用。高愿軍等2種方法提取秋葵多糖工藝研究)報(bào)道了利用微波法和纖維素酶解法提取秋葵中秋葵多糖的方法。微波輔助提取是將溶劑浸提與微波提取相結(jié)合，利用被加熱物體本身作為發(fā)熱體而進(jìn)行加熱，不靠熱傳導(dǎo)作用，可以使物料內(nèi)部溫度迅速提高，加熱時(shí)間縮短，同時(shí)采用蒸餾水作為提取溶劑，具有廉價(jià)、無毒、易于回收再利用的特點(diǎn)，大大降低了生產(chǎn)成本，利用微波輔助提取的工藝，其秋葵多糖的提取率可達(dá)到2.64％；而利用纖維素酶解的方式能夠完整地分解細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)，增加了溶劑的可溶性，有利于細(xì)胞間的活性物質(zhì)溶出，同時(shí)還可以催化水解細(xì)胞壁多糖，增加多糖的浸提率，可以最大限度的避免多糖污染以及活性物質(zhì)的喪失，其秋葵多糖的提取率預(yù)期達(dá)到6.32％。但是上述方法對(duì)于秋葵多糖的提取利用率依然存在提取率較低、提取的多糖組分生物活性不高的問題。隨著生活節(jié)奏的加快和社會(huì)壓力的增大，在發(fā)達(dá)國家和城市中，除了一部分確診的病人外，常人眼中的健康者有一半左右處于“亞健康”狀態(tài)。據(jù)統(tǒng)計(jì)資料表明，在我國國內(nèi)目前也有半數(shù)以上的人處于這種狀態(tài)。因此，疲勞與亞健康不但是醫(yī)學(xué)問題而且日益成為需要關(guān)注的社會(huì)問題，嚴(yán)重的影響著人們的生活質(zhì)量，因此防治因疲勞而導(dǎo)致的亞健康己成為當(dāng)務(wù)之急。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于現(xiàn)有技術(shù)中從秋葵中提取秋葵多糖的提取率較低、提取的多糖組分生物活性不高的問題，進(jìn)而提供一種高效率高活性秋葵多糖的發(fā)酵方法，同時(shí)，本發(fā)明提供一種具有抗疲勞功效的秋葵多糖活性制品。本發(fā)明的技術(shù)方案為：高活性秋葵多糖的發(fā)酵方法，該方法包括以下步驟：（1）預(yù)處理：取新鮮秋葵嫩果，過篩去除秋葵表面的附著物，稱重（濕重）并作為計(jì)量依據(jù)，將秋葵切成丁狀，過濾法去除秋葵籽，向粉碎后的秋葵中加入4-8倍重量的水，使用勻漿機(jī)或膠體磨將粉碎的秋葵頂制作成勻漿狀；（2）一次提?。翰捎眠^濾的方法將步驟（1）獲得的秋葵勻漿進(jìn)行過濾，分別收集濾餅和濾液，濾液為第一次提取液；（3）二次提?。簩⒉襟E（2）獲得的秋葵濾餅重新懸浮在3-5倍重量的水中，調(diào)節(jié)溶液ph至3.0-6.0，過濾后收集濾液，為第二次提取液；（4）酶解：合并兩次提取的濾液，加入0.1-2.0%秋葵重量的復(fù)合酶解物，加入原料重量0.05%-1%的擴(kuò)張蛋白，調(diào)節(jié)ph為8-9，在30-50℃范圍內(nèi)攪拌6-10h；所述復(fù)合酶解物是由質(zhì)量比為1-3:1-3:0.5-2的裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物、纖維素酶、木瓜蛋白酶組成。（5）沉淀處理：將步驟（4）獲得的酶解液調(diào)節(jié)ph至3.0-5.5并加入硫酸鹽溶液，攪拌均勻，靜置后使用離心法將濾液進(jìn)行處理，收集濾液；（6）干燥：將步驟（5）獲得的濾液進(jìn)行超濾處理，收集截留液，噴霧干燥，獲得的粉末即為秋葵多糖。進(jìn)一步的，所述步驟(4)中，所述裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法為：取經(jīng)過清洗的裂壺藻原料，設(shè)定酶解條件為料液比1∶10（m/v）、纖維素酶cellulaseaccf-4740添加量2%、溫度55℃、ph4.5、反應(yīng)時(shí)間1.3h，進(jìn)行酶解，纖維素酶水解結(jié)束后，沸水浴滅酶15min，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻纖維素酶水解液；裂壺藻酶解液滅酶活后，調(diào)節(jié)ph值至6.2-6.6，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min），然后接種體積分?jǐn)?shù)1%的mrs培養(yǎng)基活化的戊糖片球菌液到裂壺藻酶解液，37℃恒溫培養(yǎng)箱靜置，進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵結(jié)束后，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物。進(jìn)一步的，步驟（4）中，酶解的原料是經(jīng)過一次和二次提取后濾液的合并物。進(jìn)一步的，步驟（4）中，所述擴(kuò)張蛋白的制備方法為：將蓮子經(jīng)0.05-0.15wt%氯化鈉消毒4-6min，流水沖洗5-7h，然后，25-28℃暗培養(yǎng)4-6天；剪取幼苗下胚軸頂端3-4cm，置-20℃預(yù)冷0.5h，加預(yù)冷至4℃的勻漿緩沖液，勻漿后，用孔徑70μm的尼龍網(wǎng)過濾，濾渣經(jīng)勻漿緩沖液洗滌，然后將濾渣加入勻漿緩沖液中，室溫靜置1-3h，得靜置液；向靜置液中加入提取液，4℃下提取44-50h，過濾，按0.3-0.5g/ml的添加量向?yàn)V液中緩慢添加硫酸銨，添加硫酸銨過程中不斷攪拌，防止硫酸銨局部過飽和，然后靜置45-50h，4℃條件下25000g離心5-10min，沉淀用酸性緩沖液復(fù)溶，4℃下分子量3000da的透析袋透析，透析液經(jīng)20000g離心10min，取上清液即為制備的擴(kuò)張蛋白溶液；上述勻漿緩沖液組分為：25mmol/l4-羥乙基哌嗪乙磺酸，1.5mmol/l焦亞硫酸鈉，2mmol/ledta，0.1wt%tritonx-100，ph7.0；上述提取液組分為：15mmol/l4-羥乙基哌嗪乙磺酸，1.0mmol/l乙二胺四乙酸，1.5mmol/l焦亞硫酸鈉，0.5mol/lnacl，ph6.0；上述酸性緩沖液配制是：將2.05g醋酸鈉溶于水中，用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至4.0，水定容至1l。進(jìn)一步的，步驟（5）中，向溶液中加入的硫酸鹽，可以是硫酸鐵、硫酸鋅或硫酸鈉或混合使用。海洋微藻作為一類原始而十分重要的海洋生物資源，富含多不飽和脂肪酸、多糖、多肽等多種生物活性物質(zhì)，現(xiàn)主要用于制備生物能源及水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料，關(guān)于用于發(fā)酵的活性物質(zhì)制備的報(bào)道更為少見。裂壺藻是一類富含多不飽和脂肪酸的微藻，常被用來生產(chǎn)高純度二十二碳六烯酸（docosahexaenoicacid，dha）的保健品、嬰幼兒乳制品添加劑等。裂壺藻經(jīng)提取多不飽和脂肪酸后所產(chǎn)生的藻渣其蛋白質(zhì)含量可高達(dá)40%以上，然而目前這些藻渣大多被當(dāng)成飼料或肥料處理，蛋白資源未得到充分開發(fā)與利用。將裂壺藻發(fā)酵蛋白產(chǎn)物應(yīng)用于秋葵多糖的發(fā)酵生產(chǎn)，用以提高秋葵多糖產(chǎn)量等次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)量的研究國內(nèi)外尚未見報(bào)道。擴(kuò)張蛋白是近年在植物細(xì)胞壁中發(fā)現(xiàn)的一類新型蛋白，最先是從黃瓜下胚軸伸長區(qū)分離純化得到，現(xiàn)已證明在燕麥胚芽鞘細(xì)胞壁、栝樓根尖細(xì)胞壁、番茄、煙草、擬南芥、水稻、棉纖維、玉米、大豆等細(xì)胞壁中也有擴(kuò)張蛋白的存在，被認(rèn)為其普遍存在于各種雙子葉和單子葉植物的細(xì)胞壁中，與促進(jìn)其細(xì)胞生理生長，影響營養(yǎng)生長、形態(tài)發(fā)生、授粉受精、果實(shí)軟化等生理生長過程有關(guān)。利用重組細(xì)胞壁實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)了擴(kuò)張蛋白與以前發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞壁蛋白不同，具有誘導(dǎo)熱鈍化的離體細(xì)胞壁恢復(fù)伸展的功能，被推測(cè)能夠打斷細(xì)胞壁多聚物之間的氫鍵進(jìn)而誘導(dǎo)酸依賴的細(xì)胞壁延展和壓力松弛等生理活動(dòng)，在植物生長過程中可能是生理調(diào)控和細(xì)胞壁松弛延伸的主要生理調(diào)節(jié)物質(zhì)。本發(fā)明所述提取秋葵多糖的方法，以裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物、纖維素酶、木瓜蛋白酶組成的復(fù)合酶解物進(jìn)行酶解提取的方法，再通過擴(kuò)張蛋白的協(xié)效復(fù)配作用，相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中常規(guī)使用的僅以纖維素酶解的方式而言，其提取效率提升接近30倍；本發(fā)明所述提取方法進(jìn)一步篩選整個(gè)提取工藝的優(yōu)化參數(shù)條件，最大限度的提升了秋葵多糖的提取效率，并且能夠在發(fā)酵的過程中保持多糖的活性。一種秋葵多糖的活性制品，是由以下重量份數(shù)計(jì)組分組成：益母草提取物13-18份，鹿茸提取物8-12份，黃連提取物12-17份，細(xì)辛提取物11-14份，秋葵多糖25-37份，維生素a10-15份，維生素c15-20份，玉米淀粉10-20份。特別的，所述秋葵多糖的濃度為65%-78%。進(jìn)一步的，所述秋葵多糖的活性制品，其特征在于，是由以下重量份數(shù)計(jì)組分組成：益母草提取物15份，鹿茸提取物9份，黃連提取物14份，細(xì)辛提取物12份，秋葵多糖29份，維生素a11份，維生素c17份，玉米淀粉17份。秋葵（okra，hibiscusesculentusl.），營養(yǎng)保健價(jià)值很高，嫩莢富含多種蛋白質(zhì)，氨基酸，維生素和礦質(zhì)元素。每100克黃秋葵富含蛋白質(zhì)2.1g，碳水化合物含6.6g，膳食纖維5g，維生素c4mg，鈣45mg，鐵0.1mg，鋅0.23mg，硒0.51μg等，可提供150kj的能量。黃秋葵中多糖含量2%，嫩果中含有黏性液質(zhì)及阿拉伯聚糖、牛乳聚糖、鼠李聚糖，其脆嫩多汁，口感潤滑，香味獨(dú)特，具有助消化、增強(qiáng)體力、保護(hù)肝臟、健胃整腸；秋葵含有特殊的具有藥效的成分，強(qiáng)腎補(bǔ)虛，享有“植物偉哥”之美譽(yù)，是歐美運(yùn)動(dòng)員消除疲勞、快速恢復(fù)體力的首選蔬菜；富含維生素c，可預(yù)防心血管疾病發(fā)生，提高免疫力；由于含鋅和硒等微量元素，可以增強(qiáng)人體防癌抗癌能力。本發(fā)明經(jīng)驗(yàn)證，食用后可達(dá)到抗疲勞和增強(qiáng)免疫力的效果，基于本發(fā)明中主要活性組分為秋葵多糖，配合從植物體內(nèi)提取出的活性成分以及鹿茸提取物，在進(jìn)入腸道后，一方面可以在腸道內(nèi)定殖，維持腸道微生物菌群的平衡；另一方面是秋葵多糖與益母草提取物、黃連提取物、鹿茸提取物共同作用于宿主的免疫系統(tǒng)，誘發(fā)腸道免疫，并刺激胸腺，脾臟等免疫器官，促進(jìn)巨噬細(xì)胞活性，通過增強(qiáng)b、t淋巴細(xì)胞對(duì)抗原刺激的反應(yīng)性，發(fā)揮特異性免疫活性，從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，易于被人體吸收，條件98%低齡人群長期服用無不適癥狀。具體實(shí)施方案下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。實(shí)施例1高活性秋葵多糖的發(fā)酵方法，該方法包括以下步驟：（1）預(yù)處理：取新鮮秋葵嫩果，過篩去除秋葵表面的附著物，稱重（濕重）并作為計(jì)量依據(jù)，將秋葵切成丁狀，過濾法去除秋葵籽，向粉碎后的秋葵中加入6倍重量的水，使用勻漿機(jī)或膠體磨將粉碎的秋葵頂制作成勻漿狀；（2）一次提取：采用過濾的方法將步驟（1）獲得的秋葵勻漿進(jìn)行過濾，分別收集濾餅和濾液，濾液為第一次提取液；（3）二次提取：將步驟（2）獲得的秋葵濾餅重新懸浮在3-5倍重量的水中，調(diào)節(jié)溶液ph至4.0，過濾后收集濾液，為第二次提取液；（4）酶解：合并兩次提取的濾液，加入1%秋葵重量的復(fù)合酶解物，加入原料重量0.5%的擴(kuò)張蛋白，調(diào)節(jié)ph為8，在38℃范圍內(nèi)攪拌8h；所述復(fù)合酶解物是由質(zhì)量比為2:2:1的裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物、纖維素酶、木瓜蛋白酶組成。（5）沉淀處理：將步驟（4）獲得的酶解液調(diào)節(jié)ph至4.0并加入硫酸鹽溶液，攪拌均勻，靜置后使用離心法將濾液進(jìn)行處理，收集濾液；（6）干燥：將步驟（5）獲得的濾液進(jìn)行超濾處理，收集截留液，噴霧干燥，獲得的粉末即為秋葵多糖。進(jìn)一步的，所述步驟(4)中，所述裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法為：取經(jīng)過清洗的裂壺藻原料，設(shè)定酶解條件為料液比1∶10（m/v）、纖維素酶cellulaseaccf-4740添加量2%、溫度55℃、ph4.5、反應(yīng)時(shí)間1.3h，進(jìn)行酶解，纖維素酶水解結(jié)束后，沸水浴滅酶15min，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻纖維素酶水解液；裂壺藻酶解液滅酶活后，調(diào)節(jié)ph值至6.4，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min），然后接種體積分?jǐn)?shù)1%的mrs培養(yǎng)基活化的戊糖片球菌液到裂壺藻酶解液，37℃恒溫培養(yǎng)箱靜置，進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵結(jié)束后，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物。進(jìn)一步的，步驟（4）中，酶解的原料是經(jīng)過一次和二次提取后濾液的合并物。進(jìn)一步的，步驟（4）中，所述擴(kuò)張蛋白的制備方法為：將蓮子經(jīng)0.1wt%氯化鈉消毒5min，流水沖洗6h，然后，26℃暗培養(yǎng)5天；剪取幼苗下胚軸頂端3cm，置-20℃預(yù)冷0.5h，加預(yù)冷至4℃的勻漿緩沖液，勻漿后，用孔徑70μm的尼龍網(wǎng)過濾，濾渣經(jīng)勻漿緩沖液洗滌，然后將濾渣加入勻漿緩沖液中，室溫靜置1-3h，得靜置液；向靜置液中加入提取液，4℃下提取46h，過濾，按0.4g/ml的添加量向?yàn)V液中緩慢添加硫酸銨，添加硫酸銨過程中不斷攪拌，防止硫酸銨局部過飽和，然后靜置47h，4℃條件下25000g離心7min，沉淀用酸性緩沖液復(fù)溶，4℃下分子量3000da的透析袋透析，透析液經(jīng)20000g離心10min，取上清液即為制備的擴(kuò)張蛋白溶液；上述勻漿緩沖液組分為：25mmol/l4-羥乙基哌嗪乙磺酸，1.5mmol/l焦亞硫酸鈉，2mmol/ledta，0.1wt%tritonx-100，ph7.0；上述提取液組分為：15mmol/l4-羥乙基哌嗪乙磺酸，1.0mmol/l乙二胺四乙酸，1.5mmol/l焦亞硫酸鈉，0.5mol/lnacl，ph6.0；上述酸性緩沖液配制是：將2.05g醋酸鈉溶于水中，用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至4.0，水定容至1l。進(jìn)一步的，步驟（5）中，向溶液中加入的硫酸鹽，可以是硫酸鐵、硫酸鋅或硫酸鈉或混合使用。實(shí)施例2高活性秋葵多糖的發(fā)酵方法，該方法包括以下步驟：（1）預(yù)處理：取新鮮秋葵嫩果，過篩去除秋葵表面的附著物，稱重（濕重）并作為計(jì)量依據(jù)，將秋葵切成丁狀，過濾法去除秋葵籽，向粉碎后的秋葵中加入4倍重量的水，使用勻漿機(jī)或膠體磨將粉碎的秋葵頂制作成勻漿狀；（2）一次提取：采用過濾的方法將步驟（1）獲得的秋葵勻漿進(jìn)行過濾，分別收集濾餅和濾液，濾液為第一次提取液；（3）二次提取：將步驟（2）獲得的秋葵濾餅重新懸浮在3倍重量的水中，調(diào)節(jié)溶液ph至3.0，過濾后收集濾液，為第二次提取液；（4）酶解：合并兩次提取的濾液，加入0.1%秋葵重量的復(fù)合酶解物，加入原料重量0.05%的擴(kuò)張蛋白，調(diào)節(jié)ph為8，在30℃范圍內(nèi)攪拌6h；所述復(fù)合酶解物是由質(zhì)量比為1:1:1的裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物、纖維素酶、木瓜蛋白酶組成。（5）沉淀處理：將步驟（4）獲得的酶解液調(diào)節(jié)ph至3.0并加入硫酸鹽溶液，攪拌均勻，靜置后使用離心法將濾液進(jìn)行處理，收集濾液；（6）干燥：將步驟（5）獲得的濾液進(jìn)行超濾處理，收集截留液，噴霧干燥，獲得的粉末即為秋葵多糖。進(jìn)一步的，所述步驟(4)中，所述裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法為：取經(jīng)過清洗的裂壺藻原料，設(shè)定酶解條件為料液比1∶10（m/v）、纖維素酶cellulaseaccf-4740添加量2%、溫度55℃、ph4.5、反應(yīng)時(shí)間1.3h，進(jìn)行酶解，纖維素酶水解結(jié)束后，沸水浴滅酶15min，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻纖維素酶水解液；裂壺藻酶解液滅酶活后，調(diào)節(jié)ph值至6.2，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min），然后接種體積分?jǐn)?shù)1%的mrs培養(yǎng)基活化的戊糖片球菌液到裂壺藻酶解液，37℃恒溫培養(yǎng)箱靜置，進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵結(jié)束后，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物。進(jìn)一步的，步驟（4）中，酶解的原料是經(jīng)過一次和二次提取后濾液的合并物。進(jìn)一步的，步驟（4）中，所述擴(kuò)張蛋白的制備方法為：將蓮子經(jīng)0.05wt%氯化鈉消毒4min，流水沖洗5h，然后，25℃暗培養(yǎng)4天；剪取幼苗下胚軸頂端3cm，置-20℃預(yù)冷0.5h，加預(yù)冷至4℃的勻漿緩沖液，勻漿后，用孔徑70μm的尼龍網(wǎng)過濾，濾渣經(jīng)勻漿緩沖液洗滌，然后將濾渣加入勻漿緩沖液中，室溫靜置1h，得靜置液；向靜置液中加入提取液，4℃下提取44h，過濾，按0.3g/ml的添加量向?yàn)V液中緩慢添加硫酸銨，添加硫酸銨過程中不斷攪拌，防止硫酸銨局部過飽和，然后靜置45h，4℃條件下25000g離心5min，沉淀用酸性緩沖液復(fù)溶，4℃下分子量3000da的透析袋透析，透析液經(jīng)20000g離心10min，取上清液即為制備的擴(kuò)張蛋白溶液；上述勻漿緩沖液組分為：25mmol/l4-羥乙基哌嗪乙磺酸，1.5mmol/l焦亞硫酸鈉，2mmol/ledta，0.1wt%tritonx-100，ph7.0；上述提取液組分為：15mmol/l4-羥乙基哌嗪乙磺酸，1.0mmol/l乙二胺四乙酸，1.5mmol/l焦亞硫酸鈉，0.5mol/lnacl，ph6.0；上述酸性緩沖液配制是：將2.05g醋酸鈉溶于水中，用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至4.0，水定容至1l。進(jìn)一步的，步驟（5）中，向溶液中加入的硫酸鹽，可以是硫酸鐵、硫酸鋅或硫酸鈉或混合使用。實(shí)施例3高活性秋葵多糖的發(fā)酵方法，該方法包括以下步驟：（1）預(yù)處理：取新鮮秋葵嫩果，過篩去除秋葵表面的附著物，稱重（濕重）并作為計(jì)量依據(jù)，將秋葵切成丁狀，過濾法去除秋葵籽，向粉碎后的秋葵中加入8倍重量的水，使用勻漿機(jī)或膠體磨將粉碎的秋葵頂制作成勻漿狀；（2）一次提?。翰捎眠^濾的方法將步驟（1）獲得的秋葵勻漿進(jìn)行過濾，分別收集濾餅和濾液，濾液為第一次提取液；（3）二次提取：將步驟（2）獲得的秋葵濾餅重新懸浮在5倍重量的水中，調(diào)節(jié)溶液ph至6.0，過濾后收集濾液，為第二次提取液；（4）酶解：合并兩次提取的濾液，加入2.0%秋葵重量的復(fù)合酶解物，加入原料重量1%的擴(kuò)張蛋白，調(diào)節(jié)ph為9，在50℃范圍內(nèi)攪拌6-10h；所述復(fù)合酶解物是由質(zhì)量比為3:3:2的裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物、纖維素酶、木瓜蛋白酶組成。（5）沉淀處理：將步驟（4）獲得的酶解液調(diào)節(jié)ph至5.5并加入硫酸鹽溶液，攪拌均勻，靜置后使用離心法將濾液進(jìn)行處理，收集濾液；（6）干燥：將步驟（5）獲得的濾液進(jìn)行超濾處理，收集截留液，噴霧干燥，獲得的粉末即為秋葵多糖。進(jìn)一步的，所述步驟(4)中，所述裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法為：取經(jīng)過清洗的裂壺藻原料，設(shè)定酶解條件為料液比1∶10（m/v）、纖維素酶cellulaseaccf-4740添加量2%、溫度55℃、ph4.5、反應(yīng)時(shí)間1.3h，進(jìn)行酶解，纖維素酶水解結(jié)束后，沸水浴滅酶15min，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻纖維素酶水解液；裂壺藻酶解液滅酶活后，調(diào)節(jié)ph值至6.6，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min），然后接種體積分?jǐn)?shù)1%的mrs培養(yǎng)基活化的戊糖片球菌液到裂壺藻酶解液，37℃恒溫培養(yǎng)箱靜置，進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵結(jié)束后，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物。進(jìn)一步的，步驟（4）中，酶解的原料是經(jīng)過一次和二次提取后濾液的合并物。進(jìn)一步的，步驟（4）中，所述擴(kuò)張蛋白的制備方法為：將蓮子經(jīng)0.15wt%氯化鈉消毒6min，流水沖洗7h，然后，28℃暗培養(yǎng)6天；剪取幼苗下胚軸頂端4cm，置-20℃預(yù)冷0.5h，加預(yù)冷至4℃的勻漿緩沖液，勻漿后，用孔徑70μm的尼龍網(wǎng)過濾，濾渣經(jīng)勻漿緩沖液洗滌，然后將濾渣加入勻漿緩沖液中，室溫靜置1-3h，得靜置液；向靜置液中加入提取液，4℃下提取50h，過濾，按0.5g/ml的添加量向?yàn)V液中緩慢添加硫酸銨，添加硫酸銨過程中不斷攪拌，防止硫酸銨局部過飽和，然后靜置50h，4℃條件下25000g離心10min，沉淀用酸性緩沖液復(fù)溶，4℃下分子量3000da的透析袋透析，透析液經(jīng)20000g離心10min，取上清液即為制備的擴(kuò)張蛋白溶液；上述勻漿緩沖液組分為：25mmol/l4-羥乙基哌嗪乙磺酸，1.5mmol/l焦亞硫酸鈉，2mmol/ledta，0.1wt%tritonx-100，ph7.0；上述提取液組分為：15mmol/l4-羥乙基哌嗪乙磺酸，1.0mmol/l乙二胺四乙酸，1.5mmol/l焦亞硫酸鈉，0.5mol/lnacl，ph6.0；上述酸性緩沖液配制是：將2.05g醋酸鈉溶于水中，用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至4.0，水定容至1l。進(jìn)一步的，步驟（5）中，向溶液中加入的硫酸鹽，可以是硫酸鐵、硫酸鋅或硫酸鈉或混合使用。實(shí)施例4一種秋葵多糖的活性制品，所述的膠囊中各原料的質(zhì)量份數(shù)比為：益母草提取物15份，鹿茸提取物9份，黃連提取物14份，細(xì)辛提取物12份，秋葵多糖29份，維生素a11份，維生素c17份，玉米淀粉17份。所述秋葵多糖采用實(shí)施例1中的制備方法獲得。實(shí)施例5本實(shí)施例提供一種秋葵多糖的活性制品，所述的膠囊中各原料的質(zhì)量份數(shù)比為：益母草提取物15份，鹿茸提取物9份，黃連提取物14份，細(xì)辛提取物12份，秋葵多糖25份，維生素a11份，維生素c17份，玉米淀粉17份。所述秋葵多糖采用實(shí)施例1中的制備方法獲得。實(shí)施例6本實(shí)施例提供一種秋葵多糖的活性制品，所述的膠囊中各原料的質(zhì)量份數(shù)比為：益母草提取物15份，鹿茸提取物9份，黃連提取物14份，細(xì)辛提取物12份，秋葵多糖37份，維生素a17份，維生素c17份，玉米淀粉17份。所述秋葵多糖采用實(shí)施例2中的制備方法獲得。實(shí)施例7本實(shí)施例提供一種秋葵多糖的活性制品，所述的膠囊中各原料的質(zhì)量份數(shù)比為：益母草提取物15份，鹿茸提取物9份，黃連提取物14份，細(xì)辛提取物12份，秋葵多糖25份，維生素a11份，維生素c17份，玉米淀粉17份。所述秋葵多糖采用實(shí)施例3中的制備方法獲得。實(shí)施例8本實(shí)施例提供一種秋葵多糖的活性制品，所述的膠囊中各原料的質(zhì)量份數(shù)比為：益母草提取物15份，鹿茸提取物9份，黃連提取物14份，細(xì)辛提取物12份，秋葵多糖37份，維生素a11份，維生素c17份，玉米淀粉17份。所述秋葵多糖采用實(shí)施例3中的制備方法獲得?？蛊谛Ч?yàn)證實(shí)驗(yàn)將通過實(shí)施例4制得的活性制品混合均勻，制備成粉末狀，作為測(cè)試樣品。將生理鹽水為空白對(duì)照組，以支鏈氨基酸的水溶液為陰性對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)對(duì)象：選用sd大鼠，由北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄各半，180只，220±18g，約3月齡，在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)一個(gè)月后，經(jīng)過初步游泳訓(xùn)練隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和樣品組。試驗(yàn)方法（1)力竭性試驗(yàn)：取樣品粉末，用蒸餾水溶解，樣品的濃度分別為分別為0.15g.kg-1.d-1、0.30g.kg-1.d-1、0.60g.kg-1.d-1，樣品組每天按0.1ml/10g體重灌胃；陰性對(duì)照組為支鏈氨基酸（亮氨酸∶異亮氨酸∶纈氨酸按質(zhì)量比2：1:1混合后獲得）的水溶液，配成濃0.60g.kg-1.d-1，每天按0.1ml/10g體重灌胃；各組末次灌喂30min后，進(jìn)行大鼠負(fù)重（5％體重）游泳試驗(yàn)至力竭（力竭標(biāo)準(zhǔn)：負(fù)重大鼠游泳動(dòng)作明顯失調(diào)，不能再堅(jiān)持或沉入水底超過3s不能回水面為力竭)。（2)血清尿素氮試驗(yàn)：取樣品粉末，用蒸餾水溶解，樣品的濃度分別為分別為0.15g.kg-1.d-1、0.30g.kg-1.d-1、0.60g.kg-1.d-1，樣品組每天按0.1ml/10g體重灌胃；陰性對(duì)照組為支鏈氨基酸（亮氨酸∶異亮氨酸∶纈氨酸按質(zhì)量比2：1:1混合后獲得）的水溶液，配成濃0.60g.kg-1.d-1，每天按0.1ml/10g體重灌胃；各組連續(xù)灌喂30d后，進(jìn)行大鼠游泳試驗(yàn)（無負(fù)重），90min后，拔眼球采血，用尿素氮測(cè)定試劑盒（二乙酰肼一肟法，北京化工廠生產(chǎn)）檢測(cè)血清尿素氮。試驗(yàn)結(jié)果實(shí)施例樣品與對(duì)照組對(duì)大鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響見表1。表1實(shí)施例樣品與對(duì)照組對(duì)大鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響對(duì)比組別游泳時(shí)間（min）陰性對(duì)照組98±2.1陽性對(duì)照組137±1.9a低劑量組116±1.3a中劑量組154±0.2ab高劑量組138±1.6ab注：采用方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，與陰性對(duì)照組比較，”a”:p<0.05;與陽性對(duì)照組比較,“b”:p<0.01。表2實(shí)施例樣品與對(duì)照組對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)后血清尿素氮含量的影響組別血清尿素氮水平（mmol/l）陰性對(duì)照組4.07±0.21陽性對(duì)照組5.88±0.61a低劑量組3.18±0.14ab中劑量組6.29±0.25a高劑量組4.94±0.37ab注：采用方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，與陰性對(duì)照組比較，”a”:p<0.05;與陽性對(duì)照組比較,“b”:p<0.01。同樣，對(duì)其余實(shí)施例5-8和本發(fā)明的實(shí)施例其余配比進(jìn)行相同實(shí)驗(yàn)，結(jié)果與實(shí)施例1的效果類似。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點(diǎn)來看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。本發(fā)明中所未詳細(xì)描述的技術(shù)細(xì)節(jié)，均可通過本領(lǐng)域中的任一現(xiàn)有技術(shù)實(shí)現(xiàn)。特別的，本發(fā)明中所有未詳細(xì)描述的技術(shù)特點(diǎn)均可通過任一現(xiàn)有技術(shù)實(shí)現(xiàn)。當(dāng)前第1頁12